3-3动物微生物--病毒的鸡胚接种技术(实验四)
病毒的鸡胚培养法接种途径
新乡医学院微生物学教研室 监督电话:3029945 Email:jcbwsw@
内容提要
一 抗酸染色 二 病毒的接种技术 三 真菌菌落的观察 （小白鼠和鸡胚共用注射器16支，病毒悬液用 锥蓝染液代替，小白鼠8只，鸡胚15只，微 量移液器4支，真菌示教培养管4支）
缺陷：带毒，缺敏感动物。
常用动物：鼠、家兔、猴和羊等。
接种的途径：脑内、鼻内、皮内、腹腔内和静
脉注射等。
1 病毒的动物接种
目的 了解病毒的动物接种法 材料 小白鼠（1~3天或3周龄）， 乙型脑炎 病毒悬液， 1ml注射器（8支），碘酒 ， 棉签，眼科剪等
小白鼠的脑内接种（共8只小白鼠）
病毒的培养
病毒的概念：形态最小，结构最简 单的微生物。缺乏完整的酶系统， 无完整的细胞结构，必须在活的组 织细胞中才能增殖。
常用的分离、 培养、鉴定 病毒的分离培养 病毒的方法
动物接种法
鸡胚培养法
组织细胞培养法
动物接种（Animal inoculation）
最早应用的病毒培养法。 用途：分离鉴定、传代、制备免疫血清。
本次实验不做培养，接种完病毒，可将 鸡胚去除部分卵壳后，小心将卵壳内组 织倒入平皿中，观察接种的病毒替代液 （锥蓝染液）是否接种部位正确及各膜 囊等的组织结构。
注意事项
消毒小白鼠时不要碰到眼睛
注射时不要扎的太深以免扎到手
磨卵壳及钻孔时力量要适中
看过的鸡胚不要倒入水池，倒入指定的 大烧杯中
菌落光滑、湿润；无菌丝 隐球菌菌落 外观和酵母型菌落相似，显微镜下可看到假菌丝 白色念株菌菌落 菌落系由多细胞菌丝体所组成 大多数丝状真菌或霉菌的菌落
3-3动物微生物--病毒的鸡胚接种技术(实验四)
十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株 在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡的鸡胚 以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、 足趾、翅膀出血尤为明显。
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上， 冻死胚胎，防止出血。
根据接种途径的不同，收获相应的材料 1、绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜 2、尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml） 3、卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体 4、羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml）
实验四 鸡胚接种
一、原理
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低， 病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途 径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒。
二、实验目的
了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的 鸡胚接种方法。
三、鸡胚的结构与功能
➢卵壳 ➢壳膜 ➢气室 ➢绒毛尿囊膜
➢尿囊腔 ➢羊膜与羊膜腔 ➢卵黄 ➢卵白
羊膜腔
卵壳 卵白 尿囊腔
卵壳膜 气室
绒毛尿囊膜
➢尿囊腔 胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透 明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液 中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13 天后，尿囊液开始变得混浊。
➢羊膜与羊膜腔 其中盛有羊水，胎体浸泡于其中 ➢卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。 ➢卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
四、材料
1、鸡胚 10日龄 2、病毒 鸡新城疫病毒（NDV） 3、照蛋灯 4、打孔器 5、石蜡 6、注射器 7、蛋座 8、酒精棉球、碘酊棉球
五、受精卵的选择
➢最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 ➢受精卵的壳最好是白色的 ➢受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
流感病毒的鸡胚培养,收获及血凝效价测定实验报告
篇一：鸡胚培养法鸡胚培养法（病毒分离培养）鸡胚是发育的机体，适合许多人类和动物病毒及立克次体的生长增值，常用于痘类病毒、粘液病毒、和疱疹病毒的分离、鉴定、抗原准备、疫苗生产以及病毒性质等方面的研究。
鸡胚培养病毒，常用的接种途径包括绒毛尿囊膜，尿囊腔、羊膜腔以及卵黄囊接种四种。
根据不同病毒，不同实验目的以及不同来源的标本，选择不同的途径接种鸡胚进行培养，即可达到分离培养病毒和传代病毒的目的。
本片主要介绍尿囊腔和羊膜腔两种接种途径在病毒分离培养和传代中的应用。
鸡胚的接种方法、孵育及收获一、仪器和器材spf鸡卵或鸡胚、二级生物安全柜、孵卵箱或恒温箱、检卵灯、照蛋灯、开卵钻、卵盘、1ml、1次注射器、医用胶布、液体石蜡、无菌镊子、巴氏吸管、15 ml无菌离心管、试管架、96孔微量反应板、加样槽、移液器、75%酒精、生理盐水等。
二、鸡胚的孵育应选择保存温度在100左右，时间不超过10天，卵壳薄而色浅的鸡卵，用于鸡胚的孵育。
特别脏的鸡卵需用清水清洗，用布擦干后孵育，干净的鸡卵不必做任何处理。
将鸡卵置于380c---390c孵卵箱，在孵卵箱底层盛水器中放入干净自来水，以保证鸡胚发育的湿度，病保持良好的通风，孵育至第四天，于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。
受精鸡卵可见清晰地血管小团和发育的鸡胚迹象，似蜘蛛壮，未受精鸡卵仅能看见模糊的卵黄黑影，无鸡胚迹象。
在孵育过程中，应随时对鸡胚进行检查，淘汰濒死或已经死亡的鸡胚。
若在恒温箱里孵育鸡胚，则应在恒温箱底层放入装满水的广口容器，并从孵育的第3天起，每天180度转到鸡胚1—2次，是鸡胚发育匀称。
也可直接订购孵育9—11日龄的鸡胚。
如何判断鸡胚存活状态：1胎动：于检卵灯下可见活胎有明显的自然运动，但胎龄大于14天的胚胎，胎动不明显，甚至无胎动，死胎则无任何胎动，胎发红似出血样，有的呈现黑快。
2血管：活胚可见清晰地血管，卵壳较薄者还可见血管的搏动。
死胎血管模糊，成淤血带或淤血块。
53动物接种试验
动物接种实验结果分析
• 结论：
– 试验鸡于接种后第2天死亡，说明该大肠杆菌分离株 具有致病性。
《动物微生物》
综合实训 大肠杆菌病的实验室诊断
实验室诊断结论
综合实训 大肠杆菌病的实验室诊断---结论
实验室诊断结论---大肠杆菌阳性
鉴定结论： 形态学检查、分离培养和生化鉴定的结 果均符合大肠杆菌特性，动物接种试验 显示该细菌分离株有致病性。一系列试 验结果表明送检病料中有致病性大肠杆 菌感染。
综合实训 大肠杆菌病的实验室诊断---结论 大肠杆菌：+
综合实训 大肠杆菌病的实验室诊断---动物接种
实验目标
• 验证大肠杆菌分离株是否有致病性
综合实训 大肠杆菌病的实验室诊断---动物接种
实验器材
• 大肠杆菌纯培养物 • 1mL注射器 • 碘酊棉球 • 酒精棉球 • 镊子等
综合实训 大肠杆菌病的实验室诊断---动物接种
动物接种试验方法---腹腔注射
《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验
《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验实验动物在病原微生物中的研究上占有重要地位。
利用实验动物可以进行病原菌的分离鉴定、毒力的检测、制备免疫血清等生物制品；进行各种皮肤试验；建立人工感染的动物模型；进行发病机制、疾病防治以及免疫机制的研究等。
一、实验动物的管理1．实验室常用的动物：家兔、豚鼠、小白鼠、大白鼠、地鼠、绵羊、鸡等，根据实验的目的选择最适宜的动物。
2．实验动物必须与正常动物分开饲养，动物室内要经常保持清洁和空气畅通，并应有防蚊、防蝇、防逃跑及保暖设备。
3．实验动物要精心饲养，喂以适当的饲料并给以充足的水，任何动物也不要断水。
4．实验动物要有详细的记录，包括性别、体重、体表特征(如毛色等)、接种材料、接种日期、接种途径、剂量、次数以及接种变化等。
5．实验动物应做好标记，对较大动物如家兔、豚鼠等可用金属号码牌固定于耳朵上，对较小动物如大白鼠、小白鼠等可用复红(或苦味酸等染料)涂于身体的不同部位，以资识别。
盛装动物的笼具等，也应付以标签。
6．接种后的动物应每天观察1～2次，注意动物的精神状态，活动能力、饮食和大小便情况，体温、注射部位的反应以及全身反应，如不安、耸毛、震颤、弓背、麻痹及死亡等，并应详细记录之。
7．感染动物死亡后，应立即剖检或暂时冻存。
动物的排泄物及使用的笼具等必须严格消毒。
任何用过的动物，不宜再做其他试验。
二、实验动物的选择选择实验动物应注意以下几点：1．易感性：是选择实验动物的首要条件。
2．动物健康：体质健康、发育正常、体重适宜；最好使用自己繁殖的动物，由市场购买的动物至少经过一周的隔离观察，证明无隐性感染方可使用；某些特殊实验应需选用专门喂养繁殖的无菌动物；实验动物应容易获得，便于喂养和管理。
3．动物大小：同一实验应选用大小一致的动物，通常以年龄或体重为标准。
4．性别：某些实验最好选用同一性别，特别是免疫的动物和需要观察较长时间的实验动物。
5．动物品系：某些实验要求使用纯系动物，纯系小鼠用于免疫学、杂交瘤及病毒感染等研究。
鸡胚接种实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚接种病毒的方法和步骤。
2. 了解病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
3. 学习病毒分离和培养的基本原理。
二、实验原理鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法。
病毒接种于鸡胚后，能够在鸡胚中繁殖，从而便于观察和分析病毒的生物学特性。
本实验主要采用尿囊腔接种法，将病毒接种于鸡胚尿囊腔内，观察病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
三、实验材料1. 实验动物：9-11日龄的鸡胚。
2. 实验试剂：新城疫病毒悬液、生理盐水、碘酒、酒精、消毒棉球等。
3. 实验仪器：照蛋器、无菌手术刀、镊子、注射器、剪刀、平皿等。
四、实验方法1. 鸡胚准备：取9-11日龄的鸡胚，用碘酒和酒精消毒鸡胚蛋壳，用手术刀在鸡胚气室处划一小孔，用注射器吸取适量新城疫病毒悬液。
2. 尿囊腔接种：将鸡胚置于卵盘上，气室端向上，用注射器将病毒悬液注入鸡胚尿囊腔内，注入量约为0.1-0.2ml。
3. 孵育：将接种后的鸡胚放入37℃孵卵箱中孵育48-72小时。
4. 观察：定期观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、畸形等现象。
5. 病毒分离：取出死亡鸡胚，无菌操作下取出尿囊液，进行病毒分离和培养。
五、实验结果1. 接种后，部分鸡胚出现死亡现象，死亡时间集中在接种后24-48小时。
2. 死亡鸡胚的尿囊液中检测到新城疫病毒。
3. 成活鸡胚生长发育正常，未出现明显异常。
六、实验讨论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法，适用于多种病毒的研究。
2. 尿囊腔接种法是一种常用的鸡胚接种方法，适用于新城疫病毒、流感病毒等多种病毒。
3. 本实验结果表明，新城疫病毒能够在鸡胚中繁殖，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
七、实验结论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法。
2. 尿囊腔接种法适用于新城疫病毒等多种病毒的分离和培养。
3. 本实验成功分离和培养了新城疫病毒，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
八、实验心得1. 实验过程中，无菌操作至关重要，需严格按照无菌操作规程进行。
实验鸡胚接种
实验鸡胚接种
xx年xx月xx日
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目录
实验准备实验步骤实验数据分析实验结论实验讨论与展望
01
实验准备
1
实验人员要求
2
3
了解微生物的种类、特点、致病性及检验方法等。
具备微生物学基础知识
熟悉接种、分离、培养、鉴定等实验操作规范，并能够熟练操作。
掌握实验操作技能
遵守实验室的各项安全规章制度，注意个人防护和实验室废弃物的处理。
培养时间
根据实验需要，确定鸡胚培养的时间，以便观察和记录实验结果。
鸡胚培养
03
实验数据分析
数据记录
记录实验进行的日期。
实验日期
记录所使用鸡胚的编号，方便追踪。
鸡胚编号
记录接种的病毒或细菌剂量。
接种剂量
记录鸡胚在实验过程中表现出的症状和时间。
症状表现
数据转换
将非数值型数据进行转换，以便进行数学分析。
多样性
根据实验需求，选择不同品种、来源的鸡胚，以满足实验的多样性和代表性。
鸡胚选取
选用精细、锋利的接种针，灭菌烘干后备用。
鸡胚接种
准备接种工具
将鸡胚固定在操作台上，用接种针在鸡胚的尿囊膜上选择适宜的位置，进行无菌接种。
接种操作
接种后对鸡胚进行密封处理，以防止外界微生物的侵入。
接种后处理
培养环境
为鸡胚提供适宜的温度、湿度和气体环境，以保证鸡胚的正常发育和繁殖。
数据清洗
去除异常值、缺失值和重复数据，确保数据准确性。
数据聚合
将多个数据源的数据聚合在一起，以便更全面地评估实验结果。
数据处理
03
结论提取
基于分析和解释，提取有关实验的结论，为后续研究提供参考。
《动物微生物》课程标准
《动物微生物》课程标准课程名称：动物微生物课程类别：专业基础课程课程学时：72课程学分：4一、课程性质与任务《动物微生物与免疫技术》是动物医学、动物防疫与检疫等专业的专业基础课程，在动物防疫与检疫、畜牧生产和疾病诊断与防控方面具有重要的地位和作用，可为学生学习《禽病防治》、《猪病防治》、《牛羊病防治》、《宠物疾病防治》、《兽医卫生检验》、《动物防疫与检疫技术》等专业课程打下良好的基础。
学好本课程能让学生掌握实用、够用的理论知识和多种贴近生产实践的技能，能够达到技能熟练、知识丰富、解决问题到位、具有一定的自主学习能力和创新能力，具备相应岗位的知识、能力和职业素质。
同时，我们将德育教育有机融入课堂，贯穿学习的全过程，使学生树立“欲做事，先做人”的思想，建立正确的人生观，明显提高了学生的专业素养和可持续发展能力。
本课程具有基础性强、技术性强、应用性强三大特点。
课程中训练的动物微生物检验技术和免疫学技术都是直接应用于生产的技能，是畜牧生产、疫病防控的重要技术支撑，是学生毕业生产实习与顶岗训练的重要准备和演练，在生产中广泛应用于兽医化验室、兽医技术服务、养殖场生物安全等生产环节；训练内容为职业技能鉴定中动物疫病防治员、动物检疫检验工、兽医化验员等工种的鉴定项目。
通过本课程的学习，要求学生能够完成以下工作任务：能利用所学理论知识和技能正确诊断细菌病、病毒病等传染性疾病；能正确消毒与灭菌；能利用生物制品进行免疫预防和治疗。
二、课程教学目标通过本课程的学习，要求学生能够掌握高等畜禽疫病防治人员、动物检疫检验人员、兽药生产与营销人员、技术推广人员所必需的动物微生物检验和免疫的基本知识与技能。
（一）知识目标1.掌握细菌病的实验室诊断方法。
2.掌握病毒病的实验室诊断方法。
3.掌握消毒与灭菌的方法，了解物理因素、化学因素和生物因素对微生物的影响及其在生产上的应用。
4.掌握特异性和非特异性免疫的基本原理。
5.掌握免疫诊断的原理、方法和临床应用。
病毒的鸡胚接种
病毒的鸡胚接种教学目标使学生掌握病毒的鸡胚接种方法和收获方法。
材料准备1.器材温箱、照蛋器、蛋架、超净工作台、1 mL注射器、20～27 号针头、镊子、酒精灯、灭菌吸管、灭菌滴管、灭菌青霉素瓶、铅笔、透明胶纸等。
2.种毒新城疫病毒悬液。
3.受精卵健康鸡群的受精卵，无母源抗体，产后10 d之内5 d最佳。
4.其他石蜡，质量分数为2.5%的碘酊及质量分数为75%的酒精棉球。
方法步骤（一）鸡卵的保存、孵育及检卵1.保存孵育前，保存在4.5～20 ℃的室温内，以10 ℃左右最佳，最多不能超过10 d。
2.孵育先将温箱调节温度为37.3～37.8 ℃，湿度45%～60%。
将鸡卵孵入后，每日翻卵2～3次。
3.检卵孵后第4~6 d，用照蛋器检查发育情况，检出未受精及死亡鸡胚。
鸡胚的生长情况分为以下几类：（1）未受精 4 ~6d后仅见模糊的卵黄黑影，无鸡胚迹象。
（2）生活鸡胚 4~6 d后可见到清晰的血管小团，内有鸡胚暗影，较大的鸡胚可见胚动。
（3）濒死或死亡鸡胚鸡胚活动呆滞或不能主动运动，血管昏暗或断折沉落。
（4）作标记将待接种的鸡胚取出，在照蛋器上照视，划出气室范围，并在鸡胚黑影，或绒毛尿囊膜发育中心等处，按接种途径要求标出记号。
（二）各种途径的鸡胚接种方法1.尿囊腔接种（1）接种方法孵育9～11日龄的鸡胚（实图6-20），经照视后，划出气室及胚胎位置，标明胚龄及日期，气室朝上立于卵架上。
在气室中心或远离胚胎侧气室边缘先后用碘酊棉球及酒精棉球消毒。
以钢锥在气室的中央或侧边打一小孔，针头沿孔垂直或稍斜插入气室，进入尿囊，向尿囊腔内注入0.1～0.3 mL新城疫病毒悬液，拔出针头,用融化的石蜡封孔，直立孵化（实图6-21）。
孵化期间，每晚照蛋，观察胚胎存活情况。
弃去接种后24 h内死亡的鸡胚。
实图6-20鸡胚的结构实图6-21尿囊腔接种（2）收获方法收获时间须视病毒的种类而定。
新城疫病毒在接种后24～48 h 即可收获病毒。
病毒的分离培养与动物接种、鸡胚接种法
小白鼠滴鼻感染法（示教）
• 【材料】 • 小白鼠、流盛病毒的鼠肺适应株悬液、无消 毛细吸管、无菌小试管、乙醚、棉球及动物 罐等。 • 【方法】 • 1 ．首先将小白鼠 1 只投于带盖的，内放有浸 蘸乙醚的棉球的容器内行全身麻醉。注意麻 醉的深度，一般不宜太深或太浅，太深时易 遭致麻痹死亡或吸人性肺炎，太浅则易在滴 注时打喷嚏。
二、标本的处理
• （一）除菌处理 粪便可加青链霉素使最终浓度为10000单位 /毫升，置4℃过夜。 鼻咽拭子一般加抗生素最终浓度为2000单位/ 毫升，置4℃作用4小时。 对乙醚有抵抗的病毒如鼻病毒、肠道病毒、 呼肠孤病毒、腺病毒、痘病毒等，则可加入 等量的乙醚4℃过夜除菌。
• （二）研磨和稀释 对脑、脊髓等组织标本首先应经研 磨器或乳钵中充分研磨后，加稀释液 （PH7.6肉汤或10％脱脂牛乳生理盐水 或0.5％水解乳蛋白Hanks液）制成组织 悬液，然后经2000转／分离心20分钟。 必要时可加抗生素处理（同上）。
尿囊腔接种
• 【材料】 • 新城鸡瘟病毒10毫升稀释液，10—12日 龄鸡胚，卵垫， 1 毫升无菌注射器及 14 号针头，小锉了刀，橡皮乳头、大头针， 眼科镊子及小镊子，无菌培养皿、无菌 生理盐水，碘酒，酒精棉球。
• 【方法】 选9—11日龄鸡胚，照检后划出气室和胎 位，在气室边缘上2—8毫米处避开血管 作一标记，将碘酒在此消毒后，用蛋钻 钻一小扎（勿损伤壳膜），用注射器注 入病毒0.1—0.2毫升，然后用溶化石蜡 封口，置33—35℃孵育（时间见表12— 6）。
二、病毒的鸡胚接种、培养与 收获
• （一）接种 实验室经常应用的接种途径有四种： 绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔和卵黄囊 接种等。（见表12—6）
• 2．用左手取出小白鼠握在掌中，大拇指及食 指抓住耳部使其头部朝前并呈仰卧位 置，另 一手将吸有病毒悬液的滴管，慢慢滴于管口 而不使其自然掉落呈悬滴状，将悬滴 靠至动 物鼻尖，动物在呼吸时带人，一般滴入0.03— 0.05毫升，不宜过多，感染材料如被吸人肺内， 容易引起动物肺水肿，往往于接种后一天内 死亡。 • 3．动物慢慢苏醒，在罐中逐日观察，通常在 数日后开始发病，发病的症状常为耸毛，咳 嗽、不食、甚至死亡，解剖可观察到肺脏有 肺炎或出血性病灶。
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六、孵育
➢孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃ ➢相对湿度：50%-60% ➢必须保证有充分的新鲜空气流通，特别是在孵
化5-6天以后 ➢从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。
七、检卵
➢自孵育后的第4天开始检卵，每天一次。 ➢孵育4-5日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育
情况。 ➢未受精卵：只见模糊的卵黄阴影，不见血管和
鸡胚痕迹 ➢活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚
还可见到胚动，但孵育14、15天以后胚动不明 显，甚至无胚动。 ➢死胚：血管昏暗模糊，没有胚动。
八、接种前处理
➢用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室 和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。
➢对鸡胚进行消毒。
九、鸡胚用于病毒培养的优缺点 （一）优点
7、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗 中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小 孔用石蜡密封。 8、胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。
（三） 尿囊腔接种 主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病
毒、新城疫病毒的分离和增殖。 1、选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位 2、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒 3、用钢锥穿一小孔 4、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入 0.1-0.2ml接种物 5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻 卵并检卵一次，24h内死亡者废弃。
方法一： 1）取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒 2）在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm的口 3）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜 4）滴入接种物 5）用胶布或透明胶纸封闭切口
方法二：（要做人工气室） 1、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用 电烙器在卵壳上烙一个直径约3-4mm的烤焦圈。
➢组织分化程度低，病毒易于增殖 ➢可选择不同的日龄和接种途径 ➢感染病毒的组织和液体中含大量病毒 ➢容易采集和处理 ➢来源充足 ➢设备和操作简便易行
（二）缺点
➢胚内可能污染细菌和病毒 沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊
髓炎病毒 ➢母源抗体 ➢许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针
十、接种途径 1、尿囊腔接种 2、绒毛尿囊膜接种 3、卵黄囊接种 4、眼球接种 5、羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒 6、脑内接种 狂犬病毒 7、静脉接种 蓝舌病毒
羊膜腔
卵壳 卵白 尿囊腔
卵壳膜 气室
绒毛尿囊膜
➢尿囊腔 胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透 明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液 中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13 天后，尿囊液开始体浸泡于其中 ➢卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。 ➢卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
四、材料
1、鸡胚 10日龄 2、病毒 鸡新城疫病毒（NDV） 3、照蛋灯 4、打孔器 5、石蜡 6、注射器 7、蛋座 8、酒精棉球、碘酊棉球
五、受精卵的选择
➢最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 ➢受精卵的壳最好是白色的 ➢受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
（一）卵黄囊接种法 主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次
氏体等的分离和增殖。 方法一： 1）取6-8日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位 置2）后用，碘垂酊直和放酒置精在消卵毒座气上(大头向上) 室端 3）用钢锥在气室中央锥 一 小孔
4） 用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小 孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。 5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育， 每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。
方法二： 1）2）同一 3）将卵横放在卵座上， 胚胎位置向下。在卵长 径的1/2处用碘酊和酒 精消毒。
4）用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm， 注入病毒液0.1-0.5ml 5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵 育，24h内死亡者废弃
（二）绒毛尿囊膜接种 主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖。
2、用碘酊和酒精消毒后， 小心用刀尖撬起卵壳，造 成卵窗。 3、在气室端中央钻一个 小孔。 4、用针尖挑破卵窗中心 的壳膜，切勿损伤其下的 绒毛尿囊膜，滴加生理盐 水于刺破处。
5、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造 成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷 而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理 盐水迅速渗入。 6、用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜 上。
十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株 在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡的鸡胚 以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、 足趾、翅膀出血尤为明显。
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上， 冻死胚胎，防止出血。
根据接种途径的不同，收获相应的材料 1、绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜 2、尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml） 3、卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体 4、羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml）
实验四 鸡胚接种
一、原理
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低， 病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途 径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒。
二、实验目的
了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的 鸡胚接种方法。
三、鸡胚的结构与功能
➢卵壳 ➢壳膜 ➢气室 ➢绒毛尿囊膜
➢尿囊腔 ➢羊膜与羊膜腔 ➢卵黄 ➢卵白