尿液标本的细菌学检验微生物学实验
尿液标本细菌学鉴定的流程
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正确的操作流程和注意事项能够确保检验结果的准确性。
临床微生物学检验的标本采集
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
尿液标本的细菌学检验
尿液标本的细菌学检验尿液标本的细菌学检验介绍：尿液标本的细菌学检验是对尿液标本进行试验进而进行判断出标本中所含的细菌类型与种类，以便给以病人针对性治疗的检验。
尿液标本的细菌学检验正常值：淡黄色至琥珀色，没检出引起尿道感染细菌。
尿液标本的细菌学检验临床意义：异常结果：(1)淡黄至无色：见于大量饮水、尿崩症、糖尿病。
(2)橙色至黄褐色：胆红素尿。
肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸，服用大黄、番泻叶等。
(3)棕褐色或浓茶色：血红蛋白尿，体内溶血，常见于蚕豆病，阵发性睡眠性血红蛋白尿，血型不合之输血。
(4)红色：血尿。
(5)绿色：细菌尿(铜绿假单胞菌)。
(6)乳白色：见于乳糜尿(丝虫病等)，脂肪尿。
需要检查的人群：疑似细菌尿、脂肪尿等症状的患者尿液标本的细菌学检验注意事项：不合宜人群：没有检查前禁忌：注意正常的生活饮食习惯，注意个人卫生。
特别是保持尿道的卫生。
检查时要求：积极配合医生尿液标本的细菌学检验检查过程：近年来、尿液检查广泛应用半自动、自动分析仪，采用于化学试带技术，主要项目包括pH、比密、蛋白、葡萄糖、酮体、隐血、胆红素、尿胆原、亚硝酸盐等，较新型的仪器还可检测白细胞、红细胞及维生素C等指标，尿沉渣计数仪也已问世。
自动分析仪能迅速准确地为临床提供定量或半定量检查结果。
但若干指标也存在一些局限，以下是尿分析仪部分指标结果应用的说明。
1.蛋白质(Protein)：能报告从十～十十十十(200～5000mg/L)含量的蛋白质，但试带主要与白蛋白起反应，所以对重症肾小球肾炎，尿中出现多量大分子蛋白时，常呈阴性或弱阳性，应采用磺柳酸法或醋酸加热法检验。
2.葡萄糖(Glucose)：试带法不受传统方法干扰因素的影响，特异性、灵敏度都高于传统方法。
3.隐血(Occultblood)：能检出尿中血红蛋白、肌红蛋白，当血红蛋白达150μg/L及红细胞为5～10个/μl时，可出现阳性，有部分化学纸条灵敏度过高，正常尿中出现较多假阳性，尿中含有不耐热酶也可呈假阳性。
检验微生物学 临床体液及排泄物标本
金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂， 37℃培养 18-24小时
副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与SS培 养基。
粪便标本检验
11
检测方法3
定量接种环涂抹法：使用 1ul的定量接种环沾满 尿液，在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘 以 1000，等于每毫升尿中的菌数。
尿液标本检验
6
检测方法和报告
• 阳性 革兰阴性菌>105cfu/ml， 革兰阳性菌>104cfu/ml有临床意义
• 阴性 报告为“48h培养无菌生长”
尿液标本检验
7
粪便标本检验
五官科标本检验
34
二.眼分泌物检验与报告
1.涂片镜检 淋病、沙眼衣原体、真菌……
2.分离培养 需氧菌 真菌
五官科标本检验
35
三. 临床意义
新生儿眼炎-葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌…… 结膜炎-细菌、病毒、衣原体、葡萄球菌、链球菌….. 角膜炎-金黄色葡萄球菌……
五官科标本检验
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一.耳及乳突标本采集
直接镜检 离心沉淀涂片革兰染色 淋球菌镜检 假丝酵母镜检 结核分枝杆菌镜检
尿液标本检验4来自检测方法和报告分离培养 普通培养 淋球菌培养 厌氧菌培养 真菌培养
尿液标本检验
5
检测方法和报告
• 菌落计数
倾注平皿法： 尿液稀释成1：10、1：100、1： 1000，取此液1ml放入直径9cm灭菌平皿内，同 时加入已熔化并冷至50℃的培养基与尿混合，待 凝固后置35 ℃培养 。
12
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
22尿液标本细菌学检验标准操作规程
5.3.1
5.3.2
5.3.3
6
7
7.1
7.2
7.2.1
7.2.2
7.3
7.4
8
8.1
8.2
8.3
9
尿液的细菌学检查（中段尿培养加计数）对于泌尿道感染的诊断有重要价值。正常尿液是无菌的，而外尿道有正常菌群寄生，标本的采集必须无菌操作。另外，细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数＞105CFU/ml,提示感染（膀胧炎、肾孟肾炎、肾或膀胧结核等）。常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、肠球菌等。
3.2.2
3.2.3
3.2.4
3.3
3.3.1
3.3.2
3.3.3
3.4
采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于冰箱。
3.5
3.5.1
3.5.2
3.5.3
4
参见《质量管理程序》。
5
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
5.1
5.1.1
5.1.2
5.1.3
5.2
取中段尿，用定量接种环取尿液10μl接种于血琼脂平板和麦康凯营养琼脂平板上，5%～10%CO2,35℃培养18～24小时，观察有无菌落生长，并进行菌落计数。平板生长菌落数乘以100即每毫升尿液的菌落数。根据菌落特征和涂片、染色结果，选择相应的方法作进一步鉴定。
10
如查出抗酸杆菌阳性，则应及时向临床报告并作传染病报告。
编 写： 审 核： 批 准：
日 期： 年 月 日
1
规范尿液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2
尿液。
3
3.1
3.2
3.2.1
尿液标本的细菌学检验微生物学实验
实验九、尿液标本的细菌学检验【器材】发模拟尿标本1-4# 1套/桌，发高压灭菌营养琼脂1瓶/桌，发一个无菌平皿/人，无菌吸管。
【倾注平板法】（每人做）1）稀释：①取尿标本1# 0.2ml+NS1.8ml配成1:10尿标本②从上述所配1:10尿标本中取0.2ml，加入1.8mlNS配成1:100尿标本③从上述所配1:100尿标本中取0.2ml，加入1.8mlNS配成1:1000尿标本2）涂无菌平板：分别从1:100和1:1000尿标本中取1ml加入各自无菌平皿中，并分别加50℃营养琼脂（10ml±），混均，冷凝后置35℃18—24h，菌落计数。
【直接涂片革兰染色镜检】（每人做）（1#尿标本）【观察菌落特点】在1:1000尿标本中菌落数大于100；1:1000尿标本中菌落数大于1000。
1~2mm圆形凸起、表面光滑湿润、呈金黄色、白色、柠檬色脂溶性不透明的菌落。
【各菌鉴定步骤】革兰染色镜检：1）G+C→触酶：①触酶阳性，为葡萄C→血浆凝固酶试验：阳性为金葡，阴性为表葡②触酶阴性，为链C 2）G-b→氧化酶①氧化酶阳性，为非发酵菌，O-F,铜绿水溶性色素→绿脓b②氧化酶阴性，肠道杆菌→KIA、MIU→初步鉴定→血清学试验最终鉴定【实验结果】（1#尿标本）11:100 G+葡萄状球菌2）触酶试验（+）3）血浆凝固酶试验（-）鉴定结果：1#尿标本直接涂片革兰染色观察，平均每个视野≥1个细菌（表示细菌定量培养≥105/ml）；再经过细菌培养、菌落计数、触酶（+）、血浆凝固酶（-）鉴定1#尿标本中的细菌为表皮葡萄球菌。
【实验讨论】1.标本采集及注意事项1）标本采集：①清洁中段尿②导尿或膀胱穿刺留尿标本2）注意事项：①尿标本采集后应立即送检，以免污染②要在未用抗生素前采集标本③尿液中不得加防腐剂和消毒剂2.菌落计数的影响因数较多，与抗生素的使用、输液、使用利尿剂、尿液的pH变化和细菌种类等有关。
3.尿液是良好的细菌生长环境，采取后应立即检验，放置时间过长会导致感染菌和杂菌过度生长，影响诊断的准确性。
尿液标本的细菌学检验
实验室外部质量控制
01
02
03
04
参与外部比对实验
与其他实验室进行比对实验， 确保检验结果的一致性。
外部质控数据
收集并使用外部质控数据，监 控检验过程的准确性。
定期评估
定期评估实验室的检验能力， 提高检验水平。
反馈与改进
根据外部质控结果，及时反馈 并改进检验过程。
检验结果的分析与解读
结果判断
根据检验结果判断是否存在细 菌感染。
CHAPTER 04
尿液标本细菌学检验的质量 控制
实验室内部质量控制
仪器校准
确保所有用于检验的仪 器都经过校准，以保证
结果的准确性。
试剂质控
使用经过验证的试剂， 并定期进行质控，确保
试剂质量。
操作规范
实验室人员需遵循标准 操作程序，避免操作失
误影响结果。
室内质控
定期进行室内质控，监 控检验过程的稳定性。
解读误差
了解可能出现误差的原因，正 确解读结果。
临床意义
结合临床情况，分析检验结果 的意义。
结果报告
准确、及时地报告检验结果， 为临床提供依据。
CHAPTER 05
尿液标本细菌学检验的临床 意义与价值
泌尿系统感染的诊断与治疗
诊断
尿液细菌学检验是诊断泌尿系统 感染的重要手段，通过检测尿液 中是否存在细菌，可以判断是否 存在尿路感染。
要点一
指导用药
尿液细菌学检验结果可以为医生提供用药指导，避免抗生 素滥用和无效治疗。
要点二
疗效评估
通过尿液细菌学检验，可以评估治疗效果，为后续治疗提 供依据。
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泌尿系统微生物检验结果分析
泌尿系统微生物检验结果分析泌尿系统微生物检验是指对泌尿系统内的微生物进行检测，以了解有关泌尿系统感染的情况。
泌尿系统微生物检验通常包括尿液培养、尿液镜检等项目，通过这些检验可以了解患者是否有泌尿系统感染，感染的微生物种类及其敏感药物情况等。
本文将从泌尿系统微生物检验结果的分析角度，对泌尿系统微生物检验结果进行详细解读。
一、尿液培养结果分析尿液培养是检测尿液中是否存在细菌、真菌等微生物，以及其种类和数量的重要检查项目。
通过尿液培养，可以了解患者是否患有尿路感染、膀胱炎、肾盂肾炎等疾病。
在检验结果中，首先需要关注的是是否有细菌、真菌等微生物的生长。
如果培养结果为“未见生长”，则表明尿液中不存在致病微生物，可以排除泌尿系统感染的可能。
如果培养结果为“阳性”，则需要进一步分析检测出的微生物种类及其数量。
1. 微生物种类：尿液培养结果通常会注明检测出的微生物种类，比如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等。
对于不同的微生物种类，可能对应不同的感染病情，需要医生进行进一步诊断。
2. 微生物数量：尿液培养结果中通常会标注检测出的微生物数量。
一般来说，微生物数量越多，代表感染程度越重。
需要根据患者的具体病情和临床表现进行综合分析。
对于检测出的微生物种类，还需要进行药敏试验，了解其对各种抗生素、抗真菌药物的敏感情况。
这有助于医生选择最合适的抗菌药物进行治疗，提高治疗效果。
二、尿液镜检结果分析尿液镜检是通过显微镜观察尿沉渣中的细胞和颗粒，以了解有关泌尿系统疾病和感染情况的检查项目。
尿液镜检可以发现红细胞、白细胞、细菌、结晶等成分，为泌尿系统疾病的诊断提供重要依据。
1. 红细胞：尿液中的红细胞增多可能是由于泌尿系统感染、结石、肿瘤等引起的尿路出血。
根据红细胞的数量和形态，可初步判断出血的部位和原因，有助于医生进行进一步诊断。
2. 白细胞：尿液中的白细胞增多通常是泌尿系统感染的表现。
白细胞的数量和形态可以反映炎症程度，对于判断感染的程度和严重性有一定帮助。
常见临床标本细菌学检验简述
分离培养
将标本接种在适宜的培养 基上进行细菌分离培养。
注意事项
01 确保采集工具的无菌性，避免交叉感染。
02 采集足够的标本量，以保证检验结果的准 确性。
03
及时送检，避免延误检验时间。
04
注意个人防护，避免感染。
PART 02
临床标本细菌学检验方法
分离培养
分离培养
将临床标本接种于适宜的固体或 液体培养基上，在适宜的温度和 环境下进行培养，使细菌得以生
免疫学鉴定
利用抗原-抗体反应的原理 ，通过免疫学方法进行细 菌的鉴定。
药敏试验
纸片扩散法
将含有不同抗菌药物的纸片贴在已接 种细菌的平板上，观察细菌的生长情 况，以判断细菌对抗菌药物的敏感程 度。
稀释法
E试验
将细菌接种在含有抗菌药物的平板上 ，通过测量抑菌圈的大小来判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
通过不断增加抗菌药物的浓度，观察 细菌的生长情况，以判断细菌对抗菌 药物的敏感程度。
结果解读
1 2
解读临床意义
根据细菌培养和药敏试验结果，判断细菌种类、 感染部位及病原体对抗生素的敏感性，为临床医 生提供诊断和治疗依据。
鉴别病原菌
通过细菌形态、染色、生化反应等实验手段，鉴 别不同病原菌，有助于针对性地选择抗菌药物。
3
判断耐药性
监测细菌对抗生素的耐药性，预测治疗效果，为 临床医生提供抗菌药物选择的参考依据。
伤口分泌物标本
用无菌棉签擦拭伤 口表面分泌物。
血液标本
采集静脉血液，常 用无菌注射器抽取 。
呼吸道标本
采集鼻咽拭子或痰 液，用无菌棉签擦 拭鼻咽部或咳痰。
粪便标本
采集新鲜粪便，避 免污染。
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实验九、尿液标本的细菌学检验
【器材】
发模拟尿标本1-4# 1套/桌，发高压灭菌营养琼脂1瓶/桌，发一个无菌平皿/人，无菌吸管。
【倾注平板法】（每人做）
1）稀释：
①取尿标本1# 0.2ml+NS1.8ml配成1:10尿标本
②从上述所配1:10尿标本中取0.2ml，加入1.8mlNS配成1:100尿标本
③从上述所配1:100尿标本中取0.2ml，加入1.8mlNS配成1:1000尿标本
2）涂无菌平板：分别从1:100和1:1000尿标本中取1ml加入各自无菌平皿中，并分别加50℃营养琼脂（10ml±），混均，冷凝后置35℃18—24h，菌落计数。
【直接涂片革兰染色镜检】（每人做）（1#尿标本）
【观察菌落特点】
在1:1000尿标本中菌落数大于100；1:1000尿标本中菌落数大于1000。
1~2mm圆形凸起、表面光滑湿润、呈金黄色、白色、柠檬色脂溶性不透明的菌落。
【各菌鉴定步骤】
革兰染色镜检：
1）G+C→触酶：
①触酶阳性，为葡萄C→血浆凝固酶试验：阳性为金葡，阴性为表葡②触酶阴性，为链C 2）G-b→氧化酶
①氧化酶阳性，为非发酵菌，O-F,铜绿水溶性色素→绿脓b
②氧化酶阴性，肠道杆菌→KIA、MIU→初步鉴定→血清学试验最终鉴定
【实验结果】（1#尿标本）
1
1:100 G+葡萄状球菌
2）触酶试验（+）
3）血浆凝固酶试验（-）
鉴定结果：1#尿标本直接涂片革兰染色观察，平均每个视野≥1个细菌（表示细菌定量培养≥105/ml）；再经过细菌培养、菌落计数、触酶（+）、血浆凝固酶（-）鉴定1#尿标本中的细菌为表皮葡萄球菌。
【实验讨论】
1.标本采集及注意事项
1）标本采集：
①清洁中段尿
②导尿或膀胱穿刺留尿标本
2）注意事项：
①尿标本采集后应立即送检，以免污染
②要在未用抗生素前采集标本
③尿液中不得加防腐剂和消毒剂
2.菌落计数的影响因数较多，与抗生素的使用、输液、使用利尿剂、尿液的pH变化和细菌种类等有关。
3.尿液是良好的细菌生长环境，采取后应立即检验，放置时间过长会导致感染菌和杂菌过度生长，影响诊断的准确性。
不能及时接种的标本可临时存放4℃冰箱，但不得超过2h。
4.尿路感染病原体检验的临床意义
①尿路感染常见肾盂肾炎（急性和慢性）、膀胱炎（急性为主）、尿道炎（细菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎）、前列腺炎（慢性常见）等。
②尿路感染主要经尿道口上行感染所致，极少数为血行感染，即从体内感染灶侵入血流到达肾脏引起肾盂肾炎。
尿液细菌学检验可反映肾脏、膀胱、尿道、前列腺等处的炎症变化。
临床表现主要有尿频、尿急、尿痛、排尿困难和腰痛等。
③尿路感染需要明确部位和急性与慢性，主要依病原菌检测，还要紧密结合临床综合考虑做出诊断，药物敏感试验对指导临床合理使用有效抗生素有重要意义。
5.通过此次实验掌握尿液标本细菌学检验程序、方法和注意事项以及掌握尿液标本的细菌计数方法。