T淋巴细胞亚群检测操作程序教学提纲
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程一、编号：JS0604二、标题：流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程三、关键词：流式细胞术淋巴细胞操作规程四、目的：规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的实验操作五、背景知识：T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。
在感染性疾病中，因为CD4+ T细胞是辅助、诱导T细胞的标志，CD4+ T 细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。
而CD4+ T细胞长期低于正常水平，常提示患者易于被病毒等微生物侵袭。
CD8+是抑制、杀伤T细胞的标志，在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等感染性疾病中，CD8+ T细胞常升高。
CD4+／CD8+细胞比值下降，除肿瘤等疾病外，常见于AIDS、瘤型麻风、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、血吸虫病等。
六、原理：利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。
待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物质发出的信号，利用这些信号，可计算出CD3+、CD4+、CD8+的相对含量，从而得出各细胞群的相对比值。
七、仪器设备和材料：肝素抗凝静脉血1ml，不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，流式细胞仪。
八、操作步骤1、100μ1抗凝血加20μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。
2、避光室温作用20min，溶去红细胞后，固定剂固定。
3、上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，调节荧光补偿，设定阳性参数值，软件将计算出阳性表达细胞比例。
九、注意事项1、为保证所得结果的可靠性，每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。
2、每次应做阴性对照、阳性对照、正常对照、质控对照，以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。
T淋巴细胞亚群（Tcellsubset）
T淋巴细胞亚群（Tcellsubset）【参考范围】CD3+CD4+CD8-：0.34～0.70（34.O%～70.0%）；CD3+CD4-CD8+：0.25～0.54（25.0%～54.0%）；CD4+/CD8+：0.68～2.47。
【影响因素】1．标本最好用EDTA抗凝，其次用肝素。
2．标本要新鲜采集，不能发生凝血。
3．制备细胞悬液时，使用标准溶血剂以使红细胞充分溶解。
4．血液采集后，应尽快进行免疫荧光染色和固定，最迟不能超过6h。
5．标记后的细胞应尽快上机检测，最迟不能超过72h。
【临床意义】正常机体中各T淋巴细胞亚群相互作用，维持着机体的正常免疫功能。
当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，机体就可导致免疫紊乱并发生一系列的病理变化。
目前越来越多的研究说明，T淋巴细胞亚群在各种临床疾病如自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、变态反应性疾病、再生障碍性贫血、病毒感染、恶性肿瘤等都有异常改变。
因此，T淋巴细胞亚群的检测对控制这些疾病的发生、发展、了解疾病的机制、指导临床治疗都有极其重要的意义，它已作为临床研究的一种重要手段。
1.T淋巴细胞亚群与自身免疫和免疫缺陷病现已普遍认为在自身免疫病中,CD8+细胞的数量和功能的低下是发病的重要因素，有时也CD4+细胞数量和功能的增高。
最典型的例子就是活动性系统性红斑狼疮（SLE）患者，这种疾病患者外周血单个核细胞中CD8+细胞百分率下降，常伴有CD4+细胞百分率增高，CD4+/CD8+比值升高。
其他自身免疫病象HBsAg阳性的乙型肝炎，多发性硬化症活动期，自身溶血性贫血，类风湿症，重症肌无力，急性GVHD或排斥反应时患者都具有类似的T淋巴细胞亚群异常分布的特征。
CD4+/CD8+比值减小是免疫缺陷病的重要指征。
在获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者中，就存在着CD4+细胞数显著减少的现象，因而常常出现CD4+／CD8+比值倒置。
在一些上呼吸道感染的患者中，体内T抑制细胞的数量和功能都有异常增高的现象。
小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）酶联免疫分析（
小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆，组织液及相关液体样本中T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）水平。
用纯化的小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8），再与HRP标记的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程英文回答：Lymphocyte Subset Absolute Count Protocol.Principle:Lymphocyte subset absolute count is a quantitative analysis of lymphocyte subpopulations, such as CD3+, CD4+, CD8+, and CD19+ cells, in a blood sample. This procedure is used to assess the immune system's composition and function, particularly in conditions involving immune dysregulationor infection.Materials:Blood sample.Flow cytometry analyzer.Fluorochrome-conjugated antibodies specific for lymphocyte subpopulations.Lysis buffer.Wash buffer.Absolute counting beads.Procedure:1. Sample Preparation:Collect a blood sample into a tube containing an anticoagulant.Centrifuge the blood sample at 300 x g for 10 minutes.Remove the plasma and wash the cells with PBS.Lyse the red blood cells with lysis buffer.Centrifuge the cells and resuspend them in wash buffer.2. Antibody Staining:Aliquot the cells into tubes.Add fluorochrome-conjugated antibodies specificfor each lymphocyte subpopulation.Incubate the cells at room temperature in the dark for 15-30 minutes.3. Washing:Wash the cells twice with wash buffer.Centrifuge the cells and resuspend them in wash buffer.4. Absolute Count:Add absolute counting beads to the cell suspension.Acquire a flow cytometry data file.Gate on the lymphocyte population using forwardand side scatter.Use the absolute counting beads to calculate the absolute count of each lymphocyte subpopulation.Calculation:The absolute count of each lymphocyte subpopulation is calculated using the following formula:Absolute Count = (Event Count / Number of Beads) x (Bead Concentration)。
医院检验中心淋巴细胞亚群测定操作规程
医院检验中心淋巴细胞亚群测定操作规程
(1)试剂
1)CD4 F / CD8 P Cat NO
0747
2)CD3 F / CD16+56 P Cat NO
2076
3)CD19 P Cat NO
1285
4)同型对照 F IgG1/IgG1 P Cat NO
1203
(2)方法
1)取试管各加上述单抗10ul于管底
2)加50ul EDTA K2抗凝血,混匀
3)室温暗处放置15分钟
4)Q-PREP仪上溶血、固定
5)FCMW仪上分析10000个以上细胞
(3)参考范围
CD3 60 — 85 % CD4 24.5 — 48.8 %
CD8 18.5 — 42.1 %
NK 8.0 — 20.0 %
CD19 7.0 — 23.0 %
D20、医院检验中心HLA B27 / HLA B7 测定操作规程(1)试剂
1.HLA B27 F/ HLA B7 P Cat NO 1502
2.同型对照 IgG 2a F / PIgG1 P Cat NO 1255
（2）方法
1.取试管各加上述单抗10ul于管底
2.加EDTA K2抗凝血50ul，混匀
3.室温暗放置15分钟
4.Q-PREP仪上溶血、固定
5.用PBS洗涤细胞2次
6.在FCM仪上数细胞10000个以上，设门在淋巴区域
7.记录阳性百分度及相应的平均荧光强度和荧光峰值（1）参考范围
阴性。
淋巴细胞亚群检测操作程序
一、目的：保证流式细胞仪检测外周血中淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证淋巴细胞亚群检测的标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。
二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：外周血中淋巴细胞亚群检测。
四、溯源：MultiTEST IMK Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340503)。
五、实验原理：人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为三大类：T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK自然杀伤细胞。
T淋巴细胞表达CD3；B淋巴细胞表达CD19；NK自然杀伤细胞表达CD56或CD16，并且不表达CD3。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，即可以把淋巴细胞区分为各种亚型。
进面得到各亚群的比例。
六、主要试剂：MultiTEST IMK Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340503)，其中包括：1、CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC2、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC3、FACSLysing Solution七、实验操作：抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
1、标本采集：使用EDTA-K22、染色和固定细胞：（1）标本管编号A，取两只流式专用管A1、A2。
（2） A1管加入CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC 20uL；A2管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC 20Ul。
（3） A1、A2管中分别再加入全血100Ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
t淋巴细胞斑点试验操作流程
t淋巴细胞斑点试验操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!T 淋巴细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种用于检测结核感染的免疫学方法。
大鼠T淋巴细胞亚群CD3CD4CD8酶联免疫分析
大鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）水平。
用纯化的大鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8），再与HRP标记的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
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T淋巴细胞亚群检测
操作程序
一、目的：
保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。
二、修改程序：
本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：
外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。
四、实验原理：
人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。
六、主要试剂：
CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 (美国BCs公司；CAT:IM3548)，
七、实验操作：
抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
1、标本采集：使用EDTA-K
2
2、染色和固定细胞：
（1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。
（2） A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 20ul。
（3） A1管中再加入全血100ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
3、上机检测；分析结果；打印实验报告。
八、参考值：
总T细胞（CD3+）： 59.4-84.6
辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5
抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3
Th/Ts: 0.9-3.6
九、临床意义：
T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。
在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts比例显著下降。
HIV及某些病毒感染（EB病毒、SARS病毒等）患者Th/Ts比例也下降显著。
十、质量控制：
1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。
2、健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3总数；免疫病、淋巴
瘤可能有较大差异。
3、收集细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴
细胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。
4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC设门与FSC-SSC设门）减少杂质的
干干扰。