乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)
乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒说明书
乳酸脱氢酶（LDH ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC0680规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体30 mL×1瓶4℃保存试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体25 mL×1瓶4℃保存试剂四液体60 mL×1瓶4℃保存标准品液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用时加入1.3 mL 双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；2、标准品：2 μmol/mL 丙酮酸钠溶液。
产品说明：LDH （EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD +/NADH 之间互变。
LDH 催化NAD +氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
乳酸脱氢酶测定试剂盒(乳酸底物法)产品技术要求danda
乳酸脱氢酶测定试剂盒(乳酸底物法)适用范围：本品用于体外定量测定人血清中乳酸脱氢酶的活性。
1.1规格规格1： (试剂1：20mL；试剂2：5mL)；规格2： (试剂1：40mL；试剂2：10mL)；规格3： (试剂1：80mL；试剂2：20mL)；质控品（冻干品）：为选配规格1（0.5mL×2；2水平)；规格2（1.0mL×2；2水平)。
1.2组成试剂盒组成见表1表1乳酸脱氢酶测定试剂盒组成2.1试剂2.1.1外观试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；各组分齐全，完整，液体无漏液；试剂1,试剂2均为透明液体，不得有沉淀和絮状物。
2.1.2装量每瓶不少于标示值。
2.1.3试剂空白吸光度用指定的空白样品测试试剂（盒），37℃条件下，光径1cm，在340nm处测定试剂空白吸光度A≤0.50。
空白变化率(△A/min)≤0.002.2.1.4分析灵敏度测定200U/L的样本，吸光度变化率（△A/min）大于0.01。
2.1.5线性范围2.1.5.1在[25,1000]U/L内,相关系数R≥0.990。
2.1.5.2在[25,100] U/L内，线性绝对偏差不超过±10U/L；(100,1000]U/L内，线性相对偏差不超过±10%。
2.1.6重复性重复测试(200±20)U/L和(500±50)U/L样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。
2.1.7批间差测定(200±20)U/L和(500±50)U/L样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.1.8准确度用国家标准物质(GBW（E）090350)检测，实测值与标示值的相对偏差在±10%内。
2.2质控品2.2.1外观质控品为冻干品。
2.2.2瓶间差瓶间差CV≤5%。
2.2.3赋值有效性试剂盒内的质控品，检测结果均在质控范围内。
2.3 效期稳定性试剂（所有组份）有效期为12个月到效期后一个月内进行检测，测定结果应符合2.1.3-2.1.8（除2.1.7批间差）、2.2.3项要求。
乳酸脱氢酶测定(精)
乳酸脱氢酶测定(2,4-二硝基苯肼法)
实验原理:在PH8.9的环境下,LDH催化乳酸形成丙酮
酸,同时使氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)受氢形成还原型辅酶 Ⅰ(NADH),后者在340nm波长下吸光度的增加与 LDH的活力成正比(速率法).丙酮酸与2,4-二硝基苯肼 在碱性条件下显色,在510纳米波长下测吸光度值.(终 点法) 实验准备: 工作试剂配制:每瓶干粉均用5ML缓冲液溶解,混合均 匀为工作试剂. 4N氢氧化钠用蒸馏水5倍稀释,即4份蒸馏水1份4N氢 氧化钠.
临床意义
在急性心肌梗死后8～18小时乳酸脱氢酶开始升高，
24～72小时达高峰，持续4～16天恢复正常，平均 10天，峰值可高达正常水平的10倍。乳酸脱氢酶同 工酶LDH，，主要存在于心肌中，如LDH1＞LDH2， 则表示有心肌梗死。乳酸脱氢酶及其同工酶检测，对 某些心电图诊断作用不大，而对发病后较迟就医的急 性心肌梗死患者的诊断，有较大的意义。还有，肝脏 疾病、恶性肿瘤液 样品 0.5 标准管 0.5 0.02 样品管 0.5 0.02
混合37℃水浴15分钟，然后各管加显色剂500 μL， 37℃水浴15分钟取 出，各管加稀释氢氧化钠2.0ml,室温放置3分钟510纳米波长测定.
标准值:400U/L 波长510纳米,试剂空白调零,按公式计 算结果. 参考范围:150-350U/L 样本要求：最适样本为当日空腹采集 的无溶血、无乳糜的血清或肝素抗凝 血浆及时测定。
乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)
乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)产简介：乳酸(Lactic acid ，LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物，是一种含有羟基的羧酸，分子式是C 3H 6O 3，参与生物化学很多反应过程。
乳酸检测有化学氧化法、酶催化法、电化学法、酶电极感应器法。
乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)其检测原理是在NAD 存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸，同时生成NADH 。
在碱性条件下显色剂与丙酮酸生成复合物，并使平衡偏向乳酸氧化为丙酮酸的方向，驱动反应完成，生成的NADH 与乳酸为等量摩尔。
通过分光光度比色法测定340nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出LD 水平。
组成：自备材料：1、 离心管或小试管2、 蒸馏水3、 水浴锅或恒温箱4、 比色杯5、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。
编号 名称TC0733 50T Storage试剂(A): 乳酸标准(20mmol/L) 1ml -20℃ 避光 试剂(B): 乳酸标准稀释液 1ml RT 试剂(C): LD 显色液C1: LD Assay buffer 15ml 4℃ 避光 C2: NAD buffer 2支 -20℃ 避光 C3: LDH solution50μl-20℃ 避光试剂(D): LD 终止液 200mlRT 使用说明书1份细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于LD 的检测。
高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的LD ，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。
2、 配制标准品工作液：4℃避光保存2个月有效。
3、 LD检测：按照下表设置空白管、对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P比色法)
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加入物(ml) 待测样品(血清、血浆、体液等) LDH 检测工作液
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乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 比色法)
简介：
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH 或 LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原 子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的 酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙 酮酸(P)之间的氧化还原反应。乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 比色法)是利用乳酸脱氢 酶催化上述逆反应，即丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD+。在上述反应过程中，丙酮酸还 原成乳酸，同时 NADH 氧化成 NAD+，引起 340nm 处吸光度的下降。该 LD-P 法的优点 是：1、操作比二硝基苯肼比色法简单；2、重复性好；3、准确性比二硝基苯肼法好；4、
2、 处理后的样品应及时检测，否则 LD4 和 LD5 易失效。 3、 血清或肝素抗凝血浆检测效果较好，草酸类、EDTA 抗凝剂对 LDH 活性有抑制作用。
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4、 避免使用溶血样本。 5、 为了您的安全和健康，请穿实验服幵戴一次性手套操作。
自动分析仪计算公式：LDH(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(296/10)=ΔA/min×4758.8 注意：如果待测样品加入 LDH 保护工作液，其结果应除以 0.9。
小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒操作说明操作说明
小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒操作说明操作说明小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒操作说明小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒实验原理小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被小鼠乳酸脱氢酶(LDH）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠乳酸脱氢酶(LDH）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明乳酸脱氢酶（LDH）法操作说明操作简介：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种常用的生物化学分析方法。
本文将详细介绍使用乳酸脱氢酶法进行实验操作的步骤。
材料准备：1. 乳酸脱氢酶试剂盒2. 样品溶液3. 乳酸标准品4. 实验用试管和显微管操作步骤：1. 样品制备- 将待测样品装入实验用试管中。
每个样品应分别装入不同的试管，以避免交叉污染。
- 若样品过浓稀，需要进行适当的稀释，确保样品浓度在测试范围内。
2. 标准曲线制备- 准备不同浓度的乳酸标准品溶液，浓度范围可根据实验要求而定。
- 将不同浓度的标准品溶液分别装入实验用试管中。
3. 试剂添加- 分别向样品管和标准品管中加入相同体积的乳酸脱氢酶试剂，充分混匀。
4. 反应温育- 将所有试管置于恒温水浴中，温度设定为适合乳酸脱氢酶反应的温度（一般为37°C）。
- 在设定的反应温度下，将试管保持在水浴中反应一段时间（时间根据实验要求而定）。
5. 反应终止- 在反应时间结束后，以适当的方法终止反应。
常见的终止方式是添加酸性试剂或采用其他合适的方法。
6. 测定乳酸脱氢酶活性- 使用光度计、分光光度计或其他合适的仪器，测定样品和标准品反应后产生的光吸收值。
吸收值与乳酸脱氢酶活性成正比。
- 通过标准曲线，将样品的吸收值转化为对应的乳酸脱氢酶活性。
注意事项：1. 本实验操作需要严格按照实验室安全操作规范进行，避免任何可能导致个人受伤或污染的行为。
2. 实验过程中的试剂、标样和废液等应按照实验室规定的方法处理，不得随意丢弃。
3. 在操作过程中，保持实验器材和试剂的洁净，尽量避免外界因素对实验结果的影响。
4. 操作时需注意避免交叉污染，尤其是样品的装管和试剂的配比过程。
5. 样品和标准品的选择要合适，浓度范围应覆盖实验要求。
6. 温育过程中，确保试管能均匀受热，并避免发生温度不稳定的情况。
总结：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种可靠的生物化学分析方法，适用于乳酸脱氢酶活性的测定。
LDH检测
乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。
同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。
通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。
LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。
LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。
吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。
该酶联反应原理的示意图如下：可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。
一个试剂盒可进行100次检测。
包装清单：产品编号产品名称包装C0016-1 LDH释放试剂 1.5mlC0016-2 乳酸溶液2mlC0016-3 酶溶液1ml×2C0016-4 INT溶液(10X) 0.2mlC0016-5 INT稀释液2ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，一年有效。
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乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)
简介：
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase ，LDH 或LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。
其反应公式：
乳酸+NAD +→丙酮酸+NADH+H +。
L →P 为正向反应；P →L 为逆向反应。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，
-70℃冻存，用于LDH 的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-70℃冻存，用于LDH 的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的LDH ，可以使用蒸馏水稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计 算单位蛋白重量组织或细胞内的LDH 含量。
2、 制作标准曲线：用LDH Assay buffer 准确稀释丙酮酸标准(5mmol/L)至0.5 mmol/L ，
按下表制备标准曲线。
编号 名称
TE0159 50T TE0159 100T Storage
试剂(A): 丙酮酸标准(5mmol/L) 1ml 2ml 4℃ 避光 试剂(B): LDH Assay buffer 15ml 30ml 4℃ 避光 试剂(D): 二硝基苯肼溶液 15ml 30ml 4℃ 避光 试剂(E): 碱性显色液 52ml
104ml
RT
使用说明书 1份
加入物
0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准(0.5mmol/L)(μl) 0 12.5 25 50 75 100 LDH Assay buffer(ml)
0.25
0.2375
0.225
0.2
0.175
0.15
蒸馏水(ml) 0.055 0.055 0.055 0.055 0.055 0.055 相当于LDH活力(金氏)单位(U) 0 125 250 500 750 100 3、配制碱性显色工作液：取适量的碱性显色液，按碱性显色液：蒸馏水=1.5:1的比例混
合，即为碱性显色工作液。
4、LDH酶促反应：按照下表设置对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，
并注意避免产生气泡。
如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物对照管标准管测定管LDH Assay buffer(ml) 0.25 —0.25
待测样品(如血清等)(ml) 0.005 —0.005
混匀，37℃水浴15min。
NAD Buffer(ml) —0.05 0.05
混匀，37℃水浴15min。
二硝基苯肼溶液(ml) 0.25 0.25 0.25
NAD Buffer(ml) 0.05 ——
混匀，37℃水浴15min。
碱性显色工作液(ml) 2.5 2.5 2.5
5、LDH检测：混匀，室温放置。
分光光度计440nm处检测吸光度，比色杯1.0cm光径，以空白管调零，读取各管吸光度值。
一般应数小时内检测完毕。
以酶活力单位为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。
以测定管与对照管吸光度值之差查标准曲线，求得酶活力单位(U)。
计算：
以标准管活力单位为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，用(A测定-A对照)之差值在标准曲线上查出待测样品的LDH酶活力单位。
注意事项：
1、标本严禁溶血，也不采用草酸盐、EDTA抗凝血浆。
2、提取出来的血清样本，不宜冰箱放置，应室温放置3天有效。
3、比色应在5-15min内完成，否则吸光度值会下降。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。