检验微生物学 志贺菌属
志贺菌属简介
志贺菌属简介志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。
根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。
CDC分类系统（1989）将生化性状相近的A、B、C群归为一群，统称为A、B、C血清群，将鸟氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。
我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢-最为常见。
（一）生物学特性1.形态与染色：革兰阴性短小杆菌，（2～3）μm×（0.5～0.7）μm，无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。
2.培养特性：需氧或兼性厌氧，液体培养基中呈浑浊生长，在普通琼脂平板和SS培养基上形成中等大小、半透明的光滑型菌落，宋内志贺菌可形成扁平、粗糙的菌落医学|教育网搜集整理。
3.生化反应：志贺菌属的细菌KIA：K／A、产气-／+、H2S-，MIU：动力-、吲哚+／-、尿酶-，氧化酶-，不产生赖氨酸脱羧酶，氧化酶试验阴性。
4.抗原结构：志贺菌属只有O抗原而无鞭毛抗原，个别菌型及新分离菌株有K抗原。
（二）致病性致病物质：侵袭力：菌毛粘附于肠粘膜上皮细胞，诱导细胞内吞。
内毒素：破坏肠粘膜；肠壁通透性；肠壁植物神经——腹痛，腹泻，里急后重，粘液脓血便。
外毒素（志贺毒素，ST）：肠毒素活性；细胞毒活性；神经毒活性。
所致疾病：细菌性痢疾，简称菌痢医学|教育网搜集整理。
1.急性菌痢。
2.中毒性菌痢。
3.慢性菌痢。
传染源为病人和带菌者，经粪口传播。
（三）微生物学检验1.标本采集尽可能在发病早期及治疗前采集新鲜粪便，选择脓血便或粘液便，必要时可用肛拭子采集。
2.检验办法及鉴定（1）分离培养：取粪便（粘液或脓血部分）或肛拭标本接种GN肉汤增菌及再开展分离培养。
一般同时接种强弱选择性不一样的两个平板。
强选择鉴别培养基可用沙门、志贺菌选择培养基（SS）；弱选择培养基可用麦康凯或中国蓝培养基。
培养18～24h后选取可疑菌落开展下列鉴定。
（2）鉴定1）初步鉴定：挑选可疑菌落3～4个先用志贺菌属多价诊断血清作试探性玻片凝集试验。
实验五-粪标本的微生物学检验
二、结果观察：
１、菌落形态描述: 分别描述1#、2#、3#、4#、5#标本在SS、Mac上的
菌落形态。（可疑菌落与正常菌群菌落分别描述）
2、革兰染色： 3、触酶试验： 4、氧化酶试验： 5、细菌分纯：挑取生长于SS平板、MaC平板中的可疑
菌落3～5个分别接种3～5支KIA。37℃培养18—24小 时后，观察结果。
伤寒杆菌及其它沙门菌、志贺菌、弯曲菌、致病大肠埃希菌、霍 乱弧菌、副溶血弧菌 、气单胞菌、邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森 菌
白假丝酵母菌
病毒
轮状病毒
粪便标本的检验程序
粪便标本或肛拭子标本
直接涂片
革兰染色 抗酸染色
分离培养
（SS、MaC、TCBS、碱性 蛋白胨平板）
35℃18～24h
菌落形态、革兰染色
氧化酶试验
• 实验器材：
1、标本：已增菌模拟粪便标本1#、2#、3#、4#、5#。 2、培养基：SS、MaC、 KIA、蛋白胨水、枸橼酸盐斜面、尿素、苯丙
氨酸斜面、硝酸盐蛋白胨水、甘露醇半固体培养基。 3、试剂：革兰染液、氧化酶试剂、3%H2O2、靛基质试剂、甲基红试
剂、10%FeCl3、硝酸盐还原试剂甲液、硝酸盐还原试剂乙液。 4、诊断血清：
• 肛拭子法：不易获得粪便的患者或作厌氧菌培养时，常采用此法。将 无菌棉拭子用无菌生理盐水湿润后，插入肛门约4～5厘米（幼儿约 2～3厘米）处，轻轻旋转，擦取直肠表面粘液后取出，置无菌试管内 送检。除婴幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。
• 疑似痢疾患者应在发病初期、用药前采取标本；疑似伤寒患者应在发 病2～3周内采集粪便标本。
• 志贺菌属：若生化反应结果相符，则作玻片凝集反应： 1、做生理盐水对照, 看有无自凝。 2、用志贺氏菌属4种多价血清反应，若有凝集，再用单价
《微生物学》期末复习资料知识点
《微生物学》期末复习资料知识点绪论一.微生物概念微生物是一种形体微小、结构简单、分布广泛、增值迅速、肉眼不能直接观察到，须借助显微镜放大几百倍、乃至数万倍才能看到的微小生物。
二.微生物的分类1.非细胞型微生物:最小的一类微生物，无典型的细胞结构，多数由一种核酸（DNA或RNA）和蛋白质衣壳组成。
2.原核型细胞微生物:细胞核分化程度低，仅有DNA盘绕而成的拟核，无核膜和核仁等结构，除核糖体外，无其他细胞器。
包括细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体等。
3.真核细胞型微生物:有细胞结构，细胞核分化程度高，有核膜、核仁和染色体，细胞质内有细胞器（如内质网、高尔基体和线粒体等），行有丝分裂。
三.正常菌群和条件治病菌人体的表面以及与外界相通的腔道（如口、鼻、咽部、肠道等）中都存在大量种类不同的微生物，在正常情况下这些微生物都是无害的，称为正常菌群。
但其中有一部分微生物在某些条件下也可以导致疾病的发生，故被称为条件致病性微生物。
第十章细菌学概论一.细菌的大小和形态1.细菌的测量单位:通常以微米（μm）为测量单位2.细菌的基本形态:1)球菌:单球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌2)杆菌3)螺形菌:分为弧菌和螺菌二.细菌的细胞结构(一)细菌细胞的基本结构基本结构是维持细菌正常生理功能所必须的结构，是各种细菌细胞共同具有的结构。
包括细胞壁、细胞膜、细胞质、核质及细胞质内的内容物等。
1.细胞壁的主要功能:赋形、保护、纳泄、抗原作用。
2.胞质颗粒:细菌细胞内的一些颗粒状内含物，多为细菌贮存的营养物质，也有的属于细菌的代谢产物。
（二）细菌细胞的特殊结构某些细菌细胞在一定情况下才有的结构称为特殊结构。
包括荚膜、芽胞、鞭毛、菌毛。
1.荚膜的主要功能:抗吞噬作用、黏附作用、抗有害物质的杀伤作用、抗原性。
2.芽胞:休眠结构。
3.鞭毛:细菌的运动“器官”。
分为四种——单鞭毛、双鞭毛、丛鞭毛、周鞭毛。
4.菌毛:分为普通菌毛和性菌毛，性菌毛与细菌的遗传物质有关。
临床医学检验考试辅导《微生物检验》肠杆菌科及检验讲义
肠杆菌科及检验● 考点概述概念；命名与分类原则；共同特点；自然与人体内的分布；微生物学检查方法；临床意义。
埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。
生物学性状；微生物学检验；临床意义。
【内容讲解】一、概述（共性）肠杆菌科是由多个菌属组成，G-杆菌，生物学性状相似。
大多数肠道杆菌属于正常菌群。
当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。
部分为致病性细菌。
（一）分类肠杆菌科细菌的种类繁多。
主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。
根据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌属、耶尔森菌属等。
（二）生物学特性1.形态与染色G-，杆菌，大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。
多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。
2.培养需氧或兼性厌氧；营养要求不高；普皿和麦康凯培养基：中等大小、表面光滑的菌落；液体培养基：混浊生长。
3.生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形杆菌）。
触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。
4.抗原构造表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包绕在O抗原外的不耐热的多糖抗原，可阻断O抗原与相应抗体之间的反应，加热处理能破坏其阻断作用。
5.变异菌落S～R变异鞭毛H～O变异耐药性变异生化反应性质的改变6.抵抗力不强。
加热60℃，30分钟即被杀死。
不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。
对低温有耐受力，能耐胆盐。
7.肠杆菌科的初步分类（三）致病性1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻及肠热症等。
2.条件致病菌：为医院感染主要病原菌，出现移位感染。
4789.5志贺菌检验
对可疑的食品，包括在使用前需用手处理的或 轻微加热的产品，且其酸度范围由PH5.5至6.5 之间。一般来说，当食品中含有大量的大肠菌 群，大肠杆菌与沙门氏菌时，同时即可疑含有 志贺氏菌。
现行GB/T 4789.5-2003标准不足处
1. 采用的GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后大肠菌
的生长速度大大超过志贺氏菌,所以检测效果较差
2. 使用的分离平板SS对志贺1型有抑制 3. 检验方法与现行的其它国家的标准存在差异
修 订 原 则
1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性
考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件尽可能 简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法
2.与国际接轨的原则
该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准 ，部分参 考采用了美国FDA、NMKL等标准
培 养 特 性
志贺氏菌属于革兰氏阴性短杆菌； 无芽孢、无荚膜、无鞭毛、不运动 需氧或兼性厌氧，营养要求不高，能在普通培 养基上生长 能利用葡萄糖与其他碳水化合物，产酸不产气。 除A群外，B 、 C 、 D群均能发酵甘露醇，除 D群外，A 、 C和D群均不发酵乳糖； D群具 有鸟氨酸脱羧酶
菌体（0）抗原 1.型特异性抗原：化学组成为多糖，是光滑型菌株所 含有的重要抗原。当菌株变为粗糙型时，此抗原也常 随之消失，根据所含的型抗原不同，可将志贺菌属分 为A、B、C、D四个群及39个抗原型。 2.群特异性抗原：为光滑型菌株的次要抗原，也是菌 体抗原的一种。特异性较低，主要存在于B群。根据所 含的群抗原不同，可将一些菌型分为多种亚型。
西蒙氏柠檬酸盐实验
挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培 养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌 落生长，培养基从绿色转为蓝色。
志贺菌属
所致疾病
细菌性痢疾
• 临床表现：急性、慢性、中毒性、带菌者 • 夏秋季节肠道传染病
传染源：病人、带菌者（尤为重要！） 传播途径：粪—口途径 易感者：人类普遍易感,且敏感性较高
微生物学特性与检验
志贺菌属
粪便、肛拭子 分离培养
SS、MAC XLD
增菌培养 GN肉汤
挑选可疑菌落 初步鉴定 触酶、氧化酶、硝酸盐还原 KIA、MIU、IMViC
最终鉴定
全面生化 毒力试验
血清学鉴定 Βιβλιοθήκη 、群、型生物学性状 形态染色：短小G-杆菌，无鞭毛 培养特性：营养要求不高
SS、MAC：呈乳糖不发酵、中等大小 无色半透明的S型菌落 XLD：红色
生化反应
属生化反应
KIA：K/A -/+ MIU：- +/- IMViC：– + – – 群内区别 A群不发酵甘露醇 D群ONPG及鸟氨酸脱羧酶阳性
志贺菌属
鉴定
•血清学鉴定
•与EIEC的鉴别
无动力、赖氨酸脱羧酶（-） 发酵糖产酸不产气分解粘多糖 在醋酸盐琼脂上产碱 •与类志贺邻单胞菌鉴别 邻单胞菌氧化酶、动力均（+） •与伤寒沙门菌 伤寒沙门菌H2S和动力（+） A-F（O多价）、Vi、O9凝集 •生化反应为志贺菌但与志贺菌抗血清不凝集 ①K抗原 ②EIEC
临床意义
致病物质
菌毛、内毒素，少数菌株产生外毒素
1、侵袭力--菌毛 粘附并穿入回肠未端、 结肠粘膜上皮细胞
菌毛粘附及穿入 是致病的首要 粘膜固有层上皮细胞增殖、炎症 因素！
2、内毒素
内毒素
破坏局部粘膜，加重坏死及溃疡形成 刺激植物神经-肠功能紊乱 典型痢疾症状 脓血粘液便、腹痛、 里急后重等 肠粘膜通透性增加 大量内毒素吸收
临床微生物学检验技术考试题库及答案(二)
临床微生物学检验技术考试题库及答案2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。
3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素）4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白）5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。
结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。
是溶菌酶、青霉素作用部位）6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质）*将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。
②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。
高渗环境生长。
（环丙沙星）9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。
10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。
11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。
13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法；14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。
15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。
16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。
17、细菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→初染→染色（媒染）→（脱色）→（复染，使脱色菌体着色）。
18、胃部细菌喜酸，肠道细菌喜碱19、SS琼脂有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。
志贺氏菌属生物危害评估报告
志贺氏菌属生物危害评估报告一、细菌的传播与致病志贺菌属是主要的肠道病原菌之一，也是引起人类细菌性痢疾的病原体。
本属细菌分布于全世界,是炎症性痢疾的典型病原菌,很多地区5%~10%的腹泻性疾病是由该菌属所致。
弗氏志贺菌和宋内志贺菌比鲍氏志贺菌和毒力特别强的痢疾志贺菌分布更广。
美国犹他州所有临床实验室工作者志贺菌病的年发病率为0.7/1 000，而临床微生物学工作者的年发病率为5.4/1 000。
在英国临床实验室，沙门菌病和志贺菌病的年发病率分别为0.137/1 000和0.322/1 000，大多数感染者为微生物学工作者。
感染者和恢复期带菌者的排泄物是传染源,经粪-口途径直接传播,经污染的食物或物体可间接传播。
苍蝇可作为机械性媒介,水源性传播不常见。
卫生条件差的拥挤人群中最易发生流行,流行区的幼儿志贺菌病特别常见,而成人得病较轻。
恢复期和亚临床带菌者是重要传染源,但真正的长期带菌者罕见。
感染很少或不诱导产生免疫性,因此同一菌种的再感染是可能的。
志贺菌可穿入低位肠段的粘膜,引起粘液分泌,充血,白细胞浸润,水肿,并常有表浅粘膜溃疡。
志贺菌感染相关的水泻由内毒素介导所致,因这种内毒素可引起肠道分泌增多。
由志贺菌感染所导致的症状包括：（1）急性细菌性痢疾经潜伏期1~4日,幼儿的起病突然,表现为发热,烦躁不安,嗜睡,厌食,恶心或呕吐,腹泻,腹痛和腹胀以及里急后重。
3日内大便中出现血液,脓液和粘液.大便次数可增加到≥20次/d,体重下降和失水严重。
若不治疗,患儿可在12日内死亡；若患儿存活,则在第2周急性症状消退.成人可表现为无发热的非血性,非粘液性腹泻,很少有或完全没有里急后重.但其最初的症状可为发作性腹绞痛,急于排便,起初排出成形大便并在排便后可缓解腹痛.以后反复发作,并且日趋严重和频繁.腹泻变得明显,系软便或含有粘液,脓及常有血液的水泻。
严重的里急后重可造成直肠脱垂和大便失禁。
成人患病常可自愈：轻者4~8日,重者3~6周。
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致病性与免疫性
二、所致疾病： 细菌性痢疾（简称痢疾）。经粪-口传播。 宋内志贺菌引起轻型感染，痢疾志贺菌 引起重型感染，福氏志贺菌感染易变为 慢性，病程迁延。
致病性与免疫性
常见临床感染类型: 1.急性菌痢：发热、腹痛、腹泻、里急后重。粪
便为脓血粘液便。 2.中毒性菌痢：出现神经系统症状，多见于少儿。
多无消化道症状。 3.慢性菌痢：病情迁延，常反复发作，病程在二
个月以上。 隐匿型菌痢：无症状，但结肠镜检或粪便培养 细菌为阳性。 4.带菌者：分为恢复期、慢性和健康带菌者
致病性与免疫性
三、耐药性 出现多重耐药菌，其原因是质粒传递产 生耐药
志贺菌属
志贺菌属是细菌性痢疾的最常见病原菌 痢疾志贺氏菌，福氏志贺氏菌、鲍氏志
贺氏菌和宋内志贺氏菌。
生物学性状
一、形态染色： G-短杆菌、无芽胞、有菌毛、无荚膜、
无鞭毛（无动力）
生物学性状
二、培养特性 在SS平板上形成乳糖不发酵、中等大
小、无色半透明菌落
生物学性状
生物学性状
三、生化反应： 动力阴性，分解葡萄糖产酸不产气、不发酵乳
①与EIEC鉴别：醋酸钠，葡萄糖铵利用，黏质酸 盐产酸试验
②与类志贺邻单胞菌鉴别
志贺菌 类志贺邻单胞菌
氧化酶
-
+
动力试验 -
+
③与沙门菌鉴别（培养24h动力不明显、H2S阴性）
微生物学检验
④快速诊断 a.直接凝集 b.免疫荧光菌球法 c.协同凝集试验 d.乳胶凝集试验 e.分子生物学方法
致病性与免疫性
糖（某些迟缓发酵乳糖）、发酵甘露/+IMViC:-+--
注意：宋内志贺个别菌株迟缓发酵乳糖 福氏6型产气
生物学性状
四、抗原结构：
有O、K抗原，无H抗原。
根据O抗原构造，将志贺菌分为四群，44个血 清型（包括亚型）
菌种
群型
亚型
痢疾志贺菌 A 1～10 8a 8b 8c
一、致病物质： 1.侵袭力：菌毛 2.内毒素 ⑴肠粘膜通透性增高 ⑵破坏肠粘膜 ⑶作用于肠壁自主神经系统
致病性与免疫性
3.外毒素:志贺毒素（ST），又称Vero毒素 （VT）——痢疾志贺（A群）Ⅰ型和Ⅱ型 ST生物学活性：
①肠毒素性：具有类似ETEC、霍乱肠毒素 作用；水样便
②细胞毒性：肝、肾、血管内皮等细胞损 害
福氏志贺菌 B 1～6x y 1a 1b 2b 3a 3b 3c4a 4b
鲍氏志贺菌 C 1～18
宋内志贺菌 D 1
微生物学检验
1.标本采集：粪便或肛拭子 运送培养基：30%甘油缓冲盐水、卡-布 培养基
2.分离培养： 培养基：SS，MAC或伊红亚甲蓝平板 出现不发酵乳糖的无色透明或半透明菌 落，需进一步鉴定
微生物学检验
3.生化鉴定 KIA：KA-IMViC：-+-MIU为--/+-
注意：宋内志贺个别菌株迟缓发酵乳糖 福氏6型产气
微生物学检验
4.血清学鉴定:4种多价血清，我国以B群为 主
微生物学检验
生化反应符合，血清不凝集：K抗原 加热破坏后还不凝集，应考虑是EIEC
微生物学检验
⑶鉴别试验：