目的基因克隆之欧阳光明创编
抗菌药和抗真菌药之欧阳光明创编
抗菌药和抗真菌药欧阳光明（2021.03.07）（Antimicrobial and Antifungal Agents）基本要求第一节磺胺类药物及抗菌增效剂（Antimicrobial Sulfonamides and Antibacterial Synerists）磺胺类药物的发现，开创了化学治疗的新纪元，从发现、应用到作用机制学说的建立，只有十几年的时间。
尤其是作用机制的阐明，开辟从代谢拮抗寻找新药的途径，推动药物化学的发展。
通过对其副作用的研究，又发现了利尿药和降血糖药。
目前临床上使用频率对高的磺胺药物是磺胺嘧啶(Sulfadiazine)和磺胺甲噁唑（Sulfamethoxazol），关于其作用机理为磺胺类药物能与细菌生长所必需的对氨基苯甲酸（PABA）产生竞争性拮抗，干扰了细菌的酶系统PABA利用，PABA是叶酸的组成部分，叶酸为微生物生长中必要物质，也是构成体内叶酸辅酶的基本原料。
PABA在二氢叶酸合成酶的催化下，与二氢蝶啶焦磷酸酯及谷氨酸或二氢蝶啶焦磷酸酯与对氨基苯甲酰谷氨酸合成二氢叶酸。
再在二氢叶酸还原酶的作用下还原成四氢叶酸，为细菌合成核酸提供叶酸辅酶。
由于磺胺类药物和PABA这种类似性，使得在二氢叶酸的生物合成中，磺胺类药物可以取代PABA位置，生成无功能的化合物，妨碍了二氢叶酸的生物合成。
二氢叶酸经二氢叶酸还原酶作用还原为四氢叶酸，后者进一步合成辅酶F。
辅酶F为DNA合成中所必需的嘌呤、嘧啶碱基的合成提供一个碳单位。
人体作为微生物的宿主，可以从食物中摄取四氢叶酸，因此，磺胺类药物不影响正常叶酸代谢，而微生物靠自身合成四氢叶酸，一旦叶酸代谢受阻，生命不能继续，因此微生物对磺胺类药物都敏感。
本机理开辟了抗代谢学说，所谓代谢拮抗就是设计与生物体内基本代谢物的结构有某种程度相似的化合物，使与基本代谢物竞争性或干扰基本代谢物的被利用，或掺与生物大分子的合成之中形成伪生物大分子，导致致死合成（Lethal Synthesis），从而影响细胞的生长。
第讲 目的基因的克隆与分离
第讲目的基因的克隆与分离引言目的基因是指在一项研究中，具有研究意义或实际应用价值的基因。
目的基因克隆和分离是分子生物学研究的重要环节，它们为后续研究提供了基础和保障。
本文将介绍目的基因克隆和分离的方法和技术。
一、目的基因的克隆1. PCR扩增PCR是聚合酶链反应的简称，是一种利用DNA聚合酶酶作用、在体外增加DNA序列数量的技术。
PCR扩增可以在保证目的基因序列一致性的前提下，扩增出足够的DNA量，用于后续实验。
PCR扩增的步骤一般包括模板DNA的选择、引物的设计和勘误、PCR反应体系的搭建等。
2. 基因文库筛选基因文库指的是将一个或多个组织的基因在体外克隆并构建而成的基因库。
基因文库筛选是一种在文库中选取目的基因的方法。
其中最常用的是基于杆菌的蛋白表达文库、细胞质体DNA文库和DNA合成文库。
基因文库筛选的步骤一般包括构建文库、传统筛选和高通量筛选。
3. 限制性内切酶切割限制性内切酶切割是指利用特定的酶切位点将DNA分割成碎片，然后选取目标DNA寻找需要的限制酶切片段的方法。
这种方法可以快速而准确地寻找目的基因，并进行克隆。
限制酶切割的步骤一般包括DNA提取、DNA质量检测、选取限制酶和体外反应等。
二、目的基因的分离1. 分子杂交分子杂交是指在体外或体内使某一脱氧核糖核酸（DNA）与另一种DNA或核酸杂交而形成方法的过程。
它的作用是寻找与目的基因DNA互补的DNA序列，并在该序列中分离目的基因。
分子杂交的步骤主要包括细胞培养和DNA序列的寻找和筛选等。
2. 化学合成化学合成是指通过化学方法合成目的基因的方法。
这种方法可以直接合成目的基因，只要知道目的基因的序列就可以了，不需要进行PCR扩增、克隆等操作。
化学合成的步骤主要包括碱基合成、链延伸、中间产物合成和连接、滤液等。
3. 通量基因测序通量基因测序也称为高通量测序，是一种快速且准确测定DNA或RNA序列的方法。
通过对目的基因进行测序，可以快速分离目的基因。
宏观经济学发展脉络之欧阳光明创编
1. 萨伊定律与古典宏观经济模型欧阳光明（2021.03.07）萨伊是18 世纪末和19 世纪初的法国著名经济学家。
他认为，商品的买卖实际上只是商品和商品的交换;在交换中，货币只是在一瞬间起了媒介作用;卖者得到了货币，马上又会购买商品，所以卖者同时就是买者，即供给者就是斋求者。
一种产品的生产给其他产品开辟了销路，供给会创造自己的需求，不论产量如何增加，产品都不会过剩，至多只是暂时的积压，市场上商品的总供给和总需求一定是相等的，这就是著名的萨伊定律。
古典宏观经济模型是对萨伊定律的全面论证。
其基本观点是：由于价格机制是健全的，资本主义市场经济经常处于充分就业的状态。
该模型主要内容包括:总产出等于总供给，总供给主要取决于劳动力市场的供求状况;工资的灵活变动使劳动力市场实现充分就业均衡，从而使总产出量达到最大;利息率的灵活变动使投资与储蓄趋于一致;货币数量决定总需求，并在总供给不变的情况下，直接影响价格水平。
2. 凯恩斯宏观经济学的形成和发展凯恩斯革命是指凯恩斯的经济理论对宏观经济学的古典学派进行了带有革命性质的批判，建立了现代宏观经济学，其标志是1936 年《就业、利息和货币通论》一书的出版。
凯恩斯革命主要表现在三个方面:经济学研究的重点从稀缺资源最优配置转移到怎样克服资源闲置问题上来;资本主义市场经济经常运行在小于充分就业的状态中;政府应采取积极干预经济政策，促使充分就业的实现。
凯恩斯理论的核心内容是有效需求理论。
从20 世纪40—50 年代以来，凯恩斯的理论得到后人的进一步拓展，便之不断完善和系统化，从而构成了凯恩斯宏观经济学的完整体系。
这些拓展主要体现在希克斯和汉森同时创建的“IS-LM1 模型”、莫迪利安尼提出的“生命周期假说”、弗里德曼提出的“永久收入说”、托宾对投资理论的发展、索罗等人对经济增长理论的发展以及克莱因等人对宏观经济计量模型的发展。
在众多经济学家的努力下，日趋完善的凯恩斯宏观经济理论与微观经济学一起构成了经济学的基本理论体系，这一理论体系也被称为“新古典综合派”。
烧烫伤日常处理方法之欧阳光明创编
物的清毒解热、杀菌抗菌、止痛、化腐、生肌的功效，使患处在无损伤及通畅引流快速愈合，通常愈合后不留疤痕，基本都能保持原有肤色与各种部位的生理功能。
欢迎大家支持新时代医学的微博：欧阳光明（2021.03.07）乙肝五项乙肝已经是威胁我们健康的主要疾病之一了，中国的携带或者感染人口接近十分之一。
我国乙肝高发的主要原因是：家庭性垂直传播，包括母婴垂直传播和父婴垂直传播，尤以前者居多。
母亲如果乙肝E抗原阳性，所生子女未注射乙肝疫苗，大都成为乙肝病毒携带者。
我国乙肝的家庭聚集特征突出。
动物和人体研究证实，乙肝病毒可通过生殖细胞传播。
HBSAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 临床意义－－－－－过去和现在均未感染ＨＢＶ－－－－＋乙肝病毒隐形携带者，有既往感染史－－－＋＋急性乙肝病毒感染或有即往感染史－＋－－－感染过乙肝，无传染性，并产生免疫力或打过疫苗产生抗体－＋－＋＋急慢性乙肝恢复期，以前感染过乙肝，有免疫力－＋－－＋既往感染，急性HBV感染已恢复＋－－－＋急性乙肝感染阶段或慢性乙肝表面抗原携带者，传染性弱＋－－＋＋急性HBV感染趋向恢复；慢性乙肝表面抗原携带者，传染性弱；长期持续易变癌（俗称＂小三阳＂：小三阳通常是由“大三阳”转变而来，是人体针对E抗原产生了一定程度的免疫力。
）＋－＋－＋急性或慢性乙肝，传染性极强（俗称＂大三阳＂：首先是HBsAg阳性。
一般提示体内有乙肝病毒存在，现在正被感染；HBeAg阳性是乙肝病毒的复制指标，提示乙肝病毒正在体内活跃复制，病毒含量较多，传染性相对较强。
抗抗—HBc的阳性意义不大，只提示曾被乙肝病毒感染过，现在体内也许有病毒，也许没有。
）＋－－－－急性感染早期，慢性HBsAg携带者传染性弱＋－＋－－急性HBV感染早期，传染性强－－＋＋＋急性感染中、晚期＋－＋＋＋急性感染趋向恢复，慢性携带者＋－－＋－急性感染趋向恢复－－－＋－急性感染趋向恢复－＋－＋－HBV感染已恢复乙肝抗体“三兄弟”各自阳性的意义1、若患者的乙肝核心抗体呈阳性，则说明该患者曾感染过乙肝病毒或最近正受到乙肝病毒的感染。
十分钟试讲(必修一)之欧阳与创编
《细胞的能量通货---ATP》各位专家，各位评委，大家下午好！（鞠躬）我是生物03号考生，今天我试讲的题目是《细胞的能量通货---ATP》，下面开始试讲。
上课！同学们好，请坐！上课之前我们先来看一段视频。
大家看到了吗？萤火虫在晚上会发出漂亮的光芒，科学家们根据这个现象发明了荧光灯。
大家想一下，荧光灯是把什么能转变成了光能？对，是把电能转变成了光能。
那萤火虫发光是把什么能转变成了光能呢？是萤火虫利用自己体内的一种叫ATP的物质产生了光能。
其实ATP不只可以为生物发光提供能量，细胞中很多生命活动所需的能量都是由ATP提供的，那这节课我们就来学习细胞的能量通货ATP。
板书：《细胞的能量通货---ATP》首先，请看大屏幕，这是我们这节课的学习目标，下面我给出几分钟时间，请大家结合学习目标先把课本看一遍，并思考目标中的问题。
（下来指导学生；‘弯腰’嗯，对，这里，好，可以。
嗯，不错）好，现在大部分同学都已经把课本看了一遍，那我们就来检验一下你看的效果如何？首先第一个问题：ATP的中文名字是什么？它的结构是什么样的呢？好，小明同学，你来说一下吧。
喔，完全正确，请坐！小明说，ATP的中文名字是三磷酸腺苷。
它是由一分子的腺嘌呤一分子的核糖和三分子的磷酸构成的，小明说的完全正确。
大家看，这就是ATP的化学结构，它的左边这一部分是一个腺嘌呤，就是一个含氮碱基，中间是个五碳糖而且是个核糖，右面是三个磷酸基团。
通常情况下，我们把这个腺嘌呤和核糖合起来成为腺苷，用A来表示，然后，三个磷酸用P来表示。
并且，核糖与磷酸之间的这个化学键是个普通的磷酸键，用---来表示，而三个磷酸基团之间的化学键是个高能磷酸键，用~来表示，那，这就是ATP的结构简式。
这个高能磷酸键之所以称为高能，因为当这个化学键水解时会产生大量的能量。
这部分能量就可以用于细胞的生命活动。
那ATP在什么条件下就会水解呢？它这种物质又是怎么形成的呢？下面我们分为激情组，超越组，青春组，绽放组，我们分组讨论，合作探究。
加入商会不可不知的好处之欧阳光明创编
加入商会不可不知的好处欧阳光明（2021.03.07）市场经济越发展、越成熟，商人们越会意识到成立商会的必要。
遗憾的是，许多商人并不清楚商会的性质和作用，也不明白参加商会对自己的发展会有什么作用。
商会林林总总，各式各样，什么样的商会才是有生命力的呢？一个组织是不是有生命力，取决于其价值观、理念、经营方式等基因。
有生命力不一定轰轰烈烈，但一定会持续不断地成长。
当你加入这样的组织后，你也才能在一个好的环境下发展。
中国改革开放30多年，过去快速发展的企业多数是资源导向型或者关系导向型，但是今后这种粗放生产、靠资源掠夺或者靠“干爹”的时代已经过去。
在大环境变化时，只能向管理要效益，这就对老板自身素质提出了更高要求，老板不得不去学习。
在一个充满学习氛围的组织里，通过同行之间的交流、分享、探讨，可以快速而有效地学到各种管理工具落地的经验，探讨适合各自企业的有效方法。
而优秀的商会能做到这些，就会有长久的生命力。
有一句话说得好：以什么样的方式开始就会以什么样的方式结束。
如果以吃喝开始，肯定以吃喝结束，如果以学习开始，肯定会以学习联结，但是很难以学习来结束。
因为学习是一辈子的事，是结束不了的，除非你不想再学习了。
所以，当一个商会的核心领导层有学习的氛围，而且团队的执行力也是够强，不停留在喊口号阶段的时候，这样的组织，你就可以将其列为加入的商会名单中。
曾听过不少协会的会长、秘书长说，他们发展商会会员，往往会碰到商人发问“参加商会对我有什么好处”？一时难以明答，往往会陷入尴尬。
那么加入商会到底有什么好处，又有哪些事情是我们该注意的呢？一、人脉网络：做生意，首先得有人脉，得有关系。
人脉就是最大的财富。
凡成功的企业家都懂得人脉比金钱更重要，因此他会把参加社交活动，结识更多的人，聚餐应酬，当做一项极其重要的工作，并且从结识的人中选定少数人进行长时间的感情投资，最终成为好朋友。
其结果，这些朋友一定会在某一时期出手相助，助其成功。
农业概论论文之欧阳光明创编
农业概论课程论文欧阳光明（2021.03.07）学院：专业：姓名：学号：现代农业之农业科学技术摘要：合理开发资源、保护环境，促进农业可持续发展，根本出路在于科技进步。
我国人均资源量少，生态环境脆弱，尤其是土地沙化、水土流失和环境污染等问题相当突出。
改善生态环境已成为农业科技工作急迫而长期的艰巨任务。
实现传统农业向现代农业的跨越，尽快缩小与发达国家的差距，必然要在农业科学研究与技术开发上取得重大突破，促使先进适用技术及时充分地应用到农业生产中去，加速科学技术、特别是高新技术全面向农业渗透，大幅度提高农业科技整体水平，实现农业生产力水平质的飞跃。
推进新的农业科技革命，是农业科技工作者在新世纪的历史使命，也是各级政府、社会各界及广大农民面临的艰巨任务。
关键字：科学技术、功能、推广、农业教育一、什么是农业科学技术农业科技，主要就是用于农业生产方面的科学技术以及专门针对农村以及城市生活方面和一些简单的农产品加工技术。
包括种植，养殖，化肥农药的用法，各种生产资料的鉴别，高效农业生产模式等几方面。
邓小平同志说过：“科学技术是第一生产力”，我们赖以生存的基础是农业，从狩猎到养殖，从采摘野果到种植工作者，离不开劳动人民在生产中的探索和研究，今天，我们生活在物质丰富的年代，但是，我们不能忘记农业仍然需要发展，更需要科学。
二、农业科技进步的进程与动力改革开放20多年来，我国农业取得了举世瞩目的成就。
农产品实现了从长期短缺到供求基本平衡、丰年有余的历史性转变，全国农村总体上进入由温饱向小康迈进的阶段，农村社会主义市场经济体制基本建立。
我国农业和农村经济的发展已进入新阶段，调整农业结构、提高农业效益、增加农民收入、改善农村生态环境、实现农业和农村经济的持续稳定发展，必然要推进新的农业科技革命，实现传统农业向现代农业的跨越。
（一）农业的发展，最终要依靠农业科技的进步与创新。
1、新的世界性农业科技革命正在兴起。
随着经济全球化的进一步发展，许多国家纷纷采取增加投入、改革体制和组织重大科技行动等措施，加速农业科技进步与创新。
3心理健康C证面试考官可能会问的问题之欧阳光明创编
考生现场提问准备欧阳光明（2021.03.07）(1)气质类型包括哪几种。
思维、情绪、行为、交际希腊医生希波克拉底的看法，人体内有4种体液（即血液、粘液、黄胆汁、黑胆汁），每种体液所占比例的不同决定了人的气质差异，一、多血质多血质类型属于神经活动强而均衡的灵活型，好像春天，给人的感觉思维敏捷，学习上精力丰富，效率高。
情绪上待人热情，性格温和。
行动机敏，反应迅速，工作朝气蓬勃，表现出巨大的积极性。
交际活泼，能处理好周边的人际关系。
兴趣广泛，乐于接受新鲜事物。
二、黏液质黏液质类型属于神经活动强而均衡的安静型。
好像冬天。
思维反应速度慢，但考虑问题全面。
情绪不易外露，不易发脾气，性格波动小，为人稳重。
行动缓慢而沉着，耐力持久。
交际适度，但因循守旧，灵活性不足。
在生活中是一个坚持而稳健的辛勤工作者，能恪守既定的生活秩序和工作制度，能长时间坚持不懈地从事自己的工作。
三、胆汁质——胆汁质相当于神经活动强而不均衡型，力量型外倾性。
思维，反应迅速，直来直去，少转弯。
情绪，强烈持久，脾气急躁，易动感情，具有外倾性。
行为，动作的发生也是迅速、有力，工作精力旺盛。
交际，待人热情，让人受不了。
四、抑郁质——抑郁质相当于神经活动弱型，和平型内倾性，兴奋和抑郁过程都弱。
思维，小心谨慎，思考透彻。
情绪，非常敏感、多愁善感。
行为，行动迟缓、在困难面前容易优柔寡断，易受挫折，不图进取。
具有明显的内倾性。
交际，行为孤僻、不太合群。
(2)气质与性格的关系气质，指人与生俱来的生理、心理等素质，主要是由遗传和生理决定的。
（所谓气质是指那些主要是与生俱来的心理和行为特征，是相当稳定的个性特点。
也指人的风度；模样。
）气质实际上是指人格中最稳定的、在早年就表现出来的、受遗传和生理影响较大而受文化和教养影响较小的那些层面。
人的基本气质特点是不能改变的。
性格一词源于希腊语，是雕刻的痕迹的意思。
（这句话应该可以看出两者的区别了吧）。
性格就是人对现实的态度和行为方式中比较稳定的心理特征的总和。
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一、目的基因克隆的策略有哪些？其理论依据什么？如何根据具体条件，如目的性状的特点，已知控制目的性状的基因的信息合理选择基因克隆的方法？欧阳光明（2021.03.07）1、主要有以下几个克隆的策略：（1）PCR法分离目的基因：从蛋白质的一级序列分析得到核酸序列的相关信息，设计简并引物，通过对mRNA进行反转录得到cDNA，以cDNA为模板，然后将目的基因通过PCR方法扩增，或者直接从基因组DNA扩增的方法。
（2）核酸杂交的方法：通过对蛋白质的氨基酸序列分析，设计简并引物，通过核酸杂交的方法从基因文库中筛选得到目的基因。
（3）免疫学筛选法分离目的基因：利用免疫学原理，通过目的蛋白的特异抗体与目的蛋白的专一结合，从表达文库中分离目的蛋白基因。
2、若控制该性状的目的蛋白质不容易分离纯化，这PCR方法比较适宜，若蛋白质分离纯化容易，且有现成的基因文库，则后两种方法较为简单。
二、蛋白组学方法克隆目的基因的理论依据是什么？有哪些技术环节？要用到哪些技术？1、理论依据：以分离纯化的目的蛋白为研究起点，通过对目的蛋白的一级结构分析，获得起码的氨基酸序列信息后，反推可能的DNA序列，然后设计引物，从cDNA中将目的基因扩增出来，或者设计核酸探针，通过杂交技术将目的基因从基因文库中筛选出来。
或通过抗体抗原免疫反应从表达文库中将该基因分离出来。
2、技术环节是确定并制备出高纯度的蛋白质。
3、所需要的实验技术有：蛋白质的双向电泳技术，由第一向的等电聚焦电泳和第二向的SDS-PAGE电泳组成；蛋白质氨基酸序列分析。
三、基因组学方法克隆基因的策略有哪些？各有什么特点？如何选择恰当的基因组学方法克隆目的基因？1、基因文库筛选方法通过对基因文库的筛选将目的基因分离出来，一般有两种方法：核酸杂交法，原理是分子杂交；PCR筛选法，通过ＰＣＲ方法将目的基因分离出来，对于以混合形式保存的文库，先将文库分成几份，每份为一个“反应池”进行PCR反应，待选出阳性池后，将阳性池的混合克隆稀释，然后等量分置96孔板中，进行横向池及纵向池的ＰＣＲ反应，然后将阳性菌落群进行稀释，重复上述工作，直到筛出阳性单克隆。
2、图位克隆目的基因利用分子标记技术对目的基因进行精细定位，利用分子标记技术对目的基因进行精细定位，用获得的与目的基因紧密连锁的分子标记筛选基因文库的方法。
主要有染色体步移法、染色体登陆、跳查和连接法；外显子捕捉和cDNA直选法等。
3、插入突变分离克隆目的基因由重组DNA 技术衍生出的插入突变，可人为地造成某一待研究基因的突变，并可根据由此带来的表型特征的改变分析该基因的功能。
基因插入突变的方法主要有：插入失活突变；T－ DNA标签；转座子标签。
4、相邻片段的体外克隆（1）Panhandle PCR法在限制酶消化的DNA 3＇端加一个与未知序列上游已知序列互补的单链引物，从而使经变性后产生的单链DNA分子内聚合，导致已知DNA定位于未知相邻DNA侧翼区段。
引物设计是该技术运用的关键所在，所需引物包含一个与已知序列上游互补的单链引物和两对位于该单链引物两侧与已知序列一致的引物。
（2）Cassette PCR法利用Cassette及Cassette引物特异性快速扩增cDNA及基因组DNA 未知区域的一种有效方法。
由于Cassette的5＇端没有磷酸基，在目标DNA的3＇端和Cassette的5＇端的连接部位形成缺口，在第一次PCR反应的第一循环时，从引物C1开始的延伸反应在连接部位终止，从而控制了非特异性的扩增。
只有从引物S1开始延伸合成的DNA链，才能成为引物C1的模板，进行DNA的扩增反应。
再用内侧引物(引物C2,引物S2)进一步进行第二次PCR反应时，能高效特异性地扩增目的DNA。
克隆目的基因的方法：若目的基因的序列未知，则采用相邻片段的体外克隆的方法；若目的基因的序列已知，有现成的基因文库，则采用基因文库筛选方法较好；若有合适的分子标记，则用图位克隆的方法较好；若需研究目的分子的功能，则采用插入突变分离克隆目的基因的方法较好。
四、功能基因组学策略克隆目的基因的方法有哪些？各有什么特点？如何解决其中的假阳性克隆问题？1、RT-PCR扩增这种方法专一性强，但是操作过程比较麻烦，特别是mRNA很不稳定、生存时间短，所以要求的技术条件较高。
2、mRNA差异显示技术该方法以RT-PCR和DNA凝胶电泳为基础，实验简便，灵敏度高，耗时短，可同时比较多个样品间基因表达的差异，可同时检测到上调和下调的基因，但这种方法对低丰度的mRNA检出率低，得到的绝大多数差异条带仅含3’UTR短片段信息，这些区域的序列结构相对保守，得不到特异的基因且容易出现假阳性。
假阳性的鉴定：（1）Northern杂交：通常是将序列胶中回收的片段再次扩增后作探针进行Northern杂交检测，确定阳性片段后再进行克隆。
（2）Northern杂交并回收特异cDNA片段（3）DNA部分序列分析法：先对10个菌落的cDNA插入序列进行部分序列分析，通过比较选出不同菌落，再对其进行序列分析以证实其异质性。
3、PCR法构建减法cDNA文库（SSH）该法通过2次杂交和2次PCR，使假阳性率可降到6%，且灵敏度高。
用SSH可一次同时分离几十至几百个差异基因，使效率大增。
但由于SSH需mRNA量大(几微克)，对mRNA来源困难的材料不利。
因为SSH对不同材料或材料间存在的小片段缺失不能有效检测，所以研究材料的差异不能太大。
4、基因表达的序列分析（SAGE）目前，高通量地研究基因表达谱的方法主要有两种，即生物芯片和基因表达序列分析（serial analysis of gene expression，SAGE）。
基因芯片所能检测的基因必须是已知的基因，放在芯片上几种基因的探针就只能检测这几种基因的表达谱；相比之下，SAGE能以远高于DNA芯片的精确度和重复性来检测在病理条件下基因表达谱的改变，而不必考虑所检测的基因是已知的还是未知的。
因此在检测疾病相关的新基因，特别是无法用基因芯片进行检测的低表达量致病基因时，SAGE是目前的最佳手段，无可取代。
5、cDNA末端快速克隆（RACE）RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3'端和5'端的方法。
与筛库法相比较，此方法是通过PCR技术实现的，无须建立cDNA文库，可以在很短的时间内获得有利用价值的信息，节约了实验所花费的经费和时间，且只要引物设计正确，在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长。
五、基因芯片技术的基本原理是什么？有哪些类型？基因芯片在基因克隆中有哪些应用？如何利用基因芯片进行基因的功能验证？1、原理：采用光导原位合成或显微印刷等方法将大量特定序列的探针分子密集、有序地固定于经过相应处理的硅片、玻片、硝酸纤维素膜等载体上,然后加入标记的待测样品，应用已知核酸序列与互补的靶序列杂交，通过杂交信号的强弱及分布,来分析目的分子的有无、数量及序列,从而获得受检样品的遗传信息。
2、类型：由于尚未形成主流技术，生物芯片的形式非常多，以基质材料分，有尼龙膜、玻璃片、塑料、硅胶晶片、微型磁珠等；以所检测的生物信号种类分，有核酸、蛋白质、生物组织碎片甚至完整的活细胞；按工作原理分类，有杂交型、合成型、连接型、亲和识别型等。
但可分为三种主要类型：（1）固定在聚合物基片（尼龙膜，硝酸纤维膜等）表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。
（2）用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。
这种方法点阵密度可有较大的提高，各个探针在表面上的结合量也比较一致，但在标准化和批量化生产方面仍有不易克服的困难。
（3）在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列,与荧光标记的靶基因杂交进行检测。
该方法把微电子光刻技术与DNA化学合成技术相结合，可以使基因芯片的探针密度大大提高，减少试剂的用量，实现标准化和批量化大规模生产，有着十分重要的发展潜力。
3、基因芯片在基因克隆上的应用：（1）研究生物体对逆境的反应植物抗逆等基因的筛选是从分子水平上揭示植物生理机制的一项基础性研究，发现新基因是培育抗逆新品种的重要前提，如寻找抗病虫、抗旱、耐寒的相关基因，以进行新产品的开发和品种的改良等，利用基因芯片可以高通量、快速检测基因的差异表达。
（2）基因表达水平的检测基因芯片将已知基因固定于芯片上，将生物体某种生理状态下所表达的mRNA反转录为cDNA并作荧光标记，然后和芯片进行杂交，通过检测杂交信号的强度来分析相关基因的表达丰度。
用基因芯片进行的表达水平检测可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况。
（3）基因突变和多态性分析基因突变是顺序上的核苷酸发生了改变，其突变将会引起相应基因的功能丧失或改变，引起遗传病。
芯片用于检测分子突变，可以准确地确定突变位点和突变型，芯片可以同时检测多个基因乃至整个基因组的突变，还可以进行基因多态性分析。
（4）基因组DNA序列分析基因芯片技术用于序列分析提出最早，原理是依据短的标记寡核苷探针与靶DNA杂交，利用杂交谱重建靶DNA序列。
（5）利用基因芯片技术进行后基因组学研究基因预报和功能鉴定是测序和对基因组进行注释的结果，基因组测序完成后，研究未知基因的功能是一个十分引人的后基因组研究课题。
（6）转基因农产品检测广泛收集用于转基因技术的启动子、目的基因(如抗病基因、抗虫基因等)和标记基因的EST序列，制成基因芯片，可以对转基因农产品进行检测。
4、基因功能验证首先进行序列分析，根据基因序列中特异的片段设计探针，制备出代表该生物所有基因的寡核苷酸或DNA阵列，即DNA芯片。
然后将不同条件下从某生物中转录出来的所有mRNA标记，与DNA芯片杂交，通过分析杂交位点及信号强弱，可得知在不同条件下各组基因是否表达及各自表达的程度。
根据表达图谱进行不同条件下基因表达的对比分析，可找出在环境条件变化时，哪些基因表达发生了变化，从而分析其生理功能，找出与该生理功能相关的功能基因。
六、简述生物信息学技术在基因克隆和基因结构与功能分析中的应用，举例说明。
1、核酸序列的同源性检索GenBank数据库中收录的EST序列有数百万个之多，由于EST代表着一段表达基因序列，这样就可用其与公共数据库进行同源性检索，检索与其同源的核酸序列。
典型分析是采取NCBI的Blast软件对GenBank 中的非冗余数据库（non-redundant database,nr）进行查询。
2、比较基因组分析达尔文的进化论给比较基因组学提供了理论依据。
动物进化从低等到高等，动物与动物之间存在着亲缘关系。
这种关系可以从基因序列上反映出来。