分子实验室、细胞实验室常用配方
最全常用缓冲液配方及缓冲范围
最全常用缓冲液配方及缓冲范围缓冲液是一种能够维持溶液pH值相对稳定的溶液。
它可以减少酸碱反应的影响，使物质在酸碱环境中保持稳定。
在生命科学实验室和工业生产中，常用的缓冲液有许多种。
下面是最常用的一些缓冲液配方及其缓冲范围。
1. Phosphate缓冲液：Phosphate缓冲液通常由磷酸二氢盐和磷酸氢二盐组成。
它的pH范围为2.1-7.4，在生物化学和细胞生物学实验中得到广泛应用。
配方1：-0.1M磷酸二氢盐，pH2.0-2.8-0.2M磷酸氢二盐，pH5.8-7.4配方2：-0.1M磷酸二氢盐，pH2.1-3.1-0.2M磷酸氢二盐，pH5.6-7.42. Tris缓冲液：Tris缓冲液由三羟甲基氨基甲烷（Tris）和其酸盐组成。
它的pH范围为7-9，在分子生物学和生化实验中广泛使用。
配方：- 1 M Tris HCl，pH 7.4-9.0- 1 M Tris base，pH 7.0-9.23.MES缓冲液：MES缓冲液是一种针对中性pH值（5.5-6.7）的缓冲液，常用于细胞生物学和酶活性实验。
配方：-0.1MMES，pH5.5-6.74.HEPES缓冲液：HEPES缓冲液是一种适用于细胞培养和酶活性实验的缓冲液，其pH 范围为6.8-8.2配方：-0.1MHEPES，pH6.8-8.25.CAPS缓冲液：CAPS缓冲液是一种适用于生化实验的缓冲液，其pH范围为9.7-11.1配方：-0.1MCAPS，pH9.7-11.1这些是最常用的缓冲液配方及其缓冲范围，可以根据实验的需要选择合适的缓冲液。
需要注意的是，在配制缓冲液时应使用高纯度的化学品，并根据实验要求精确控制缓冲液的pH值。
此外，在实验过程中应注意缓冲液的保存和稳定性，以确保实验结果的准确性。
PBS缓冲液的配制方法
PBS缓冲液的配制方法在免疫组化和细胞培养中，常用到PBS缓冲液。
以下是我们实验室的配方，供大家参考：A液：0.1mol/L磷酸二氢钾将1.361g磷酸二氢钾(KH2PO4，分子量136.09)加入100ml双蒸水中。
B液：0.1mol/L磷酸氢二钠将1.78g酸酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O，分子量177.99)加入100ml双蒸水中。
或者将3.58g酸酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O，分子量358.14)加入100ml双蒸水中。
pH值。
A液(ml)。
B液(ml)5.60.9.50.0.255.91.9.00.1.006.24.8.00.2.006.47.7.00.3.006.64.6.00.4.006.81.5.00.5.006.98.4.00.6.007.17.3.00.7.007.38.2.00.8.007.73.1.00.9.008.04.0.50.9.50免疫组化常用的PBS只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠）、NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）和NaCl。
用于细胞培养的PBS需要含有氯化钾。
配方如下：取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，浓度为0.01M。
PBS缓冲液的配方如下：取8g NaCl、0.2g KCl、3.63g Na2HPO4•12H2O和0.24gKH2PO4，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调节pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。
PBS缓冲液是实验室中最常用的缓冲液之一，但不同实验室的配方可能不同。
以下是我的总结：母液的配制：0.2M Na2HPO4：取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml水。
0.2M NaH2PO4：取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水。
不同浓度的PBS(pH=7.4)的配制：先配制0.2M PBS(pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4即可。
实验室常用溶液配制
实验室常用溶液配制实验室常用溶液的配置Amp+/Kan+:贮存液浓度为50mg/mL称取500mg于10mL超纯水中溶解，抽滤后1mL分装到离心管中，于-30℃冻存X-gal：贮存浓度为20mg/mL称取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30℃中用锡箔纸包裹后避光保存，不需要过滤除菌IPTG：贮存浓度为0.84mol/L称取2g IPTG溶于8mL超纯水中，用水定容到10mL，用0.22um 的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中并于-30℃保存CaCl2：贮存浓度为1mol/L称取1.11g CaCl （或者CaCl:2H2O 1.4698g）溶于8mL超纯水中，定容到10mL，用0,22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中，并于-30℃保存LB培养基：胰蛋白胨（Tyrtone）10g/L酵母提取物（Yeast Extraction）5g/L氯化钠10/L根据经验用NaOH调节PH为7.2-7.6，然后高压蒸汽灭菌，注意及时从灭菌锅中取出无DNA酶的RNA酶：将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L Tris-Cl（PH7.5）、15mmol/L NaCl 中，配成10mg/mL 的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃Bradford 贮存液95%乙醇100mL88%磷酸200mLG 250 0.35g室温下可储存，一般4℃Bradford 工作液Bradford贮存液30mL双蒸水425mL95%乙醇15mL88%磷酸30mL储存于4℃超声破碎缓冲液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO450 mM 6.81 gEDTA 1 mM 0.292 g (EDTA-2Na-2H2O) 0.372 g定容至1 L，调pH至8.0包涵体洗涤液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO4 50 mM 6.81 gEDTA 5 mM 1.46 g (EDTA-2Na-2H2O) 1.86 g尿素 2 M 120 gTriton X-100 0.5% 5 ml脱氧胆酸钠盐0.1% 1 g定容到1 L 调pH至8.0匀浆缓冲液（pH=7.5）成分：20mM HEPES 0.002mol=0.476g 加入0.952g1.5mM MgCl20.00015mol=0.0036g 加入0.0072g 0.2mM EDTA 0.00002mol=0.00584g 加入0.01168g 0.1M NaCl 0.01mol=0. 58g 加入1.16g0.5mM 钒酸钠0.00005mol=0.0092g 加入0.0184g 加100mL水进行溶解，NaOH调pH至7.50.2mM DTT 总体积500μL加入0.1μL0.4mM PMSF 总体积500μL加入20μL1%SDS 加入50μL 10% SDS其中DTT和PMSF匀浆之前加入，SDS匀浆之后离心之前加入DTT配成1M母液，溶于0.01M乙酸钠（pH=5.2）中，过滤除菌PMSF配成10mM母液，溶于异丙醇10*PBSNaCl 80.0669 gKCl 2.0129 gNa2HPO414.1960 gKH2PO4 2.4496 g水定容至1L，使用时稀释10倍，用NaOH调pH至7.4Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts. Adjust the pH to 7.4 with HCl. Add distilled water to a total volume of 1 liter. The resultant 1x PBS should have a final concentration of 10 mM PO43?, 137 mM NaCl, and 2.7 mM KClIf used in cell culturing, the solution can be dispensed into aliquots and sterilized by autoclaving (20 min, 121°C, liquid cycle). Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can be stored at room temperature or in the fridge. However, concentrated stock solutions may precipitate when cooled and should bekept at room temperature until precipitate has completely dissolved before use.转膜缓冲液（含有SDS）1L剂量甘氨酸 2.9gTris 5.8gSDS 0.37g甲醇200mL水800mL10×蛋白电泳缓冲液1L剂量Tris 碱(Mr 121.14) 30.2g甘氨酸(Mr 75.07) 188gSDS (Mr 288.38) 10 g加水至1L用时稀释10倍即可30％丙稀酰胺1L 剂量丙烯酰胺290gN,N’-亚甲基双丙稀酰胺10g溶于600ml蒸馏水中，加热至37℃溶解，补足体积至1L，过滤，且pH不大于7.01 M Tris-Cl（pH6.8）60.55 g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml1.5 M Tris-Cl（pH8.8）90.83g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml。
实验室常用染色液和试剂配方
实验室常用染色液和试剂配方染色液和试剂在实验室中被广泛使用，用于各种科学研究和实验。
它们可以用来染色细胞、分析化合物和反应产物、诊断疾病等。
下面是一些常用的染色液和试剂配方。
1. Hematoxylin-Eosin染色液：Hematoxylin-Eosin（HE）染色液是一种经典的组织染色方法，常用于病理学研究和诊断。
配方如下：- Hematoxylin染色液：将5 g hematoxylin溶解在100 mL乙醇中，加入2 mL盐酸和900 mL蒸馏水，最后调节pH值为5-6-酸性酒红染液：将0.5g酸性酒红溶解在100mL乙醇中。
- Eosin染色液：将0.5 g eosin溶解在100 mL乙醇中。
2. Giemsa染色液：Giemsa染色液用于染色细胞，特别是白细胞，常用于血液学和微生物学研究。
配方如下：- Giemsa染色液：将4 g Giemsa粉末溶解在1 L蒸馏水中。
可以加入2 mL甲醇增强染色效果。
3.厌氧培养试剂：用于厌氧条件下培养微生物的试剂。
配方如下：- Thioglycollate培养基：将11.5 g thioglycollate溶解在1 L蒸馏水中，加热至溶解。
- Dithiothreitol（DTT）溶液：将1 g DTT溶解在100 mL蒸馏水中，用10 mL离心管分装，-20℃保存。
4. Bradford试剂：用于蛋白质的浓度测定，常用于生物化学和分子生物学实验。
配方如下：- Coomassie Brilliant Blue G-250：将100 mg染料溶解在50 mL浓硫酸中，加热至溶解。
再用1 L蒸馏水稀释至30%浓度。
5. Gill's胶片显影试剂：用于胶片的显影，常用于分子生物学实验。
配方如下：-显影溶液A：将1.5g氯化钴和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.8-显影溶液B：将3g溴化钾和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.86.RIPA裂解缓冲液：用于细胞或组织的裂解，提取蛋白质或RNA，常用于生物化学和分子生物学实验。
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2021-04-23 11:01:29)转载▼标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术根本实验室技术生物学实验教育常用的分子生物学根本技术核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的根本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
其根本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下〔适宜的温室度及离子强度等〕可按碱基互补原成双链。
杂交的双方是待测核酸序列及探针〔probe〕,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。
核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的DNA或RNA片段。
根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。
固相杂交固相杂交〔solid-phase hybridization〕是将变性的DNA固定于固体基质〔硝酸纤维素膜或尼龙滤膜〕上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。
斑步杂交〔dot hybridization〕是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后参加过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。
该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永别离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。
该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。
印迹杂交〔blotting hybridization〕Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反响，用放射性自显影或酶反响显色，检测特定大小分子的含量。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
实验室常用溶液配制
0.25%胰酶-EDTA的配制细胞消化胰酶的配制对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。
低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力实验常用溶液的配制1.革兰氏碘液：称碘化钾2g溶于100ml蒸馏水中，再加1g碘使其溶解，最后用蒸馏水稀释至300m1，盛于棕色瓶内，保存于暗冷处。
2.1.苯酚品红改良液（一）①A液：取3克碱性品红，溶于100ml 70％酒精中（此液可长期保存）。
②B液：取A液10m1，加入90ml 5％苯酚水溶液（一般在两周使用为好）。
③C液：取B液45m1，加入 6ml冰醋酸和6ml 37％甲醛。
④、苯酚品红改良液：取C液10m1，加入90ml45％冰醋酸和1克山梨醇。
2.2.苯酚品红改良液（二）：A液：碱性品红3g＋100ml 70％乙醇。
B液：A液10ml＋5％苯酚水溶液90m1。
C液：B液120ml＋冰醋酯12ml＋甲醛12ml。
D液：C液120ml＋45％冰醋酸480ml。
在D液中加1％山梨醇（600mlD液中加 6g山梨醇），此液配好后至少放4一5天方可使用，可保存几年。
3.1.甲基绿一哌罗宁混合染液（一）：①醋酸缓冲液（pH4.8）0．2mol.L-1醋酸（A.R）（取1.2ml加蒸馏水至100ml）4份0．2mol.L-1醋酸钠（A.R）（取2．72g加蒸馏水至100ml）6份。
实验室常用试剂和缓冲液配方
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液种类繁多，根据实验需求，可以根据不同的试剂和缓冲液配方来满足实验要求。
以下是一些常见的试剂和缓冲液配方，以及其用途和制备方法。
1. 磷酸缓冲液（Phosphate buffer）磷酸缓冲液常用于生化和分子生物学实验中，用于控制溶液的pH值，适用于酸性和碱性条件下。
常见的配方包括0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.2-7.4），需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
2. 氯化钠溶液（Sodium chloride solution）氯化钠溶液是实验室中常见的缓冲液配方之一，通常用于调节生物样品的渗透压和离子浓度。
可以制备不同浓度的氯化钠溶液，常见的配方为0.9%氯化钠溶液（生理盐水）。
3. 碳酸氢盐缓冲液（Bicarbonate buffer）碳酸氢盐缓冲液常用于细胞培养和生理实验中，用于维持细胞培养基或实验液的pH稳定。
一种常见的配方为10mM碳酸氢盐缓冲液（pH7.2-7.4），需要用碳酸氢钠和盐酸来制备。
4. Tris缓冲液（Tris buffer）Tris缓冲液是一种常见的生化实验缓冲液，可以调节到不同的pH值。
常见的配方为50 mM Tris缓冲液（pH 7.4），需要用Tris（三氯甲烷磺酸，Tris-HCl）和盐酸来制备。
5. PBS缓冲液（Phosphate-buffered saline）PBS缓冲液是一种用于细胞和组织处理的常见缓冲液，具有稳定pH值和离子浓度的特点。
常见的配方为10mMPBS缓冲液（pH7.4），需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
6. 甘氨酸缓冲液（Glycine buffer）甘氨酸缓冲液常用于蛋白质电泳实验中，用作电泳缓冲液和传递缓冲液。
常见的配方为25mM甘氨酸缓冲液（pH8.3），需要用甘氨酸和盐酸来制备。
7. BSA溶液（Bovine serum albumin solution）BSA溶液是实验室中常见的蛋白质标准物质，用于测定蛋白质浓度和酶活性等实验。
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分子实验室、细胞实验室常用配方————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:ﻩ(一)WB相关试剂及常用缓冲液●RIＰA（１０0mI）(最后要调pH为７.4）终浓度分子量称取50mM 1２1.14 60５．7mg Ｔｒｉs-HCI（pH７.4)NaCI １50 ｍＭ５8.4４87６.６ｍgTritｏnＸ-1０0 1% 1mI脱氧胆酸钠1％１gEDTA １mM 292.24８２９.224８mｇSＤS 0．1％０.1gＰMSF（１00ｍM) 使用时每1ｍl加１０ｕl●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度)AP粉末 1ｇddＨ2０ 10mｌ●1０%SDS(十二烷基硫酸钠）：SＤＳ粉末１0gｄdH20定容到 100ml注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡●6X蛋白质sample bufferTris-HCl(１M,ｐH6.８) 30ｍLＳＤＳ10ｇ甘油 30ｍLDTT（1５4.２5）９.3g溴酚蓝０．０6gdd H2０定容至10０mＬ●10XPBＳ缓冲液的配制：ＮaCｌ 80gKCl 2gＮa2ＨPＯ4 14．4ｇ(十二水合36g）KH２PO40 2.４g加800 mLddH2O,根据开始的pH用ＮaOH或ＨCL调pH到７.4,调好pH再定容到1升。
配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度●PBSＴ(1X)ＰBS(1X） 500mlTweeｎ 2０５０0μｌ●5０×Tris－乙酸（TＡE）缓冲液配制1Ｌ溶液各成分的用量Ｔris粉末 2４2ｇ冰醋酸 57.１ｍlNａ2EDTA·2H2O 3７.２gddH20定容到 1Ｌ●封闭液脱脂奶粉 5g叠氮钠 0．02g(现配现用时可不加)PBS 定容到1０0mL●染色液(室温)１L 500ml 200ml 100ｍl甲醇5０0ｍＬ25０100 50乙酸１０0 mL 5０20 10R2５0考马斯亮蓝0.5g 0.2５g ０.1 g ０．05 gH2０4０0 mL 20０8０40●脱色液：(室温)甲醇 165mＬ乙酸５0 ｍLH２０785 mＬ●8.8Buffer:（调ｐH至8．８，4度保存)1０0ml 200ｍlTris 18．17ｇ3６.３4g1０％SDS 4mＬ８mlddH２０定容至100mL 200ml● 6.８ Bufｆｅr: (调pH至６.8,４度保存)10０ｍl 200ｍlTris 6．０6g 12.１2g10％SDS 4mL 8mlｄdH20 定容至１00mＬ20０ml●转移缓冲液(1０×trａns bufｆeｒ）:（常温保存）1L ２L甘氨酸1４4g 288ｇTrｉs粉末30．3ｇ60.6ｄdＨ20 定容至１L 定容至2L使用时甲醇 200mＬ转移缓冲液（１0×）１０0 mＬｄdＨ２0 700 mL●电泳缓冲液(1０×）（ｒunｎing bｕffeｒ）:(常温保存）１L ２L甘氨酸144g 28８gTris粉末30.3g 60.6SDS 10g 2０gddH20 定容至1L 定容至2L●10Х)ＴＢS: （常温保存)NａCl 80.0ｇTｒis粉末 24．2gddH20 定容至１L●ＴBＳT(１Ｘ)TＢS(1X) 5０0ｍｌTweeｎ２0 ５0０μl●Stｒippiｎg ｂuffer(可反复利用)温老师组配方10％SDS 10ｍlΒ-巯基乙醇35０ lTriｓ－ＨCI（pH６.８） 6.２5mｌ（６.0６加到50mL水)加入ddＨ２Ｏ至5０mL●Stｒiｐping buffer（可反复利用)郭老师给配方甘氨酸15gＳDＳ1ｇTｗeeｎ20 １mlｄd ddH2O 1L作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。
(二)细胞和细菌培养基、抗生素●LB培养基(当天灭菌后放4度存放)100０ml 500mｌ３０0 mｌ2５0 ｍl 200 ml 氯化钠10g 5ｇ３g 2．5g 2g蛋白胨10ｇ5g ３g ２．5g 2g酵母提取物5g 2.5g 1.5ｇ 1.25ｇ1gdｄH20 定容至１000ｍl 定容至500ml 定容至３0０mｌ定容至２50ｍl定容至２00ml●LB平板：(当天灭菌后倒平板,放4度存放）1000ｍl 50０ml ３０0 ml 250 ml ２00 ｍl 氯化钠10g 5g 3g ２．5g 2g蛋白胨１０ｇ5ｇ3ｇ 2.5g 2g酵母提取物5g 2．5g 1.5g 1.25g １g琼脂1５g 7．５ｇ４.５g 3．725g 3gddＨ2０定容至1000mｌ定容至500ml 定容至300ｍl定容至２50ml定容至2０0ｍl●ＳＯB培养基将下列组分溶解在0.９Ｌ水中：ﻫ蛋白胨2０gﻫ酵母提取物 5gﻫ氯化钠 0.5g1mol／L氯化钾 2．5ｍl用水补足体积到1L。
分成１00ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1mｌ灭过菌的1moｌ/Ｌ氯化镁●1M IＰTＧ（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为２３8．3）)溶液ＩＰTG粉末2．383gdｄH20 定容到10ｍl用0．22μm滤器过滤除菌,分装成1ｍl小份贮存于-20℃。
●Amｐ+（50mg/ml)Amp+粉末50ｍｇddＨ20 1ml注意：分装保存于－２０度,使用时按10０0:1的比例用●Kana＋（５0mｇ/ml)Kana +粉末 50mgddH２0 １mｌ注意:分装保存于-20度，使用时按１000:１的比例用●胰酶:抽滤,长期保存可放负20度粉末 0．25gEDＴＡ0.02-0.03g１XPＢS 100ｍl●高糖DＭＥM培养基:抽滤保存在4度粉末全部碳酸氢钠３.7gddH２0 定容到1Ｌ（用盐酸调pH值到：7.２-7．4)●Ｇ418母液(１00ｍg/ml）用０.22μM滤菌，分装存于-20度粉末 1gPＢS １0ml●zeocin母液（100mｇ/ml）用０.22μＭ滤菌,分装存于-２０度粉末1gｄｄH２Ｏ１0ｍl●Blaｓticidiｎ(１００mg／ml）用0.22μＭ滤菌,分装存于－２0度粉末０．3gPBS 1０ml(三）利用His－tag从细菌中纯化蛋白配方透析液配方终浓度母液浓度量取体积２0mM １Ｍ20ml Ｔrｉs-ＨＣl(pＨ:8．0)NaＣl 20mM 4Ｍ 5 mlMｇCl22mＭ１M 2 ｍｌＤTT 1mM１M １ｍl甘油50% 500ｍlddHO472 ml2●超声裂解液(ｌyｓｉｓbuffｅr):2011年做蛋白纯化时用Nａ3PＯ4(１64） 8.2ｇ(５0ｍM)NａCl （58.5）１7.55ｇ(30０mM)加8０0 mL dｄH2O溶解，用2M NaOH或者２ＭHCL 调pＨ到8.0,再定容到1升。
配好后用高压蒸气灭菌后常温保存。
●洗涤液(wａsh buffer):20１1年做蛋白纯化时用Na3PO４８.２g(5０mM)ＮａCl １7.55g(300mM）咪唑 0．６８１ｇ（1０mＭ)加8０0 mLdｄＨ2O溶解,根据开始的pＨ用2M NａＯH或者２M HCL调pH到８.0,调好pH 再定容到1升●洗脱液（elutiｏn bufｆer)：2０１１年做蛋白纯化时用Ｎａ3PO4 ８.2ｇ(5０mM)ＮaＣl 1７.5５g（３０0mM）咪唑1７.02５g(25０mＭ)加80０ｍLdｄH2O溶解，根据开始的pH用2ＭNaOH或者2ＭHCL调ｐH到8．0,调好pH再定容到１升)PrepEase®Ｈistｉｄｉｎe-Taggeｄ PｒoｔeiｎＰｕｒificaｔion Kits - Hｉgh Spｅci ficiｔy●８Ｘ LEＷ Bｕffｅr (Lyｓis-Equiｌiｂrｉｕｍ-Waｓｈ Buffer）：（室温保存）pH:８.０NaH2PＯ４.2H2O 6.240４g(4０0mM）NaCl 14.0２56ｇ(2．4M）dＨ2０定容到100 ｍL (调节ｐＨ：8．0）●4X Eｌutiｏn Ｂｕfｆer:(室温保存)ｐＨ:８.0NaH2PＯ4．2H２Ｏ 3.1202 g（２00ｍM)NａC l7.0128g（１.2M）咪唑６．81 g(1M）dH２０定容到100 mL(调节pH:8.0）●ＥＤＴA:（1０0mM)EDTA 2.92３ gdH２0 定容到100 mL●NiSO4:NiSO4 .6H2Ｏ２.6２8５g(１00mＭ）ｄH20 定容到100 mL●溶菌酶：（使用时1ml溶液加入2０uｌ)粉末 50ｍｇdｄH20 1ｍL(四)利用His-ｔag从细胞中富集蛋白配方●磷酸钠缓冲液按图示比例混合0．2 M Nａ2HＰO４溶液和０.2 MNaＨ２PO４溶液,得到两种缓冲液，pＨ分别调节成为8.0和６．3.pH ０.2 M Na2ＨPO4体积/mL 0.2 MNaH2PO4体积/mＬ6.3 11.２5 38.75８.0 47.35 2.65●细胞裂解液（最好新鲜配制,当天使用)Cｅllｌysis ｂuffer终浓度配１０mｌ配１5ml 配20ml 配40ml 配30ml盐酸胍（g) 6M 5．7318 8.5977 １1.46３６2２．927２17．１９５4Tｒis(ｇ) 10 mM ０．01２1140.0181７1 0.024228 0.048４56 0.036３42ｐH 8.0ｂuffer(mｌ) 100 mＭ 5 ７.5 10 20 15 (注意胍盐是有害试剂注意这里用的磷酸钠缓冲液pＨ必须8.0!）(注意二价阳离子螯合剂，还原剂,会导致镍从树脂上的洗脱)本实验的所有试剂中EDTA浓度不得超过1 mM,DTT浓度不超过5 ｍM，巯基乙醇浓度不超过20 mM。
●pＨ8.0的洗脱溶液（最好新鲜配制，当天使用）pH 8.0的wasｈbuffer 终浓度配1０0ｍl 配５0ｍｌ配20ml 配4０ml 配30mlUreａ尿素(g）8Ｍ48.04８24．02４9.6０96 1９.21９２1４.4144Ｔrｉs(g) 10 mM 0.１2114 0．06０57 0.０２42280.048456 0.036３42ｐＨ8.０Na３PO4buｆfer(ml)100 mM 50 25 10 20 15Ｔrｉton X-10０(ul) ０.１%(ｖol/vol)100 50 ２０40 3０b-mercａｐtoeｔhanol．巯基乙醇(ul)5 mM ３5 17．５７14 10．５●ｐＨ 6.3 ｗash buffｅr (现配现用)pH6．3的wａsｈｂuffer 终浓度100ml 配50ml 配30ｍl pＨ６.3的ｗasｈbｕｆｆｅrＵrea尿素(g）8Ｍ４8.048 ２４.024 １4．４144Urea尿素(g)Tris(g) 10 mM ０.12１１4 ０．06０570.036342 Ｔｒis(g）pH6．３Nａ３ＰO４ｂuffer(ml）100mM50 2５1５pH6.3Nａ3ＰO４buffeｒ(ml)TritｏｎX-100(ul）0.1％(vol/voｌ)１00 50 ３0 Triｔｏn X-10０（uｌ)注意使用pＨ为6.３的磷酸缓冲液,而且pH不得低于6,pH要精确配制,非常重要！Histｉｄine 的质子化，会导致镍树脂上的解离,所以要精确测定pＨ,并且以ｐH试纸校对，而不是仅仅依靠pH仪器。