淋巴细胞亚群分析在儿科中的临床意义
淋巴细胞及其亚群检测的临床意义ppt新版
1、T细胞在胸腺中的发育
三个阶段 三个重要事件 三个重要结果
双阴性阶段 (DN) 双阳性阶段 (DP) 单阳性阶段 (SP)
TCR基因重排 阳性选择 阴性选择
获得功能性TCR 获得MHC限制性 获得自身耐受
T细胞受体（TCR）的发育
过程： DP细胞
CD8+ T细胞
杀伤靶细胞 有重要的负 答 初始T细胞（naive T cell） 引起迟发 调节功能 型超敏反 CD4+和CD8+T细胞有助于监测患有免疫缺陷疾病（如SCID、AIDS的病人体内CD4+细胞亚群的百分率相对降低，而CD8+群体的百分
率相对升高），自身免疫性疾病（如在SLE病人中，CD8+淋巴细胞的相对百分比往往会降低，但当使用类固醇药物治疗时，也可能上
TCR
和
TCR
两种类型。
二、 T淋巴细胞的分化发育
释放穿孔素，颗粒酶杀伤靶细胞
CD3分子的低度表达 按T细胞的CD4和CD8分子表型
主要表面标志：CD8+CD28初始T细胞（naive T cell）
对免疫应答有重要的负调节功能
部位：胸腺皮髓质交界处及髓质区。
初始T细胞（naive T cell）
按T细胞所处的活化阶段 初始T细胞（naive T cell） 效应T细胞（effector T cell） 记忆性T细胞（memory T cell）
按TCR的表型分类 TCR + T细胞 TCR + T细胞
按T细胞的CD4和CD8分子表型 CD4+ T细胞 CD8+ T细胞
按T细胞的功能分类 Th（help T cell） Tc/C TL（cytotoxic T cell） Tr（regulatory T cell）
淋巴细胞亚群检测的临床意义
淋巴细胞亚群与临床人体外周血的淋巴细胞是机体重要的免疫细胞，主要包括三种：T淋巴细胞（TC）、B淋巴细胞（BC）、自然杀伤细胞（NK）。
TC主要表达CD3+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的60--80%；BC主要表达CD19+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的15--20%；自然杀伤细胞（NK）主要表达CD3--CD16+CD56+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的10--20%。
通过T淋巴细胞亚群的监测可以了解在不同疾病状态下患者的细胞免疫功能状态，已经广泛在肿瘤、自体免疫、感染性疾病中,辅助临床诊断、帮助了解发病机理、判断预后和指导临床治疗。
T淋巴细胞亚群检测的内容为总T细胞（CD3+）及其亚群（辅助性T淋巴细胞，CD4+；抑制性或细胞毒T淋巴细胞，CD8+）的数量和比例。
在某些自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、自体免疫性溶血性贫血患者中CD3+/CD4+细胞的比值升高。
在病毒感染（上感，AIDS等）、恶性肿瘤、再生障碍性贫血等疾病中，患者CD4+/CD8+比值降低，三种淋巴细胞的数量和比例均可能有相应的改变。
T 细胞亚群已被用来监测器官移植病人的免疫状态，协助发现和使其避免受到GVHD的攻击。
由于在感染性、肿瘤性疾病、自体免疫性疾病和器官移植中患者的免疫功能和预后之间有着密切的关系，对其给予密切注意并及时采取适当措施、调节患者的免疫状态以改善预后就成为现代医学的一个重要内容。
常见疾病T淋巴细胞的改变（参考）疾病T细胞亚群CD4+/CD8+CD4+（辅助T）CD8+（抑制T）类风关↑（活动期）↑↑SLE--或↓（活动期）↑↓↑胰岛素依赖性糖尿病↑多发性硬化症↓↓↑乙型肝炎↑自身免疫溶血性贫血↑↑上呼吸道感染↓↓↓结核↓AIDS↓↓↑CD4+/CD8+CD3+（总T）CD4+（辅助T）CD8+（抑制T）恶性肿瘤（白血病）↓↓↓↓↑↑↑↑再障及粒细胞减少症↓↑↓CMV感染↓↑↓血小板减少↓↓↓↓↓↓CD19为全部B细胞共有的表面标志，增高见于B细胞系统的恶性肿瘤，减低见于体液免疫缺陷病。
淋巴细胞亚群检测在儿科的应用
目前以人群为基础的新生儿筛查(newborn screening, NBS)主要应用于遗传性疾病,但尚未开展有关PID的 NBS。SCID是一种严重的联合免疫缺陷,患儿在出生后 处于无症状期的时间很短,如果不进行有效的免疫重建,
往往在婴儿期死亡。免疫重建的时间与预后的关系密 切,如果在出生3个月内进行造血干细胞移植存活率接 近95%,如果在出生3个月后进行移植则存活率降至76%。 这是将SCID纳入NBS的重要原因。SCID的免疫表型 特点主要为严重的T淋巴细胞减少，流式细胞仪分析T 细胞亚群(包括CD3+、CD4+和CD8+)、B细胞(CD19+) 和NK细胞(CD16+/CD56+)比例是主要的实验室检查, 可对大多数患儿作出诊断。
总之，测定外周血CD3、CD4和CD8细胞亚群的水平 可以正确判断机体的细胞免疫功能，为临床提供用药指导 和判断预后的可靠指标。
正常人外周血白细胞CD45-SSC及T亚群散点图
CD3+CD4+ （Th/Ti细胞）
CD3+CD8+ （Ts/Tc细胞）
患儿男, 5个半月,以“发热、腹泻11天,皮疹7天”为主诉入院。入院后诊断为: (1)腹泻病; (2)发热待查:结缔组织病?(3)营养不良性贫血。入院后给予抗感染、补 液,调整肠道微生态,营养支持治疗,腹泻治愈,仍发热,皮疹渐增多,蔓延至上腹部、 胸前,皮疹呈棕色或棕黑色。入院第12天对患儿左大腿内侧一皮疹下结节进行活 检见:表皮角化,真皮脂肪坏死,炎性细胞浸润,考虑脂膜炎。但疗效不显。体液免疫 检查正常; T细胞亚群: CD3+ 2.41%(56%~84% ), CD4+ 0.53% (27%~51% ), CD8+ 0.50% (15%~44% ), CD4+/CD8+ 1.06。追问病史:此患儿生后接种卡介 苗部位常有渗液,不久结痂,结痂后不久又出现渗液,如此反复。遂对既往骨髓片及 组织片进行抗酸染色,均见大量抗酸杆菌。确诊为原发性T细胞免疫缺陷病合并卡
T淋巴细胞及其亚群检测的临床意义
2、TCRαβT细胞和TCRγδT细胞
• • • • • • • TCRγδT细胞 数量少，占5％ 多为CD4―CD8―（DN细胞）；少数为CD8+ 分布于皮肤、粘膜参与固有免疫，是抗感染的第一线细胞 TCRαβT细胞 数量多，CD4+或CD8+（SP细胞） TCR识别谱广，是参与免疫应答的主要细胞群
1.4-2.5
请各位批评指正 Thank you！
CD4/CD8比值与肿瘤
• 恶性肿瘤患者术前CD4/CD8比值低与术后比 值恢复正常。 • 当发生癌转移时,CD3 、CD4 细胞数明显减 少的同时CD8 细胞数明显增多,CD4/ CD8 比 值明显降低,提示恶性肿瘤患者晚期细胞免 疫功能更低,预后更差。 • 肿瘤终未期患者CD4/CD8比值异常，可预测 患者存活期。
常见疾病与T细胞免疫检测关系
疾病 肿瘤 再生障碍性贫 血 粒细胞减少症 过敏性皮炎 类风湿 红斑狼疮 膜性肾小球肾 炎 胰岛素依赖性 糖尿病 乙型肝炎急性/ 慢性 ↓ ↓ ↓ ↑（活动期） ↓（活动期） ↑ ↓ ↓ ↑↓ ↓ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↓ ↓ CD3+ ↓↓ CD4+ ↓↓ CD8+ ↑↑ CD4/CD8 ↓↓ ↑ ↓
3、 CD4+T细胞和CD8+T细胞
两者通常是针对TCRαβT细胞而言 CD4+T细胞 约占60～65％ 受MHCⅡ类分子限制 主要分化为Th CD8+T细胞 约占30～35％ 受MHCⅠ类分子限制 主要分化为CTL
4、Th、CTL、Ts和Treg细胞
辅助性T细胞（Th） 主要表面标记：CD4＋CD8 主要种类：TH1，TH2 功能：具有辅助其他免疫细胞分化和调节免疫应答（促 进和抑制）的作用。 细胞毒性T细胞（CTL） 主要表面标记：CD8+CD28+ 功能：特异性直接杀伤靶细胞 杀伤机制： 释放穿孔素，颗粒酶杀伤靶细胞 通过Fasl介导靶细胞的凋亡
淋巴细胞亚群检测及临床应用
一、概述
二、淋巴细胞亚群检测
1、检测原理
• 把全血加入到试剂中时，荧光标记的抗体会和白细胞表面抗原特异性结合，在采集 时，细胞通过激光束使激光散射。被染色的细胞就会发出荧光。这些被仪器检测到 的散射光和荧光信号提供了关于细胞大小、内部复杂度和相关荧光强度等信息。 BD Multitest检测试剂采用了荧光触发技术，能够直接对淋巴细胞群进行荧光设门， 以减少门中的未裂解细胞或有核红细胞带来的污染。
射光照射。于室温下(20-25℃)进行此程序操作 • 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。室温(20-25℃)环境下避光孵育15min上
机检测。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（六色淋巴细胞亚群试剂）
• 取一支 Trucounttube。用反向加样法加入50μl充分混匀的抗凝全血。注意血 不要碰到试管底部的微球( Beads)。
液时，将按钮按至第二个刻度点。释放按钮时，过量样本将被吸入吸头中。 将按钮按至第一个刻度点排出精确体积的样本，将过量样本留在吸头中。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）
• 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。在室温(20~25℃)环境下避光孵育 • 向各管中添加450μl 1× Multitest溶血素，注意：小心保护样本管，免受直
不能使用。室温保存的抗凝全血，可稳定48h;染色固定后的样本在2~8℃条 件下可稳定24h。 • 患者准备：无须特殊准备，检查对象生活饮食处于日常状态，空腹为宜， 静脉采血。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌A
淋巴细胞亚群检测在儿科的应用分析共27页文档
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46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
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47、采菊东篱下，悠然见南山。
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48、啸傲东轩下，聊复得此生。
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49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
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50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
急性支气管炎患儿治疗前后血清SOD、TNF-α和T-淋巴细胞亚群检测的临床意义
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４０１ 一
急性 支气 管 炎 患儿 治 疗 前 后 血 清 Ｓ ＯＤ、 Ｔ Ｆ—ｏ和 Ｔ一淋 巴细胞 亚 群检 测 的临床 意 义 Ｎ 【
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Ｃ ８ 低於正常儿组 （ ０ ０ ） 经 ２周治 疗后则与正 常儿 比较无显 著性 差异 （ ０ ０ ） Ｄ 值 Ｐ＜ ．５ ， Ｐ＞ ． ５ 。结 论 ： 检测 急性支
气 管炎患儿血清 Ｓ Ｄ Ｔ Ｆ 旺 Ｔ一 巴细胞 亚群水平 对了解病情 、 Ｏ 、Ｎ 一 和 淋 观察治疗效果均具有重要 的临床价值 。
ＴＮＦ —ａ Ｌ ｖ ｌ ａ ｄ Ｔ —ｃ ｌＳｕ ｓ ｔ ｓ ｒ ｕ ｉｎ Ｔ ｐ ｆｅ ｅ ｔ ａ ｅ ｉｔｉ ｅ ｅｓ ｎ ｅ ｌ ｂ ｅ ｓ Ｄｉ ｉ ｔ ｙ ｅ Ａ ｒ ｔｂ ｏ ｔ Ｔｒ ａ ｍｅ ｔｉ Ｐ ｄ ａ ｒ ｎ ｃ Ｐ ｔ ｎ ｓ ｗｉ ｕｅ Ｂｒ ｎ ｈｔ ａ ｉ ｔ ｔ Ａｃ ｔ ｏ ｃ ｉｓ ｅ ｈ ｉ
T淋巴细胞亚群检测，帮助了解你的免疫力
T淋巴细胞亚群是人体重要的细胞群，生活中很多人对这个细胞群并不熟悉，和人体免疫能力息息相关，是人体抵抗外来病原体的重要屏障。
人们谈之色变的艾滋病，之所以会引发极高的死亡率，很多都是因为小病导致的死亡。
究其原因，正是因为艾滋病病毒会破坏人体的T淋巴细胞亚群，导致人体免疫力每况愈下，甚至一场小感冒都有致死率。
因此，为了自身身体健康，每个人都应当加强对免疫系统和T淋巴细胞亚群的了解，从而针对性提高自身免疫力。
1 什么是免疫系统？免疫系统是人体抵御病原体入侵的保卫系统，大致可分成免疫器官、免疫细胞和免疫分子等。
具体而言，免疫器官主要包含胸腺、骨髓和淋巴结等；免疫细胞包括巨噬细胞、树突状细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞、淋巴细胞（T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等）；免疫分子包括细胞因子和抗体等。
可以看出，T淋巴细胞和B淋巴细胞等，都是人体免疫的重要细胞，T淋巴细胞为细胞免疫，可通过效应T细胞可以分泌穿孔素，对宿主细胞中病毒、细胞内寄生菌、外来组织团块和癌变细胞等摧毁，达到免疫目的。
B淋巴细胞则为体液免疫，可以通过效应B细胞分泌抗体，特异性结合抗原，将宿主细胞外的抗原及有毒物质清除。
其中，T淋巴细胞可以视为人体免疫的主力军，可以起到针对原虫、真菌、病毒、细菌的抗感染免疫，也可起到明显的抗肿瘤作用，同样也可主导迟发型变态反应（细胞内寄生虫、移植排斥反应）和自身免疫性疾病等。
2 T淋巴细胞包括什么？T淋巴细胞是一类免疫细胞的总称，当前一经发现的免疫细胞总计上百种，是引导人体免疫的重要细胞，以CD3、CD4和CD8为主要免疫细胞。
具体而言，CD3细胞为成熟T淋巴细胞，可以作为判断人体总T淋巴细胞水平的重要依据，可帮助判断人体免疫状况。
CD4细胞为有效和辅助性细胞，也是人体免疫细胞最重要的枢纽细胞。
CD8可对细胞毒性起到明显抑制作用，可以识别并将致病细胞杀死，并与CD4协同抵御外界病毒入侵。
CD4/CD8比值同样是免疫系统检查时的重要比值，CD4和CD8之间可以相互制约并共同作用，如果比值一旦出现异常表现，即可作为判断人体免疫功能的重要指标。
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《医学综述》2000年第6卷第7期
T 慢性乙肝 ↓
慢性活动性 乙肝
↓
Th Ts Th/Ts
意义
慢性肝炎患者T细胞辅助
↓
稍微↓
正常
性、杀伤性下降，引起病 毒清除困难，导致慢性迁
延性肝损伤
↓↓
↑
患者免疫自稳功能下降，
↓
从而引起自身免疫损伤， 干细胞持续性、大量损伤，
形成慢活肝、肝硬化
提示：T细胞亚群检测有助于慢性肝炎类型的鉴别，有助 于了解肝炎病毒复制程度，了解药物疗效。
小儿脓毒血症
以50例严重脓毒症患儿和150例一般脓毒症患儿为 研究对象，同时纳入50例非脓毒症儿童为对照组。 采用流式细胞仪测定外周血T、Th、Ts百分比， 并于入院24ｈ内行小儿危重病例评分（PCIS）。
结果 严重脓毒症组患儿T、Th、Ts百分比、Th /Ts及PCIS明显低于对照组及一般脓毒症组（P＜ 0.01）。因脓毒症死亡的患儿T、Th、Ts百分比、 Th/Ts及PCIS亦明显低于治愈组（P＜0.05）
类风湿性关节炎，I型糖尿病等。此外 还可见于移植后排斥反应。
B淋巴细胞检测的临床意义
B细胞↑：淋巴瘤，细菌性感染急性期，病毒感染，自身 免疫性疾病，相对性增高等
B细胞↓：无丙种球蛋白血症，使用化疗、免疫抑制剂 （产生骨髓抑制），体液免疫功能低下
NK细胞检测的临床意义
NK细胞↓：肿瘤复发、转移，重度病毒感染等 NK细胞↑：见于习惯性流产，Ⅱ型超敏反应（自
提示：淋巴细胞亚群监测自身免疫性疾病效果明 显
宫内感染乙型肝炎病毒(HBV)新生儿
对象：对宫内感染乙型肝炎病毒(HBV)新生儿进 行T淋巴细胞亚群的检测；
结果：表明宫内感染组新生儿Th↓，而Ts↑， Th/Ts↓
提示：宫内感染HBV新生儿可能存在T淋巴细胞 亚群比例失调,故有可能通过增强特异性免疫反应 而得到治疗。
淋巴细胞亚群分析 在儿科中的临床意义
淋巴细胞的组要成分及功能
淋巴细胞
T （CD3+CD19-)
细胞免疫
B （CD3-CD19+)
NK （ CD3- CD16+/CD56+ )
体液免疫
判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病
免疫监控,细胞毒作用
淋巴细胞亚群检测内容
来源 表面标记
功能
T
Th
胸腺
CD4
介导细胞免 疫，引起迟 发型超敏反 应，辅助体传性/获得性免疫缺陷病， 应用免疫抑制剂（如激素冲击治疗）。
Ts细胞（CD8+）↑
自身免疫性疾病，如SLE，艾滋病初期， 慢性活动性肝炎，肿瘤及病毒感染等。
Th/Ts ↓ Th/Ts ↑
艾滋病患者比值多在0.5以下，SLE肾 病，传染性单核细胞增多症，急性巨 细胞病毒感染，骨髓移植恢复期等。
《医学综述》2000年第6卷第7期
在细菌性疾病中的研究表明，结核性胸膜炎患者 胸水中Th/Ts比值↑↑，而重症结核病患者外周血中 比值↓
不同类型麻风病患者T细胞亚群研究发现，瘤型 麻风患者Ts↓，Th↑，而结核样型患者Ts则在正常 范围
总之，测定外周血T、Th、Ts，可以正确判断机 体的细胞免疫功能，为临床提供用药指导和判断 预后的可靠指标。
肺炎杆菌感染
B↑，Th↓，Th/Ts↓
Th
Ts
Th/Ts
小儿反复呼吸道感染(复感儿)
复感儿约占儿科临床患者的30%,其发病与机体细 胞免疫功能的紊乱与低下有关
有研究表明复感儿相较于正常儿童，其外周血中 T↓，Th↓, Ts↑ ， Th/Ts↓
提示复感儿的细胞免疫功能异常和紊乱。
《医学综述》2000年第6卷第7期
艾滋病：免疫功能普遍低下是艾滋病换着最明显 的特征。主要表现为Th↓↓，Th/Ts↓
传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、流行 性出血热、麻疹急性期、水痘、猩红热和一些上 呼吸道感染的患者均可表现为Th↓，Ts↑， Th/Ts↓， B↑。因此， Th/Ts 比值倒置被认为是病毒感染性 疾病的重要指征。
提示脓毒症患儿存在继发性细胞免疫功能低下， 且降低程度与疾病程度相关。
《中国当代儿科杂志》2013,15（3）
小儿支气管哮喘
对象：100例哮喘患儿进行淋巴细胞亚群及体液 免疫功能检测
结果:哮喘发作组与正常对照组比较 T↓↓及Ts↓↓; Th、B及Th/Ts比值↑↑；IgE明显上升， IgG明显下降。
Th/Ts=0.49↓
建议检测T细胞亚群的病人
自身免疫性疾病 HIV/AIDS患者
建议检测淋巴细胞亚群全套的病人
病毒感染 免疫缺陷疾病 习惯性自然流产患者 恶性肿瘤患者
B
NK
Ts
胸腺
骨髓
尚不清楚
CD8
CD19、CD20 CD16、CD56
对免疫应 能分化成为浆细 具有广谱的杀伤
答有重要 胞产生抗体执行 作用，无MHC限
的负调节 体液免疫；也可 制
功能
以介导T细胞免
疫应答
T淋巴细胞检测的临床意义
总T细胞可以结合总B细胞来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病
Th细胞（CD4+）↓
身免疫性溶血等），移植物抗宿主反应 ，病毒感 染急性期等
T%+B%+NK%=100%±5% Th%+Ts%=T%±5%
相差过于悬殊，临床上一定具有提示意义。 以感染和血液肿瘤最容易出现等式的严重偏离。
淋巴细胞亚群检测在儿科中的应用
为临床提供更多信息 筛查免疫缺陷疾病及监测药物对免疫功能的影响 指导临床合理用药