【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体
高中生物单克隆抗体教案
高中生物单克隆抗体教案一、教学目标：1. 了解单克隆抗体的定义和原理。
2. 掌握单克隆抗体的制备方法。
3. 了解单克隆抗体在医学领域的应用。
二、教学重点和难点：1. 单克隆抗体的定义和原理。
2. 单克隆抗体的制备方法。
三、教学内容：1. 什么是单克隆抗体？单克隆抗体是通过克隆技术从单一免疫细胞中获得的一种抗体，具有针对单一抗原的高度特异性。
2. 单克隆抗体的原理：单克隆抗体主要是通过以下几个步骤实现的：1）从免疫细胞中选择单一细胞。
2）通过融合技术获得单克隆抗体的DNA序列。
3）在合适的宿主中转染获得大量的单克隆抗体。
3. 单克隆抗体的制备方法：1）形成克隆之前的免疫工作：包括抗原注射、制备细胞悬液等准备工作。
2）细胞融合技术：将B细胞与癌细胞融合，形成杂交瘤细胞。
3）单克隆抗体的筛选和生产：通过ELISA等方法对杂交瘤细胞进行筛选，获得单克隆抗体。
四、教学方法：1. 理论讲解：通过PPT或实物示范，介绍单克隆抗体的定义、原理和制备方法。
2. 实验演示：可进行单克隆抗体的制备实验，让学生亲自操作并体验整个制备过程。
3. 讨论交流：鼓励学生针对单克隆抗体在医学领域的应用展开讨论，提高学生的思维能力和问题解决能力。
五、教学评价：1. 单选题：什么是单克隆抗体的定义？A. 通过克隆技术获得的一种抗体B. 通过激素技术获得的一种抗体C. 通过杂交技术获得的一种抗体D. 通过转基因技术获得的一种抗体2. 判断题：以下哪个步骤不是单克隆抗体制备的关键步骤？A. 形成克隆之前的免疫工作B. 细胞融合技术C. 单克隆抗体的筛选和生产D. 抗原注射六、教学延伸：1. 邀请专业人员进行讲解：邀请生物专家或医生到讲堂上分享单克隆抗体在医学领域的应用。
2. 实地考察：组织学生参观实验室或医疗机构，让学生近距离感受单克隆抗体的制备和应用过程。
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高中生物单克隆抗体实验总结
⾼中⽣物单克隆抗体实验总结 考试是检测学⽣学习效果的重要⼿段和⽅法，考前需要做好各⽅⾯的知识储备。
下⾯是店铺为⼤家整理的⾼中⽣物单克隆抗体实验总结，希望对⼤家有所帮助! ⾼中⽣物单克隆抗体实验总结 (⼀)动物的选择 ⽬前应⽤最⼴的是⼩⽩⿏和⼤⽩⿏，尤以⼩⽩⿏为好。
就品系⽽⾔以Balb/c⼩⽩⿏应⽤最⼴，由于所有的⼩⽩⿏⾻髓瘤系均从Balb/c⼩⽩⿏系诱导出来。
Balb/c系⼩⽩⿏必须⽤纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。
⼤⽩⿏也可，能产⽣较多量的单抗体。
现在已经在⼩⿏杂交瘤的基础上，发展了⼩⿏-⼤⿏，⼩⿏-⼈以及⼈-⼈杂交瘤技术。
(⼆)免疫 ⼀般⽽⾔，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。
免疫程序、剂量和⽅法是关系到是否能得到所需要的单抗体的关键之⼀。
正常⼩⿏脾脏含有能产⽣各种不同抗体的B淋巴细胞，⼀只纯种⼩⽩⿏估计能产⽣1.0×107~5.0×107种不同的抗体。
因此⼀只正常的⼩⽩⿏的脾细胞与⼩⿏⾻髓瘤融合，只能有千万分之⼀的机会获得某⼀种特定抗体。
所以为了进步得到某种杂交瘤的机会，必须加强免疫，使产⽣特异性抗体的B淋巴细胞⼤量增加。
B淋巴细胞的不同发育阶段对获得阳性杂交瘤也有很⼤影响。
有⼈以为处在转化时期的B淋巴细胞可能更易于融合，⽽免疫以后7~8天，固然是抗体产⽣的⾼峰时期，但形成有活⼒的杂交瘤细胞的可能反⽽减少。
故⼀般以为加强免疫后的第三天应杀⿏取脾做细胞融合。
1.可溶性抗原(蛋⽩质) 以1mg/ml～5mg/ml的溶液加等量的弗⽒完全佐剂乳化，分多点⼩⿏⽪下注射，总量为0.3ml～0.6ml，间隔3～5周再同样注射⼀次，10天后，断尾取⾎⼀滴，测抗体效价，选滴度⾼的⼩⿏做融合试验。
⼀个⽉后可以经静脉(尾静脉)给予⽆佐剂抗原0.2ml～0.4ml，3～4天后，杀死⼩⿏取脾做融适⽤。
2.颗粒性抗原如抗原来源⽅便，可以不加佐剂⽽增加免疫次数，缩短间隔时间。
高中生物学选择性必修3动物细胞融合技术与单克隆抗体
新教材·生物（RJ） 选择性必修3
1．(科学思维)单克隆抗体的制备过程
(1)思考不直接用经过免疫的 B 淋巴细胞(浆细胞)获得抗体的原因是什么？
(2)连线比较单克隆抗体制备过程中几种细胞的特点。
Ⅰ.免疫过的 B 淋巴细胞 ①能无限增殖但不能产生抗体
Ⅱ.骨髓瘤细胞 ②既能无限增殖，又能产生单一抗体
Ⅲ.杂交瘤细胞 ③能增殖、分化形成浆细胞、记忆细胞
诱导融合后得到多种杂 从小鼠体内提取的 B 淋巴
交细胞，另外还有未融合 细胞有很多种，形成的杂
的细胞
交瘤细胞也有很多种
新教材·生物（RJ） 选择性必修3
项目
第一次筛选
第二次筛选
用特定的选择培养基筛选：
用多孔培养皿培养，在每个孔只有一
未融合的细胞和同种细胞
筛选
个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化
融合后形成的细胞都会死
2．诱导原理和结果 (1)诱导原理：____细__胞__膜__的__流__动__性______。 (2)诱导结果：形成__杂__交____细胞。
3．诱导动物细胞融合的常用方法
新教材·生物（RJ） 选择性必修3
(1)化学法：__P_E__G___融合法等。 (2)物理法：电__融__合__法__等。
(1)动物细胞融合过程中既有细胞膜的融合也有核的融合。( √ )
(2)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导方法有聚乙二醇
融合法、灭活病毒诱导法。( × )
(3)动物细胞融合的结果是形成单核的杂交细胞，植物体细胞杂交的结果
是得到杂种植株。( √ )
(4)动物体细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞。( × )
网络构建
新教材·生物（RJ） 选择性必修3
人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第2章 第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体
知识点一
知识点二
[归纳提升]
1.血清抗体与单克隆抗体的比较
比较项目 产生
特点
血清抗体 由B淋巴(浆)细胞分泌 产量低、纯度低、特异性差
单克隆 由杂交瘤细胞分泌 抗体
能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗 原发生特异性结合,并且可以大量制备
知识点一
知识点二
(2)单克隆抗体制备过程中的两次筛选 第一次筛选:B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经诱导剂处理后,会出现多种细胞, 如B—B细胞、瘤—瘤细胞、B—瘤细胞、B淋巴细胞、骨髓瘤细胞等,因 而要用选择培养基筛选获得杂交瘤细胞(即B—瘤细胞)。用特定的培养基 筛选,未融合的和融合的具有同种核的细胞死亡,只有杂交细胞才能生长。 第二次筛选:B淋巴细胞有多种,与骨髓瘤细胞融合后产生多种杂交瘤细 胞,因而需要对杂交瘤细胞作进一步的筛选。通常用“有限稀释法”,将杂交 瘤细胞稀释,用多孔培养板培养,使每孔中的细胞不超过一个,培养增殖后, 检测各孔上清液中细胞分泌的抗体,以确定是不是所需要的杂交瘤细胞。 (3)杂交瘤细胞具备双亲的遗传物质,不仅具有B淋巴细胞产生特异性抗 体的能力,还具有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的能力,从而可以 克服单纯B淋巴细胞不能无限增殖的缺点,大量生产单克隆抗体知。识点一 知识点二
知识点一
知识点二
2.下列关于植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,正确的是( ) A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同,诱导融合的方法 也完全相同 B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离,突破有性杂交的局限,使远缘杂交 成为可能 C.利用植物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开 辟了新途径 D.目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交,得到了同时具 有两个物种遗传物质的超级植物,并使它们的性状全部得以体现 答案:B
【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体
【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体单克隆抗体：1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。
从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
2、单克隆抗体的制备（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞（2）获得杂交瘤细胞①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
（3）克隆化培养和抗体检测（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取3、单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物。
血清抗体与单克隆抗体的比较：名称产生特点血清抗体由B淋巴一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌特异性强，灵敏度高，能大量制备知识点拨：1、融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选。
2、筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞。
3、杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
5、单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。
知识拓展：制备单克隆抗体过程中的筛选：筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。
筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。
因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。
相关高中生物知识点：植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术：1、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
单克隆抗体的作用原理高中
单克隆抗体的作用原理高中单克隆抗体的作用原理单克隆抗体是一种高度特异性的工具蛋白，能够在体外和体内结合特定的抗原分子。
它的作用实质上是识别和中和病原体或毒素，以及在治疗癌症和自身免疫性疾病中定向破坏异常细胞。
单克隆抗体是由哺乳动物免疫系统中B细胞或永生化B细胞，通过合成、扩增和筛选等多步骤制备得到的。
单克隆抗体的基本原理是利用生物学技术获得单一单克隆抗体，即从单一的抗原刺激中选择出的单一抗体，其特异性极高，可以单独与其特定抗原结合。
单克隆抗体有相对一致的结构和物理化学性质，在体外和体内的含量和功能都具有可预测性和一致性。
制备单克隆抗体的过程主要分为6个步骤：免疫原选择、免疫原特异性、淋巴细胞的筛选、克隆化、单克隆抗体的生产和特性分析。
单克隆抗体制备过程简单明了，但是多步骤，每个步骤都需要精心设计、筛选和改进才能得到高效的结果。
免疫原的选择是第一步。
首先选定免疫原，包括病原体、蛋白质、多肽、药物、植物，或其他有足够兴趣和特异性的分子。
然后，对免疫原进行物理、化学、生物学改性，增加单一抗原区域的易于识别性。
免疫原特异性是第二步。
免疫原的特异性是制备单克隆抗体所需的关键。
在该步骤中，免疫原被注入到哺乳动物体内，刺激免疫系统产生抗体。
随后，持续注射，增加免疫原的特异性。
淋巴细胞的筛选是第三步。
这一步非常关键，它从免疫动物体内的淋巴细胞中筛选出具有特异性的细胞。
这些细胞通常扩增和分化成为细胞瘤细胞（Myeloma Cell）。
被称为细胞瘤细胞的细胞可以制备单克隆抗体，但是它自身不会产生抗体，因为它是无生命的，并且无法扩增。
克隆化是第四步。
在该步骤中，细胞瘤细胞和特异性淋巴细胞被融合，合并成为单独的单克隆细胞。
这些单克隆细胞通过限制性稀释法分离和分化，并形成细胞瘤。
这些细胞瘤细胞能够生产大量的单种单克隆抗体，以免费供应市场或提供给研究者继续研究。
单克隆抗体的生产是第五步。
生产单克隆抗体需要很多不同的技术。
这些技术包括培养细胞瘤细胞，并将它们移至生产培养基中进行生长和扩增。
高中生物抗体知识点总结大全
高中生物抗体知识点总结大全抗体知识点概述一、抗体的基本概念抗体，也称为免疫球蛋白（Immunoglobulins, Ig），是由B细胞分化而来的浆细胞产生的一种特殊蛋白质。
它们在人体的免疫系统中发挥着至关重要的作用，主要是通过识别和中和外来的病原体，如细菌、病毒等，以保护身体免受感染。
二、抗体的结构抗体分子由四条多肽链组成，包括两条重链和两条轻链，通过二硫键连接形成Y字形结构。
在Y字形的两个臂端，存在一个可变区和一个恒定区。
可变区使得抗体能够特异性地识别抗原，而恒定区则参与免疫效应，如激活补体系统和与细胞表面的Fc受体结合。
三、抗体的分类根据恒定区的不同，抗体可以分为五大类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。
每一类抗体都有其独特的生物学功能和表达模式。
例如，IgA主要存在于粘膜表面，保护粘膜免受病原体侵害；IgE与过敏反应有关；IgG是血清中最主要的抗体，也是唯一能够穿过胎盘传递给胎儿的抗体。
四、抗体的产生抗体的产生是适应性免疫反应的一部分。
当病原体侵入人体时，B细胞通过其表面的B细胞受体（BCR）识别并结合特定的抗原。
随后，B细胞被激活并开始增殖，分化成浆细胞，产生大量抗体。
同时，部分B细胞成为记忆B细胞，长期存活于体内，为未来遇到相同抗原时提供快速反应。
五、抗体的功能抗体的主要功能包括中和、吞噬促进、补体激活和抗体依赖性细胞毒性（ADCC）。
中和作用是指抗体直接与病原体或其毒素结合，阻止病原体侵入宿主细胞。
吞噬促进是指抗体桥接病原体和吞噬细胞，促进病原体的吞噬和清除。
补体激活是指抗体通过与补体系统的相互作用，增强免疫反应。
ADCC是指抗体介导的NK细胞对靶细胞的杀伤。
六、抗体的应用抗体在医学领域有着广泛的应用，包括诊断、治疗和研究。
在诊断方面，抗体可以用于检测病原体或特定生物标志物的存在。
在治疗方面，单克隆抗体可以针对性地治疗某些疾病，如自身免疫疾病和癌症。
在研究中，抗体作为工具可以用于检测和定量蛋白质表达。
高中生物：细胞工程知识点
高中生物：细胞工程知识点（一）克隆1.克隆clone：无性繁殖系（只由一个模板分子、母细胞或母体直接形成新一代…）2.克隆技术cloning：从众多基因或细胞群体中通过无性繁殖和选择获得目的基因或特定类型细胞的操作技术3.内容：（1）分子水平：基因克隆即目的基因的复制（受体细胞的无性繁殖）、分离（特定基因探针选择、钓取目的基因）过程（2）细胞水平：杂交瘤制备单克隆抗体（3）个体水平：不通过两性细胞的结合，从一个单一（体）细胞繁殖出生物个体——胚胎细胞克隆以胚胎/卵细胞作为供体、利用核移植，不是严格意义上的动物个体克隆4.条件：（1）理论条件：细胞全能性/有发育成完整新个体的全套遗传物质（根本原因）（2）基本条件：①具有包含物种完整基因组的细胞核的活细胞②具有能有效调控细胞核发育的细胞质物质 e.g去核卵细胞③完成胚胎发育的必要的环境条件 e.g胚胎早期培养环境/子宫5.非正面影响：丰富生物多样性，促进生物进化，维护生态平衡（二）植物克隆1.全能性表达的难易程度：(1)受精卵＞生殖细胞＞胚胎/全能干细胞＞多能（干）细胞＞专能（干）细胞＞体细胞；PS生殖细胞在一定刺激下染色体可加倍；一些动物存在孤雌生殖(2)植物细胞＞动物细胞；低等动物＞高等动物PS不同种类植物或同种植物的不同基因型个体间全能性的表达程度大不相同2.植物组织培养（植物克隆的技术基础）（1）理论基础：植物细胞全能性，即植物体的每个生活细胞都具有遗传上的全能性，因而都具有发育成完整植株的潜能（2）过程：①离体植物细胞、组织或器官（外植体）→获得愈伤组织→诱导形成试管苗→新植株PS外植体选取形成层(分生组织)部分易于诱导形成愈伤组织A.培养条件：首先是离体培养(生物体内细胞中基因在特定时间和空间条件下选择性表达，细胞分化为不同组织、器官，故无法表现出全能性)半/固体培养基（固体为例）a.营养物质：水、无机盐、蔗糖、维生素、有机添加剂(氨基酸、琼脂凝固剂等)b.植物激素/生长调节剂（适当浓度配比诱导分化出芽/根的顶端分生组织/花）——CTK中等量IAA少量诱导脱分化，CTK、IAA比例合适诱导根芽分化c.无菌条件（外植体70%酒精消毒、器械高温蒸汽灭菌）——杂菌争夺产毒d.适宜的pH、温度和渗透压B.光照：若外植体是（带叶）茎段，不经历脱分化再分化，组培全过程均需要光照；若外植体是非光合作用部位（如胡萝卜块根），再分化成芽后光照C.试管苗移栽前需炼苗（草炭土/蛭石，逐渐降湿）D.愈伤组织：排列疏松的高度液泡化的活的薄壁细胞团②外植体→愈伤组织→摇床液体悬浮培养分散成单细胞→胚状体→人工种子PS 单细胞植物克隆，类似受精卵的卵裂、分化、器官发生、形态建成单细胞：细胞质丰富、液泡小、细胞核大（胚性细胞特征）③酶解细胞壁→原生质体培养→新植株（2）用途：微型繁殖、制造人工种子(胚状体阶段)、单倍体育种、作物脱毒（植物分生组织细胞，分裂旺盛病毒极少Cf抗病毒）、在培养基中加入不同浓度的氯化钠溶液，可诱发和筛选抗盐植株细胞产物工厂化生产（愈伤组织阶段已可，试管培养苗、细胞培养反应器也可）(3)长期培养后的全能性下降原因：染色体畸变、核变异、非整倍体产生；细胞或组织中激素平衡被打破；细胞对外源生长物质的敏感性改变；形成缺乏成胚性的细胞系——植株在多次继代培养后，会逐渐丧失细胞全能性的表达能力3.原生质体融合/植物体细胞杂交（不同植物）获得原生质体：在甘露醇溶液环境（较高渗透压）中用纤维素酶和果胶酶混合液处理用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，用等渗溶液洗涤；检验原生质体是否符合要求：依据渗透作用原理，采用低渗胀破法（见比较表格）4.植物细胞工程：培养植物细胞（包括原生质体），借用基因工程技术将外源DNA导入受体细胞或通过细胞融合将不同源的遗传物质重新组合，再通过细胞培养，获得具有特定性状的植株C细胞工程：细胞培养和细胞融合（若基因型不同为细胞杂交）——基因定位：利用细胞杂交中染色体丢失与特定基因产物的对应关系（三）动物细胞工程1. 动物细胞培养指明“动物”细胞培养（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。
高中生物 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体难点剖析 新人教版选修
难点剖析知识·巧学一、动物细胞融合1.动物细胞融合的概念：是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
2.动物细胞融合的原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。
3.用灭活病毒诱导动物细胞融合过程：4.动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
辨析比较 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手段 用 法 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 离心、电刺激、振动、显微操作、聚乙二醇等试剂诱导克服了远缘杂交的不亲和性，获得杂种植株动物细胞融合 细胞膜的流动性 使细胞分散后诱导细胞融合 除应用植物细胞杂交手段外，再加灭活的病毒诱导制备单克隆抗体的技术之一二、单克隆抗体1.单克隆抗体的制备（1）抗体：B 淋巴细胞产生。
主要成分：球蛋白，具有特异性，从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
（2）单克隆抗体的制备过程：−−→−→融合淋巴细胞免股小鼠培养骨髓瘤细胞B 多种杂交细胞→在具有筛选作用的培养基上培养→克隆筛选出的杂交细胞→将不同种杂交细胞分开，并克隆专一抗体，检验阳性细胞→注射到小鼠体内或体外培养→获得单克隆抗体。
（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量迅速繁殖，又能产生专一抗体。
（4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，产量大。
2.单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并跟抗原特异性的结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
（2）用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其他疾病。
知识拓展 如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。
高中生物单克隆抗体制备(共38张PPT)
1.1动物细胞融合的概念
鼠B淋巴细胞 鼠骨髓瘤细胞
人工诱导
动物细胞融合（细胞杂交）
是指（在一定的条件下）两
个或多个细胞结合形成一个
细胞（该单核细胞称为杂交
细胞）的过程。
杂交瘤细胞
问题：1、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？ 2、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
3.若细胞两两融合后， 有几种融合情况？
选择性培养基 筛选1 克隆化
多种杂 交细胞
抗原-抗体 杂交法
筛选2（有限稀释）
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
4.第一次筛选出的杂交瘤
细胞为何需进行克隆化培
选择性培养基 筛选1
养和专一抗体检测？
多种杂
（ 特异性强、灵敏度高，可大量制备）
（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 迅速（ 大量增殖 ）特点，又具备淋巴细胞 的（ 分泌专一抗体）特点，经过选择性培养 的杂交瘤细胞，还需进行（ 克隆化培养 ） 和（ 抗体检测 ），经多次筛选，就可获得足
够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂 交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或小 鼠腹腔内增殖，从（ 细胞培养液 ）或 （ 小鼠的腹水 ）中，就可以提取出大量 的单克隆抗体了。
一个效应bb细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞动物细胞培养技术44单克隆抗体的制备方案动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体又能大量繁殖的细胞一个骨髓瘤细胞能无限增殖制备单克隆抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验5单克隆抗体制备过程步骤注射抗原效应bb细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基筛选11抗原抗体杂交法克隆化单克隆抗体筛选22有限稀释1
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【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体
单克隆抗体：
1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。
从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
2、单克隆抗体的制备
（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞
（2）获得杂交瘤细胞
①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；
②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
（3）克隆化培养和抗体检测
（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖
（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取
3、单克隆抗体的应用
(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物。
血清抗体与单克隆抗体的比较：
名称
产生
特点
血清抗体
由B淋巴
一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差
单克隆抗体
由杂交瘤细胞分泌
特异性强，灵敏度高，能大量制备
知识点拨：
1、融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要
进行筛选。
2、筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞。
3、杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
5、单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一
定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。
知识拓展：
制备单克隆抗体过程中的筛选：筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB
融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。
筛选是将产生特定
抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。
因为从体内取免疫过的B
淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交
瘤细胞。
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知识点：植物体细胞杂交技术
植物体细胞杂交技术：
1、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成
杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
2、过程：
(1)诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。
化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。
(2)细胞融合完成的标志是新的细胞壁的生成。
(3)植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞就结束。
(4)杂种植株的特征：具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的
遗传物质。
3、意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。
知识点拨：
1、体细胞杂交即两个细胞融合成一个细胞，不管染色体数、基因组数还是染色体组
数都采用直接相加的方法。
若一植物细胞含有2Ⅳ条染色体，2个染色体组，基因型为Aabb，另一植物细胞含有2M条染色体，2 个染色体组，其基因型为ccDd，则新植株应为
四倍体，其体细胞中染色体数为2N+2M，基因型为AabbccDd。
2、用该过程培育新品种的
过程中，遗传物质的传递不遵循孟德尔的遗传定律。
只有有性生殖进行减数分裂过程中才
符合遗传定律，而体细胞杂交没有此过程。
3、植物体细胞杂交克服远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合
范围。
．
知识拓展：
1、植物体细胞杂交包括植物体细胞（原生质体）融合和杂种细胞培育成一个新植株
的过程。
融合的细胞有多种类型，必须经过筛选，然后才能培育出我们所需要的杂种植株。
2、植物体细胞杂交过程中无有性生殖细胞的结合，属于无性生殖。
3、从杂种植株的染色体组成上看，染色体数目增加，属于染色体数目的变异。
相关高中生物知识点：动物细胞的融合
动物细胞的融合：
1、动物细胞融合：两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具
有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
2、诱导方法：化学法（聚乙二醇），灭活的病毒，物理法（离心、振动、电激等）。
3、动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。
动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：
细胞工程
植物体细胞杂交
动物细胞融合
理论基础
细胞的全能性、细胞膜的流动性
细胞增殖、细胞膜的流动性
融合前处理
酶解法去除细胞壁
（纤维素酶、果胶酶）
注射特定抗原，免疫处理正常小鼠
诱导手段
物理法：离心、振动、电激
化学法：聚乙二醇（PEG）
物理法：离心、振动、电激
化学法：聚乙二醇
生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病毒）诱导过程
第一步：原生质体的制备（酶解法）
第二步：原生质体融合（物、化法）
第三步：杂种细胞的筛选和培养
第四步：杂种植株的诱导与鉴定
正常小鼠免疫处理动物细胞的融合（物、化、生法）杂交瘤细胞的筛
选与培养专一抗体检验阳性细胞培
养单克隆抗体的提纯
用途和意义
克服远缘杂交的不亲和障碍，
大大扩展杂交的亲本组合范围
应用：白菜――甘蓝等杂种植株
（1）制备单克隆抗体
（2）诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症
知识点拨：
动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。
知识拓展：
1、在诱导剂的作用下进行细胞的诱导融合，形成的杂种细胞有三种：AA型、BB型、AB型。
只有AB型才是我们所需要的杂种细胞，所以需要用选择性培养基进行筛选。
2、相比较植物体细胞杂交，动物细胞融合特有的诱导方式是用灭活的病毒处理，其他物理化学诱导融合的方法与植物体细胞杂交过程中原生质体融合方法相同。
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