分子生物学实验室常用试剂配方
分子生物学实验室常用试剂的配制
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法
分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.常见试剂配制方法：(1)磷酸盐缓冲液（PBS）的配制方法：-配制PBS需要使用NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4等化学品。
-以10倍浓度配制PBS的浓缩溶液，然后稀释为需要的浓度。
-例如，1倍浓度的PBS可以通过将1升的10倍浓度PBS溶液加入9升蒸馏水来制备。
(2) 神经元无血清培养基（Neurobasal Medium）的配制方法：- 配制Neurobasal Medium需要使用神经元培养基基本成分及其他补充物质。
-根据制造商提供的配方，按照相应比例将各种化学品溶解在无菌蒸馏水中。
-配制好的培养基可以用于维持和培养神经元体外培养。
(3) 洗涤缓冲液（Washing Buffer）的配制方法：-配制洗涤缓冲液需要使用磷酸盐缓冲液（PBS）及其他添加剂。
- 将PBS溶液中加入适当浓度的Tween-20或者Tris-HCl来制备洗涤缓冲液。
-根据实验需求，可以调整洗涤缓冲液的成分和浓度。
(4) 乙醇（Ethanol）溶液的配制方法：-配制乙醇溶液常用的浓度有70%和100%。
- 70%的乙醇溶液可以通过将70ml无菌蒸馏水加入30ml无水乙醇中配制得到。
-100%的乙醇溶液可以直接使用无水乙醇。
2.常见缓冲液配制方法：(1) Tris/Tricine缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Tricine缓冲液需要使用Tris（三羟甲基氨基甲烷）和Tricine（三甘胺酸）等化学品。
- 根据实验要求，在一定PH范围内，按照不同比例混合Tris和Tricine，溶解于适量的蒸馏水中。
(2) 氯化钾缓冲液（KCl Buffer）的配制方法：- 配制KCl Buffer需要使用KCl和其他添加剂。
-将适量的KCl和其他缓冲液成分溶解在蒸馏水中。
-根据实验要求，调整KCl的浓度和缓冲液的PH值。
(3) Tris/Acetate缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Acetate缓冲液需要使用Tris和乙酸等化学品。
分子生物学实验用试剂
<<分子生物学>>实验课需要的主要试剂序号名称数量价格备注1 无水乙醇500mL×102 醋酸钠500g3 冰乙酸500mL4 氯仿500mL×25 氢氧化钠100g6 异丙醇500mL×27 异戊醇500mL8 氯化钠100g9 葡萄糖100g10 盐酸10mL11 EDTA 200g12 SDS 100g13 胰蛋白胨500g 320.0014 酵母粉500g 170.0015 Tris 200g16 饱和酚250mL×2 110.0017 Amp 1g 20.018 Xgal 200mg 240.0019 IPTG 1g 50.0020 EB 250mg21 琼脂糖100g22 琼脂23 连接酶24 限制酶25 离心管（1.5ml、0.5ml、0.2ml）26 枪头（1ml、100ul、20ul）27 一次性手套28 液氮29需配置的试剂：1.Tris母液：称取Tris（三羟甲基氨基甲烷，分子量121.1）60.55克。
加重蒸水400毫升，加热搅拌溶解，称为Tris母液。
2.10mol/L NaOH溶液称取氢氧化钠（分子量40）20克，先用40毫升重蒸水搅拌溶解后，再加重蒸水定容至50毫升。
3.500mmol/L EDTA（pH8.0）溶液称取EDTA－Ｎa2（乙二胺四乙酸二钠，分子量372.24）18.6克，先用60毫升重蒸水，加10毫升10mol/L NaOH溶液，加热搅拌溶解后，再用10mol/L NaOH溶液调pH至8.0，加重蒸水定容至100毫升，103.4kPa灭菌20分钟。
4.20％SDS溶液称取固体SDS（十二烷基硫酸钠，分子量288.44）20克，加70毫升重蒸水于42℃水溶解，加重蒸水定容至100毫升。
5.3mol/L NaAc溶液称取无水乙酸钠（分子量82.03）24.6克(或称取3H2O·CH3COONa 40.82克)，先加入重蒸水80毫升，加热搅拌溶解，再加重蒸水定容至100毫升，103.4kPa灭菌20分钟。
分子生物学常用试剂配制
试剂配制：1、1 M Tris-HCl (pH 8.0): 称取Tris-Base 121g, 加入约800 ml 水在磁力搅拌器上搅拌，使其充分溶解后加入浓盐酸调整pH至8.0后加水定溶至1000 ml. 灭菌后于室温保存。
2、0.5 M EDTA (pH 8.0): 称取EDTA-Na2盐187 g 加入约800 ml水，在磁力搅拌器上边搅拌边加入固体NaOH，当EDTA和NaOH均完全溶解，溶液变清时其pH值刚好达到8.0左右，再用pH试纸略加调整即可, 灭菌后于室温保存。
3、5.0 M NaCl:称取NaCl 300 g, 加入蒸馏水约800 ml 于磁力搅拌器上充分搅拌，约5分钟后停止搅拌，静止2~3分钟，倒出上清液，再加入100 ml蒸馏水重复前面的步骤，直到NaCl充分溶解后定溶至1000 ml., 灭菌后于室温保存。
4、DNA Buffer的配制：1 M Tris-HCl (pH 8.0) 100 ml0.5 M EDTA (pH 8.0): 100 ml5.0 M NaCl: 300 mlH2O 500 ml灭菌后于室温下保存3个月左右，用时按往Buffer中加入15g CTAB，10g PVP在电炉上烧开；在通风橱里加入1%的巯基乙醇( 现配现用)。
5、5 X TBE溶液配制：约800 ml蒸馏水中加入Tris-base 54 g，硼酸27.5 g，充分溶解后加入0.5 M EDTA（pH: 8.0）定溶到1000 ml, 调节pH为8.0备用，于室温下短期存放。
使用时配制成1×TBE或0.5×TBE稀释缓冲液。
6、1XTE10ml 1M Tris-HCl (pH 8.0)，2ml 0.5M EDTA (pH 8.0)定溶到1000 ml, 调节pH为8.0备用。
生物化学与分子生物学常用试剂配方
30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide 100mL将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。
严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。
使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。
如有沉淀，可以过滤。
【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。
称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液）称取15.0gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。
得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。
临用前稀释5倍。
【保存条件】室温保存，两年有效。
【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。
电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。
摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS 配制20mL【组分浓度】10%(w/v)SDS【配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害，请注意防护。
摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法膜转移缓冲液(Transfer Buffer)配方一：takara称取2.9g甘氨酸（glycine），5.8gTris碱，0.37g SDS溶于约600mL的去离子水，充分搅拌溶解，定容至800mL后，并加入200ml甲醇，摇晃混匀，室温保存。
分子生物学实验常用试剂、缓冲液的配制方法
实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500 mM EDTA（pH8.0）20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
分子生物学实验室常用试剂配方-ProbeGene2015(精)
分子生物学常用试剂配制与保存一 . 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine :溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。
分装成小份贮存于 -20℃。
1mol/L精胺(Spermine :溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。
分装成小份贮存于 -20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate:将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白 (BSA :加 100mg 的牛血清蛋白 (组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到 10ml ,然后分装成小份贮存于 -20℃。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate:溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml 。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate:溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml 。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 (0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。
或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶于水中,定容至 1L 。
1mol/L HCl:加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。
25mg/ml IPTG:溶解 250mg 的 IPTG (异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷于 10ml 水中, 分成小份贮存于 -20℃。
100mmol/L PMSF:溶解 174mg 的 PMSF (苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中, 定容到 10ml 。
分子生物学常用试剂配制表
LB 培养基PBS 缓冲液1x 10x 胰蛋白胨Tryptone 10g/L液体Na2HPO4（8mM/L ）1.14g/L11.36g/L酵母提取物Yeast extract 5g/L Nacl(136mM/L)7.95g/L 79.56g/L氯化钠Nacl10g/L KH2PO4(2mM/L)0.27g/L 2.72g/L 琼脂20g/L固体Kcl(2.6mM/L)0.2g/L 1.94g/L ddWater 至1L 至1LSDS-PAGE 电泳缓冲液5X NaOH 调节pH 至7.4-7.6Tris 15.1g 用前稀释TBS 缓冲液1X 10X甘氨酸94g Tris 2.42g/L 24.2g/L SDS 5g氯化钠Nacl 8g/L 80g/L ddWater 至1L ddWater 至1L 至1LHcl 调节pH 至7.4-7.6WB 湿转转膜液10X 加500ul Tween-20/L 得PBST/TBST Tris 30.3g/用前稀释甘氨酸144g/L细胞破碎缓冲液ddWater 至1L Kcl(300mM)22.37g/L WB 湿转转膜液使用KH2PO4(50mM) 6.81g/L 10X Trans Buffer 100mlEDTA(1mM)0.292g/L 甲醇200ml ddWater 至1L pH8.0ddWater 700ml 10%SDS 50℃加热可促溶解IPTG （1mM/L ）1ul+1ml 菌液SDS 10g IPTG 2.38g10XddWater 至100ml 灭菌ddWater 至10ml稀释10倍后10ul+1ml 菌液10%过硫酸铵APS3周内使用过硫酸铵APS0.2g Amp （50-100ug/ml ）10X1ul+1ml 菌液ddWater 2ml Amp 1g 灭菌ddWater至10ml1.5MTris-Hcl pH 8.8Hcl 调至8.8稀释10倍后10ul+1ml 菌液Tris 18.8g ddWater 至100ml考马斯亮蓝染色液过滤后可循环使用1M Tris-Hcl pH6.8Hcl 调至6.8甲醇500ml Tris 12.12g 乙酸100ml ddWater 至100ml R-250考马斯亮蓝0.5gddWater 至1L考马斯亮蓝脱色液乙醇比例越高脱色越快3705ZZL甲醇/乙醇100-500ml 乙酸50ml ddWater 至1LTAE 50X ELISA 包被液Tris 242g 先溶解再加乙酸后定容Na2CO3 1.59g pH9.6Na2EDTA·2H2O 37.2g NaHCO3 2.93g ddWater 800ml灭菌ddWater 至1L 乙酸57.1ml ddWater 至1L 生理盐水0.9%氯化钠Nacl 9g 灭菌使用SDS 分离胶浓度分离范围ddWater 1L6%50-150kd 8%30-90kd 鲜血培养基10%20-80kd 培养基100ml 约37℃加血12%12-60kd 鲜血5ml 15%10-40kd巧克力培养基同样5%鲜血于≥90℃时加入琼脂糖凝胶琼脂糖1XTAE 1%核酸染料透析袋处理0.2g 20ml 6/8/11孔1ul 2%(W/V)碳酸氢钠+1mmol/L ED TA(pH 8.0)煮沸10min 0.3g 30ml 13孔 1.5ul 0.4g 40ml 18/25孔2ul 0.3g 20ml 1.5%1ul ddWater 清洗0.4g20ml2%1ul1mmol/LEDTA(pH 8.0)煮沸10min包涵体溶解液包涵体洗涤液磷酸钠（20mm ） 3.27g Hcl 调至pH 7.4EDTA （0.5mM ）0.146g Hcl 调至pH8.0氯化钠(300mM)17.53g Nacl （100mM ） 5.844g 咪唑（10mM ）0.68g Tris （50mM ） 6.06g 尿素（8M ）484.8g TritonX-100（1%）10mlddWater 至1L ddWater 至1L 加入后超声10min ，离心20min 0.1M 氯化钙CaCl2感受态用蛋白复性缓冲液CaCl2 1.1g 照紫外灭菌Nacl （100mM ） 5.85g Hcl调至pH8.灭菌ddWater 10mlTris （50mM ） 6.06g甘油（5-10%）50ml枸橼酸钠抗凝剂109mM/LGSH （2mM)0.6gNa3C6H5O7·2H2O 32.05g 灭菌后用，以实际分子量计算用量GSSG(0.2mM)0.1gddWater 至1L 尿素(6/4/2/0M)计算1：9血使用ddWater 至1L尿素6-4-2-0梯度分别1LELISA 终止液（2mM/L ）H2SO43705ZZL浓硫酸（98%）21.7ml酸入水中！ddWater 178.3ml。
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分子生物学实验室常用试剂配方：医药观察之我见
2. 常用试剂配方（Prescriptions of Ordinary Reagents）（高媛）. (217)
(1) PBS (217)
(2) 胰酶Trypin (217)
(3) Tris-NH4Cl (217)
(4) Running buffer (218)
(5) Washing buffer (218)
(6) 湿转液 (218)
(7) LB培养基 (218)
(8) LB培养板 (218)
PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。
主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。
配置方法：
NaCl : 320g 优级纯
Na2HPO4. 12H2O 61.44g
KCl 8g
KH2PO4 8g
三蒸水4L
烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4，细胞用需要高温灭菌，放于超净台冷却，贴上封口膜及标签。
胰酶：Trypsin 一种胰蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。
细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%，PH为7.2-7.4，储存液放在-20冻存，使用液放在4度。
Tris-NH4Cl :红细胞裂解液，是一种从人，鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，应用低渗的原理，改变红细胞渗透压，使得红细胞胀大破裂。
配置方法：
2L 体系：
NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤
Tris : 5.15g 溶于200mL ddH2O
3L体系
NH4Cl : 22.41g 溶于2700mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤
Tris : 7.725g 溶于300mL ddH2O
Running buffer: 4L （5X）
Tris: 60.6g
Gly: 288.3g
SDS: 20g
ddH2O 3.78L
Washing buffer: 4L (10X)
Tris : 48.6g
NaCl : 116.9g
Tween 20 : 40mL
ddH2O: 3.9L
湿转液：4L (10X)
Tris: 121.4g
Gly: 576.6g
ddH2O 3.57L
LB液体培养基：名字来源于英语lysogeny broth 即溶菌肉汤，应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
配置方法：
Tryptone ( 胰蛋白胨) 10g/L
Yeast (酵母) 5g/L 溶解定容，分瓶，不拧紧灭菌（A1程序）
NaCl 10g/L
封口膜封口，4度冷却使用
LB固体培养基：
Tryptone ( 胰蛋白胨) 2g/200mL
Yeast (酵母) 1g/200mL
NaCl 2g/200mL
Agar(琼脂) 3g/200mL
于锥形瓶中溶解，定容，高压灭菌（A1），紫外照射，约室温时加入氨苄和卡那霉素（1000X），均匀涂抹于平板，紫外照射凝固，封口膜封口，注明日期及抗生素抗性，放于4度保存。