淋巴细胞亚群
淋巴细胞亚群测定
1检验目的检测机体细胞免疫功能的重要指标，且对某些疾病（如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等）的辅助诊断，分析发病机制，观察疗效及监测预后有重要意义。
2 检验方法和原理2.1 方法：流式细胞术2.2 原理：在含有准确数量荧光计数微球的试管(如BD TruCount)中，加入一定体积的抗凝血液和六色荧光素标记的单克隆抗体进行免疫荧光染色，按溶血／免洗方法进行流式细胞仪检测，以CD45／SSC设定淋巴细胞门，应用FACS Canto软件自动进行多重逻辑设门和统计分析数据，可以准确计数血液中淋巴细胞亚群的绝对数量。
3 原始样本种类3.1 样本类型：KEDTA抗凝静脉血样本。
2EDTA或肝素抗3.2 样本容器：盛放样本的容器为洁净的一次性真空采血管（K2凝）。
3.3 样本保存：抽取样本后置于加有抗凝剂（一般选择EDTA或肝素）的试管中，室温（20-25℃）保存，尽量于采血后48小时内处理样本；标记后的样本最好在24小时内完成上机检测。
4设备和试剂4.1 设备名称：BD FACS Canto II流式细胞仪型号：Canto II厂家：美国BD公司4.2 试剂4.2.1 主要试剂本实验采用BD公司的试剂。
4.2.1.1 BD MultiTEST 6-color TBNK Reagent货号：337166规格：1ml厂家：美国BD公司储存条件：2-8℃避光保存，在试剂盒标识的有效期前使用。
只有相同批号的各种成分才能相互混用。
4.2.1.2 绝对计数管（TruCOUNT Tubes）货号：340334规格：25tubes/盒厂家：美国BD公司储存条件：2-25℃避光保存，在试剂盒标识的有效期前使用。
TruCOUNT Tubes 从冰箱拿出后需平衡至室温，方可打开包装袋。
每次用前，需要检查包装袋内的干燥剂，如果由蓝色变成粉色，则TruCOUNT Tubes不能继续使用。
4.2.1.3 溶血素Lysing Solution（10X Concentrate）货号：349202规格：100mL厂家：美国BD公司储存条件：2-8℃避光保存，在试剂盒标识的有效期前使用。
淋巴细胞亚群.pptx
1
Killer T Lymphocyte) NKT 细胞 gdT gdT 细胞
CD3+TCRgd+CD4-CD8-
2)分泌：IFN-g/TNF 或 IL-4/IL-13
1) 参与上皮细胞免疫；2)细胞 毒作用；3)分泌：IFN-g, TNF
B 淋巴细胞亚群
淋巴细胞亚群 Naive B Cells 初始型 B 细胞 Memory B Cells 记忆型 B 细胞 Switched Memory 类别转换记忆型 B 细胞 Plasma Cells 奖细胞
Hale Waihona Puke IFN-g T-bet+ IL-4 GATA-3+
1) 细胞介导免疫；2)巨噬细胞 活化；3) 分泌：IFN-g, TNF 1) 辅助 B 细胞；2) 介导过敏 性炎症；3) 分泌：IL-4, IL-15,
IL-13
Th17
CD3+CD4+
(Th17 型细胞)
Treg (regulatory T CD3+CD4+CD25+
IL-17 RORgt+ Foxp3+
1)炎症反应；2) 机体防御；3) 分泌：IL-17, IL-17F, TNF 1) 接触依赖性抑制；2) 分泌：
cells) 调节性 T 细胞 Tr1 (regulatory T CD3+CD4+
IL-10
TGF-b, IL-10 1) 免疫调节；2)高分泌：IL-10
表型 CD19+IgM+IgD+ CD19+CD27+IgM+ CD19+CD27+IgMCD38+CD138+
淋巴细胞分类和功能分类
淋巴细胞分类和功能分类淋巴细胞是一类重要的免疫细胞，是淋巴系统中的关键成员。
根据细胞的表面标志物和功能特点，淋巴细胞可以被分类为多个亚群。
下面将详细介绍淋巴细胞的分类和功能分类。
一、淋巴细胞的分类1. T淋巴细胞T淋巴细胞是最常见的淋巴细胞亚群，约占淋巴细胞总数的80%以上。
根据细胞表面的CD4和CD8标志物的表达情况，T淋巴细胞可以进一步分为T辅助细胞（CD4+ T细胞）和T细胞（CD8+ T细胞）。
2. B淋巴细胞B淋巴细胞是另一类重要的淋巴细胞亚群，约占淋巴细胞总数的10-20%。
B淋巴细胞主要负责体液免疫应答，能产生和分泌抗体，对于细菌和病毒的清除起到重要作用。
3.自然杀伤细胞（NK细胞）NK细胞是第三类重要的淋巴细胞亚群，约占淋巴细胞总数的5-10%。
NK细胞主要负责细胞免疫应答，能够直接杀伤一些感染病原体的细胞或肿瘤细胞。
4.大颗粒淋巴细胞（LGL细胞）LGL细胞是一大类异质性的细胞，具有很强的杀伤能力。
根据表面标志物的不同，大颗粒淋巴细胞可以进一步分为自然杀伤T细胞（NKT细胞）和T细胞淋巴瘤/白血病（T-LGL）。
5.调节性T细胞调节性T细胞（Treg细胞）是一群具有免疫调节功能的淋巴细胞。
它们能够抑制免疫应答的过度反应，维持免疫系统的平衡。
二、淋巴细胞的功能分类1.免疫应答调节淋巴细胞在免疫应答中起到了重要的调节作用。
T辅助细胞通过激活B淋巴细胞并促进抗体的产生，帮助清除外来病原体；T调节细胞则通过抑制免疫应答过程中的过度反应，维持免疫系统的平衡。
2.抗体产生在体液免疫应答中，B淋巴细胞能够通过抗体的产生来清除病原体。
B淋巴细胞通过识别和结合抗原，进而分化为浆细胞，产生大量的抗体。
3.细胞毒性杀伤NK细胞和一些T细胞具有细胞毒性杀伤能力。
它们能够杀伤肿瘤细胞和感染病原体的细胞，起到免疫防御的重要作用。
4.免疫记忆淋巴细胞是免疫记忆的关键细胞。
一旦机体曾经接触过某个病原体，记忆性淋巴细胞能够迅速被激活，并产生特异性的免疫应答，从而保护机体免受再度感染。
淋巴细胞亚群科普
淋巴细胞亚群科普
淋巴细胞是免疫系统中的一种重要细胞，它可以识别并攻击身体
内的病原微生物和肿瘤细胞。
在淋巴细胞中，有不同的亚群，它们在
免疫应答中担当着不同的角色。
1. CD4+ T细胞：这种细胞可以协调和调节整个免疫系统的应答，促进其他免疫细胞的增殖和分化，以及生成特定的抗体。
CD4+ T细胞
还可以产生多种趋化因子，引导其他细胞组织到感染部位，并调节炎
症和免疫反应的程度。
在人类免疫缺陷病毒（HIV）感染中，CD4+ T细胞是主要受损害的细胞类型。
2. CD8+ T细胞：这种细胞可以直接杀死感染细胞和肿瘤细胞，
称为细胞毒性T细胞。
它们通过识别细胞表面的异常蛋白或肽段，释
放细胞毒素和促凋亡因子，导致被感染的细胞死亡。
3. B细胞：这种细胞可以分化成浆细胞，产生抗体，帮助机体对抗病原微生物和外来物质。
B细胞的不同亚群可以产生不同种类的抗体，以适应各种不同的病原体。
4. 自然杀伤细胞（NK细胞）：这种细胞能够识别并杀伤缺乏特
异性抗原的肿瘤细胞和病原微生物，其机制是通过释放细胞毒素和促
凋亡因子来诱导细胞死亡。
NK细胞也能够与其他免疫细胞相互作用，
促进免疫应答。
5. 调节性T细胞：这种细胞可以抑制其他免疫细胞的活性，防
止过度活化和自身免疫反应。
它们对于调节免疫平衡和控制炎症反应
具有重要作用。
了解和识别不同的淋巴细胞亚群，可以有助于我们更好地了解免
疫反应的机制和不同疾病的发展。
淋巴细胞亚群
淋巴细胞亚群是指在免疫系统中不同类型和功能的淋巴细胞种类。了解淋巴 细胞亚群的分类和功能，对于理解免疫系统以及免疫疾病的发生至关重要。
什么是淋巴细胞亚群？
淋巴细胞亚群是在免疫系统中不同类型和功能的淋巴细胞种类。它们扮演着 免疫系统中重要的角色，参与免疫应答和疾病清除。
淋巴细胞亚群的分类
免疫耐受
一些淋巴细胞亚群具 有免疫耐受的能力， 防止免疫系统对自身 组织产生过度反应。
免疫突变
淋巴细胞亚群可以通 过基因重组和突变来 产生多样的抗体和受 体。
免疫逃逸
一些病原体可以通过 改变自身的表面结构 或进入宿主细胞来逃 避淋巴细胞亚群的识 别和清除。
淋巴细胞亚群在免疫疾病中的 作用
淋巴细胞亚群的功能失调常常与免疫疾病的发生和发展密切相关，研究淋巴 细胞亚群对于免疫疾病的预防和治疗具有重要意义。
3 免疫清除
淋巴细胞亚群可以通过不 同的机制来清除感染和异 常细胞，维护身体健康。
4 免疫监视
淋巴细胞亚群可以监视身体中的各种细胞和 组织，及时发现和排除异常。
5 免疫刺激
淋巴细胞亚群可以增强免疫应答，激发免疫 系统产生更强的反应。
淋巴细胞亚群的生物学特性
组织特异性
不同的淋巴细胞亚群 可以富集在特定的组 织和器官中，发挥特 定的功能。
NK细胞是一种具有自然杀伤功能的淋巴细胞，可以直接杀伤病变细胞和受体 识别异常的细胞。
B细胞亚群
B细胞是一种产生抗体的淋巴细胞，具有抗原呈递和体液免疫功能。
淋巴细胞亚群的功能
1 免疫记忆
淋巴细胞亚群可以记住特 定病原体，使得免疫系统 在再次遭遇时更快、更有 效地应对。
2 免疫调节
淋巴细胞亚群可以调节免 疫应答的强度和方向，确 保免疫系统对各种病原体 做出合适的反应。
淋巴细胞亚群检测项目
淋巴细胞亚群检测项目1. 什么是淋巴细胞亚群？淋巴细胞亚群，听起来有点高深对吧？其实它就是咱们身体里一种重要的免疫细胞，帮我们抵抗各种病毒和细菌。
这些小家伙就像是你身体里的超级英雄，每天都在默默地保护你，防止坏东西入侵。
淋巴细胞主要分为几种：T细胞、B细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）。
每种细胞都有自己的“特长”，就像各种职业的人，齐心协力，才能让我们的免疫系统运转得顺顺利利。
1.1 T细胞：免疫的指挥官首先来说说T细胞，这可是免疫系统里的“指挥官”。
它们负责识别那些不速之客，像是侵入你身体的病毒或者细菌。
一旦发现敌人，T细胞就会发号施令，召集其他细胞来围攻敌人。
你可以想象一下，一个勇敢的指挥官在战场上大喊：“快来，大家一起打！”这就是T细胞的工作。
它们可真是个能干的小家伙。
1.2 B细胞：抗体的工厂再来看看B细胞，它们就是免疫系统里的“工厂”。
B细胞的主要任务是制造抗体，这些抗体就像是敌人的“克星”，能精准识别并消灭入侵者。
就像打游戏的时候，找到对手的弱点，B细胞也会为每一种病毒量身定制抗体。
哎，这种“个性化服务”可真不错，绝对是给我们身体的一大保障。
2. 为什么要检测淋巴细胞亚群？那么，既然淋巴细胞这么重要，咱们为什么要检测它们呢？首先，检测淋巴细胞亚群可以帮助医生了解你的免疫系统是不是健康。
如果某一类淋巴细胞数量偏低，那可能就意味着你的免疫力不足，容易感染；如果某一类过多，那又可能暗示着某些潜在的问题，像是自身免疫性疾病。
所以说，了解自己的免疫状态，真的是个好主意！2.1 监测健康状况而且，这种检测也可以作为健康监测的一部分。
就像我们定期去体检，看看血压、血糖一样。
淋巴细胞亚群检测也是一种提前预警的方式，帮助你及时发现问题，避免大病临头。
俗话说“有备无患”，这话真是一点没错。
2.2 定制个性化治疗此外，对于一些慢性病患者，淋巴细胞亚群检测也能帮助医生制定个性化治疗方案。
医生可以根据你的具体免疫状态，调整用药和治疗方案，让治疗效果达到最佳。
淋巴细胞亚群
B细胞
产生抗体，为体液免疫提 供重要保护。
自然杀伤细胞
针对病毒感染和肿瘤细胞 的杀伤作用。
淋巴细胞亚群的功能和作用
1 免疫调节
调节免疫系统的应答， 维持 疫应答。
3 免疫效应
产生免疫效应，杀伤被 感染的细胞。
淋巴细胞亚群在免疫应答中的作用
抗原递呈
T细胞接受抗原递呈细胞的信 号，触发免疫应答。
抗体产生
B细胞分化为浆细胞，产生抗 体。
肿瘤杀伤
自然杀伤细胞识别肿瘤细胞并 杀伤。
淋巴细胞亚群与疾病的关联
1
免疫缺陷病
淋巴细胞功能异常导致免疫系统缺陷性疾病。
2
自身免疫病
免疫系统对自身组织产生异常反应。
3
淋巴瘤
淋巴细胞的恶性肿瘤。
淋巴细胞亚群的检测方法
通过流式细胞术、细胞培养和免疫组化等方法检测和鉴定淋巴细胞亚群。
淋巴细胞亚群
淋巴细胞亚群是免疫系统中不同类型的淋巴细胞。它们在免疫应答中扮演着 重要角色，具有不同的功能和特点。
淋巴细胞亚群简介
淋巴细胞亚群是淋巴细胞的亚群，包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等。它 们在免疫系统中起着至关重要的作用。
淋巴细胞亚群的分类与特点
T细胞
包括辅助T细胞和细胞毒性 T细胞，对调节和进攻性免 疫起关键作用。
淋巴细胞亚群应用的前景和挑战
1 免疫疗法
淋巴细胞亚群的研究为新的免疫疗法提供了机会。
2 个体化治疗
深入了解淋巴细胞亚群有助于个体化治疗的发展。
3 技术挑战
淋巴细胞亚群的准确检测和鉴定仍然面临技术挑战。
淋巴细胞亚群及检测意义
淋巴细胞亚群及检测意义淋巴细胞是构成免疫系统的主要细胞类别，占外周血白细胞总数的20%-45%；淋巴细胞亚群分类可将淋巴细胞分为T、B、NK细胞等。
T细胞主要参与细胞免疫，表达CD3抗原，T细胞又包括辅助T细胞（Th）和抑制T细胞（Ts），它们分别表达CD4和CD8。
CD4+T细胞：辅助性T细胞（help T cell, TH）包括TH 1和TH 2细胞。
TH 1细胞与抗原接触后，可通过释放IL-2、IFN-α、TFN-β等因子，引起炎症反应或迟发型超敏反应，TH1细胞又称为炎性T细胞；TH2细胞可通过释放IL-4、5、6、10等因子，诱导B细胞增殖、分化、分泌抗体,引起体液免疫应答。
外周血中CD4淋巴细胞计数在500以上则够用，350-500免疫力偏低，200-350时需要警惕。
CD8+T细胞：主要包括细胞毒T细胞（Tc或CTL）和抑制性T细胞（Ts）。
Tc细胞为细胞免疫效应细胞，经抗原致敏后，可特异性杀死带致敏抗原的靶细胞。
抑制性T细胞（Ts，其存在尚有争议）具有抑制体液免疫和细胞免疫的功能，通过分泌抑制性细胞因子和IFN-γ，抑制体液免疫和细胞免疫。
B细胞主要参与体液免疫，表达CD19抗原；NK细胞表达CD16和/或CD56，在机体中不依赖抗原刺激自发地发挥细胞毒效应。
1.T淋巴细胞检测的临床意义(1) CD4+T细胞绝对计数小于200个/μl，考虑停用药物。
在使用免疫抑制剂的过程中：当小于500个/μl，提示需要注意控制用量。
(2) CD4/CD8的值小于0.5，考虑停用药物。
(3)如果CD4+T维持低位，建议使用胸腺素等免疫增强剂。
（*CD4+T淋巴细胞＜200个/μl，易发生卡氏肺孢子虫感染；巨细胞病毒感染和鸟分枝杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞＜50个/μl的病人，极少见于CD4+T淋巴细胞＞100个/μl的病人）2.调节性T细胞（Treg）检测的临床意义3.B淋巴细胞亚群检测的临床意义4.NK细胞亚群检测的临床意义。
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机体免疫状态是衡量机体是否患病的重要指标，目前多采用流式细胞术来监测机体的免疫状态，其中最重要的指标是检测T、B和NK淋巴细胞的水平。
T细胞主要包括T辅助细胞（Th）和T抑制细胞（Ts）细胞亚群。
CD3+细胞代表外周血中总的成熟T细胞，理论上应约等于CD4+细胞和CD8+细胞的总和，但往往出现CD4+加CD8+细胞之和大于CD3+，这是因为CD4+细胞包括CD3+/CD4+细胞（真正Th细胞）和CD3-CD4+细胞（非Ts细胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+56+细胞（一部分NK细胞）和CD3-CD8+CD16+56-（未知细胞）。
由此可见，真正的TH细胞是CD3+CD4+细胞，真正Ts细胞是CD3+CD8+细胞。
尤其当患者NK细胞明显增加时，会使CD4细胞和CD8细胞的总和远大于CD3+细胞，因此，用三色荧光标记才能分析真正的辅助性T细胞和抑制性T细胞。
首先在淋巴细胞中识别出CD3细胞，然后在CD3细胞中再区分CD4+和CD8+细胞。
NK细胞的表面无T细胞和B细胞表面标志，但有CD16和CD56等标志，用CD16+56抗体能鉴定出NK细胞（一定是CD3阴性），CD3-CD16+56+细胞才是真正的NK细胞。
根据是否表达CD8，又可将NK细胞分为CD3-CD8+CD16+56+细胞（所占比例小，不影响CD8比例）和CD3-CD8-CD16+56+细胞（主要成分）。
B细胞的表面标志是CD19，理论上CD3-CD19+细胞才是真正的B淋巴细胞。
但CD3+CD19+细胞很少，可忽略不计，所以CD19+细胞就是B淋巴细胞。
在抗肿瘤效应中，CD4和CD8分别是T淋巴细胞的辅助／诱导细胞亚群与抑制/细胞毒细胞亚群，CD4细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子，增强和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞如杀伤性T细胞，B细胞等共同发挥抗肿瘤作用，CD4细胞的减少，导致免疫功能低下。
CD4/CD8比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相关。
CD4降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者；CD8降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病；CD4/CD8比值升高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、病毒感染等；CD4/CD8比值降低见于艾滋病(常小于0.5)。
监测器官移植排斥反应时，CD4/CD8比值升高预示可能发生排斥反应。
淋巴细胞担负着免疫的主要功能。
淋巴细胞亚群的测定有助于了解机体免疫状况及一些疾病的监测。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料，通过流式细胞仪检测分析即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比例。
最常检测的亚群包括T细胞（CD3）、B细胞（CD19）、NK细胞（CD16+56）、辅助性T细胞（CD3+CD4+）和抑制性T细胞（CD3+CD8+）等等。
(1) 应用CD3/CD19区分T淋巴细胞和B淋巴细胞
CD3是T细胞的特异性抗原，CD19则用来识别B细胞．因此应用CD3/CD19双标试剂即可以区分和鉴定T淋巴细胞和B淋巴细胞亚群；CD3、CD19阳性表达为独立的阳性细胞群体。
如出现双阳性细胞均为假象。
这样就可不用同型对照来设定阴性或阳性界线。
此外，此检测还会出现双阴性群体，这些都是NK细胞，这些细胞也提供了双阴性群体的对照。
(2) 应用CD3/CD4来鉴定CD4+T细胞
首先用CD3来区分全部T细胞．而CD3/CD4双阳性细胞为真正的辅助/诱导性T细胞，这是HIV病毒感染的主要对象;CD3-/CD4+细胞群是由单核细胞组成，这些细胞相对于CD4+和T细胞来说弱表达CD4，在光散射参数的位置分布也较广。
所以CD3/CD4抗体组合能够完全把CD4阳性辅助/诱导性T细胞区分开。
另外，应用适当的双色组合如CD4与CD29,CD4与CD45RA,也可以测定T辅助细胞的的亚群。
如CD4+2H4(CD 45RA)+细胞是Ts的诱导细胞;CD4+ 4B4 (CD29)+细胞Th的诱导细胞。
同理,•利用CD8+CD45RA和CD8+CD29+ S6F1可测定T抑制细胞的亚群。
T辅助细胞还可分成Th1、Th2两个亚群，同时标记细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4，可区分Th1细胞（CD4+/IFN-γ+）和Th2细胞（CD4+/IL-4+）。
（3）应用CD3/CD8鉴定CD8+T淋巴细胞
CD8的表达不只限于细胞毒性T细胞，此抗原在部分的NK细胞上也能检测到。
所以利用CD3抗体才能把该细胞亚群分开。
若采用三色测定可给出更为准确的各亚群的情况:如真正的T辅助细胞应是CD3+ CD4+CD8-,真正的T抑制细胞应是CD3+CD4- CD8+,单标CD8+细胞中不仅有T抑制细胞,还含有30%左右的NK细胞;而CD3+CD4-CD8-细胞群是γδT细胞,此类细胞与感染有关．CD3+CD4+ CD8-细胞+CD3+CD4-CD8+细胞+CD3+CD4-CD8-细胞
+CD3+CD4+CD8+细胞=CD3+细胞。
(4) 自然杀伤细胞（NK）的检测
①CD16(FcRⅢ)表达于大多数NK细胞上，但也表达于中性粒细胞，此抗原NK细胞的表达比较弱，并在NK 细胞活化时丢失；②CD56表达于大多数NK细胞上，也表达于一些T淋巴细胞，与CD3联合使用可以区分CD3+/CD56+T淋巴细胞和CD3-/CD56+NK细胞。
③联合使用3种抗体最完全地鉴定所有的NK细胞。
NK细胞或表达CD16，或表达CD56，但它们不表达CD3。
CD16和CD56联合使用，根据荧光强度可将NK细胞从双阴性细胞中区分出来。
这样运用该试剂组合，NK细胞可形成独立的群体与其它细胞相区分。
图1 流式分析细胞亚群
外周血是临床检验中的重要标本。
FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。
以下给出常用细胞亚群的正常范围供参考,请注意同一CD中有多种克隆的McAb,同一CD中不同McAb•所测出的数值不同,每个实验室应测定自己实验室的正常数值：
表1 人外周血各细胞亚群表面抗原和流式检测的正常参考值
细胞表面抗原细胞名称正常参考值（%）
T细胞抗原
CD2总T细胞62.5-89.0
CD3成熟T细胞61.1-77.0
CD4T辅助/诱导性细胞亚群15.8-41.6
CD5T细胞（B细胞亚群）69.5-88.0
CD8T细胞/细胞毒性细胞亚群18.1-29.6
CD28T细胞受体共刺激分子39.5-6408 CD8+/CD28+细胞毒性T细胞8.6-15.5
CD8+/CD28-T抑制性细胞9.9-24.8
CD3+/HLA-DR-静止T细胞55.3-77.1
B细胞抗原
CD19全部B细胞7.3-18.2
CD20全部B细胞7.3-18.2
NK细胞抗原
CD3-/CD（16+56）+NK细胞8.1-25.6。