志贺氏菌检测
志贺氏菌检验方法
03
，如实验服、口罩、手套等。
样品处理注意事项
样品采集时应保证无菌操作，避免污染。
样品应尽快送至实验室进行检验，避免长时间存 放导致细菌繁殖。
样品处理过程中应保持清洁卫生，避免交叉污染 。
检验方法选择注意事项
1
根据样品类型和检验目的选择合适的检验方法。
2
对于不同种类的志贺氏菌，应选择具有针对性的 检验方法。
断结果。
分子生物学检测法
聚合酶链式反应（PCR）
利用特异性引物扩增志贺氏菌基因片段，通过凝胶电泳检 测扩增产物，判断是否存在志贺氏菌。
基因测序
对志贺氏菌基因进行测序分析，与其他已知基因序列进行 比对，以确定志贺氏菌的种属和亚种。
生物传感器技术
利用生物传感器检测志贺氏菌的代谢产物或特异性抗原， 通过信号转换器将生物信号转化为电信号，实现快速、灵 敏的检测。
食品样品的处理
采集到的食品样品应尽快送往实验室进行检验，如果不能及时送检，应将样品低 温保存，避免样品变质和污染。
04
志贺氏菌检验的注意事项
实验室安全注意事项
01
实验室应保持清洁卫生，定期进行消毒处理，确保无菌环境。
02
实验操作应在生物安全柜中进行，避免交叉污染和意外感染。
实验人员应接受专业培训，熟悉操作规程，佩戴个人防护装备
03
志贺氏菌检验的样品采集与处 理粪便样品的采集与处理粪便样品的采集
采集粪便样品时，应确保采集到新鲜 、未被污染的粪便，并尽量多采集一 些，以增加检出率。
粪便样品的处理
采集到的粪便样品应尽快送往实验室 进行检验，如果不能及时送检，应将 样品低温保存，避免样品干燥和污染 。
水样品的采集与处理
志贺氏菌检测
通过检测环境中志贺氏菌的分布和数量，采取有效的消杀措施，降低疾病传播的风险。
05
志贺氏菌检测的挑战与展望
检测挑战
灵敏度与特异性
志贺氏菌检测需要高灵敏 度和特异性，以避免假阳 性或假阴性的结果，给临 床诊断和治疗带来困扰。
快速检测
在感染早期快速准确地检 测志贺氏菌对于及时治疗 和防控疾病传播至关重要。
抵抗力较强
志贺氏菌对理化因素的抵 抗力较强，在粪便、土壤、 食品等外界环境中可存活 数周至数月之久。
志贺氏菌的传播途径
粪口途径传播
志贺氏菌主要通过消化道传播， 通过污染的食物、水或与感染者 的接触而感染。
直接接触感染
志贺氏菌也可通过直接接触感染 者的分泌物或接触被污染的物品 而传播。
志贺氏菌的危害
优点
操作简便、快速。
缺点
可能出现假阳性或假阴性结果，特异性不 如细菌培养法。
分子生物学检测法
聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增志贺氏菌的特异性基因片段，实现 快速、灵敏的检测。
优点
灵敏度高、特异性强、检测速度快。
基因芯片技术
利用芯片上固化的探针与样本中的目标基因 进行杂交，实现高通量检测。
缺点
仪器设备和检测技术要求较高，成本也较高。
简便操作
检测方法应具有简便、易 操作的特点，以便在基层 医疗机构和现场环境中广 泛应用。
技术展望
分子生物学技术
随着分子生物学技术的发展，利 用基因芯片、高通量测序等技术 有望提高志贺氏菌检测的灵敏度
和特异性。
免疫学方法
开发特异性强、灵敏度高的免疫 学检测方法，如酶联免疫吸附试 验（ELISA）、免疫荧光技术等， 将为志贺氏菌的快速检测提供有
志贺氏菌属实验活动风险评估报告
志贺氏菌属实验活动风险评估报告一、生物学特性（一）种类和细菌分型志贺氏菌属细菌的形态与一般肠道杆菌无明显区别，志贺氏菌属（Shigella）是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌（Dysentcrybacillus）。
志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（0）及表面抗原（K）组成。
0抗原是分类的依据，分为型特异性抗原和群特异性抗原2种。
根据抗原构造的不同，将本属细菌分为 4 个群、40余个血清型（包括亚型）。
1. A群又称痢疾志贺氏菌群，有10个血清型。
不分解甘露醇，无鸟氨酸脱竣酶，与其他各群细菌无血清学联系。
2.B群也称福氏菌群，己有13个血清型（包括亚型和变种）。
分解甘露醇，无鸟氨酸脱竣酶。
抗原结构较复杂，各型间有交叉凝集。
3.C群也称鲍氏菌群，有18个血清型。
分解甘露醇，无鸟氨酸脱竣醐。
各型内无交叉凝集。
4.D群也称宋内氏菌群，仅有一个血清型。
分解甘露醇，有鸟氨酸脱粉酶，迟缓发酵乳糖。
有I、∏相之分。
（二）来源痢疾是一种古老的疾病。
远在2600多年以前的《内经至真要大论》中说：“民病，泻泄赤白。
”秦汉（公元前2世纪）以后，记载渐多。
国外有关痢疾的记述始于古希腊希波克拉底时代（公元前5世纪）。
19世纪曾出现全世界痢疾的大流行。
1897年，日本人志贺洁首先发现痢疾是由痢疾杆菌引起，为纪念志贺氏的发现，把痢疾杆菌称为志贺氏菌痢坎杆菌。
（三）传染性志贺氏菌引起细菌性痢疾。
传染源是病人和带菌者。
非典型患者、慢性菌痢患者及无症状带菌者由于症状不典型而容易被误诊或漏诊，因此，在流行病学中具有重要蕙义（四）传播途径志贺氏菌主要通过粪一口途径直接传播，污染的食物或物体可间接传播，苍蝇可作为机械性传播媒介。
志贺氏菌病常为食物暴发型或经水传播。
和志贺氏菌病相关的食品包括色拉（土豆、金枪鱼、虾、通心粉、鸡），生的蔬菜，奶和乳制品，禽，水果，面包制品，汉堡包和有鳍鱼类。
志贺氏菌在拥挤和不卫生条件下能迅速传播，经常被发现于人员大量集中的地方，如餐厅、食堂。
志贺氏菌的检测报告
７５ 、 ％ ， 村 总 发病 ５ ．％ ４ ２ 两 ２例 ， 发病 率 为 ５７ ．％。
共 发病 ３ ６户 ， 占总户数 的 ｌ ％ ， 户发病 ｌ 的 ６５ 每 例 ２ ５户 ， 例 的 ９户 ， 和 ６例 的各 ｌ户 ； 者 中男 ２ ３例 患 性 ４例， 性 ｌ ２ 女 Ｏ例 ， 男女 之 比 为 ４ ２ ｌ 年 龄最 大 、 ：； ７ ６岁 ， 最小 ３岁 ， 平均 ３ ． ； ４２岁 今春 以来 ， 与羊有 明 确接 触史 的 ３ ８人 （３ １ ， 明确 接触 史 的 ｌ 人 ７ ％） 无 ４
［ 收稿 日 ］ ０ — ２ ２；修定 日期］０２ １ ２ 期 ￣ １ １—４［ ０ ２０—０ — ２ ｆ 作者简介 ］ 崔东胜（９６ ， ， １ 一）男 主管压师 ， ５ 从事卫生防疫工作 。
检 （ ） 、 氏菌感染 及孕羊 流 产率较 高 。 免 疫 布
志 贺 氏菌 的检测 报 告
陈秀英 （ 浙江省疾病预防控制中 ， 浙江 杭州 ３００ ） １０９
沁源 县 官滩 乡 的 琵 琶 园 、 头 两 村 ２０ 崖 ０ １年 ４
逐 户调 查 ． 已发 现 的 ４ 对 ５例 患者 进 行 了个 案调 查 ， ３ 对 ８例有 可 疑症 状 者 进行 血 清 学检 验 后 确诊 ７例 。故 自 ４月 １ ８日发 生 第 一 例后 ， ８月 至 ２ ５日琵 琶园 、 崖头分 别发 病 ３ ｏ例 、２例 ， 病率 为 ２ 发
粪 便随处 可见 。近 年来 两 村 的 羊 只均 未 进行 过 检
（ ） ， 与已 有布 病 疫 情 的平 遥 、 县 等邻 县有 免 疫 且 沁 混 牧及羊 只贸 易。牧 羊 人 员 为羊 接 产 时 不采 取 任 何防护措施 ． 流产 后的胎 羔 、 盘 ， 水等 未进行 过 胎 羊 掩埋 等处理 。经 畜牧部 门调查 ， 只的布病 感 染率 羊 为 ９２ ， ％ 今年孕 羊 的流产 率为 ８ ％左右 。
志贺氏菌属诊断血清说明书
志贺氏菌属诊断血清学试验操作程序1.目的制定标准化的志贺氏菌属诊断血清操作程序，指导对志贺氏菌属的检测2.原理用志贺氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理诊断各型志贺氏菌。
3.试剂及实验设备3.1志贺氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为22种的志贺氏菌属诊断血清3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。
3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。
4.程序步骤4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。
4.2选择符合志贺氏菌属培养特性，并经初步生化检测符合志贺菌属生物特性的疑似菌落。
4.3菌群分析将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，分别用志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验，凝集阳性时，再分别用群多价血清做玻片凝集试验，群多价血清凝集阳性时，再分别与相应的单价血清做玻片凝集试验，最终确定其血清分型。
如果志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验均为阴性，可能有以下3种可能性：①K抗原的存在，处理方法：取待检菌的纯菌落于生理盐水中制成浓度约2麦氏单位的菌悬液，置于100°C水浴中煮沸30min，泠却至室温后再用诊断血清进行玻片凝集试验；②非典型菌落，处理方法：通过在营养琼脂平板上的传代让其恢复抗原性，再用诊断血清进行玻片凝集试验；③诊断血清型以外的可送市或省CDC检测。
4.4玻片凝集试验法取18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制成2麦氏单位的菌悬液，取诊断血清20μL于洁净玻片上，然后取20μL待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。
若与福氏志贺氏菌单价血清呈现凝集可参照福氏志贺氏菌诊断抗原表（见附表）及生化特性做菌型诊断。
5.质量控制志贺氏菌属4种多价血清选择福氏志贺氏菌属为阳性对照株；选择大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照菌株。
4789.5志贺菌检验
对可疑的食品，包括在使用前需用手处理的或 轻微加热的产品，且其酸度范围由PH5.5至6.5 之间。一般来说，当食品中含有大量的大肠菌 群，大肠杆菌与沙门氏菌时，同时即可疑含有 志贺氏菌。
现行GB/T 4789.5-2003标准不足处
1. 采用的GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后大肠菌
的生长速度大大超过志贺氏菌,所以检测效果较差
2. 使用的分离平板SS对志贺1型有抑制 3. 检验方法与现行的其它国家的标准存在差异
修 订 原 则
1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性
考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件尽可能 简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法
2.与国际接轨的原则
该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准 ，部分参 考采用了美国FDA、NMKL等标准
培 养 特 性
志贺氏菌属于革兰氏阴性短杆菌； 无芽孢、无荚膜、无鞭毛、不运动 需氧或兼性厌氧，营养要求不高，能在普通培 养基上生长 能利用葡萄糖与其他碳水化合物，产酸不产气。 除A群外，B 、 C 、 D群均能发酵甘露醇，除 D群外，A 、 C和D群均不发酵乳糖； D群具 有鸟氨酸脱羧酶
菌体（0）抗原 1.型特异性抗原：化学组成为多糖，是光滑型菌株所 含有的重要抗原。当菌株变为粗糙型时，此抗原也常 随之消失，根据所含的型抗原不同，可将志贺菌属分 为A、B、C、D四个群及39个抗原型。 2.群特异性抗原：为光滑型菌株的次要抗原，也是菌 体抗原的一种。特异性较低，主要存在于B群。根据所 含的群抗原不同，可将一些菌型分为多种亚型。
西蒙氏柠檬酸盐实验
挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培 养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌 落生长，培养基从绿色转为蓝色。
志贺氏菌检测
志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g ,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎lmin ,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培育6〜8h。
培育时间视细菌生长状况而定，当培育液消失稍微混浊时即应中止培育。
二、分别和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36工培育18~24h e志贺氏菌在这些培育基上呈现无色透亮不发酵乳糖的菌落。
挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。
一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培育18~24h ,分别观看结果。
下述培育物可以弃去：a.在三糖铁琼脂斜面上呈扩散生长的培育物；b.在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培育物;C.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培育物；d.产气的培育物；e.有动力的培育物；f.产生硫化氢的培育物。
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。
三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培育物，做玻片凝集试验。
先用4种志贺氏菌多价血清检查，假如由于K抗原的存在而不消失凝集，应将菌液煮沸后再检查；假如呈现凝集，则用Al、A2、B群多价和D群血清分别试验。
如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。
福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表10可先用群因子血清检查，再依据群因子血清消失凝集的结果，依次选用型因子血清检查。
4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。
假如鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。
四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖镀西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶pH7.2尿素KCN生长水杨昔和七叶昔的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培育物均为阴性结果。
志贺氏菌检测
志贺氏菌检测【1 】1 装备和材料除微生物实验室通例灭菌及造就装备外,其他装备和材料如下：1.1 恒温造就箱：36℃±1℃;1.2 冰箱：2℃～5℃;1.3 膜过滤体系;1.4 厌氧造就装配：℃±1℃;1.5 电子天平：感量0.1g;1.6 显微镜：10×～100×;1.7 均质器;1.8 振荡器;1.9 无菌吸管：1ml（具刻度）.10ml（具刻度）或微量移液器及吸头;1.10 无菌均质杯或无菌均质袋：容量500ml;1.11 无菌造就皿：直径90mm;1.12 pH计或pH比色管或周详pH试纸;1.13 全主动微生物生化剖断体系.2 造就基和试剂3.1 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录中1.3.2 麦康凯（MAC）琼脂：见附录中2.3.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录中3.3.4三糖铁（TSI）琼脂：见附录中4.3.5养分琼脂斜面：见附录中5.3.6半固体琼脂：见附录中6.3.7葡萄糖铵造就基：见附录中7.3.8尿素琼脂：见附录中8.3.9β-半乳糖苷酶造就基：见附录中9.0氨基酸脱羧酶实验造就基：见附录中10.1糖发酵管：见附录中11.2西蒙氏柠檬酸盐造就基：见附录中12.3粘液酸盐造就基：见附录中13.4蛋白胨水.靛基质试剂：见附录中14.5志贺氏菌属诊断血清.6生化剖断试剂盒.4 操纵步调4.1 增菌以无菌操纵取检样25g（ml）,参加装有灭菌225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质杯,用扭转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质;或参加装有225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中,用拍击式均质器持续均质1min～2min,液体样品振荡混匀即可.于℃±１℃,厌氧造就16h～20h.4.2 分别取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色造就基平板上,于36℃±1℃造就20h～24h,不雅察各个平板上发展的菌落形态.宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌.若消失的菌落不典范或菌落较小不轻易不雅察,则持续造就至48h再进行不雅察.志贺氏菌在不合选择性琼脂平板上的菌落特点见表1.表1 志贺氏菌在不合选择性琼脂平板上的菌落特点4.3 初步生化实验4自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典范或可疑菌落,分别接种TSI.半固体和养分琼脂斜面各一管,置36℃±1℃造就20h～24h,分别不雅察成果.4凡是三糖铁琼脂中斜面产碱.底层产酸（发酵葡萄糖,不发酵乳糖,蔗糖）.不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）.不产硫化氢.半固体管中无动力的菌株,挑取其4中已造就的养分琼脂斜面上发展的菌苔,进行生化实验和血清学分型.4.4 生化实验及附加生化实验4生化实验用4中已造就的养分琼脂斜面上发展的菌苔,进行生化实验,即β-半乳糖苷酶.尿素.赖氨酸脱羧酶.鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分化实验.除宋内氏志贺氏菌.鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性;宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型,鲍氏志贺氏菌13型的β-半乳糖苷酶为阳性以外,其余生化实验志贺氏菌属的造就物均为阴性成果.别的因为福氏志贺氏菌6型的生化特点和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌类似,须要时还需加做靛基质.甘露醇.棉子糖.甘油实验,也可做革兰氏染色检讨和氧化酶实验,应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌.生化反响不相符的菌株,即使能与某种志贺氏菌分型血清产生凝聚,仍不得剖断为志贺氏菌属.志贺氏菌属生化特点见表2.表2 志贺氏菌属四个群的生化特点4附加生化实验因为某些不生动的大肠埃希氏菌（）.A-D（Alkalescens-D isparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特点与志贺氏菌类似,并能与某种志贺氏菌分型血清产生凝聚;是以前面生化实验相符志贺氏菌属生化特点的造就物还需另加葡萄糖胺.西蒙氏柠檬酸盐.粘液酸盐实验(36℃造就24h～48h).志贺氏菌属和不生动大肠埃希氏菌.A-D菌的生化特点差别见表3.表3 志贺氏菌属和不生动大肠埃希氏菌.A-D 菌的生化特点差别4如选择生化剖断试剂盒或全主动微生物生化剖断体系,可依据4的初步断定成果,用4中已造就的养分琼脂斜面上发展的菌苔,应用生化剖断试剂盒或全主动微生物生化剖断体系进行剖断.4.5 血清学剖断4抗原的预备志贺氏菌属没有动力,所以没有鞭毛抗原.志贺氏菌属重要有菌体（O）抗原.菌体O抗原又可分为型和群的特异性抗原.一般采取1.2%～1.5%琼脂造就物作为玻片凝聚实验用的抗原.注1：一些志贺氏菌假如因为K抗原的消失而不消失凝聚反响时,可挑取菌苔于1ml心理盐水做成浓菌液,100℃煮沸15min～60min去除K抗原后再检讨.注2：D群志贺氏菌既可能是滑腻型菌株也可能是光滑型菌株,与其他志贺氏菌群抗原不消失交叉反响.与肠杆菌科不合,宋内氏志贺氏菌光滑型菌株不一定会自凝.宋内氏志贺氏菌没有K抗原.4凝聚反响在玻片上划出2个约1cm×2cm的区域,挑取一环待测菌,各放1/2环于玻片上的每一区域上部,在个中一个区域下部加1滴抗血清,在另一区域下部参加1滴心理盐水,作为对比.再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液.将玻片竖直动摇混杂1min,并对着黑色布景进行不雅察,假如抗血清中消失凝聚成块的颗粒,并且心理盐水中没有产生自凝现象,那么凝聚反响为阳性.假如心理盐水中消失凝聚,视作为自凝.这时,应挑取统一造就基上的其他菌落持续进行实验.假如待测菌的生化特点相符志贺氏菌属生化特点,而其血清学实验为阴性的话,则按4注1进行实验.附录造就基和试剂1 志贺氏菌增菌汤-新生霉素（Shigella broth）1.1 志贺氏菌增菌肉汤成分蒸馏水1000mlp±1.制法将以上成分混杂加热消融,冷却至25℃阁下校订pH,分装恰当的容器,121℃灭菌15min,掏出后冷却至50℃～55℃μg/ml）,分装225ml备用.注：如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存一个月.1.2 新生霉素溶液1.成分蒸馏水1000ml制法μm过滤膜除菌,如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存一个月.1.3 临用时每225ml志贺氏菌增菌肉汤（1.1）参加5ml新生霉素溶液（1.2）,混匀.2 麦康凯（MAC）琼脂2.1 成分3号胆盐蒸馏水1000mlp±2.2 制法将以上成分混杂加热消融,冷却至25℃阁下校订pH,分装,121℃高压灭菌15min.冷却至45℃～50℃,倾泻平板.注：如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存二周.3 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂3.1 成分L-赖氨酸蒸馏水1000ml±3.2 制法除酚红和琼脂外,将其他成分参加400ml蒸馏水中,煮沸消融,校订pH.另将琼脂参加600ml蒸馏水中,煮沸消融.将上述两溶液混杂平均后,再参加指导剂,待冷至50℃～55℃倾泻平皿.注：本造就基不须要高压灭菌,在制备进程中不宜过火加热,防止下降其选择性,贮于室温暗处.本造就基宜于当天制备,第二天应用.应用前必须去除平板概况上的水珠,在37℃～55℃温度下,琼脂面向下.平板盖亦向下烘干.别的如设置装备摆设好的造就基不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存二周.4 三塘铁（TSI）琼脂4.1 成分硫酸亚铁铵(NH4)2Fe(SO4)·6H2蒸馏水1000ml±4.2 制法除酚红和琼脂外,将其他成分加于400ml蒸馏水中,搅拌平均,静置约10min,加热使完整熔解,冷却至25℃阁下校订pH至±.另将琼脂加于600ml蒸馏水中,静置约10min,加热使完整熔解.将两溶液混杂平均,参加5%酚红水溶液5ml,混匀,分装小号试管,每管约3ml.于121℃灭菌15min,制成高层斜面.冷却后呈桔红色.如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存一个月.5 养分琼脂斜面5.1 成分蛋白胨10.0g牛肉膏氯化钠琼脂15.0g蒸馏水1000mlpH 7.0±5.2 制法将除琼脂以外的各成分消融于蒸馏水内,参加15%氢氧化钠溶液约2ml,冷却至25℃阁下校订pH至±.参加琼脂,加热煮沸,使琼脂熔解.分装小号试管,每管约3ml.于121℃灭菌15min,制成斜面.注：如不立刻应用,在2℃～8℃前提下可储存二周.6 半固体琼脂6.1 成分～蒸馏水100ml±6.2 制法按以上成分派好,加热消融,校订pH,分装小试管,121℃灭菌15min,竖立凝固备用.7 葡萄糖胺造就基7.1 成分硫酸镁（MgSO4·蒸馏水1000ml±7.2 制法先将盐类和糖消融于水内,校订pH,再参加琼脂加热消融,然后参加指导剂.混杂平均后分装试管,121℃高压灭菌15min.制成斜面备用.8 尿素琼脂8.1 成分蛋白胨1.0g氯化钠蒸馏水1000mlpH 7.2将上述成分参加蒸馏水中,煮沸消融,调节pH,分装小试管,121℃高压灭菌15min.8.2 制法除酚红和尿素外的其他成分加热消融,冷却至25℃阁下校订pH,参加酚红指导剂,混匀,于121℃灭菌15min.冷至约55℃,参加用μm过滤膜除菌后的20%尿素水溶液100ml,混匀,以无菌操纵分装灭菌试管,每管约3m l～4ml,制成斜面后放冰箱备用.8.3 实验办法挑取琼脂造就物接种,在36℃±1℃造就24h,不雅察成果.尿素酶阳性者因为产碱而使造就基变成红色.9 β-半乳糖苷酶造就基9.1 液体法（ONPG法）成分邻硝基苯β±±9.1.2制法将ONPG溶于缓冲液内,参加蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管内,每管l,用橡皮塞塞紧.9.1.3实验办法自琼脂斜面挑取造就物一满环接种,于36℃±1℃造就1h～3h和24h不雅察成果.如β-D-半乳糖苷酶产生,则于1h～3h变黄色,如无此酶则24h不变色.9.2 平板法（X-Gal法）成分5-溴-4-氯-3-吲哚-β蒸馏水1000ml±制法将各成分加热煮沸于1L水中,冷却至25℃阁下校订pH,115℃高压灭菌10min.倾泻平板避光冷藏备用.实验办法挑取琼脂斜面造就物接种于平板,划线和点种均可,于36℃±1℃造就18h～24h不雅察成果.假如β-D-半乳糖苷酶产生,则平板上造就物色彩变蓝色,如无此酶则造就物为无色或不透明色,造就48h～72h后有部分转为淡粉红色.10 氨基酸脱羧酶实验造就基10.1 成分蛋白胨5.0g1.6%溴甲酚紫-乙醇溶液L型或DL型赖氨酸和鸟氨酸/100ml或/100ml蒸馏水1000ml±10.2 制法除氨基酸以外的成分加热消融后,分装每瓶100ml,分别参加赖氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%参加,DL-氨基酸按1%参加,再校订pH至±.对比造就基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管ml,上面滴加一层白腊油,115℃高压灭菌10min.10.3 实验办法从琼脂斜面上挑取造就物接种,于36℃±1℃造就18h～24h,不雅察成果.氨基酸脱羧酶阳性者因为产碱,造就基应呈紫色.阴性者无碱性产品,但因葡萄糖产酸而使造就基变成黄色.阴性对比管应为黄色,空白对比管为紫色.11 糖发酵管11.1 成分磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2蒸馏水1000ml±11.2 制法11葡萄糖发酵管按上述成分派好后,按％参加葡萄糖,25℃阁下校订pH,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min.11其他各类糖发酵管可按上述成分派好后,分装每瓶100ml,121℃高压灭菌15min.另将各类糖类分别配好10％溶液,同时高压灭菌.将5ml糖溶液参加于100ml造就基内,以无菌操纵分装小试管.注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采取过滤法除菌.11.3 实验办法从琼脂斜面上挑取小量造就物接种,于36℃±1℃造就,一般2d～3d.迟缓反响需不雅察14d～30d.12 西蒙氏柠檬酸盐造就基12.1 成分氯化钠g硫酸镁（MgSO4·7H2O）g磷酸二氢铵g磷酸氢二钾g柠檬酸钠g琼脂20g0.2%溴麝喷鼻草酚蓝溶液ml蒸馏水1000ml±12.2 制法先将盐类消融于水内,调至pH,参加琼脂,加热熔解.然后参加指导剂,混杂平均后分装试管,121℃灭菌15 min.制成斜面备用.12.3 实验办法挑取少量琼脂造就物接种,于36℃±1℃造就4d,天天不雅察成果.阳性者斜面上有菌落发展,造就基从绿色转为蓝色.13 粘液酸盐造就基13.1 测试肉汤成分酪蛋白胨g溴麝喷鼻草酚蓝溶液g蒸馏水1000ml粘液酸g±制法慢慢参加5N氢氧化钠以消融粘液酸,混匀.其余成分加热消融,参加上述粘液酸,冷却至25℃阁下校订pH至,分装试管,每管约5ml,于121℃高压灭菌10min. 13.2 质控肉汤成分酪蛋白胨g溴麝喷鼻草酚蓝溶液g蒸馏水1000ml±制法所有成分加热消融,冷却至25℃阁下校订pH,分装试管,每管约5ml,于121℃高压灭菌10min.13.3 实验办法将待测新颖造就物接种测试肉汤和质控肉汤,于36℃±1℃造就48h不雅察成果,肉汤色彩蓝色不变则为阴性成果,黄色或稻草黄色为阳性成果.14 蛋白胨水.靛基质试剂成分蛋白胨(或胰蛋白胨) g氯化钠g蒸馏水1000mL14.2 制法按上述成分派制,分装小试管,121℃高压灭菌15 min.注：此试剂在2℃～8℃前提下可储存一个月.14.3 靛基质试剂柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛消融于75ml戊醇中.然后迟缓参加浓盐酸25ml.欧－波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛消融于95ml95%乙醇内.然后迟缓参加浓盐酸20ml.14.4 实验办法挑取少量造就物接种,在36℃±1℃造就1d～2d,须要时可造就4d～5d.参加柯凡克试剂约l,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或参加欧－波试剂约ml,沿管壁流下,笼罩于造就液概况,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注：蛋白胨中应含有丰硕的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种剖断后方可应用,此试剂在2℃～8℃前提下可储存一个月.。
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1.20志贺氏菌属是一类革兰氏阴性杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌。
为兼性厌氧菌，能在普通培养基上生长，形成中等大小，半透明的光滑型菌落。
在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。
志贺氏菌检测标准如下：
GB/T4789.31-2003食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法
GB4789.5-2012食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验
GB/T8381.2-2005饲料中志贺氏菌的检测方法
SN/T1168-2002猴志贺氏菌检验操作规程
SN/T2565-2010食品中志贺氏菌分群检测MPCR-DHPLC法
SN/T3064.3-2011国境口岸蝇类、蜚蠊携带重要病原体检测方法第3部分：志贺氏菌SN/T3306.3-2012国境口岸环介导恒温扩增（LAMP）检测方法第3部分：志贺氏菌10
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