实验：细胞化学染色POX
细胞化学染色
细胞化学染色检验前言细胞化学是细胞和化学相结合的一门科学。
细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。
在病理情况下，血细胞的化学成分可发生改变。
因此，细胞化学染色不仅对研究血细胞的代谢活动、生理功能，而且对生理和病理情况下血细胞的化学成分的变化、各种类型血细胞的鉴别、某些血液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。
研究血细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。
下面主要介绍血液学中常用的一些细胞化学染色方法。
瑞氏染色法：瑞氏染色液的配制：瑞氏染料（粉）1g纯甲醇60ml将染料放在乳钵内加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒入洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及用完甲醇为止。
制配好的染液保存于温室中一周便可应用。
新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染色愈好。
缓冲液的配制及其作用:1% KH2PO4 (即1g KH2PO4+100ml蒸馏水) 30ml1% Na2HPO420ml加蒸馏水至1000mlPH 6.4~6.8过氧化物酶染色一、原理：细胞中的过氧化物酶（POX）分解底物过氧化氢（H2O2）产生新生态氧，后者使联苯胺氧化为联苯胺蓝沉淀而定位于POX活性部位。
二、过氧化物酶染色法染液的配制：（1）联苯胺（Benzidine）0.3g95%乙醇（Ethye alcohol）99ml36%亚硝基铁氰化钠（Sodium Nitroprusside）1ml (0.36g+1ml蒸馏水，置于37℃水浴箱中促溶。
)（2）30%mlml过氧化氢溶液：30%双氧水，吸取一滴约0.05ml放入50ml蒸馏水内，每次用时必须新鲜配制。
三、结果判断：细胞质中有蓝色颗粒的为阳性细胞。
四、临床意义：粒细胞中除早期原粒细胞呈阴性反应外，晚期原粒细胞及以后各阶段粒细胞均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。
08细胞化学染色检验
细胞内铁
存在于中幼红细胞、晚幼红细胞、及红细 胞中的铁（包括铁粒幼红细胞、铁粒红细胞）。
油镜下计数100个中幼红和晚幼红细胞， 记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分数。
铁粒幼细胞根据蓝色铁颗粒多少粗 细分为：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。
环形铁粒幼细胞：胞质内蓝色颗粒5 颗以上，围绕核周三分之一以上。
铁粒红细胞：红细胞内出现铁颗粒。
结果判读
胞浆中有紫黑色颗粒结果为阳性，分 为+，++，+++，++++，分别为1分、2分、 3分、4分，100个细胞中阳性细胞的积分之 和即为积分值。
参考范围
阳性率<40%,NAP积分值为30~130分。
临床意义
1、NAP积分增加：见于细菌性感染（类白 血病反应）、再生障碍性贫血、某些骨髓 增殖性疾病（慢粒、骨髓纤维化、真性红 细胞增多症、原发性血小板增多症）、慢 性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、 恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、雄激素治疗等。
• 健康人骨髓中的铁主要存在于骨髓小 粒和幼红细胞中。骨髓中的铁在酸性 环境下与亚铁氰化钾作用，形成普鲁 士蓝色的亚铁氢化铁沉淀，定位于含 铁部位。
化学反应
铁+亚铁氰化钾
酸性环境
亚铁氰化铁
蓝色沉淀
细胞外铁
主要存在于骨髓小粒的巨噬细胞内，反 映体内贮存铁。
分-、+、++、+++、++++五个等级。
• 急性淋巴细胞白血病：原始淋巴细胞及幼 稚细胞均呈阴性，实际上急性淋巴细胞患 者骨髓中可残留部分原始粒细胞，而出现 阳性，故参考范围为阴性或阳性<3%
临床血液学检验：4实验四 POXandPAS-2017
实验一
过氧化物酶染色（）
红过系碘、酸-粒雪夫系反、应巨（核PA系S）正常形态
请问：
以上都是什么细胞？
实验一
化学染色
红系、粒系、巨核系正常形态
细胞化学染色Cytochemical Staining
实质是原位显示细胞结构成分，对各种化学成 分作定位、定性及半定量分析的方法。
用于急性白血病鉴别，血液病辅助诊断、鉴别 诊断、疗效观察和预后判断及发病机制探讨。
– POX存在于粒细胞、部分单核细胞胞浆内。
二氨基联苯胺法（DAB ）
国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐法
组成
主要成份
联苯胺液（A） H2O2液（B） 瑞姬氏染液（C）
联苯胺 H2O2 瑞姬氏染料
磷酸盐缓冲液（D） 磷酸盐
• 细胞内的过氧化物酶能将无色的二氨基联苯胺的氢原子转 移给H2O2 ，释放新生氧，使前者变为有色染料（棕黄色或 蓝黑色）沉积在细胞质酶所在部位。
（+）
（-）
（+）
沉淀颗粒特点
细颗粒状或均匀红色 粗颗粒状或块状 细颗粒状
颗粒状或块状
临床意义
1、鉴别白细胞疾病的性质（白血病细胞） 淋巴系统恶性增生时多呈强阳性---ALL、CLL、淋巴瘤（红色颗粒或块状） 急性粒细胞白血病阳性为：细颗粒，弥散状分布。 急性单核细胞白血病阳性为：细颗粒，胞质边缘颗粒较粗大。 急性巨核细胞白血病阳性为：粗颗粒状、小块状或弥散分布。
作业
• POX与PAS化学染色的原理、正常细胞特点与临床 意义。
• 记录本次课中POX和PAS的细胞染色结果。
新鲜涂片
2、鉴别红系增生的性质（有核红细胞） • 红血病、红白血病、MDS为强阳性 • 地中海贫血、IDA 、巨幼细胞性贫血、HA 、AA 阴性
细胞化学染色实验
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
二、铁 染 色(Iron Stain)
【目的和原理】 骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，
其中的三价铁与分子中的蛋白质结合不牢， 经稀盐酸处理后而游离，并能在酸性亚铁 氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞内 铁也可用此法显示。
【材料】
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5、急性单核细胞白血病：原单和幼单POX 多呈弱阳性或阴性，单核细胞呈弱阳性， 阳性率常>3%，阳性颗粒较为细小、稀疏。
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6、中性粒细胞髓过氧化酶缺陷症：中性 粒细胞POX染色，纯合子呈阴性，杂合子 多为弱阳性。在一些髓系细胞白血病，如 部分慢性髓细胞白血病（CML）患者，中 性粒细胞POX染色可呈阴性或弱阳性，提 示POX获得性缺陷。
【器材和试剂】
1．第一液
联苯胺 0．3g
360g／L亚硝基铁氰化钠饱和液 lml
95％L醇 加至 lOOml
贮存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分装 备用。
2．第二液 (稀过氧化氢液，新鲜配制)
3％过氧化氢 0．3ml
蒸馏水
25ml
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【步骤和方法】 1．于新鲜干燥血涂片或骨髓涂片上，滴加第
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【步骤和方法】
1.选骨髓小粒丰富的骨髓片，用甲醇固定 10min，待干。 2．玻片上滴满酸性亚铁氰化钾，染色 30min(可置37℃环境) 3. 用蒸馏水冲洗后用核固红染液复染 10—15min。 4．流水冲洗、待干、镜检。
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细胞化学染色检验
细胞化学染色检验摘要】细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学。
它以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质(酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。
【关键词】血液细胞染色检验过氧化物酶(peroxidase，POX)染色方法有Washburn法、四甲基联苯胺法和改良的Pereira染色法等。
前者曾是最为常用的方法，但由于其底物联苯胺具有致癌性，故现常用后两者，下面分别介绍这两种方法的原理。
四甲基联苯胺法粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶，POX能分解 H2O2而释放出新生氧，使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于酶活性的细胞质内。
改良的Pereira染色法粒细胞和部分单核细胞中POX能分解H2O2而释放出新生氧，使碘化钾氧化生成碘，碘再与煌焦油蓝作用形成蓝绿色沉淀，定位于酶活性的细胞质内。
1 苏丹黑染色原理苏丹黑B(Sudan black B，SBB)是一种脂溶性重氮染料，能溶解于细胞内的含脂结构(如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇)中，而使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。
脂类物质在粒细胞中丰富，单核细胞中也有少量。
2 中性粒细胞碱性磷酸酶染色原理中性粒细胞碱性磷酸酶(neutrophilic alkaline phosphatase，NAP)染色的方法有G0mori钙-钴法和Kaplow偶氮偶联法，因为钙-钴法操作较为繁琐且所需时间长，而偶氮偶联法的试剂盒操作方便，染色时间短，故目前国内常用偶氮偶联法。
Kaplow偶氮偶联法成熟中性粒细胞碱性磷酸酶在pH 9.6左右的碱性环境中，能水解基质液中的磷酸萘酚钠底物，释放出萘酚，后者与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质酶活性所在之处。
不同的底物与重氮盐的组合不同，化学反应过程以α-醋酸萘酚钠为例。
3 酸性磷酸酶染色原理酸性磷酶(acid phosphatase，ACP)存在于细胞的溶酶体颗粒中，有的细胞中酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的诊断及鉴别诊断。
过氧化物酶(POX)染色
过氧化物酶(POX)染色[原理]粒细胞和单核细胞脑浆内含过氧化物酶，能借助受体(联苯胺)脱氢催化过氧化氢而释放新生氧。
受体被氧化成联苯胺蓝。
再与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒而沉淀于脑浆内。
[试剂]1．联苯胺溶液：联苯胺0．38，加36％亚硝基铁氰化钠溶液1ml，再取95％乙醇加到100ml，水浴加热助溶。
贮于棕色瓶中，可保存数月。
工作时应小心溶液污染皮肤。
2.稀双氧水：临用前将30％双氧水用蒸馏水1：80稀释。
[操作](1)新鲜干燥血片或骨髓片，加联苯胺液5—8滴，使布满整张涂片，固定1—2分钟。
(2)加等量稀双氧水，用吸球吹吸，使两液混匀，作用4—8分钟。
(3)涂片用流水冲洗。
待干后再用瑞氏染液复染，复染时间约30分钟。
[结果观察]可报告阳性程度或阳性细胞％。
阴性：无蓝色颗粒和蓝色物质。
弱阳性：蓝色颗粒量少且细小，相当于(十)。
阳性：‘蓝色颗粒量多，粗细不一。
相当于(++)。
强阳性：细胞充满粗大紧密蓝色颗粒。
相当于(+++）。
[临床意义](1)粒系统细胞除早期原粒细胞阴性外，晚期原粒细胞及以下各阶段细胞均含有不同程度的蓝色颗粒。
嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色。
嗜碱性细胞为阴性。
(2)单核细胞中，除早期原始阶段外，皆呈弱阳性反应，其颗粒细小稀疏。
(3)某些网状细胞及吞噬细胞可呈不同程度的过氧化物酶阳性反应。
(4)所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。
(5)该化学染色是区别急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病的关键化学染色。
FAB分型规定前者阳性率＜3％。
编写：谢平制定日期：2011.12.1[附注](1)联苯胺溶液若明显变色发绿，应重新配制。
(2)亚硝基铁氰化钠溶液也可在临用前取0．368溶解于1ml蒸馏水中，加热助溶后应用。
(3)双氧水浓度若过高，则有抑制酶作用。
双氧水浓度太高、制片太厚、涂片冲洗不净以及粒细胞破坏过多，可造成假阳性。
涂片中粒细胞若看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示双氧水过浓。
细胞化学染色法
醋酸AS-D萘酚酯酶染色 染色结果 、临床意义基本同α-NAE
染色。
α -丁酸萘酚酯酶染色 临床意义同α-NAE染色，特异性低
于α-NAE染色
酸性磷酸酶染色
原理： 偶氮偶联法： Gomori硫化铅法 抗酒石酸酸性磷酸酶染色
临床评价： 诊断多毛细胞白血病
毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石 酸抑制。
ＮＡＰ积分下降：
慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性 睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合 症、恶性组织细胞病等。
疾病的鉴别
1. 类白血病反应 血病
慢性粒细胞性白
2. 细菌性感染 病毒性感染
5. 恶性组织细胞病 反应性组织细胞增 多症
6. 真性红细胞增多症 继发性红细胞增 多症
单核细胞系统 原单（可为阴性）,其他为阳性。
淋巴：大多阴性，少数阳性。 巨核及血小板：阳性
临床评价
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合 征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）
白细胞系统疾病： 急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗 颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性
M5 PAS(+)
红、沙黄等 染浆：伊红、刚果红、光绿等
四、种类
过氧化物酶染色、苏丹黑染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸奈酚酯酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色
过氧化物酶染色(POX)
过氧化物酶： 是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒 的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内 氧化还原过程。
参考范围：
细胞外铁： （+）～（++）
细胞内铁：铁粒幼红细胞12% ～ 44%，以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型。
实验十二常用血细胞化学染色
实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。
联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。
试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。
2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。
3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。
4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。
5．瑞氏(Wright)染色液。
6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。
操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。
2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。
3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。
4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。
注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。
2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。
3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。
涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。
若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。
4．染色液pH应为5.5。
骨髓染色
骨髓细胞化学染色(一) 过氧化酶染色（POX）【结果判断】细胞中出现蓝绿色颗粒为阳性反应。
按颗粒大小和密集程度分为强阳性和弱阳性。
【临床意义】过氧气酶主要存在于粒细胞系统，除早期原始粒细胞外，其后各阶段均呈阳性反应。
单核细胞从幼稚单核细胞起呈弱阳性反应。
淋巴细胞各阶段均为阴性。
故对急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞、急性粒细胞与急性单核细胞白血病的鉴别诊断有帮助。
急性淋巴细胞白血病全部阴性，急性单核细胞白血病POX颗粒细小、染色浅淡。
(二) 中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞中，其他细胞均阴性。
网状细胞及吞噬细胞的酶活性很强。
【结果判断】染色结果，在细胞浆中出现灰色至棕黑色颗粒者为阳性，阴性与阳性程度可表示为：(一) 胞浆呈淡红色，无颗粒。
(＋) 全部胞浆呈淡灰色，无颗粒。
或胞浆中出现棕黑色或黑色颗粒，但不超过整个细胞的1/4。
(十十) 同(＋)，胞浆呈灰色，或颗粒不超过细胞1/2。
(＋十十) 胞浆内充满棕黑色或黑色颗粒，但尚不十分致密，范围可超过整个细胞的3/4。
(十十十十) 颗粒粗大稠密，甚至遮盖细胞核。
以积分值表示：正常人阳性率一般在40%左右，NAP积分值80分左右，以弱阳性为主。
【临床意义】(1) 急性白血病与中性粒细胞类白血病样反应的鉴别。
前者NAP减弱，后者活性明显增强。
(2) 慢性粒细胞性白血病时降低。
阵发性睡眠性血红蛋白尿患者的成熟粒细胞NAP降低。
(3) 急性淋巴细胞白血病、淋巴肉瘤、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、骨髓硬化症患者NAP明显增强。
(4) 再生障碍性贫血时NAP增强，而其他类型贫血多无变化。
(5) 激素的影响，垂体肾上腺皮质功能亢进，或应用皮质激素时NAP增强。
妊娠亦出现 NAP 增强。
(三) 糖原染色 (PAS)糖原存在于细胞浆内，粒系统细胞自早幼粒细胞开始就可呈现阳性，阳性程度随细胞成熟而增强。
成熟中性分叶粒细胞糖原最为丰富。
单核细胞呈弱阳性。
医学检验学基础知识：血细胞化学染色小结
医学检验学基础知识：血细胞化学染色小结医学检验血液学是医疗卫生事业单位招聘考试中出题率相对较高的内容，其中血细胞化学染色可以说是血液学中的难点及重点,考试中很容易出题，它的各个试验多且内容繁杂,不容易记忆,同学们也很容易混淆的地方，今天今天帮助大家梳理，以便大家更好地复习和记忆。
常用的血细胞化学染色有过氧化酶染色(POX),过碘酸-雪夫反应(PAS)，碱性磷酸酶染色(NAP)，氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色(AS-D-NCE)，-醋酸萘酚酯酶染色( -NAE)，碱性-丁酸萘酚酯酶染色( -NBE)，铁染色。
结果判断:结果阳性：1.POX:棕黑色颗粒2.PAS：红色颗粒块状呈弥漫状红色3.NAP：灰褐色至深黑色颗粒状或片状沉淀4.AS-D-NCE:红色沉淀5. -NAE：棕黑色颗粒沉淀6. -NBE：蓝色颗粒7.铁染色：弥散蓝色，颗粒状，小珠状或块状正常血细胞的染色反应：1.POX：粒细胞系统：绝大部分(+)单核细胞系统：可(-)/(+)淋巴细胞系统：(-)2.NAP：粒细胞系统：绝大部分(+)单核细胞系统：绝大部分(+)淋巴细胞系统：绝大部分(-)3.NAP：除了巨噬细胞(+)，其他都(-)4.AS-D-NCE：粒细胞系统：原始粒细胞绝可(-)/(+)，大部分(+) 单核细胞系统：绝大部分(+)淋巴细胞系统：(-)5. -NAE：粒细胞系统：绝大部分(+)单核细胞系统：原始单细胞绝可(-)/弱(+)，其他(+)淋巴细胞系统：绝大部分(-)6. -NBE：粒细胞系统：(-)单核细胞系统：绝大部分(+)淋巴细胞系统：B淋巴(-)，其他(+)7.铁染色：细胞外铁：大多(++)临床意义：1.POX:鉴别急性白血病2.PAS：白血病分型3.NAP:主要慢性粒细胞白血病与类白血病的鉴别：慢性粒细胞白血病：NAP积分值常为0类白血病：NAP积分值明显增高4.AS-D-NCE:急性粒细胞白血病(+)，急单急淋(-)5. -NAE：急粒大部分(-)不能被NAF抑制;急单大部分(+)能被NAF抑制;急淋大部分(-)6. -NBE：与-NBE染色的临床意义相同7.铁染色：诊断缺铁性性贫血。
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骨髓片POX染色
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▪ 【临床意义】 ▪ （1）粒系： ▪ POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随
着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分 叶核粒细胞为强阳性。 ▪ 嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒 比中性粒细胞粗大，有折光。 ▪ 碱性粒细胞为阴性。
注意事项
1. 涂片应新鲜制作、厚薄适宜。 2. TMB 配制在85％～88％的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90
％～95％乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向 胞内渗入而使显色反应减弱或消失。 3. 过氧化氢溶液需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。 涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表 示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示 无效。 4. 染色液适宜pH值应为5.5，若pH值 <5.0会出现假阳性结果。 5. 试剂应置于低温暗处，防止光线照射失效。 6. 染色时加稀过氧化氢溶液之后必须与染色液充分混匀，否则 同一片子上细胞染色情况----不-精品一文档致---。---
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▪ 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。
▪ 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。
▪ 5、金属沉着法 ▪ 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色
（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断。
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▪ 血细胞化学染色的基本要求是在原位 显示细胞成分和结构，反应产物应是 有色沉淀物，具有一定的稳定性。
▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、 酶、蛋白质等。
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血细胞化学染色流程
▪ （一）固定 ▪ 固定有物理法与化学法， ▪ 物理法为干燥和火焰固定， ▪ 化学法最常用的是甲醛、乙醇、
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▪ （5）过氧化物酶染色 ▪ 主要用于鉴别急性白血病类型， ▪ 急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和
M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， ▪ 故有助于区别M3和M5型。 ▪ 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故
为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重 要指标。
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（2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性 反应，颗粒细小，弥散分布。
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（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可 作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。
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▪ 【操作】 ▪ 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰
化钠饱和溶液10μl，混合溶液呈淡棕黄色。 ▪ 2. 在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,
放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml， 染色6min 。 ▪ 3. 瑞氏染液复染15～20min 。 ▪ 4. 油镜镜检。
▪ 下面介绍几种常用的细胞化学染色方 法
▪ 这些方法学在白血病的鉴别诊断上具 有重要意义。
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一、过氧化物酶染色（POX）
（一）四甲基联苯胺法(TMB) ▪ 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆内的
髓过氧化物酶（POX orMPO）分解过氧 化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧化 成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色化合 物沉着于细胞质内。
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【原理】
过氧化氢 POX
（基质中）
粒、单核 细胞胞浆
四甲基联苯胺
TMB （无色）
新生态氧
[O]↑
亚硝基铁氰化钠 联苯胺蓝（蓝色）
自我脱氢氧化
蓝色颗粒
（浆内酶部位）
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四甲基苯醌二胺 (棕色)
【试剂】 ▪ 1%TMB ▪ 亚硝基铁氰化钠饱和溶液 ▪ 1%过氧化氢溶液 ▪ 稀过氧化氢溶液 ▪ 瑞氏染色液
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【结果】 细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。
（－） 无颗粒沉着； （±） 颗粒细小 ，分布稀疏； （+） 颗粒较粗，局灶分布； （++） 颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/2~2/3； （+++） 颗粒粗大，呈团块分布； （++++） 全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。
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丙酮和醋酸等。
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（二）显示
1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物， 在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐 结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶 氮色素，以此证明酶的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。
细胞化学染色
沧州医专医学技术系 侯振江
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▪ 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结 合运用化学或生物化学技术对血细胞内各 种化学成分作定位、定性及半定量分析的 方法。
▪ 用于研究血细胞生理、病理和化学结构； ▪ 临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、
疗效观---精品文档------
▪ （三）细胞化学定量
▪ 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅 ，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。
▪ 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受 色强弱。
▪ 积分法，是常用的半定量法，将等级估量与 百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低 ，又反映了细胞受色的强弱。
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AML-M1
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M1 - POX(+)
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二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能 溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的 中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞 内微细结构的脂类物质也能显示出来。