生物化学实验
生物化学实验原理和方法
生物化学实验原理和方法
生物化学实验是研究生物体内化学反应的实验方法，主要用于研究生物体内分子结构、代谢途径、蛋白质结构和功能等方面的问题。
生物化学实验的基本原理是利用生物体内的生物分子（如蛋白质、核酸、酶等）进行化学反应或与其他物质相互作用，从而检测、分离或定量这些分子。
生物化学实验主要包括以下几个方面的原则和方法：
1. 分离与纯化：将某一特定生物分子从其他组分中分离出来，获得纯净的样品。
常用方法包括离心、电泳、柱层析、过滤等。
2. 分析与测定：对生物分子的含量、结构和性质进行定量或定性的研究。
常用方法包括分光光度法、荧光法、比色法、拉曼光谱等。
3. 酶反应：酶是生物体内催化生物化学反应的一类蛋白质，其活性与底物浓度、温度、pH值等因素有关。
通过测定底物转化率来研究酶的活性。
常见的酶反应方法有酶解反应、酶促进反应等。
4. 蛋白质分析：蛋白质是生物体内最为重要的分子之一，可以通过电泳、质谱、Western blot等方法进行分析，从而了解蛋白质的结构、含量和功能。
5. 核酸分析：核酸是生物体内遗传信息的主要载体，可以通过PCR、凝胶电泳、
Southern blot等方法进行分析，用于检测基因的突变、限制性片段长度多态性等。
以上是一些常用的生物化学实验原理和方法，实际的生物化学实验会根据具体的研究目的和问题而选择适合的方法和技术。
生物化学课内实践教学(3篇)
第1篇一、前言生物化学作为一门研究生物体内化学反应及其调控规律的学科，在生命科学领域具有极其重要的地位。
为了让学生更好地理解和掌握生物化学的理论知识，提高学生的实验技能和科学素养，我们开展了生物化学课内实践教学活动。
本文将对本次实践教学进行总结和分析。
二、实践内容1. 蛋白质鉴定实验（1）实验目的：掌握蛋白质的鉴定方法，了解蛋白质在生物体内的作用。
（2）实验原理：蛋白质具有特定的氨基酸序列，通过特定的化学反应，可以产生具有特定颜色的化合物，从而实现对蛋白质的鉴定。
（3）实验步骤：①制备蛋白质样品；②加入双缩脲试剂，观察颜色变化；③加入Folin-酚试剂，观察颜色变化；④计算蛋白质含量。
2. 酶活性测定实验（1）实验目的：掌握酶活性测定的方法，了解酶在生物体内的作用。
（2）实验原理：酶活性是指酶催化特定反应的能力，通过测定酶催化反应的速度，可以评估酶的活性。
（3）实验步骤：①制备酶反应体系；②测定酶催化反应的速度；③计算酶活性。
3. 核酸提取实验（1）实验目的：掌握核酸提取的方法，了解核酸在生物体内的作用。
（2）实验原理：核酸是生物体内的重要遗传物质，通过特定的方法可以将核酸从细胞中提取出来。
（3）实验步骤：①破碎细胞；②提取核酸；③检测核酸。
4. 脂质分离实验（1）实验目的：掌握脂质分离的方法，了解脂质在生物体内的作用。
（2）实验原理：脂质具有不同的极性，可以通过特定的方法将其分离。
（3）实验步骤：①制备脂质样品；②加入氯仿，观察分层现象；③分离脂质。
三、实践总结1. 通过本次实践教学，我们掌握了蛋白质、酶、核酸和脂质的鉴定、提取和分离方法，提高了我们的实验技能。
2. 在实验过程中，我们学会了如何设计实验方案、操作实验仪器和记录实验数据，为今后的科研工作打下了基础。
3. 通过实验，我们深入了解了生物体内化学反应及其调控规律，增强了我们对生物化学理论知识的理解。
四、实践反思1. 实验过程中，我们发现部分同学对实验原理掌握不牢固，导致实验结果不准确。
生物化学实验报告
生物化学实验报告实验目的，通过本次实验，掌握生物化学实验的基本方法和技能，了解生物化学实验的原理和应用，提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理，生物化学实验是利用生物化学原理和方法，对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器，本次实验所需材料包括，蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品；试剂，酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等；仪器，分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤：1. 蛋白质的定性实验，取少量蛋白质样品，加入蛋白质定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验，取少量核酸样品，加入核酸定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验，取少量酶样品，加入酶定性试剂，观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验，取少量碳水化合物样品，加入酚酞试剂，观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析，利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器，对生物分子进行定量分析。
实验结果分析，根据实验结果，可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析，从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论，通过本次实验，掌握了生物化学实验的基本方法和技能，了解了生物分子的定性和定量分析方法，提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义，生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节，通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解，为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中，我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法，还培养了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验，我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解，提高了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生物化学实验报告
生物化学实验报告生物化学是一门研究生命体系中化学成分和物质转换过程的科学，其实验研究对于揭示生命的本质、改善人类生命质量具有重要意义。
本文将以实验报告的形式，介绍一次生物化学实验的设计、过程和结果。
一、实验目的本次实验的目的旨在从多个方面探究某种生物化学物质的结构、性质及功能，以及探索该物质在生命体系中的作用。
具体的实验目标包括：1. 通过化学方法及相关仪器对该化合物的分子结构进行分析和测定；2. 对该化合物的氧化还原性进行测定，并探究其可能的氧化还原反应机制；3. 通过光谱分析、酶活性测定等方法，确定该化合物在生命体系中的作用及其机制；4. 总结实验结果，探讨该化合物在生物化学领域中的应用及前景。
二、实验步骤本次实验主要包括以下步骤：1. 提取目标化合物。
选用某一生物体组织作为原料，在适当的化学反应条件下，经过酶促反应、液液抽提、柱层析等步骤，旨在获得目标化合物的高纯度样品。
2. 分析结构。
使用核磁共振(NMR)、高效液相色谱(HPLC)、紫外可见光谱(UV-vis)等现代科学仪器和技术，对提取的化合物进行结构分析和测定，以揭示化合物分子结构，及其性质和可能的反应机制。
3. 氧化还原性测定。
利用常用的氧化还原滴定法，对化合物的氧化还原性进行测定，及探究其可能的氧化还原反应机制。
4. 酶活性测定。
通过对该化合物活性酶的特定底物的催化反应，测定其反应速率及相关动力学参数，以推测该化合物在生命体系中的作用方式及机制。
5. 总结实验结果。
根据所测得的实验数据和分析结果，对该化合物的结构、性质及功能进行总结，即探讨其在生物化学领域中的应用及未来前景。
三、实验结果及分析根据实验数据和分析结果，我们可以得出以下结论：1. 通过化学反应及柱层析等步骤，我们从生物体组织中获得了目标化合物，并通过核磁共振(NMR)等技术分析，揭示了化合物的结构；2. 通过常用的氧化还原滴定法，我们测定了化合物的氧化还原性，并推测了其可能的氧化还原反应机制；3. 通过酶活性测定等方法，我们推测了该化合物在生命体系中的作用机制及性质，具体表现为一定的生物活性及催化能力；4. 综合以上实验结果，我们总结了该化合物在生物化学领域中的应用前景，并探讨了可能的发展方向及挑战。
生物化学实验(整理版)
生物化学实验（整理版）一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能，提高实验技能。
3. 培养科学探究能力，提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作：了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项：严格按照实验步骤进行操作，注意实验安全，保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式：包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
2. 实验报告的要求：内容完整、条理清晰、数据准确、分析深入、讨论充分、结论明确。
五、实验拓展1. 结合实验内容，查阅相关文献，了解生物化学领域的最新研究进展。
2. 尝试设计新的实验方案，对生物化学现象进行深入探究。
3. 参加学术讲座、研讨会等活动，拓宽生物化学知识面。
生物化学实验（整理版）一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能，提高实验技能。
3. 培养科学探究能力，提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作：了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项：严格按照实验步骤进行操作，注意实验安全，保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式：包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
生物化学的实验技术有哪些
生物化学的实验技术有哪些生物化学是一门研究生物体化学组成和生命过程中化学变化的学科，实验技术在生物化学的研究中起着至关重要的作用。
以下为您介绍一些常见的生物化学实验技术。
一、分光光度法分光光度法是一种基于物质对光的吸收特性来定量分析物质浓度的方法。
在生物化学中，常用于测定蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度。
例如，通过测量蛋白质在 280nm 处的吸光度，可以估算蛋白质的浓度。
分光光度法操作简便、快速，且灵敏度较高。
二、电泳技术电泳是指带电粒子在电场中向与其所带电荷相反的电极移动的现象。
在生物化学中，常用的电泳技术有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳常用于分离和分析 DNA 片段，根据 DNA 片段的大小不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳则常用于分离蛋白质，能够分辨分子量差异较小的蛋白质。
三、层析技术层析技术是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离的方法。
常见的层析技术有凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
凝胶过滤层析根据分子大小进行分离，大分子先流出，小分子后流出。
离子交换层析基于分子所带电荷的不同来分离物质。
亲和层析则利用生物分子之间的特异性亲和力进行分离，具有很高的选择性。
四、离心技术离心是利用离心机旋转产生的离心力，使不同密度、大小的颗粒分离的技术。
在生物化学实验中，常用于分离细胞器、细胞组分、蛋白质复合物等。
差速离心通过逐渐提高离心速度，分步沉淀不同大小的颗粒。
密度梯度离心则是在离心管中形成密度梯度，使不同密度的颗粒在相应的密度区带中沉降，从而实现分离。
五、PCR 技术（聚合酶链式反应）PCR 技术是一种用于扩增特定 DNA 片段的分子生物学技术。
通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程，使 DNA 片段呈指数级扩增。
PCR 技术在基因诊断、基因克隆、基因突变检测等方面有着广泛的应用。
六、酶联免疫吸附测定（ELISA）ELISA 是一种利用抗原抗体特异性结合进行检测的技术。
大学生物化学实验报告
一、实验名称：蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的：1. 了解凝胶层析法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用凝胶层析法测定蛋白质的分子量。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
三、实验原理：凝胶层析法是一种利用凝胶作为固定相，通过分子大小不同的物质在凝胶孔径中的移动速度差异来实现分离的方法。
在凝胶层析中，大分子物质不能进入凝胶内部的孔径，而小分子物质可以进入孔径，从而在洗脱过程中，大分子物质先流出，小分子物质后流出。
通过测量不同分子量蛋白质的洗脱体积，可以计算出其分子量。
四、实验材料与试剂：1. 凝胶层析柱（直径1.5cm，长30cm）2. 凝胶（聚丙烯酰胺凝胶）3. 蛋白质样品（已知分子量）4. 标准样品（已知分子量）5. 洗脱液（Tris-HCl缓冲液）6. 显色剂（考马斯亮蓝G-250）7. 移液器8. 旋转混匀器9. 分光光度计五、实验步骤：1. 准备凝胶层析柱：将凝胶倒入层析柱中，用洗脱液充分浸泡凝胶，直至凝胶膨胀并固定在层析柱中。
2. 准备样品：将蛋白质样品和标准样品分别稀释至适当浓度。
3. 加样：将蛋白质样品和标准样品分别加入凝胶层析柱中，用洗脱液洗脱，收集不同洗脱体积的洗脱液。
4. 显色：将收集到的洗脱液加入考马斯亮蓝G-250显色剂，室温下显色10分钟。
5. 测量：用分光光度计测定显色液在595nm处的吸光度值。
6. 数据处理：以标准样品的分子量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
根据蛋白质样品的吸光度值，从标准曲线上查得蛋白质的分子量。
六、实验结果：（此处插入实验数据表格，包括标准样品和蛋白质样品的分子量、洗脱体积、吸光度值等）七、实验分析：通过凝胶层析法，成功分离了蛋白质样品，并测定了其分子量。
实验结果表明，蛋白质样品的分子量与标准样品的分子量相符，说明实验操作正确。
八、讨论与心得：1. 凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质分离方法，可用于测定蛋白质的分子量。
2. 在实验过程中，要注意凝胶层析柱的制备、样品的加入和洗脱液的收集等操作步骤，以保证实验结果的准确性。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。
（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。
（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。
（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。
（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。
移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。
（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。
离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。
（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
生物化学实验
（二）样品蛋白质浓度的测定 待测样品必须进行适当的稀释，使每毫升中含有0.5mg左右的蛋白质，才能进行测定。 该过程至少重复两次或平行测定两次。
7200分光光度计的使用
四、结果处理
固体样品中蛋白质含量＝m’×Vm/Vn×1/m×10-3×100% 式中m′——由标准曲线查到的样品的蛋白质含量（mg） Vn ——用于显色的样品体积（ml） Vm —— 样品稀释后的体积（ml） m ——样品的质量（g）
三、操作方法
1. 样品制备 称取粉碎过40目筛的（玉米）样品2.50 g（精确至0.01 g）放入100 mL锥形瓶中； 沿器壁缓慢加入50 mL l％的盐酸溶液，并轻轻摇动使全部样品润湿； 将锥形瓶放入沸水浴中，预热3min，在沸水中准确加热15min； 立即取出，迅速冷却至室温。
2．样品测定 先加1 mL30％的硫酸锌溶液，充分混匀； 再加入1 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀并全部转 移至 100 mL容量瓶中，用少量蒸馏水将锥形瓶冲洗几次； 若泡沫过多，加几滴无水乙醇消泡； 用蒸馏水定容至刻度； 混匀后过滤，弃去初始滤液15 mL，收集其余滤液 充分混匀； 进行旋光测定。
四、结果处理 皂化值=
式中 VA—空白瓶盐酸用量（mL）； VB—样品瓶盐酸用量（mL）； m—油脂的质量（g）。
五、思考题
1. 上式中（VA - VB ）的含义是什么? 2. 试列出由皂化值计算油脂相对分子质量的公式。
生物化学实验
Q3：在测酶活力时应注意哪些反应条件？为什么？
A3： （1）保持最适温度。因为随着温度的升高，酶促反应速率 加快；但当温度过高时，又会使酶变性失活，酶促反应速率 反而会下降。只有在最适温度时反应速率最大。 （ 2 ）选择最适 pH 。在此 pH 时酶活性最大，过高或过低， 酶活力会降低。 （3）底物浓度应足够大，保证酶可以完全被底物饱和结合。 （4）酶量应小于底物浓度，否则反应体系底物不足，发生 有的酶分子尚不能发挥作用，酶浓度与酶促反应速率不成正 比。 （5）添加激活剂。有些酶需要激活剂，有激活剂条件下酶 才体现有活力。 （6）去除抑制剂。抑制剂会抑制酶活性，使酶活力偏低。
Q5：举例说明为什么一般不用质量单位表示酶量？ A5：催化活性是酶的一个独特属性，酶蛋白质再多，纯度 再高，如果没有活性，则是毫无意义的。因此在表示酶量 时，一般不用质量单位，而是用活力单位表示。如有一种 酶制剂，在最适条件下，每分钟能催化1微摩尔底物转化为 产物所需要的酶量是 0.5 微克那么 5 微克酶制剂含有 10U ， 用“10U/5微克酶”比用5微克酶更能反映酶量。
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2008—2009 学年度第 一 学期
开课单位 课程名称 授课班级 任课教师
水产学院 生物化学实验 养殖 0713 韩芳
试验一蛋白质显色反应和氨基酸纸层析
（一） 蛋白质的显色反应
一、 目的要求： 1、 理解蛋白质具有双缩脲反应。 2、 理解蛋白质和α--氨基酸均能与茚三酮作用产生有色化合物。 3、 了解氨基酸、蛋白质的某些侧链功能基团能发生黄色反应、米伦氏反应
二、教学方法和教学学时： 1、教学方法：学生操作实验，教师指导。 2、教学学时：4 学时。
三、实验内容： 以桔络、作实验样品，用 10 倍量的 1%盐酸抽提（研磨），制得 50ml 抽
提液；用 1%盐酸作空白液。脉动和鲜橙多饮料，离心后的6—二氯酚靛酚滴定法测定该抽提液或样品液中 VC 的含量。
六、思考题
1．常用蛋白质的提取方法有哪些？各有何优缺点？
2．考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋白质含量的原理是什么？还有哪些蛋白质定
量法？
3．如何正确使用分光光度计？
七、作业：完成实验报告。
实验四 还原糖和总糖含量的测定（3，5-二硝基水杨酸比色法）
一、目的要求：
1、掌握用硝基水杨酸比色法测定样品中总糖和还原糖含量。
（1）标准曲线的制作
取 6 支具塞试管，编号后，按下表加入试剂。
管号
12345 6
蛋白质标准液（ml）
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水（ml）
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
考马斯亮蓝 G-250 试剂（ml）
55555 5
蛋白质含量（μg）
0 20 40 60 80 100
（二） 氨基酸的纸层析法分离
一、目的要求：
1、 掌握分配层析分离技术的原理。
2、 掌握用纸上分配层析法分析氨基酸的方法。
二、教学方法和教学学时：
1、教学方法：学生操作实验，教师指导。
2、教学学时：2 学时。
三、实验内容：
以滤纸及其结合水作为固定相，以有机溶剂（正丁醇：醋酸：乙醇：
水=4：1：1：2）作为流动相，分离混合氨基酸样品，并鉴定其成分。
之完全进入凝胶柱内。注意每当液面降至床表面时，都要小心及时地加入洗脱液，
以保持凝胶床面不露出液面。
4、洗脱与收集 当加样结束后，开始用洗脱液洗脱并收集流出液。调节洗
脱液流速为 0.3mL/min。先收集 4mL 后，再以每管 0.3mL（约 6 滴）分部收集，
观察并记录 3 种有色物质被分离的先后顺序和收集液颜色的深浅程度（以－、＋、
管做参比，在 595nm 波长下比色，记录吸光度。
四、结果处理
根据所测样品提取液的吸光度，在标准曲线上查得相应的蛋白质含量（μg），
按下式计算：
样品蛋白质含量（µg / g鲜重）= 查得的蛋白质含量（µg）× 提取液总体积（ml） 样品鲜重（g）× 测定时取用提取液体积（ml）
五、注意事项
比色应在出现蓝色 2min～lh 内完成。
量。
四、结果与分析：
（一）糖的定量测定结果
管号
还原糖测定管号 总糖测定管号
①
②
I
II
还原糖待测液（ml）
1
1
总糖待测液（ml）
1
1
蒸馏水（ml）
1
1
1
1
3,5- 二 硝 基 水 杨 酸 1.5
1.5
1.5
1.5
(ml)
计算公式：
查曲线所得还原糖质量（mg）× 提取液总体积
还原糖% =
测定时取用体积 ×100
2、掌握总糖和还原糖的提取方法。
二、教学方法和教学学时：
1、教学方法：学生操作实验，教师指导。
2、教学学时：5 学时。
三、实验内容：
1、制作葡萄糖标准曲线 2、以面粉为材料，500C 水浴提取还原糖；用硝基水杨酸比色法测定出还原糖的
含量。
3、取食用面粉，酸解法制备总糖水解液；用硝基水杨酸比色法测定出总糖的含
物质的量浓度×34.02
被分解的H 2O2量（mg）× 酶液总体积（ml） 过氧化氢酶活性 = 测定时用酶液量（ml）
样品质量（g）× 时间（min）
式中：34.02 为过氧化氢摩尔质量。 （二） 分析结果 五、 作业：实验报告。
实验六 维生素 C 的定量测定
一、目的要求： 掌握用 2，6—二氯酚靛酚滴定法测定样品中 VC 的原理及方法。
1、提取 用分析天平准确称取洗净风干的桔皮 2g，放入研钵中研碎。加入 5mL 1％盐酸溶液仔细研磨。浆液经滤纸过滤到 50mL 容量瓶中。如此反 复提取 3－4 次。最后用 1％盐酸溶液定容至刻度并混匀。
2、滴定 将已标定的 2，6—二氯酚靛酚溶液装入微量滴定管（5mL）内。 取 3 只 50mL 锥形瓶，各加入 10mL 桔皮提取液。用微量滴定管内的染料溶 液进行滴定。当滴定至提取液呈淡红色，并保持 15 秒内不褪色时，即为 滴定终点。记录所消耗的 2，6—二氯酚靛酚溶液的毫升数。另取 3 只锥 形瓶，各加入 10mL 1％盐酸溶液如上作空白对照滴定。
实验七 葡聚糖凝胶柱层析法基本训练
一、目的要求： 1、 学习与掌握凝胶层析分离的一般原理和操作方法。 2、 了解蓝色葡聚糖、细胞色素 C、DNP—甘氨酸的基本性质。 二、教学方法和教学学时： 1、教学方法：学生操作实验，教师指导。 2、教学学时：4 学时。 三、实验内容：
葡聚糖凝胶 G—50 或 G—100 加水，沸水浴溶胀 2hr，装柱，加样， 洗脱与收集，绘制洗脱曲线。
实验五 过氧化氢酶活性的测定——碘量法
一、 目的要求： 掌握过氧化氢酶活性的测定的原理及方法。
二、 教学方法和教学学时： 1、教学方法：学生操作实验，教师指导。 2、教学学时：4 学时。
三、 实验内容： 1、 酶液的提取 2、 酶活力测定。
四、 结果与分析： （一） 实验结果 用空白滴定值减去样品滴定值即可求出此期间酶所分解的过氧化氢量。 被分解的 H2O2 量(mg）＝[空白滴定值(ml)—样品滴定值(ml)]×硫代硫酸钠
四、结果与分析：
用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原
点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的 Rf 值，与标准氨基 酸的 Rf 值对照，确定水解液中含有哪些氨基酸。
（一）实验结果
混合样品
标准氨基酸
亮氨 谷氨 酪氨 组氨
酸
酸
酸
酸
Rf
成 分
计算公式： （二）分析结果： 五、注意事项 1．点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面（即展层时样品可能达到的 部分）。 2．点样斑点不能太大（直径应小于 0.3cm），防止层析后氨基酸斑点过度扩 散和重叠，且吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。 3．展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。 六、思考题 1．为什么点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面？ 2．影响物质移动速率 Rf 值的因素有哪些？ 七、作业：完成实验报告
1、溶胀
2、装柱 洗净的层析柱应保持垂直位置，柱内先装入洗脱液，排除层析柱
滤板下的空气，关闭出口。柱内留下约 10mL 洗脱液，加入搅拌均匀的葡聚糖凝
胶 G－50 的浆液，打开柱底部出口，调节流速为 0.3mL/min。凝胶颗粒随溶液慢
慢流下而均匀沉降到层析柱底部。不断补入凝胶浆液，直到凝胶床高 15cm 为止。
床面上保持有少量洗脱液，关闭出口。操作过程中应注意不能让凝胶床表面露出
液面，并防止层析床内出现“纹路”。
3、加样 打开出口，使洗脱液凹液面恰好下降到床表面时，及时关闭出口。
然后吸取 0.5mL 样品液，小心加于床表面成一薄层，切勿搅动床表面。小心打开
出口，让样品液流入凝胶柱内。再用 0.5－1mL 洗脱液洗凝胶床表面 2 次，并使
实验三 蛋白质的粗提及含量测定（考马斯亮蓝 G-250 法）
一、 目的要求：
1、 掌握蛋白质粗提方法。
2、 掌握考马斯亮蓝 G－250 法样品蛋白含量的原理。
二、 教学方法和教学学时：
1、 教学方法：学生操作实验，教师指导。
2、 教学学时：4 学时。
三、 实验内容：
1．蛋白质的粗提：
2．样品中蛋白质含量的测定
＋＋、＋＋＋等符号表示）。
5、绘制洗脱曲线 以洗脱管数为横坐标，洗脱液颜色深浅为纵坐标，在坐
标纸上绘制洗脱曲线。
四、结果与分析：
实验结果：
图 1 洗脱曲线
洗 脱 液 颜 色
洗脱管数 分析结果 五、注意事项 加样时，为了不让样品稀释，必须使洗脱液凹液面下降到与床表面相切。打开出 口不容易控制，也可用滴管从上面吸取多余的洗脱液。 六、作业：实验报告。
样品质量（mg）
总糖% = 查曲线所得水解后还原糖质量（mg）× 稀释倍数 ×100 样品质量（mg）
（二） 结果分析：
1、面粉中主要含有何种糖？
2、在提取糖时，其他杂质是否会影响到测定？
3、分析操作误差和偶然误差。
五、注意事项
标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
六、思考题
1．可用不同材料，以比较含糖量的差异。 2．面粉中主要含有何种糖？ 3．在提取糖时，其他杂质是否会影响到测定？ 七．作业：完成实验报告
等显色反应。 二、 教学方法和教学学时：
1、教学方法：学生操作实验，教师指导。 2、教学学时：2 学时。 三、 实验内容： 蛋白质是由很多氨基酸通过特殊的结构而形成的，氨基酸以及这些特殊的结 构与化学试剂作用而产生颜色，称呈色反应。蛋白质的呈色反应非常灵敏， 常用作检验蛋白质和某些氨基酸的反应，也是定量测定的依据。 <一>、双缩脲反应：验证蛋白质具有双缩脲反应，能观察到蓝紫色的出现。 l．取小量固体尿素，故在干燥小试管中，在弱火上加热，此时尿素溶融并 放出氮，直到溶融物呈白色而坚硬的停止加热。 2．冷却后，加入 10％NaOH 溶液 1ml，摇匀溶解，再加入 1％CuSO4 溶液 5 滴， 摇匀，观察颜色。 3．取另一小试管，加入 10％NaOH 溶液 1ml 及 1％CuSO4 溶液 5 滴，后逐滴加 入 1％卵清蛋白溶液，观察溶液颜色的变化。 <二>、茚三酮反应：验证蛋白质能与茚三酮作用产生蓝紫色化合物。 l．取干净滤纸一小片，滴上 1％酪氨酸溶液 1 滴，酒精灯上小火烘干。 2．冷却后加 l～2 滴 0.1％茚三酮酒精溶液，待酒精蒸发后烘干(注意勿着 火)，观察出现颜色。 <三>、黄色蛋白反应: 验证蛋白质的某些侧链功能基团能发生黄色反应（与 浓 HNO3 反应）。 l、取 1％卵清蛋白 lml 于溶液中，加浓硝酸（3－5）滴，此时出现蛋白质沉 淀（为什么？），小心加热，观察沉淀颜色的变化。 2、用自来水冷却试管，逐渐滴人 40％NaOH 溶液使之成为碱性，观察沉淀颜 色的变化。 四、 作业：实验报告