地中海贫血基因突变需要做什么检测
应用高分辨熔解曲线分析技术检测β-地中海贫血基因突变
ｔ ｈ ａ ｌ ａ ｓ ｓ ｅ ｍｉ ａ ｇ ｅ ｎ ｅ ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｔｈ ｅ ＨＲＭ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｆ ｉ ｖ ｅ ｋ ｉ ｎ ｄ ｓ ｏ ｆ ｃ ｏ ｍｍｏ ｎ ８ 一 ｔ ｈ ａ ｌ ａ ｓ ｓ ｅ ｍｉ ａ ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ（ 一 ２ ８，
王晶晶， 许朝旭， 彭 红 波
（ 广 州 市 番 禺 区 何 贤 纪 念 医 院检 验 科 ， 广 东广 州 ５ １ １ ４ ０ ０ ）
摘 要 ： 目的 探 讨 高 分辨 熔解 曲线 （ ＨＲＭ） 分析 技 术检 测 Ｂ 一 地 中海 贫 血 基 因突 变 的 可 行 性 。 方 法 应 用 ＨＲ Ｍ 法检 测广 东
Ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈ ｉ ｇ ｈ ｒ ｅ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｌ ｔ ｉ ｎ ｇ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ｉ ｎ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐ ＿ ｔ ｈ ａ ｌ ａ ｓ ｓ ｅ ｍｉ ａ ｇ ｅ ｎ ｅ ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ
ＨＲ Ｍ 法能 准确 检 测 广 东省 ５种 常见 的 ０ 一 地 中海 贫 血 突 变 ， 具有简
便、 快速 、 灵敏度高等优点 ， 有 望 成 为 临床 筛查 Ｂ 一 地 中海 贫 血 突 变 的 新 方 法 。 关键词 ： Ｂ 一 地 中海 贫 血 ； 基 因突变； 高 分 辨 溶 解 曲 线
荧光PCR方法检测孕妇血浆胎儿DNA的β地中海贫血基因突变
生物抗癌剂的研究进展[J ].天然产物研究与开发,2005,17(1):1042107.[2]赵艳丽,陆道培.白花丹醌对人急性早幼粒细胞白血病细胞的体外效应[J ].中国实验血液学杂志,2006,14(2):2082211.[3]刘 圆,邓 放,刘 超,等.RP 2HPL C 测定民族药材白花丹不同药用部位白花丹醌的含量[J ].中国中药杂志,2006,31(20):168421686.[4]Yuan CW ,Tung L H.High 2performance liquid c hroma 2tography for qua ntification of plumba gin ,an a nti 2Heli 2cobacter pylori co mpo und of Plumbago Zeylanica L [J ].Journal of Chroma tography A ,2005,1094(122):992104.[5]丘翠嫦,戴 斌,安平平.白花丹的薄层色谱及紫外光谱鉴定[J ].中国民族医药杂志,1995,1(2):37238.[6]Y e n J H ,Lei CL ,Tung H T.Mea surement a nd Phar ma 2cokinectic study of plumbagin in a conscious f reely mov 2ing rat using liquid c hromatograt hy/tande m ma ss spec 2trometry [J ].Journal of Chroma tography B ,2006,844(1):125.[7]曾烃泽.生物药物分析[M ].第2版.北京:中国医药科技出版社,1998:243.广西医科大学学报 2008Apr ;25(2)3广西壮族自治区科技厅科学基金资助项目(N 1桂科回)广西医科大学第一附属医院妇产科收稿日期22荧光PCR 方法检测孕妇血浆胎儿DNA 的β地中海贫血基因突变3陈 萍 李慕军1 周林英 林伟雄 李敏清1 李树全 陈文强 杨德寨(广西医科大学第一附属医院血红蛋白研究室 南宁 530021)摘要 目的:利用孕妇血浆中的胎儿DNA 进行无创伤性β地中海贫血产前基因诊断。
地中海贫血检测方法
地中海贫血检测的方法目前,用于地中海贫血检测的方法的代表性技术大体可分为以下两类:检测基因缺失突变的单管多重跨越断裂点PCR技术和多重连接探针扩增技术(MLPA);检测基因点突变的反向点杂交技术(RDB)、变性高效液相色谱技术(dHPLC)]和DNA序列分析技术等。
此外,最近发展的基于实时荧光PCR平台的新技术,如用于α地贫缺失拷贝数定量的实时荧光PCR直接检测技术、以及用于检测β地贫点突变的基于探针熔解曲线的基因分型技术(PMCA),可能是下一步更新换代的技术选择。
上述胛p PCR、RDB和MLPA等为地贫检测的主流技术。
1.Southern 印迹法优点：分析缺失型α-地中海贫血分子缺陷的可靠技术缺点：操作繁冗，不宜作为常规手段2.联合检测平均红细胞参数（MCV、MCH）+红细胞脆性检测+Hb（血红蛋白）电泳MCV：平均红细胞容积 MCH：平均红细胞血红蛋白量3.PCR-RDB法（PCR/寡核苷酸探针反向斑点杂交法）检测中国南方常见的17种β地贫突变：CD41～42(-TCCT)、IVS-2 nt654 C →T、-28 A→G、CD71～72（+A）、CD71～72（+T）、CD17 A→T、CD26 G→A、CD31（-C）、CD27～28（+C）、CD43 G→T、-32 C→A、-29 A→G、-30 T→C、CD14～15（+G）、CAP、Int及IVS-1 nt5 G→C4.α地中海贫血的基因诊断依据Gap-PCR原理采用单管四重PCR法（多重PCR技术）对其基因组DNA进行扩增，同时检测-α3.7、-α4.2、--SEA和正常对照4种等位基因型，采用1.2％琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物，通过片断大小判断患者的基因型。
5.采用PCR-RFLP方法检测非缺失型α地贫Hb Constant Spring(HbCS)。
地中海贫血需要做哪些检查？
地中海贫血需要做哪些检查？地中海贫血，又称为地中海贫血症，是一种遗传性血液疾病，在地中海沿岸地区较为常见。
该疾病主要由于人体红细胞内的地中海贫血基因突变导致的血红蛋白合成障碍，从而引发贫血。
地中海贫血的诊断需要通过一系列的检查，包括基因检测、血常规、血型、电泳等。
本文将介绍地中海贫血需要进行的常见检查。
首先，地中海贫血的诊断最为关键的一项检查是基因检测。
该检查可以通过对患者DNA或RNA的分析，发现是否存在与地中海贫血相关的基因突变。
目前，常见的地中海贫血相关基因突变有α地中海贫血和β地中海贫血两种类型。
对于怀疑患有地中海贫血的患者，基因检测是确定诊断的重要依据。
其次，进行血液常规检查也是诊断地中海贫血的重要手段之一。
血液常规检查主要包括红细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数、白细胞计数等指标的测量。
在地中海贫血患者中，血红蛋白浓度通常较低，红细胞计数也相对较低，而血小板计数和白细胞计数则较正常人群相差不大。
通过对这些指标的测量，可以评估患者的贫血程度，并初步判断是否为地中海贫血。
除了血常规检查，地中海贫血的诊断还需要进行血型检查。
地中海贫血主要与血红蛋白分子结构的改变有关，而血型则与红细胞膜表面的抗原有关。
在地中海贫血患者中，除了输血时对血型进行匹配外，对患者本身的血型也需要进行检查，以便更好地评估其与疾病的关联。
此外，电泳检查也是诊断地中海贫血的一种重要方法。
血液中的血红蛋白分子在电场中会产生迁移，不同类型的地中海贫血患者在电泳图上表现出不同的迁移模式。
通过对血液样本进行电泳分析，可以进一步确认是否存在地中海贫血。
除了以上提到的几种常见检查方法，地中海贫血的诊断还可能涉及到其他一些辅助检查手段。
例如，骨髓穿刺检查可以评估骨髓造血能力，评估贫血的原因。
肝功能、肾功能、铁代谢指标等也可以帮助评估患者贫血的程度和原因。
总结起来，地中海贫血的诊断需要进行一系列的检查，包括基因检测、血常规、血型、电泳等。
地贫诊断标准参考指南
地贫诊断标准参考指南一、概述地中海贫血（简称地贫）是一种遗传性溶血性贫血，由于血红蛋白的珠蛋白β链发生了缺失或突变，导致红细胞结构异常，易于破裂，进而引发贫血。
地贫的诊断需综合考虑多个方面的检查结果，以得出准确诊断。
二、诊断方法1.血常规检测：通过血常规检测，观察红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）等指标，初步判断是否存在贫血及可能的贫血类型。
2.血红蛋白电泳：通过血红蛋白电泳，观察血红蛋白的组成，有助于地贫的初步筛查。
3.基因检测：基因检测是地贫诊断的金标准，通过检测β珠蛋白基因的突变位点，可以明确地贫的类型及严重程度。
4.家族史调查：了解患者的家族史，特别是地贫阳性家族史，有助于诊断地贫。
5.临床表现观察：地贫患者通常有面色苍白、黄疸、肝脾肿大等表现，根据临床表现可以辅助诊断。
6.铁代谢评估：由于地贫患者体内血红蛋白代谢异常，可能导致铁过载，因此进行铁代谢评估有助于了解病情。
7.骨髓检查：骨髓检查可以观察红细胞的生成情况，有助于地贫的诊断。
三、诊断标准判定1.若血常规检测、血红蛋白电泳及家族史调查结果均提示地贫可能，建议进行基因检测以明确诊断。
2.若基因检测发现β珠蛋白基因突变，结合临床表现及家族史，可以确诊为地贫。
3.若基因检测未发现β珠蛋白基因突变，但临床表现及实验室检查结果均支持地贫诊断，可以考虑其他类型地贫，如α地贫等。
4.对于临床表现不典型或实验室检查结果与地贫不符的情况，需综合考虑各项检查结果，进行全面评估，以得出准确的诊断。
四、注意事项1.地贫诊断需由专业医生进行，患者切勿自行诊断或治疗。
2.地贫患者需定期进行血常规及血红蛋白电泳等检查，以便及时了解病情变化。
β-地中海贫血基因检测(PCR-反向点杂交法)
pcr扩增
DNA提取
利用特定的试剂从血细胞中提取出DNA。
pcr扩增
使用聚合酶链式反应（PCR）技术对DNA进行扩增，使其数量增加，便于后续 的检测。反向点Fra bibliotek交制备探针
将目标基因序列设计成特定的探针，并固定在尼龙膜上。
杂交反应
将扩增后的DNA与固定在膜上的探针进行杂交，通过碱基互 补配对原则，将目标基因序列特异性地结合在膜上。
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术提高检测的灵敏度和特异性，降 低检测误差。
要点二
基因组编辑技术
利用CRISPR-Cas9等基因组编辑技术，对β-地中海贫血基因 进行精确编辑和修复，从根本上治疗地中海贫血。
临床应用的拓展
早期筛查
将β-地中海贫血基因检测纳入新生儿筛查 计划，实现早期发现和干预，降低疾病对 患儿的影响。
β-地中海贫血基因检测(pcr反向点杂交法)
• β-地中海贫血基因检测介绍 • pcr-反向点杂交法介绍 • β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点
杂交法)流程 • β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点
杂交法)的临床意义
• β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点 杂交法)的未来发展
01
β-地中海贫血基因检测介绍
03
耗时长：需要进行PCR扩增和杂交反应， 整个过程需要一定时间。
04
对实验条件要求高：需要严格控制实验条 件，避免交叉污染和假阳性结果。
03
β-地中海贫血基因检测(pcr-反 向点杂交法)流程
样本采集和处理
血液样本采集
从患者静脉抽取适量血液，用于 后续的基因检测。
样本处理
将采集的血液进行离心，分离出 血浆和血细胞，保留血细胞用于 后续的DNA提取。
1例罕见β地中海贫血基因突变及其家系分析
1例罕见β地中海贫血基因突变及其家系分析李敏敏;邹亚伟;张碧云;杨少灵;马玉花;陈福雄;吴梓梁【摘要】目的鉴定1种罕见的β地中海贫血突变类型.方法血液学分析采用血细胞分析仪及全自动快速电泳分析系统；α珠蛋白常规突变检测采用Gap-PCR；β珠蛋白常规突变检测采用反向点杂交法；样品的基因突变及基因型用β珠蛋白基因全长测序技术确定.结果先证者具有典型的β地中海贫血临床特点和血液学特性,HbF为5.8％,其父母各项指标均正常.未发现先证者及其家庭成员有已知的α-/β-地中海贫血基因突变,测序发现先证者及其母亲均为CD2 (CAT-CAC)杂合子,父亲为CAC纯合子；先证者有β珠蛋白exon1 CD27 (GCC-GAC)突变,编码的氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸,未发现其父母有CD27突变.结论 CD27 (GCC-GAC)突变是罕见的β珠蛋白基因点突变,有助于指导人群筛查、遗传咨询和临床诊断.%Objective To identify a rare mutation ( GCC-GAC) at codon 27 exon1 of β-globin gene in a p-thalasse-mia carriers from a Chinese family. Methods Hematological cytoanalyzer and electrophoretic analysis system were used to analysis the phenotype. Gap-PCR was used to detect known mut ation of α-globin gene. Known mutation of β-globin gene was detected by reverse dot blot analysis. The β-globin gene was sequenced to identify the genotype and to find out the underlying mutation of the sample. Results The proband presented a typical β-thalassemia intermedia phenotype, and the HbF was 5. 8% ,and no abnormal parameter were found in other family members. No mutation was detected. The sequencing revealed heterozygosity of codon 2 ( CAT-CAC) in the proband and her mother; and codon 27(GCC-GAC) mutation heterozygosity atexonl CD27( GCC-GAC) (Ala-Asp)of β-globin gene in the proband only. Conclusions A rare mutation at exonl may lead to β-thalassemia. The finding may enrich knowledge of the screening in β-thalassemia as well as the genetic counseling and Clinical diagnosis.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2012(032)003【总页数】4页(P309-312)【关键词】β地中海贫血;β珠蛋白基因;点突变【作者】李敏敏;邹亚伟;张碧云;杨少灵;马玉花;陈福雄;吴梓梁【作者单位】广州医学院第一附属医院儿科,广东广州510120;广州医学院第一附属医院儿科,广东广州510120;广州医学院第一附属医院儿科,广东广州510120;广州医学院第一附属医院儿科,广东广州510120;广州医学院第一附属医院儿科,广东广州510120;广州医学院第一附属医院儿科,广东广州510120;广州医学院第一附属医院儿科,广东广州510120【正文语种】中文【中图分类】R556.71β地中海贫血是指珠蛋白β链合成部分或完全受抑制的一种血红蛋白病，是世界范围内最常见的常染色体隐性遗传病之一［1］。
对地中海贫血基因进行检测和结果分析
世界地中海贫血的流行分布
广西地中海贫血的流行分布
共5789例
83845例3
Baise
790例
Liuzhou
1559例
1033例
Hezhou
Nanning
Yulin
Fangchengguang
Xiong , et al. Clin Genet 2010
224例
1349例
广西地中海贫血的流行分布
血红蛋白病
血红蛋白
链
链
红细胞 链
铁链 血红素
●胎儿血红蛋白主要由两条珠蛋白链、两条珠蛋白链组成，还含有 γ链、ɛ链、ζ链组成
●成年人的血红蛋白由两条珠蛋白链和两条珠蛋白链组成
二、地中海贫血的致病机制
11p15.3
β珠蛋白基因簇
HS 5 4 3 2 1 ε
Gγ Aγ
ψβ δ
β
HbA
α珠蛋白基因簇
HS40
16p13.3
α-地中海贫血 静止型携带者 α-地中海贫血特征 Hb H 病
β-地中海贫血 携带者 复合α-地中海贫血 中间型地中海贫血
δ-地中海贫血 携带者 复合α-地中海贫血
血红蛋白结构变异 携带者 复合α-地中海贫血 复合β-地中海贫血
总计
分组
阳性样本数 886 363 498 25 370 287 79 4 9 6 3 22 17 4 1 1287
12 种见于中国人群的 2/ 1珠蛋白基因点突变
显性突变
5’
EXON 1 IVS 1
EXON 2
IVS 2 EXON 3
3’
启动子突变 异常剪接 起始密码突变 移码突变 无义突变 3’UTR突变
46 种见于中国南方人群的-珠蛋白基因点突变
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地中海贫血基因突变需要做什么检测
其实我们摘掉的，地中海贫血是一个非常常见的疾病。
一旦一个人有地中海贫血基因的时候，那么往往是会进一步的造成病人出现地中海贫血。
做为引起疾病的直接原因，往往是需要进一步的搞清楚哪一个症状给引起的了。
需要进一步去做检测，才可以给治疗提供依据。
地中海贫血基因突变需要做什么检测？
地中海贫血是一组遗传性肽链合成障碍导致的血红蛋白异常性疾病。
地中海贫血病人父母往往是轻型地贫病人，也可以说病理基因携带者，父母各自有一个病理基因，如果父母各自的病理基因同时遗传给子女，即子女有两个病理基因。
在中国，a-地贫基因携带率为2.64%。
地中海贫血基因的危害最严重的类型有Hb Bart’s 胎儿水肿综合征、重型β地中海贫血和血红蛋白H 病等。
静止型或轻型地贫患者虽然没有严重的临床症状，但夫妇携带的异常α、b 珠蛋白基因可以遗传给子代，有时会产生严重的后果。
统计表明，如果夫妇双方都是地中海贫血基因的携带者，他们的子女就会有25%的可能是重型地中海贫血，50%的可能是轻型地中海贫血，另有25%属于正常。
而地中海贫血的病人如果要做基因检测的时候，那么需要进一步去医院里面认认真真做孕前筛查和基因检测的了。
而且要知道的，如果在忍受中期的时候，往往也是可以去做一下产前诊断。
那么这个好似好的haul，往往可以做一下羊水穿刺术的了。