离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备
1 材料和方法 1.1 材料：蟾蜍或蛙、蛙类手术器械、支架、肌动器、张力换能器、生物信号采集处理系统、 任氏液。 1.2 方法
实验 5.1 离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备 Sciatic-gastrocnemius Preparation of Toad
预习要求 1．理论知识：生理溶液的的配制，任氏液是蛙类的生理溶液。 2．技术知识：蛙类的毁脑脊髓技术。
蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，而且其离体组织的生活条 件比较简单，易于控制和掌握，来源也较丰富，因此在生理学实验，常用蛙或蟾蜍的坐骨神经 腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。制备具有正常 兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的基本操作技术之一。
器固定在铁架台的微调固定器上，且与换能器平行，并把标本中预留的股骨固定在肌动器上（图 5.2-1B）。 1.2.2 实验装置连接 将腓肠肌跟腱的结扎线固定在张力换能器的悬臂梁上，不宜太紧，此连 线应与桌面垂直。把穿好线的坐骨神经轻轻提起，放在刺激电极上，应保证神经与刺激电极接 触良好。换能器的输出端与生物信号采集处理系统的输入通道相连。启动生物信号采集系统软 件，选择好通道和采样参数设置，启动记录按钮，开始记录。
3讨论 （1）实验中观察到的阈刺激是神经纤维的阈刺激，还是肌肉的阈刺激？ （2）在一定的刺激强度范围内，为什么肌肉收缩的幅度会随刺激强度的增大而增大？ （3）单收缩的潜伏期是指什么？其中包括哪些时间因素和生理过程。 （4）分析讨论不完全强直收缩与完全强直收缩的条件与机制？。 （5）为什么刺激频率增高肌肉收缩的幅度也增大？ （6）本实验表明骨骼肌有哪些生理特性？试说明其生理意义。
放，“频率”按钮，可调刺激频率；“连续、单次”开关设置单次状态，刺激器发放单个脉冲， “强度”按钮，可调刺激电压。按压“启动”按钮，刺激器根据设置的参数发出刺激脉冲刺激 坐骨神经，仿真记录仪上显示Βιβλιοθήκη 肠肌收缩曲线、打标记、标注实验内容。
（4）测量按钮：按测量按钮，仿真记录仪显示所做实验项目的实验曲线，仿真记录仪面板 按钮变为图标按钮，有放大、缩小、压缩、扩展、定位图标按钮，分别可使仿真记录仪内的实 验曲线纵向放大或缩小，横向压缩或扩展，定位图标按钮可使所选记录曲线处的位置移到仿真 记录仪左边框。
实验注意事项 ① 制备神经肌肉标本过程中，要不断滴加任氏液，以防标本干燥，丧失正常生理活性。 ② 操作过程中应避免强力牵拉和手捏神经或夹伤神经肌肉。 ③ 毁脑脊髓时防止蟾蜍皮肤分泌的蟾蜍毒液射入操作者眼内或污染实验标本。
2结果 取锌铜弓在任氏液中沾湿后迅速接触坐骨神经，如腓肠肌发生收缩，表明标本具有正常的
1 材料和方法 1.1 材料：蟾蜍或蛙；蛙板、探针、粗剪刀、手术剪刀、尖镊子、玻璃分针、大头针、培养皿、 滴管、瓷碗、锌铜弓、任氏液。 1.2 方法 1.2.1 毁脑脊髓：取蟾蜍一只，用左手握住，以示指压其头部前端使其尽量前俯（图 5.1-1）， 右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，进针深度约 2mm，有脱空感即到达椎管，随即将探针改变 方向向上刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；再将探针原路退出，向下刺向尾侧， 捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，捣毁脊髓。此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成 为一毁脑脊髓的蟾蜍（pithed toad）。否则须按上法再行捣毁。
图 5.1-3 坐骨神经-腓肠肌标本
方法②：上述已剥皮的标本不先分离两腿，取仰卧位，用玻璃分针将两侧坐骨神经紧靠脊 柱根部各结扎一线暂不剪下。再将标本俯卧，用三根大头针钉在蛙板上，使充分伸直成人字型。 用尖头镊子夹住骶骨尾端稍向上提，使骶部向上窿起，用粗剪刀水平位剪除骶骨。用弯头玻璃 分针自剪口处伸入将一侧坐骨神经轻轻勾出，在其下方横置玻璃分针，使其暴露于剪口上方并 具有一定的张力。用玻璃分针在坐骨神经沟内分离出坐骨神经的大腿部分，直至腘窝处。剪断 股二头肌和半膜肌等肌腱，剪断前方的股四头肌腱。然后以同样的步骤，处理另一侧之大腿坐 骨神经。撤除固定，从脊柱根部剪断坐骨神经，手执结扎线将神经轻轻提起，顺序向下剪断其 所有分支。将神经搭在腓肠肌上，用粗剪刀自膝关节周围向上剪除刮净所有大腿肌肉，距膝关 节约 1cm 处剪断股骨。依同法处理另一侧标本。用尖头镊子在上述坐骨神经腓肠肌标本的跟腱 下方穿孔，穿线结扎。提起结扎线，在结扎线下方剪断跟腱，并游离腓肠肌至膝关节处，用粗 剪刀水平方向伸进腓肠肌与小腿之间，在膝关节处剪去腓肠肌以外的部分。保留部分即为附着 于股骨之上的、具有坐骨神经支配的腓肠肌标本。将标本浸入盛有新鲜任氏液之培养皿中待用。
图 5.1-1 毁蟾蜍脑脊髓 1.2.2 剪除躯干上部及内脏：用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱。左手握住蟾蜍下肢，大拇指抵住 脊柱尾骨，右手用粗剪刀沿脊柱两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部 下垂（图 5.1-2）。剪除全部躯干上部及内脏组织，弃于瓷碗内。
图 5.1-2 剪除躯干上部及内脏 1.2.3 剥皮：避开神经，左手持镊子夹住脊柱，右手捏住皮肤边缘，向下牵拉剥离皮肤。拉至 大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧。将全部皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏 液的培养皿中。然后洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤。 1.2.4 完成标本的坐骨神经部分
夏满莉 周新妹
实验 5.3 神经干动作电位及其传导速度的测定 Measurement of the Action potential of Nerve Trunk and its
Conduction Velocity
预习要求 1．理论知识：兴奋、兴奋性的概念；静息电位、动作电位的概念及其形 成机制；动作电位的传导原理；神经纤维的分类。 2 技术知识：蟾蜍或蛙坐骨神经的制备 生物信号采集处理系统的使用
（2）刺激频率对骨骼肌收缩的影响 用最大刺激强度的连续刺激，刺激频率按 1 Hz、6 Hz、 10 Hz、15Hz 、20 Hz、30Hz 逐渐增加（或刺激间隔逐渐减小），分别记录不同频率时的肌肉收 缩曲线，观察不同频率时的肌肉收缩变化。
注意事项 ①如果肌肉在未给刺激时即出现挛缩，是由于漏电等原因引起，需检查电器接地是否良好。 ②做肌肉最大收缩时，刺激强度不宜太大，否则会损伤神经。 ③要将制备好的坐骨神经腓肠肌标本先放在任氏液中浸泡一段时间。 ④在肌肉收缩后，应让肌肉休息一定时间再作下一次刺激，特别是在观察刺激频率的影响 时。 ⑤实验过程中保持换能器与标本连线的张力保持不变。
图 5.2-2 不同刺激频率对肌肉收缩的影响 ab 潜伏期；bc 缩短期；cd 舒张期
2结果 （1）整理实验所得曲线，并在曲线下注明刺激强度和刺激频率，标出阈强度、最大刺激强
度。 （2）测量单收缩的 3 个时程：潜伏期、收缩期与舒张期，比较单收缩和复合收缩的幅度（图
5.2-2）。 （3）描述不同刺激强度和刺激频率对骨骼肌收缩的影响。
1.2.1 蟾蜍或蛙坐骨神经腓肠肌标本制备 （1）在体标本：毁脑脊髓，剥去一侧下肢自大 腿跟部起的全部皮肤，然后将标本俯卧位固定于蛙板上。在大腿内侧的股二头肌与半膜肌之间， 纵向分离坐骨神经至膝关节处，并在神经下穿线备用。然后分离腓肠肌的跟腱，穿线结扎，并 连同扎线将跟腱剪下，一直将腓肠肌分离至膝关节。在膝关节旁钉一大头针，折弯压住膝关节， 至此在体标本制备完成（图 5.2-1A）。（2）离体标本：采用离体坐骨神经腓肠肌标本时，将肌动
不同频率的电脉冲刺激神经时，肌肉会产生不同的收缩反应。若刺激频率较低，每次刺激 的时间间隔超过肌肉单次收缩的持续时间，则肌肉的反应表现为一连串的单收缩(single twitch)。 若刺激频率逐渐增加，刺激间隔逐渐缩短，肌肉收缩的反应可以融合，开始表现为不完全强直 收缩(incomplete tetanus)，以后成为完全强直收缩(complete tetanus)。
Muscular Contraction
预习要求 1．理论知识：神经-肌接头的兴奋传递；骨骼肌收缩的分子机制；骨骼肌
细胞的兴奋-收缩耦联，影响骨骼肌收缩的因素。
2．技术知识：蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备，张力换能器的定标及微
一条坐骨神经干是由许多兴奋性不同的神经纤维所组成的。保持足够的刺激时间不变，刚 能引起其中兴奋性较高的神经纤维产生兴奋，表现为受这些神经纤维支配的肌纤维发生收缩， 此时的刺激强度即为这些神经纤维阈强度(threshold)，具有此强度的刺激叫阈刺激(threshold stimulus)。随着刺激强度的不断增加，有较多的神经纤维兴奋，肌肉的收缩反应也相应逐步增 大，强度超过阈值的刺激叫阈上刺激(suprathreshold stimulus)。当阈上刺激强度增大到某一值时， 神经中所有纤维均产生兴奋，此时肌肉做最大的收缩。再继续增强刺激强度，肌肉收缩反应不 再继续增大。将引起肌肉最大收缩(maximal contraction)的最小刺激强度的刺激称为最大刺激 (maximal stimulus)。
探索性问题 1．试设计实验，刺激腓肠肌与刺激支配腓肠肌的坐骨神经不应期有何不同？ 2．连续电刺激神经，坐骨神经腓肠肌标本会出现疲劳现象吗？为什么？ 3．试设计实验，证明骨骼肌的生理特性。
模拟实验操作 （1）进入“模拟实验 1 刺激强度和频率对骨骼肌收缩的影响”。 （2）熟悉模拟实验窗口。 （3）打开刺激器电源开关。“连续、单次”开关设置，连续状态下刺激波“定时”连续发
方法①：避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再 从耻骨联合正中央剪开。将已分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。取腿一条，先用玻璃分 针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后用大头针将标本背位固定于蛙板上。用玻璃分针在股二
头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟内，纵向分离暴露坐骨神经的大腿部分，直至分离至腘窝胫神 经分叉处。然后剪断股二头肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱，并绕至前方剪断股四头肌腱。自上向 下剪断所有坐骨神经分支。将连着 3～4 节椎骨的坐骨神经分离出来。将已游离的坐骨神经搭在 腓肠肌上。用粗剪刀自膝关节周围向上剪除并刮净所有大腿肌肉，在距膝关节约 1cm 处剪断股 骨。弃去上段股骨，保留部分即为坐骨神经腓肠肌标本（图 5.1-3）。
蟾蜍坐骨腓肠肌实验报告
一、实验目的1. 掌握蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。
2. 观察并分析坐骨神经刺激对腓肠肌收缩反应的影响。
3. 探究不同刺激强度和频率对腓肠肌收缩的影响。
二、实验原理坐骨神经是人体最大的混合神经，由腰骶神经根合并而成，主要负责下肢的感觉和运动功能。
腓肠肌是人体下肢的主要肌肉之一，负责小腿的屈曲和踝关节的屈伸。
本实验通过刺激坐骨神经，观察腓肠肌的收缩反应，探讨神经肌肉的兴奋性和收缩机制。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：蟾蜍2. 实验仪器：刺激器、放大器、示波器、张力传感器、计算机、剪刀、镊子、电极、玻璃皿、任氏液等四、实验方法1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本：将蟾蜍处死后，剥去皮肤，暴露腰骶丛神经，游离大腿肌肉之间的坐骨神经及小腿的腓肠肌。
将神经和肌肉两端结扎，剪去无关分支，保留膝关节，剪去腿骨，将标本离体。
将标本置于任氏液中，保持湿润。
2. 连接实验装置：将坐骨神经连接刺激器输出端，腓肠肌连接张力传感器，张力传感器连接放大器，放大器连接示波器和计算机。
3. 设置刺激参数：根据实验需求设置刺激强度、频率和持续时间。
4. 进行实验：刺激坐骨神经，观察腓肠肌的收缩反应，记录张力变化。
5. 数据分析：分析不同刺激强度和频率下腓肠肌的收缩反应，探讨神经肌肉的兴奋性和收缩机制。
五、实验结果1. 在不同刺激强度下，腓肠肌的收缩反应随着刺激强度的增加而增强，直至达到最大收缩。
2. 在不同刺激频率下，腓肠肌的收缩反应随着刺激频率的增加而增强，直至出现不完全强直收缩。
3. 当刺激强度和频率同时增加时，腓肠肌的收缩反应更为明显。
六、实验结论1. 坐骨神经刺激可以引起腓肠肌的收缩反应，说明神经肌肉之间存在兴奋传递。
2. 不同刺激强度和频率对腓肠肌的收缩反应有显著影响，说明神经肌肉的兴奋性和收缩机制与刺激参数密切相关。
3. 本实验结果为研究神经肌肉的兴奋性和收缩机制提供了实验依据。
七、实验讨论1. 本实验中，刺激坐骨神经可以引起腓肠肌的收缩反应，说明神经肌肉之间存在兴奋传递。
生理学实验报告-《坐骨神经-腓肠肌标本的制备》
实验二-坐骨神经标本—腓肠肌标本的制备一、实验目的：1.学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。
2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌的制备方法。
3.了解电刺激的极性法则。
二、实验原理：1、牛蛙作为实验动物的优势：离体实验是动物生理学主要的实验方法之一。
两栖动物是冷血动物，其基本生理机能与温血动物近似，而其离体组织器官维持活性所需要的条件比较简单，因此它常被选为生理学实验提供离体组织或器官的实验动物。
蟾蜍或青蛙坐骨神经—腓肠肌在任氏液中可维持生理活性数小时，在其基础上还可进一步制作神经干标本、腓肠肌标本，可用于研究肌肉收缩的特性，神经和肌肉的兴奋性、传导性，刺激与反应的关系，神经肌肉接头活动等生理活动及相关机制，甚至还可以用于药物筛选如抗疲劳药物的模型。
其中牛蛙人工养殖成本低产出率高，相对蟾蜍要更安全。
因此，本次实验选择牛蛙作为实验对象。
2、锌铜弓刺激检测标本活性的原理：锌铜弓在溶液中沾湿以后，锌的表面电离出正离子，里面形成负离子；而铜的表面电离出负离子,里面形成正离子。
当用锌铜弓接触活组织时，电流便沿着锌一活组织→铜的方向流动而产生刺激效应。
所以锌相当于正极,面铜相当于负极发挥刺激作用；当断开时，则发生相反的效应。
锌的金属电势比铜低，形成一定的电势差（就相当于有电压），锌铜弓是把一根锌棒和一根铜棒一端焊在一起，另一段分开，则接触样本（例如神经干）时，会引起样本局部去极化，引发动作电位。
三、实验器材：牛蛙，常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针)，蜡盘，蛙板（木质或硬泡沫塑料），玻璃板，固定针，锌铜弓，培养皿或不锈钢盘，污物缸，滴管，纱布，粗棉线，任氏液。
四、实验流程和步骤：1.牛蛙的双毁髓一手握住牛蛙，背部向上。
用拇指压住牛蛙的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂；另一手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及两耳中间的凹陷处（此处与两眼的连线成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。
蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备缝匠肌神经标本制备
实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备一、实验目的1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别）2、离体标本实验（与在体标本实验的区别）3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理4、掌握离体标本的制备及手术训练5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验急性动物实验可分为离体和在体实验两种方法。
离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、细胞或细胞中的某些成分。
置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的干预因素对其功能活动的影响。
例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜上单个离子通道的电流特性。
在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。
例如，以动脉插管记录动物血压，可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功能。
急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规律。
但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差异。
慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。
实验前一般需对动物作某些预处理，待动物康复后再进行观察。
例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。
生理学实验——坐骨神经-腓肠肌标本制备
4、分离坐骨神经：
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底向上，用固 定针将标本固定在蛙板上。用玻璃分针在半膜肌和股二头肌之间分离出坐骨 神经。注意分离时要仔细用剪刀剪断坐骨神经的分支，勿伤神经干，前面分 离至脊柱坐骨神经丛基部，向下分离至腘窝。保留与坐骨神经相连的一小块 脊柱，将分离出来的坐骨神经搭于腓肠肌上，或放于蛙板上。
注意事项
1.破坏脑、脊髓要完全，以蟾蜍四肢松弛、无自发运动为准。 2.制作标本过程中，应经常用任氏液湿润标本，以防标本干 燥，丧失活性。 3.分离神经须用玻璃分针，不可用金属器械，操作过程中应 避免过度牵拉及损伤神经。 4.股骨保留不可过短，否则标本不易固定。
思考题
神经上的兴奋如何传递给骨骼肌的？试述其过程及特点。
基本要求
实验准备：穿隔离衣、戴手套、携带实验指导和实验报 告纸 实验分组：按分组名单分组并确定组长 实验报告：认真书写，按时完成，下次实验上课上交 卫生打扫：清洗器械及实验台，打扫实验室卫生、
垃圾分类处理
实验报3.实验原理 4.实验步骤 5.实验结果：按实验项目逐一描述，利用图表展示具体数据 6.结果分析：就实验结果进行分析与讨论 7.思考题
5、分离股骨头：
去除膝关节周围以上的全部大腿肌肉，用剪刀刮净股骨上附着的肌肉， 保留约1cm的股骨。
6、游离腓肠肌：在腓肠肌的跟腱处穿线结扎，在结扎处远端剪断并
游离腓肠肌至膝关节处，最后在膝关节处剪断。完成坐骨神经支配的腓肠肌 标本。
7、检验标本活性：用经任氏液蘸湿的锌铜弓的两极，接触神经，观
察腓肠肌是否收缩。
2、剪除躯干上部及内脏：
在骶髂关节上约1cm处用粗剪刀剪断脊柱，将头、前肢和内脏一并弃 去，仅保存一段脊柱和后肢。脊柱的两旁可见坐骨神经丛。
蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本的制备
蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验报告实验名称蛙的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验目的要求学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本以及腓肠肌标本制备的方法；学习生理学实验基本的组织分离技术；观察刺激强度，刺激频率与肌肉收缩反应的关系；掌握引导神经干复合动作电位与测定其传导速度的基本原理与方法。
实验材料，仪器，试剂蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、玻璃分针等）、烧杯、培养皿、纱布、棉线、粗剪刀、蛙板、污物缸、滴管、生理信号采集系统、张力传感器、铁架台、计算机、任氏液等。
实验原理两栖类动物的一些基本生命活动与生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制与掌握。
因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。
任氏液是—种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等。
腓肠肌由许多的纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。
当刺激强度过小时，不应期肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。
而能引起肌肉发生收缩的最小刺激强度，为阈刺激，但全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。
这时，即使再加大刺激强度，肌肉的收缩强度也不会随之而增大。
可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激。
肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速地收缩反应，即单收缩。
单收缩的过程分为三个时期，潜伏期、收缩期、舒张期。
刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。
在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。
若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩与舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。
实验二 坐骨神经-腓肠肌标本的制备
实验二坐骨神经－腓肠肌标本的制备一．目的和要求1．学习蛙类动物双毁髓的实验方法2．学习掌握坐骨神经－腓肠肌标本的制备方法3．了解急性离体器官，组织实验二．动物与器材1．动物：蟾蜍2．器材：常用手术器械（手术剪、手术镊、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针）、辣盘、锌铜弓、培养皿、蛙钉、滴管、烧杯、棉线3．试剂：任氏液――提供母液，需按1：10稀释三．原理把蟾蜍的腓肠肌和连同它相连的坐骨神经从体内剥离出来，制成“神经－肌肉”标本；如果在神经的游离端一侧轻轻的触动神经，或者通以适当的电流作为刺激，那么在经过一个极短的时间后，可以看到肌肉出现一次快速的缩收和舒张。
而且，只要刺激不造成组织的损伤，上述反应可以重复出现。
这说明，神经或肌肉表面受到刺激的点，一定产生了某种信号，他们沿着神经纤维或肌细胞传导，最后导致整个肌肉发生受挫。
按该信号的传导速度和可重复性分析，只能是电信号。
用近代精密的电测量设备，即可确定在神经被刺激的点产生了一个微弱的电信号，它以一定的速度传向肌肉，而肌肉的收缩则发生在这种电反应之后。
上述神经－肌肉标本实际是整个体内反射弧的一部分，后者在进行正常活动时，先由感受器细胞对外在环境变化进行跨膜信号传导，随后才发生电信号在传入和传出神经纤维上的传导和细胞间的信息传递。
而肌肉运动主要时由于产生的动作电位。
四．方法与步骤1．双毁髓：左手握蟾蜍，背部向上，用无名指和小指夹在其后肢，中指抵制前肢，食指按压其头部前端，拇指压住躯干背部，使头向前俯；右手持毁髓针，找到两耳后腺之间的凹陷处即枕骨大孔位置，垂直刺入约1～2mm，然后将针尖向前刺入颅腔，搅动数下，捣毁脑组织（可感觉针触及颅骨）。
此时为单毁髓动物。
再将毁髓针退回垂直刺入状态，扔留1～2mm的针尖位于枕骨大孔处，将针尖转向右方，与脊椎平行刺入椎管，捣毁脊髓。
只蟾蜍后肢瘫痪，不再动弹。
2．剥制后肢标本：将双毁髓的蟾蜍背面向上放于蜡盘上，左手拿眼科镊轻提起两前肢间背部的皮肤，右手持眼科剪横向剪开皮肤，暴露耳后腺后缘水平的脊柱。
坐骨神经腓肠肌标本制备
坐骨神经-腓肠肌标本制备一、实验目的要求1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。
2、学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌标本的制备方法。
3、了解电刺激的极性法则。
二、实验原理1、蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动与生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。
因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。
2、细胞的静息膜电位为外正内负，电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。
膜电位减小时，细胞去极化，细胞兴奋；膜电位增大时，细胞超极化，细胞兴奋性被抑制。
蘸有任氏液的锌铜弓接触活组织时，可产生沿锌片—活组织—铜片流向的电流对细胞产生刺激效应。
三、实验材料与仪器1、实验材料：牛蛙2、实验器材：手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液四、实验步骤1、洗净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→游离股骨头→标本检验→电刺激极性法则的验证2、双毁髓一只手握住牛蛙，使其背部向上。
用拇指压住牛蛙背部，食指按压其头部前端，另一只手持毁髓针，由两眼之间沿中线向下触划，触及凹陷处即为枕骨大孔。
将毁髓针垂直刺入枕骨大孔。
将针尖向前刺入颅腔内搅动，此时为单毁髓；将毁髓针退回枕骨大孔，针尖转向后方，与脊椎平行刺入椎管内捣毁脊髓，完成双毁髓。
3、坐骨神经-腓肠肌标本制备（1）剥制后肢标本:轻提双毁髓蛙，自背面耻骨联合上方约1公分处横向剪断脊柱。
轻轻托起后肢，看清坐骨神经位置，沿脊柱两侧横向切口剪断体壁，去除断口以上肢体与内脏放入污物缸。
剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。
（2）分离两后肢：用粗剪刀纵向剪开脊柱，并剪断两后肢相连的肌肉，一只用于剥制标本，一只放入任氏液中保存。
（3）分离坐骨神经：将后肢标本脊柱端腹面向上，趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。
生理蟾蜍腓肠肌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉蟾蜍腓肠肌标本的制备方法。
2. 掌握刺激强度、频率对肌肉收缩的影响。
3. 观察神经肌肉接头兴奋传递和骨骼肌兴奋的电变化与收缩之间的时间关系及其各自特点。
4. 理解神经肌肉兴奋性的生理机制。
二、实验原理蟾蜍腓肠肌标本是生理学实验中常用的实验材料，因其离体组织生活条件易于掌握，且与哺乳类动物生理功能相似。
通过观察蟾蜍腓肠肌在不同刺激强度、频率下的收缩反应，可以了解神经肌肉兴奋性的生理机制，以及刺激与反应之间的关系。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：蟾蜍、任氏液、生理盐水、手术刀、剪刀、镊子、电刺激器、换能器、记录仪等。
2. 实验仪器：显微镜、电刺激器、换能器、记录仪、生理盐水浴槽等。
四、实验步骤1. 制备蟾蜍腓肠肌标本：a. 将蟾蜍处死，用生理盐水冲洗干净。
b. 用手术刀沿脊柱两侧剪开皮肤，暴露腰骶丛神经。
c. 游离坐骨神经和腓肠肌，剪去无关分支。
d. 将腓肠肌和坐骨神经分别结扎，用生理盐水浸泡。
2. 连接仪器：a. 将坐骨神经连接到电刺激器。
b. 将腓肠肌连接到换能器。
c. 将换能器连接到记录仪。
3. 观察刺激强度对肌肉收缩的影响：a. 调整电刺激器的输出强度，从低到高依次刺激坐骨神经。
b. 观察并记录腓肠肌的收缩反应，分析刺激强度与肌肉收缩之间的关系。
4. 观察刺激频率对肌肉收缩的影响：a. 调整电刺激器的输出频率，从低到高依次刺激坐骨神经。
b. 观察并记录腓肠肌的收缩反应，分析刺激频率与肌肉收缩之间的关系。
5. 观察神经肌肉接头兴奋传递和骨骼肌兴奋的电变化与收缩之间的时间关系：a. 观察并记录腓肠肌在刺激前后的电位变化。
b. 分析电位变化与肌肉收缩之间的关系。
五、实验结果与分析1. 刺激强度与肌肉收缩的关系：实验结果显示，随着刺激强度的增加，腓肠肌的收缩幅度也随之增加。
当刺激强度达到一定阈值时，肌肉收缩达到最大幅度。
当刺激强度继续增加时，肌肉收缩幅度不再增加。
2. 刺激频率与肌肉收缩的关系：实验结果显示，随着刺激频率的增加，腓肠肌的收缩幅度逐渐减小。
蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备
蟾蜍的坐骨神经一腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验报告实验名称蛙的坐骨神经一腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验目的要求学习并掌握坐骨神经一腓肠肌标本以及腓肠肌标本制备的方法；学习生理学实验基本的组织分离技术；观察刺激强度，刺激频率与肌肉收缩反应的关系；掌握引导神经干复合动作电位和测定其传导速度的基本原理和方法。
实验材料，仪器，试剂蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、玻璃分针等）、烧杯、培养皿、纱布、棉线、粗剪刀、蛙板、污物缸、滴管、生理信号采集系统、张力传感器、铁架台、计算机、任氏液等。
实验原理两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。
因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。
任氏液是—种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等。
腓肠肌由许多的纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。
当刺激强度过小时，不应期肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。
而能引起肌肉发生收缩的最小刺激强度，为阈刺激，但全部肌纤维同时收缩时，贝y出现最大的收缩反应。
这时，即使再加大刺激强度，肌肉的收缩强度也不会随之而增大。
可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激。
肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速地收缩反应，即单收缩。
单收缩的过程分为三个时期，潜伏期、收缩期、舒张期。
刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。
在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。
若刺激频率较小,两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。
坐骨神经-腓肠肌标本的制备
2.不要挤 压蟾蜍耳 后腺。
3.避免强力
4.标本先放
牵拉神经或 在任氏液中 用金属器械 浸泡一段时 夹捏神经。 间。
彻底。
探索性实验
The exploring experiment 温度对坐骨神经—腓 肠肌收缩的影响
坐骨神经—腓肠肌标 本制作方法的改进
给细胞外Ca2+浓度 对坐骨神经—腓肠肌 收缩的影响
Experimental methods and steps
8.制作坐骨神经-腓肠肌标本
跟腱处穿线、结扎、剪断
分离腓肠肌
膝关节下剪断胫腓骨
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
9.任氏液湿润标本
10.锌铜弓检查兴奋性
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
茶对离体坐的捉拿 枕骨大孔的位置 破坏的标志
（1）枕骨大孔的位置
位置：两线交汇的凹陷处
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
（2）破坏的标志：
呼吸消失 四肢松软
（3）方法二
粗剪将蟾蜍上颌从两耳连线 平面离断
暴露椎管
直接破坏脊髓
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
2.剪除躯干上部和内脏
骶髂关节上1-2cm 剪去的部分 留下的部分
实验方法与步骤
Experimental methods and steps
2.剪除躯干上部和内脏
手持蟾蜍下肢，腹部向下
仅保留后肢和下段脊柱 脊柱两旁即坐骨神经
实验方法与步骤
Experimental methods and steps