流式检测淋巴细胞亚群在临床中的应用
流式细胞仪及其临床应用
流式细胞术及其临床应用ABSTRACTKey words: Flowcytometry; Immunophenotyping; Leukemia; Activated platelets; Tumor; Apoptosis.流式细胞术(flowcytometry FCM)是对单个细胞或其他生物微粒进行快速定量分析和分选的一门技术。
在分析或分选过程中，包绕在流动液体中处理过的单个细胞或微粒通过聚焦的光源，产生电信号，这些信号代表光散射、荧光等参数，以此测定出细胞或微粒的物理和化学性质，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，以对其进一步的培养或分析。
包绕细胞的液流称为鞘液。
所用仪器称为流式细胞仪（flowcytometer FCM）。
流式细胞术综合了光学、电子学、流体力学、细胞化学、免疫学、激光技术和计算机科学等多门学科和技术，具有检测速度快、精确、测量指标多、采集数据量大、分析全面、方法灵活等特点。
一、流式细胞仪(flowcytometer FCM)1．流式细胞仪的基本结构流式细胞仪的结构一般可分四部分，见图1。
（1）流动系统流动系统是流式细胞仪的心脏，因为细胞悬液在被检测之前必须首先形成一个很细的稳流，细胞在其内部排成单列通过测量区。
细胞悬液和鞘液分别（是分别还是同时）进入流动室，鞘液的作用是使样品悬液中的粒子组成单一纵列方式通过测量区，保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而得到准确的细胞荧光信息。
（2）激光系统多采用氩离子激光器。
使发射光在可见光谱范围内488nm激发。
目前市场上大多数荧光色素适用于此波长。
激光的单色性好，功率高，稳定。
（3）光学和电子系统激光束射至经流体力学聚焦的个别细胞和粒子后，光散射在各个方向(360?)发射。
有两个光散射参数需收集，前向角散射(FSC)主要用于检测细胞体积的大小。
另一为侧向散射(SSC)用于检测细胞膜，胞质，核膜等细胞内部结构及胞质内颗粒。
荧光信号是由对细胞进行染色的特异性荧光染料受到激光激发后发射的。
流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用专家共识(2019完整版)
流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用专家共识（2019完整版）流式细胞术（flow cytometry,FCM）是一种对单细胞或生物颗粒进行多参数、定量分析的技术，具有速度快、精度高、准确性好等优点。
目前FCM广泛应用于临床医学，在疾病的预防、诊断、治疗及预后判断中具有重要作用。
但是淋巴细胞亚群在不同年龄阶段有不同的正常参考范围[1]，并且其结果受多种因素的影响，造成临床判读相对困难。
为科学合理应用FCM协助诊治儿科疾病，"流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用共识"在多个学术组织的协作下于2016年正式发表[2]。
该共识提高了医务工作者对FCM在儿科临床应用的认识，促进了临床诊疗水平的提高。
医学技术飞速发展，FCM的应用也有了一定的进展。
为适应医学发展和临床应用的需要，多个学术组织的专家讨论撰写了"流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用专家共识（2019版）"。
一、淋巴细胞亚群分析常规检测项目和报告内容淋巴细胞亚群分析是临床开展最多的FCM检测项目，是指借助各种荧光染料标记的单克隆抗体测定各类淋巴细胞胞膜或胞内独特的分化抗原（cluster of differentiation,CD），对淋巴细胞的各个亚群进行分析。
原国家卫生部发布的FCM检测外周血淋巴细胞亚群指南（WS/T 360－2011）对于规范FCM在外周血淋巴细胞亚群分析中的应用具有重要指导意义。
检测过程需注意标本采集和运输、免疫荧光染色、检测和分析、结果报告和审核等方面。
常规检测的淋巴细胞亚群包括T细胞（CD3+）、B细胞（CD3－CD19+）和NK细胞（CD3－CD16+CD56+）；T细胞又分为2个亚群：辅助性T细胞（CD3+CD4+）和杀伤性T细胞（CD3+CD8+）。
淋巴细胞亚群分析报告应提供各个亚群细胞的相对计数（百分比）和绝对计数。
FCM可以直接测得各淋巴细胞亚群的相对计数。
FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用
流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细 胞仪对单个生物颗粒(红细胞、白细胞、各类组织细 胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和 生物学特性进行多参数定量分析，并能对特定细胞 群体加以分选的分析技术。
FCM的工作原理
流式细胞仪组成：
1.液流系统 2.光学系统 3.数据处理系统
双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪 能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信 号。检测时需注意荧光补偿。
常用免疫荧光染料组合
荧光染料 FITC+PE
激发波长 （nm）
488
发射波长（nm） 525、575
颜色 绿色、橙色
FITC+PeCy5
488
525、675
绿色、红色
FITC+ECD
488
实体瘤以多倍体居多；
G0 期：DNA 合成静止期 G1 期：DNA 合成前期 S 期： DNA 合成期 G2 期：DNA 合成后期 M 期： 细胞分裂期
DNA 倍体 2N 2N
2N-4N 4N 4N
DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指 标:
良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNA非2倍体细 胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞；
过去认为 FCM测定残存白血病细胞不可靠， 因为现用的 McAb不能鉴别正常血细胞与白血 病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗 原，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特 征， FCM检测的敏感度可明显提高
白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应 的正常血细胞
如小儿ALL，其CDl0+细胞的荧光强度可 高达3-4个对数值，而其 CD45则为弱阳性或 阴性。
525、625
2023年流式细胞分析的规范化和标准化
2023 流式细胞分析的标准化和标准化〔全文〕流式细胞分析的临床应用日趋广泛，主要应用有淋巴细胞亚群、造血干细胞计数、白血病免疫表型、阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断、血小板自身抗体及膜糖蛋白检测等，为机体免疫功能评估、血液与淋巴组织肿瘤的诊断、分型、鉴别诊断和预后等供给依据。
随着相关技术的进步和开展，临床使用的流式细胞仪从最初的单激光3 色，已经开展为3 激光10 12 色, 甚至5 激光18 色，一些型流式细胞仪如光谱流式细胞仪更是可以供给至少24 色。
毫无疑问，更多参数流式细胞仪的应用给使用者供给了更多的数据信息，有助于提高疾病的诊疗效率。
流式细胞分析具有强大的用户自定义功能，即不同用户〔试验室〕可依据自己试验目的建立检测流程，从某种程度上讲，流式细胞分析属于试验室自建方法〔laboratory designed test, LDT 〕范畴。
因此，各个试验室操作步骤如染色过程、抗体组合、数据分析等方面都不尽一样。
另一方面, 不同类型的流式细胞仪在激光光源、荧光素种类、抗体克隆、分析软件等的设置也不尽一样。
此外，目前尚未研发出相关工程的标准品。
以上诸多因素导致了流式细胞分析的结果存在较大差异，结果可比性有待提高。
行业内也面临标准化、标准化多参数流式细胞分析这一巨大挑战。
_、标准操作过程流式细胞分析的首要操作是标本处理，这个环节直接影响检测结果全都性和可比性,是标准化至关重要的一环。
具体步骤有标本采集、接收、标本处理。
前 2 个因素的标准化要求在临床试验室标准化协会等多个文件中均已说明。
标本处理通常分为染色和离心2 个步骤,标准地进展标本染色和离心可以确保结果全都性。
(-)标本染色标准化临床实际工作中，标本染色程序依据试验目的进展选择和确认。
选择: 前向散射光(forward scatter, FSC )和侧向散射光(side scatter, SSC ) 的变异系数(coefficient of variation , CV )低；标本中主要细胞亚群的FSC 和SSC 平均通道数要有明显差异细胞损失最小荧光强度保持最高；不影响偶联荧光染料的稳定性；背景染色低；室内误差最小；操作简便快速。
淋巴细胞亚群检测及临床应用
一、概述
二、淋巴细胞亚群检测
1、检测原理
• 把全血加入到试剂中时，荧光标记的抗体会和白细胞表面抗原特异性结合，在采集 时，细胞通过激光束使激光散射。被染色的细胞就会发出荧光。这些被仪器检测到 的散射光和荧光信号提供了关于细胞大小、内部复杂度和相关荧光强度等信息。 BD Multitest检测试剂采用了荧光触发技术，能够直接对淋巴细胞群进行荧光设门， 以减少门中的未裂解细胞或有核红细胞带来的污染。
射光照射。于室温下(20-25℃)进行此程序操作 • 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。室温(20-25℃)环境下避光孵育15min上
机检测。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（六色淋巴细胞亚群试剂）
• 取一支 Trucounttube。用反向加样法加入50μl充分混匀的抗凝全血。注意血 不要碰到试管底部的微球( Beads)。
液时，将按钮按至第二个刻度点。释放按钮时，过量样本将被吸入吸头中。 将按钮按至第一个刻度点排出精确体积的样本，将过量样本留在吸头中。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）
• 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。在室温(20~25℃)环境下避光孵育 • 向各管中添加450μl 1× Multitest溶血素，注意：小心保护样本管，免受直
不能使用。室温保存的抗凝全血，可稳定48h;染色固定后的样本在2~8℃条 件下可稳定24h。 • 患者准备：无须特殊准备，检查对象生活饮食处于日常状态，空腹为宜， 静脉采血。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌A
流式细胞术淋巴细胞亚群检测在糖尿病免疫功能紊乱监测中的应用
Ｐ Ｅ ） ２ Ｏ Ｌ， 再 各 自加 入 １ ０ ０ ￣ Ｌ全血 ， 轻摇 混 匀 ， 室 温 避 光 放 置
丧失 ， 由于受遗传 、 肥胖 、 年 龄及饮 食等 影响 ， 胰 岛 素 的作 用 效
果受到影 响， 使 患 者 体 内 的 胰 岛 素 相 对 缺 乏 。本 文 对 Ｄ Ｍ 患
４ ５ ９例 健 康 体 检 者 ， 其 中， 男 ３ ４ １例 ， 女 １ １ ８例 。 年 龄 ３ ６ ～６ Ｏ
岁， 平均 ４ ４ ． ５ ９岁 。
健康 对照组 ｃ Ｄ ３ Ｔ 细 胞 和 Ｃ Ｄ ３ Ｃ Ｄ ８ Ｔ 细 胞 的 百 分 率
分别为 （ ６ ９ ． ６ ５ ±１ １ ． ２ ８ ） 和（ ２ ５ ． ７ ２ ±７ ． ９ ８ ） ， ＤＭ 患 者 组 Ｃ Ｄ ３ Ｔ
摘 要 ： 目的 探 测糖 尿 病 （ Ｄ Ｍ） 患者 外周 血 淋 巴细 胞 亚 群 分 布 情 况 ， 了 解 糖 尿 病 患 者 细 胞 免 疫 功 能 改 变 。 方 法 以 流 式 细 胞 术 三 色 荧 光标 记 的 单 克 隆 抗 体 检 测 ４ ５ ９例 健 康 体 检 者 和 １ ０ ０例 ＤＭ 患者 体 内 Ｔ 细胞 （ Ｃ Ｄ３ 、 Ｃ Ｄ ３ Ｃ Ｄ ４ 、 Ｃ Ｄ ３ Ｃ Ｄ ８ ） 、 Ｂ细 胞
意义 。
２ 结 果
１ ． １ 研 究对象
选择 ２ ０ ０ ７年 １ １月 至 ２ ０ ０ ８年 １月 来 自重 庆
市某三 甲医院已诊断 为 Ｄ Ｍ 的患 者 １ ０ ０例 ， 其 中， 男 ５ ｏ例 ， 女
５ Ｏ例 。年 龄 ２ ４ ～８ ７岁 ， 平均 ５ ８ ． ２ ８岁 。对 照 组 为 同 期 本 院
Ｔ４ ／ Ｔ８ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｐ ｅ ｒ ｃ ｅ ｎ ｔ ａ ｇ ｅ ｏ ｆ ＮＫ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ＤＭ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｐ ｅ ｒ ｓ ｏ ｎ ｓ ． Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｉ ｓ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ ｉ ｍｍｕ ｎ ｅ ｄ ｙ ｓ —
流式淋巴细胞亚群检测技术原理
荧光染料标记法
荧光染料的选择
根据抗原特异性选择相应的荧光染料，如异硫氰酸荧光素 （FITC）、藻红蛋白（PE）等。
标记过程
将荧光染料与特异性抗体结合，形成荧光标记的抗体，再 与待检测的淋巴细胞样本反应，使抗原抗体结合，形成荧 光标记的淋巴细胞亚群。
检测结果
通过流式细胞仪检测荧光信号，实现对淋巴细胞亚群的定 性和定量分析。
数据分析
使用专业软件对原始数据进行分析，包括细胞亚群的识别、计数和比 例计算等。根据实验结果，可以对患者的免疫状态进行评估和诊断。
05 流式淋巴细胞亚群检测技 术应用领域
免疫学领域应用
免疫细胞分型
利用流式细胞术对淋巴细胞进行分型，研究不 同亚群的免疫学特性。
免疫细胞功能研究
通过检测淋巴细胞亚群的表面标志物和胞内因 子，研究其在免疫反应中的功能。
喷嘴和流动室
喷嘴是连接样品管和流动室的通道， 它的直径通常很小，以便形成高速流 动的细胞悬液。流动室是检测细胞的 场所，它通常是一个透明的石英玻璃 管，内部充满鞘液。当细胞悬液通过 喷嘴进入流动室时，它们会被鞘液包 裹并排列成单行，以便后续的光学检 测。
信号检测与处理
信号检测
在流式细胞术中，信号检测通常包括前向散射光、侧向散射光和荧光信号的检测。前向散射光与细胞的大小和折 射率有关，侧向散射光与细胞的内部结构和颗粒度有关，而荧光信号则与细胞内特定成分的含量和性质有关。这 些信号可以通过光电倍增管等光电转换器件转换为电信号进行后续处理。
数据处理软件介绍及操作指南
01
FlowJo软件
功能强大的流式数据分析软件，支持多种格式数据导入和导出，提供丰
富的数据处理和分析工具。
02
Cytobank平台
流式细胞术的临床应用
一、诊断性指标如图1所示，图（左）白血病细胞成为一个单一的群体，很难区分原始或病态的白血病细胞和成熟的细胞。
但是通过CD45和（SSC）设门法之后（图右），看到图（左）无法区分细胞被分成了五群。
在这五群中，成熟细胞CD45表达的荧光比较强。
A门里是淋巴细胞，B门里是单核细胞，C门里就是粒细胞群，D门里是原始细胞，一般CD45表达较弱。
一些细胞碎片、红细胞和转移来的瘤细胞，由于不表达CD45，可能位于D门、D门偏下或者E门的位置。
CD45结合侧向散射光之后能把白血病细胞找出来，减少了其它细胞的干扰。
对D门里的白血病细胞做进一步的分型，就能准确看到白血病细胞群免疫分型的表达情况。
图13.白血病的特异性标志免疫表型分析主要是根据细胞的特异表面标志，把白细胞分成T细胞、B细胞和原始细胞。
T淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD3、抗TCRαβ、抗TCRγδ、CD2、CD5、CD8、CD10和CD7；B淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD79a、CD22、CD19 、CD10和CD20；髓系白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cMPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15和CD64；NK淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有CD16、CD56和CD57；红白血病一般表达的分化抗原有GlyA和CD36；巨核细胞白血病一般表达的分化抗原有CD41、CD42和CD61；一系列非特异标志在不同的白血病中可能都有表达，尤其是表达在早期的造血干组细胞上，一般表达的分化抗原有CD34和HLA-DR。
其中，对T淋巴细胞白血病来讲比较特异的是胞浆内的CD3，当胞浆内CD3出现阳性的时候，高度怀疑是T淋巴细胞白血病。
对于B淋巴细胞白血病来讲，胞浆内的CD79a和CD19是比较特异的，cCD79a最具特异性。
cCD3和cCD79a分别表达于早期T细胞和B细胞。
cMPO是髓系特异标志。
如图2所示为B-ALL的表达图。
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平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
化疗(n=48) 67.60 27.40 28.20 0.82 13.20 7.40 5.80
放疗(n=81) 65.30 22.30 34.10 0.73 5.90 8.10 6.90
手术(n=82) 65.20 34.00 29.00 1.20 9.10 6.30 7.70
p值
0.311 0.007 0.035 0.032 0.045 0.031 0.165
* t检验：P<0.05 显著性差异
手术、化疗和放疗对肺癌患者淋巴细胞亚群的影响
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
手术 (n=152) 67.57 34.39 31.09 1.25 16.08 6.42 8.64
化疗(n=244) 67.67 33.78 32.07 1.30 16.27 7.48 7.93
放疗(n=164) 65.64 28.59 32.99 1.13 17.98 5.85 6.58
p值
0.093 0.001 0.021 0.011 0.045 0.029 0.430
* t检验：P<0.05 显著性差异
2、流式专业讲座：流式相关免疫学、流式相关血 液学、流式相关其他实验。
3、临床流式疑难病例解答：临床在职流式专家为 您解决临床检测中遇到的疑难病例问题，帮您更好 的做出诊断。
4、交流平台：丰富的交流平台可以让更多的流式 从业者在此交流心得，互相帮助，获得更多有用的 信息。
谢谢！
放疗(n=81) 65.30 22.30 34.10 0.73 15.90 8.10 6.90
p值*
0.311 0.007 0.035 0.032 0.045 0.041 0.165
* t检验：P<0.05 显著性差异
病例：
1、邢某，男，左上肺癌 2010年1月15日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 51% 20% 26% 12%
流式测淋巴细胞亚群在 临床中的应用
流式细胞仪的基本原理、特点、及应用 范围
常规淋巴细胞亚群检测的检测方法、临 床意义及具体应用
流式细胞仪检测原理
什么是 FCM ？
流式细胞术：利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或 生物颗粒进行多参数、快速的定量分析及分选的技术
细胞荧光化学技术+单克隆抗体技术+激光技术+流体 力学+光电测量技术+计算机技术
自身免疫疾病
SLE、类风湿关节炎、自身免疫性肝炎等 患者CD4+/CD8+比值异常，当治疗药物 有效时可恢复正常。
造血干细胞移植后重建
干细胞移植后免疫系统将重建，但是极为缓慢。 NK细胞首先开始升高，随后T、B淋巴细胞开始恢 复。CD4+比CD8+重建更晚，倒置CD4+/CD8+ 两年才能逆转。
FCM的特点
测量速度快：最快可在1秒种内检测上万个细胞 可进行多参数测量：可以对同一个细胞做有关物理、化学
特性的多参数测量 具有明显的统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况 高分辨率(CV<2%)、高灵敏度(荧光检测灵敏度
≤100MESF，前向角散射光检测灵敏度(0.2∼0.5um) 既是细胞分析技术，又是精确的分选技术，分选纯度可达
检测方法： 1、按标本制备方法：LW;LNW
2、按分析方式： （阈值的设定） FSC/SSC;CD45/SSC;CD3/SSC等
3、绝对计数：需用绝对计数管
检测流程：
1、标本的留取及保存：抗凝情况，标本质量，保 存条件
2、荧光抗体标记：抗体选择，标记的时间、条件及 注意事项（如果做绝对计数有特别注意事项）
LSRII
FACSVantage
FACSCount
常用荧光素激发、发射、光源波长以及适用机型
IVD:体外临床诊断试剂
RUO:科研用试剂
以上两类抗体均有多种荧光标记可供实验的组 合搭配，除单色试剂外，还有多色组合试剂，便于 实验操作。
免疫学方面
淋巴细胞亚群及细胞活化分析、免疫功能监测、
HLA-B27的检测等
移植后免疫监测
免疫抑制剂治疗监测，了解机体的免疫状 态、用药剂量是否过多或不足及预防、抑制 排斥反应的发生。
实体肿瘤疗效观察
恶性肿瘤治疗前CD3+细胞数量、CD4+/CD8+ 细胞比值降低，化疗或放疗有效时则可逐渐恢复 或达到正常水平。
肺癌患者T淋巴细胞亚群变化
化疗、放疗及手术对食管癌患者淋巴细胞亚群的影响
手术、化疗和放疗对贲门癌患者淋巴细胞亚群的影响
平均值 CD3＋ CD4＋ CD8＋ CD4＋/8+ CD56＋ CD127＋ CD19＋
手术(n=82) 65.20 34.00 29.00 1.20 19.10 6.30 7.70
化疗(n=58) 67.60 27.40 38.20 0.82 13.20 7.40 5.80
99%以上
流式细胞仪的检测范围
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量
细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特 异性抗原 细胞活性 细胞内细胞因子 酶活性 激素结合位点 细胞受体
流式细胞仪
FACSCalibur
FACSCanto
FACSAria
CD4+T细胞：下降 CD8+T细胞：HIV感染早期增高，发展为AIDS时下降 NK细胞：降低，特别是疾病晚期
SARS
淋巴细胞数量减低，部分患者表现出与AIDS和部 分晚期肿瘤患者相似的免疫功能状态。
研究发现： SARS患者淋巴细胞及其各亚群均受到破坏，以T 细胞受损为主，而且CD4细胞比CD8细胞受损更为 严重。 治疗后病情好转或治愈后，T淋巴细胞数量可逐 渐恢复正常。
NK 23%
3、曹某，男，胃癌 2010年3月24日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 43% 30% 15% 4%
NK 29%
2010年4月23日治疗后检测： CD3 CD4 CD8 B 53% 35% 21% 4%
NK 31%
3、唐某，男，慢淋
2010年8月25日入院检测：
CD3 CD4 CD8 B
3、红细胞裂解：裂解液工作液的种类决定使用方法 、作用时间及注意事项（特殊标本请特殊处理）
4、红细胞裂解液的去除，及上机前的其它注意事项
CD45/SSC 与FSC/SSC 的比较
双 色 淋 巴 细 胞 亚 群 检 测 分 析
三 色 淋 巴 细 胞 亚 群 检 测 分 析
四 色 淋 巴 细 胞 亚 群 检 测 分 析
三 色 淋 巴 细 胞 亚 群 绝 对 计 数
四 色 淋 巴 细 胞 亚 群 绝 对 计 数
临床意义
1、了解淋巴细胞的分化、功能，鉴别新的淋巴细胞亚群有重要 价值；
2、辅助诊断某些疾病(如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、 血液病、变态反应性疾病等)，分析发病机制，观察疗效及监 测预后有重要意义。
三色和四色试剂可用于 检测淋巴细胞亚群的绝对计数
原理：绝对计数管（TruCOUNT管）内含已知总数的荧光微球 Beads作标准内参，加入一定体积的血液和荧光素标记的单 克隆抗体，定量分析淋巴细胞中各群细胞的绝对值。
临床意义： 对于治疗前后免疫细胞变化、原发性免疫缺陷病、AIDS、 SARS、自身免疫病的诊断和治疗有重要意义。
NK 21%
2010年3月22日出院检测： CD3 CD4 CD8 B 55% 27% 24% 11%
NK 18%
2、马某，男，非何杰金淋巴瘤 2010年3月10日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 57% 13% 42% 0%
NK 24%
2010年3月24日治疗后检测： CD3 CD4 CD8 B 65% 15% 50% 0%
NK
17% 6% 9% 79% 4%
2010年9月21日治疗后检测：
CD3 CD4 CD8 B
NK
53% 17% 34% 36% 9%
2010年10月25日治疗后监测：
CD3 CD4 CD8 B
NK
80% 14% 60% 13% 10%
1、常用流式细胞仪的应用： BD FACSAria、BD FACSCalibur、 BD FACSCount、BD FACSCanto、BD Influx等等。
主要检测项目：
总T、B细胞 判断免疫缺陷和自身免疫性疾病
Th和Ts细胞 检测免疫缺陷病（如SCID、AIDS患者）、自身免疫性疾病（如
SLE、急性GVHD和移植排斥患者） Th/Ts
升高：自身免疫性疾病（类风湿性关节炎、SLE） 降低：病毒感染、恶性肿瘤、再生障碍性贫血 NK细胞
介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用 活化淋巴细胞分析
血液学方面
白血病和淋巴瘤的免疫分型、造血干细胞计数、PNH诊断、 PLT功能、网织红细胞和网织血小板计数等
肿瘤病理学方面
肿瘤组织或脱落细胞的增殖周期和DNA倍体分析、肿瘤细 胞和白细胞的多药耐药性检查、肿瘤细胞表面标记及癌基因 产物分析等。
淋巴细胞亚群检测的检测方法
淋巴细胞：
T淋巴细胞：特异性细胞免疫应答 B淋巴细胞：特异性体液免疫应答 NK细胞：自然杀伤细胞，固有免疫
3、流式检验技术的不断进步，使淋巴细胞表性分析已成为临床 实验室的常规检查项目。
免疫缺陷病
原发性免疫缺陷病：患者血液淋巴细胞免疫表型可出现多种异常。如严重联 合免疫缺陷病（SCID）时，T淋巴细胞缺乏；X连锁无丙种球蛋白血症， B淋巴细胞数量缺乏或减少。