血清总胆固醇测定
血清总胆固醇CHO测定
血清总胆固醇CHO测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理胆固醇酯+H2O——→游离胆固醇+脂肪酸CO游离胆固醇+O2——→胆甾烯酮+ H2O2POD2H2O2+4-AAP+4-氯酚————→醌亚胺化合物在一定波长处比色，吸光率（△A）与T-CH浓度成正比。
3 标本：3.1 病人准备：应禁食12小时抽血，24h内不饮酒。
体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。
3.2 类型：血清。
3.3 标本存放留取标本后请尽快分离血清。
在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定3天， -20℃保存至少可以稳定3个月。
3.4 标本运输室温条件下运输。
3.5 标本拒收标准细菌污染的不能做测定。
4 实验材料4.1 试剂:宁波美康生物科技股份有限公司CHO测定试剂盒（浙械注准 20142400134）4.1.1 试剂组成R1试剂：三羟甲基氨基甲烷缓冲液 pH7.0 0.05mol/L胆固醇脂酶（CE） 800U/L胆固醇氧化酶（CO） 400U/L胆酸钠 3.5mmol/LR2试剂：4-氨基安替比林（4-APP） 1mmol/L辣根过氧化物酶（POD） 1000U/L4-氯酚 2.5mmol/L4.1.2 试剂准备试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用雅培公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5.仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪。
血清总胆固醇的测定
实验原理
• 第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水 解为游离胆固醇和游离脂肪酸 。
• 第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作 用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。
• 第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在 时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚 胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅 与标本中TC含量成正比。
• 鱼类。乌鱼又称黑鱼性寒味甘，能补脾利水同时 它又是一种高蛋白低脂肪食品。青鱼性平味甘， 能补气健脾化湿。鳆鱼又称鲍鱼，肉性平味甘咸， 蛋白质含量极高，而脂肪含量很低的清补营养品。 黄鳝甘温，古代医家认为它有添精益髓，又有通 血脉、壮筋骨的作用同时它又是一种低脂食品。 另外，如黄瓜、海带、羊栖菜、海藻、槐花等食 物，均有降低血中胆固醇的效果。
试剂
• 基础液：100ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液 （pH=6.7）(含胆酸钠129mg),4-氨基安替 比林16mg,苯酚132mg,TritionX-100 0.2ml
• 酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固 醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶）合 剂1ml,加基础液30ml,混匀既得
• 胆固醇标准液（5.17mmol/L）:精准称取胆 固醇200mg,用纯无水乙醇溶解，用乙醇定 容至100ml，分装4ºC保存，临用时取出
注意事项
• 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； • 2、比色应在30min内完成； • 3、试管在操作前尽量保持干燥； • 4、试剂中酶的质量影响测定结果 ； • 5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成
分中去掉胆固醇酯酶即可。
• 此法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆 红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生 素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使 结果降低。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃ 可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告血清总胆固醇测定实验报告胆固醇是一种脂类物质，它在人体中起着重要的生理作用。
然而，当胆固醇水平过高时，就会增加心血管疾病的风险。
因此，了解自己的胆固醇水平对于保持健康至关重要。
本实验旨在测定血清中的总胆固醇水平，并通过结果分析对参与者的健康状况进行评估。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 血清样本- 高精度血清胆固醇测定试剂盒- 试剂盒使用说明书- 分光光度计- 定量移液器和移液枪- 试管和离心管2. 实验步骤：a. 收集参与者的血液样本，并将其离心分离血清。
b. 根据试剂盒使用说明书，准备所需试剂和标准品。
c. 将标准品和血清样本分别加入试管中，并按照说明书中的步骤进行试剂添加和混合。
d. 使用分光光度计测量各试管中的吸光度，并记录结果。
e. 根据标准曲线计算出各样本中的总胆固醇浓度。
实验结果：通过实验测定，我们得到了参与者血清中的总胆固醇浓度。
根据标准曲线和试剂盒提供的计算公式，我们可以将各样本的吸光度值转换为胆固醇浓度。
根据实验数据，我们将参与者的胆固醇水平分为以下几个等级：1. 理想范围：参与者的胆固醇水平在正常范围内，表明其心血管健康状况良好。
他们应继续保持健康的生活方式，包括均衡的饮食、适当的运动和定期体检。
2. 边缘范围：参与者的胆固醇水平略高于正常范围，但尚未达到危险水平。
他们应该注意饮食结构，减少高胆固醇食物的摄入，并增加运动量。
此外，定期监测胆固醇水平也是必要的。
3. 高风险范围：参与者的胆固醇水平明显升高，表明他们存在心血管疾病的风险。
他们应立即采取行动，改变生活方式，如低脂饮食、戒烟、减少酒精摄入等。
此外，医生可能会建议他们接受进一步的检查和治疗。
实验讨论：通过本实验，我们不仅可以测定参与者血清中的总胆固醇水平，还可以根据结果评估其心血管健康状况。
然而，需要注意的是，本实验只是初步评估，并不能替代专业医生的诊断和建议。
对于高风险范围的参与者，他们应该咨询医生，制定个性化的治疗方案。
血清总胆固醇TC测定操作规程
血清总胆固醇TC测定操作规程.docx血清总胆固醇（TC）测定操作规程1. 目的本操作规程旨在规范血清总胆固醇（TC）的测定过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 原理血清总胆固醇（TC）测定通常采用酶法，通过胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化为胆甾酮和H2O2，最后利用过氧化物酶将H2O2分解为2H2O和O2，同时产生颜色变化。
颜色的深浅与血清中胆固醇含量成正比，可通过比色法测定。
3. 试剂和材料酶试剂盒（含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶等）校准品和质控品血清样本蒸馏水移液枪及吸头比色杯恒温水浴箱自动生化分析仪或分光光度计4. 操作步骤4.1 准备工作确保所有试剂和样本均已在室温下平衡至25°C。
校准生化分析仪或分光光度计至适当的波长（通常为500-550nm）。
4.2 试剂准备根据试剂盒说明书，将酶试剂混合均匀，并预热至25°C。
4.3 样本处理取适量的血清样本，避免溶血和脂血样本。
如有必要，对样本进行离心，去除沉淀物。
4.4 加样使用移液枪准确取样，将血清样本加入比色杯中。
按照试剂盒说明书，加入等量的酶试剂至每个比色杯中。
4.5 反应将比色杯放入恒温水浴箱中，保持37°C反应一定时间（通常为5-10分钟）。
4.6 比色测定将反应后的比色杯放入自动生化分析仪或分光光度计中。
读取吸光度值，并根据标准曲线计算血清总胆固醇浓度。
5. 质量控制每次测定前，使用校准品进行仪器校准。
定期使用质控品进行质量控制，确保结果的准确性和稳定性。
6. 结果记录与报告记录所有测定结果，包括吸光度值、胆固醇浓度等。
根据医院或实验室的标准操作程序，编写并发布检测报告。
7. 安全注意事项操作时应穿戴适当的个人防护装备，如手套和实验服。
避免接触试剂和样本，尤其是避免吸入和摄入。
按照当地法规处理废弃物。
8. 维护和校准定期对生化分析仪或分光光度计进行维护和校准，确保仪器的准确性。
血清总胆固醇的测定和血清蛋白分离实验
血清总胆固醇的测定实验目的：测量血清中总胆固醇的含量实验原理：胆固醇酯加水在胆固醇酯酶的催化下生成游离胆固醇和脂肪酸。
游离胆固醇加氧在胆固醇氧化酶作用下生成胆烷4-烯-3-酮和过氧化氢，过氧化氢再加4-氨基安替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成醌亚胺，醌亚胺在500nm 有特异吸收峰，吸收的强度与胆固醇含量成正比。
反应如下：胆固醇酯+H 2O 胆固醇酯酶→ 游离胆固醇+脂肪酸游离胆固醇+O 2 胆固醇氧化酶→ 胆烷-4-烯-3-酮+H 2O 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚过氧化物酶→ 醌亚胺染料+H 2O 实验操作：取干净干燥的小试管3支，标号，按下表操作混匀，置37℃水浴5-6分钟，以空白管校零，在500nm 波长下比色读取各管吸光度。
实验结果：As= 0.214 A T =0.143标准管胆固醇含量mmol/L=5.00mmol/L测定管胆固醇含量mmol/L=3.34mmol/L分析讨论：为保证实验结果准确，滴加液体时可以先滴加量少的液体，再滴加含量较大的血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验目的：醋酸纤维薄膜电泳把血清蛋白分离，并测定血清蛋白种类实验原理：带电颗粒在电场作用下，向着与其所带电性相反的电极移动，称电泳。
醋酸纤维薄膜电泳可把血清蛋白分离为：清蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白5条区带实验操作：1.点样：取在缓冲液中浸泡的醋酸纤维薄膜一条（2.5×8cm），轻轻夹于滤纸中，吸去多余的缓冲液，在薄膜的毛面上距一端约1.0cm～1.5cm处，用点样气沾上血清后迅速压一下，然后将毛面向下使两端紧贴在四层滤纸上，加盖，平衡2～3分钟，通电电泳。
2.电泳：恒压120V，0.6mA/cm，时间50～60分钟。
3.染色：电泳完毕后，关闭电源，将薄膜取出，直接浸入氨基黑染色液中染色，取出用漂洗液浸洗3～4次，至背景完全无色为止。
实验结果:电泳后出现5条区带，从正极到负极，分别为清蛋白、α1、α2、β、γ，点样线。
血清总胆固醇测定标准操作规程
血清总胆固醇测定标准操作规程1.检验原理：（氧化酶法）血清中总胆固醇（TC ）包括游离胆固醇（FC ）和胆固醇酯（CE ）两部分。
血清中胆固醇可被脂蛋白酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA ），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠存在时，晶过氧化物酶（POD ）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
胆固醇酯+22O H −−−→−胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸 胆固醇+2O −−−−→−胆固醇氧化酶胆甾烯酮+22O H 222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD红色醌类物质+422O H 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃可保存1年。
样本应避免反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程） 5参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×38.77.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在500nm处吸光度大于0.080时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明或淡黄色液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.0808.4线性区间：试剂的线性区间为[0.5-20.0]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.0-20.0]mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用具有溯源性的标准品进行测定，实测值与标识值的相对偏差应在±10%内。
8.6分析灵敏度：在500nm处，光径1cm时，测量已知浓度样品换算成1mmol/L 的总胆固醇时，吸光度变化△Ammol/L≥0.0028.7批内精密度：CV≤4.0%8.8批间差：R≤6.0%8.9稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足1-8.7的要求。
实验三血清总胆固醇的测定
二、样品测定
取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定:
管号
对照
样品①
样品②
稀释的未知血清样品
(mL)
0
0.40
0.40
邻苯二甲醛试剂(mL)
0.20
0.20
0.20
冰乙酸(mL)
0.40
0
0
混合酸(mL)
4.00
4.00
混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。
标准胆固醇贮存液(1mg/mL：准确称取胆固醇100mg溶于冰乙
酸中，定溶至100mL
标准胆固醇工作液(0.1mg/mL):将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰
乙酸稀释至100mL
二、测试样品
0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。
三、器材
实验三 血清总胆固醇的测定
目的要求
了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。
实验原理
血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、 临床诊断和 营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~250mg/mL。
胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成， 而且也是细胞的必要结构成分， 还可以转化成胆汁酸盐、 肾上腺皮质 激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式 存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。 本实验采用前一种方法。
正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质， 此物
质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量 测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关 系。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中的常见项目之一，本实验旨在掌握血清总胆固醇测定的原理、方法和操作步骤，熟悉实验过程中的注意事项，并对实验结果进行准确分析和判断。
二、实验原理目前，血清总胆固醇测定常用的方法是酶法。
其原理是胆固醇酯酶（CE）将胆固醇酯水解为游离胆固醇（FC）和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）将 FC 氧化为胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的催化下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺。
在一定波长下，通过比色法测定吸光度，从而计算出血清总胆固醇的含量。
三、实验材料与设备1、材料血清样本：新鲜无溶血、无脂浊的血清。
试剂盒：包含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等试剂。
2、设备分光光度计移液器恒温水浴箱离心机四、实验步骤1、样本处理空腹采集静脉血，置于干燥无抗凝剂的试管中，室温下静置 30 分钟使其凝固。
以 3000 转/分钟离心 10 分钟，分离血清，备用。
2、试剂准备按照试剂盒说明书的要求，将试剂 R1 和试剂 R2 分别配制好，并放置于恒温水浴箱中预热至规定温度。
3、测定操作取两支干净的比色管，分别标记为空白管和测定管。
空白管中加入蒸馏水20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
测定管中加入血清样本20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
然后，向空白管和测定管中分别加入试剂R2 500μL，混匀，置于37℃恒温水浴箱中保温 10 分钟。
4、比色测定以空白管调零，在分光光度计 500nm 波长处读取测定管的吸光度值（A）。
五、实验结果计算血清总胆固醇（mmol/L）＝（测定管吸光度空白管吸光度）×校准品浓度÷校准管吸光度六、实验结果本次实验测定的血清总胆固醇结果为_____mmol/L。
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/100毫升。
血液中胆固醇含量过高，表示胆固醇代谢 可能发生障碍。冠状动脉粥样硬化患者的血 清胆固醇含量往往偏高。因此临床化验上测
定血清胆固醇含量将有助于诊断某些疾病。
人体胆固醇来自食物及体内合成两个途径。 1. 2/3由肝脏制造出
2.其余的1/3来自食物，尤以肥肉﹑内脏、
蛋黄含量较高。
机体的胆固醇以两种形式存在:
（三）实验反应原理
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲
醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有
最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的
定量测定。
胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光
吸收值呈良好线性关系。
三、实验步骤 1、制作标准曲线
2、样品测定,人血清(已经稀释，直接使用)
四、注意事项
高密度脂蛋白扮演清道夫角色，它将周边组织 多余的胆固醇送回肝脏，排出体外，达到抗血管硬 化的目的。它还有维护血管内皮细胞功能，及保护 血管免于血栓的形成。高密度脂蛋白增加，动脉壁 被胆固醇囤积的机会就减少。因此它是“好的胆固 醇”。
（二）血液 组成：血细胞（有形体） 血浆（包含血清及纤维蛋白原） 血浆是血液的重要组成分，呈淡黄色液体， 水分占90～92％，溶质以血浆蛋白为主 。 血浆总胆固醇的1/3以游离形式存在，2/3为 与脂肪酸结合之胆固醇酯。
实验五
人血清总胆固醇的测定 ----化学比色法
一、实验目的
1.了解胆固醇 2.学习胆固醇测定的原理和方法
二、实验原理
（一） 胆固醇cholesterol
是一种环戊烷多氢菲的衍生物。早在18世 纪人们已从胆石中发现了胆固醇，它广泛存在 于动物体内，尤以脑及神经组织中最为丰富， 在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶 解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚、氯
仿等溶剂。
是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的原料
胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要 物质，它不仅参与形成细胞膜。
自然界中的胆固醇主要存在于动物性食 物之中，植物中没有胆固醇，但存在结构上 与胆固醇十分相似的物质——植物固醇。植 物固醇无致动脉粥样硬化的作用。
正常人体内血液总胆固醇110～220毫克
1.强酸注意实验安25毫升浓硫酸缓慢倒入25毫升冰乙 酸中，边加边搅
4.混合酸粘度大，要用封口膜混匀。比色前也需要混匀 5.样品测定中对照不做，用标准曲线中的0号管 6.接触血清戴手套一只，实验结束要洗手
五、思考题
酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成 乳浊液。为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多， 但却清澈透明？
游离的胆固醇
胆固醇酯
胆固醇必须和脂蛋白结合才能运送到体
内各部分；脂蛋白又分低密度脂蛋白LDL和
高密度脂蛋白HDL。
低密度脂蛋白胆固醇 LDL-C
低密度脂蛋白把胆固醇从肝脏运送到全身组织， 过量时，它携带的胆固醇便积存在动脉壁上，久了 容易引起动脉硬化。因此低密度脂蛋白被称为“坏 的胆固醇”。
高密度脂蛋白胆固醇HDL-C