结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长特征
5.50结核分枝杆菌生物学形状
③蜡质D(wax D):可激发迟发型超敏反应。 ④硫酸脑苷脂(sulfatides): 能抑制巨噬细胞吞噬体与溶酶体融合。
抑制吞噬溶酶体融合
3. 菌体成分及作用 (2)蛋白质： 结核菌素:引起迟发型
超敏反应 ★
超敏反应
(3)多糖:中性粒细胞增多 (4)核酸:rRNA,特异性细胞免疫 (5)荚膜
结核分枝杆菌 Mycobacterium tuberculosis
郭霍 我国结核杆菌感染人数居世界第二位
结核分枝杆菌1 ——生物学性状
学习内容
1. 形态染色 2. 培养特点 3. 菌体成分及作用 4. 抵抗力 5. 变异性
1. 形态染色
细长略弯曲,抗酸阳性 ★
结核分枝杆菌
抗酸染色
2. 培养特点 ★
馋,懒,丑 馋:营养要求高(罗氏培养基) 懒:生长缓慢 丑:菌落干燥粗糙
罗氏培养基
菌落
3. 菌体成分及作用
(1)脂质： ★
①磷脂:刺激单核细胞增生,抑 制蛋白酶分解,使病灶组织溶解 不完全,形成结核结节和干酪样 坏死。 ②索状因子:破坏线粒体膜, 抑制白细胞游走,引起慢分及作用
4. 变异性 易产生形态,毒力,耐药变异
Assignment
1. 结核分枝杆菌为何生长缓慢？ 2. 该菌菌落为何粗糙？菌落粗糙程度与细 菌的毒力之间是否有关联？
真诚感谢上述所用图片的所有作者！！
Thanks for your attention！
4. 抵抗力 三耐
四怕
• 耐干燥 • 耐酸碱 • 耐一般消毒剂
• 怕湿热 • 怕紫外线 • 怕乙醇 • 怕抗痨药
5. 变异性
• 毒力变异： 牛结核杆菌经13年230代培 养,制成卡介苗BCG(减毒活
结核分枝杆菌【17页】
4.结果与分析
红肿硬结直径
（1）阳性反应（＞5mm）-- 机体已感染过结核分枝杆 菌或卡介苗接种成功
（2）强阳性反应（≥15mm）-- 可能有活动性结核,应进 一步做其他检查。
（3）阴性反应（＜5mm）
1）未感染过结核分枝杆菌
2）感染初期
3）严重结核病患者
4）患有其他疾病细胞，如麻疹等导致的细胞免疫功 能低下者；艾滋病；
• 专性需氧 • 生长缓慢(18-24h/代) • 营养要求高
罗氏培养基：乳白色或米黄色，干燥、 表面粗糙呈颗粒样或菜花状菌落。
3.抵抗力
巴氏消毒法能杀灭 结核分枝杆菌吗？
四怕： • 怕湿热 • 怕紫外线 • 怕乙醇 • 怕抗痨药物
四不怕： 不怕干燥 不怕酸碱 不怕碱性染料 不怕青霉素
四、防治原则
1.预防： 卡介苗，结核菌素皮 内试验 2.治疗： 原则:早期 适量 联合 全程 规律 常用药物: 有异烟肼、利福平、链 霉素、乙胺丁醇等。
小结
• 生物学特性：细长略弯 分枝状排列 需氧 生长缓慢 四怕四不怕
• 致病性：脂质 蛋白质 荚膜 • 免疫性：结核菌素试验 • 防治原则：卡介苗 抗痨药物
林黛玉
态生两靥之愁， 娇袭一身之病。
泪光点点， 娇喘微微。 闲静时如姣花照水，
行动时如弱柳扶风。
• 林黛玉到底得的是什么 病？
肺结核
• 结核病是由哪个 致病菌 引起的呢？
结核分枝杆菌
一、生物学性状
1. 形态与染色 • 细长,稍有弯曲 • 抗酸染色红色 • 分枝状排列或聚集成团 • 无鞭毛，无芽胞，有荚膜
4.变异性
• 毒力变异：
– 卡介苗（BCG）：1908年，Calmette和 Guerin将有毒的牛分枝杆菌培养在含甘油、胆 汁、马铃薯的培养基中，经13年230次传代而 获得的减毒活疫苗株，用于预防结核病。
医学微生物学：结核分枝杆菌
结核病
tuberculosisTB
肺部感染
原发感染 原发后感染
肺外感染 ➢传播途径 • 呼吸道 • 消化道 • 皮肤损伤部位等
进入肺泡
肺泡巨噬细胞
炎症-原发灶
淋巴管（炎）肺门淋巴 结肿大
原发综合征
外源性或内源性 原发后感染
90%以上 钙化自愈
肺结核典型临床症状 发热、乏力、咳痰、 咳血、胸水、腹水
第二节 麻风分枝杆菌
（Mycobacteriu leprae）
生物学性状
形态染色：与结核分枝杆菌相似 培养特性：典型胞内菌，不能人工培养 动物模型：犰狳（qiuyu） 抵抗力：较强，耐干燥、耐低温 传播途径：呼吸道和密切接触 潜伏期：数年~数十年
致病性与免疫性
麻风分 枝杆菌 侵入
隐性感 感染 染多见 排出 发病（神经和皮肤）
磷脂 分枝菌酸 蜡质D 硫酸脑苷脂 硫酸多酰基化海藻糖
多糖
局部病灶细胞浸润
所致疾病
结核病（tuberculosis，TB） ➢ 传播途径：呼吸道、消化道、皮肤损伤部位等 ➢ 基本病变：结核结节
• 结核（tubercle）源自 拉丁文tuberculum，意 为“小的肿胀”
• 干酪样坏死
所致疾病
荚膜
粘附,入侵 抗吞噬
蛋白质
迟发型超敏反应 结核结节的形成
脂质：60%
磷脂 分枝菌酸 蜡质D 硫酸脑苷脂 硫酸多酰基化海藻糖
多糖
局部病灶细胞浸润
脂质
➢分枝菌酸 与抗酸性有关 索状因子=分枝菌酸+海藻 糖 • 破坏线粒体膜及酶类 • 抑制白细胞游走 • 引起慢性肉芽肿 ➢蜡 质 D= 分 枝 菌 酸 + 肽 糖 脂 • 佐剂作用 • 引起迟发型超敏反应
结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较_咸爱金
结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较_咸爱金结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较咸爱金摘要目的 :探讨结核分枝杆菌在改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基上阳性分离培养情况及形成菌落天数情况。
方法 :对 100例新登记肺结核患者的痰液标本经去污染处理 ,接种在自制改良罗氏、丙酮酸钠培养基上。
接种后在 37ħ孵箱内培养 8周 , 每周观察一次记录菌落生长情况及污染情况。
每份标本用改良罗氏培养基2支 , 丙酮酸钠培养基 2支。
结果 :结核分枝杆菌在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上均生长 20例 , 在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上均不生长 70例。
结核分枝杆菌在改良罗氏培养基上生长而在丙酮酸钠培养基上不生长 6例 , 在丙酮酸钠培养基上生长 , 而在改良罗氏培养基上不生长 4例。
结核分枝杆菌改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基在形成典型菌落数上无差异 (t =0. 57,P ＞0. 01) 。
结论 :分枝杆菌分离培养检查法 , 是结核病确诊最可靠的方法。
关键词结核分枝杆菌 ; 改良罗氏培养基 ; 丙酮酸钠培养基中图分类号 :Ｒ446文献标识码 :B 文章编号 :2095－1434. 2013. 02. 038作者单位 :吉林省汪清县结核病防治所 , 汪清 133200结核病是长期严重危害人类健康的慢性传染病 , 目前已在全球范围内造成严重的社会和经济问题。
结核分枝杆菌是引起人类结核病的主要病原体 , 此外牛分枝杆菌引起牛结核病外 , 少数人类结核病也由其引起。
分离培养结核分枝杆菌的培养基有改良罗氏培养基、丙酮酸钠培养基、酸性罗氏培养基、小川培养基四种 , 我们常用的培养基有改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基。
为了观察结核分枝杆菌在改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基上的阳性分离培养情况及形成菌落天数情况 , 对我所新登记 100例肺结核病人的痰液标本进行了培养 ,其培养结果分析如下。
1材料与方法1. 1实验材料实验标本来自本所新登记的肺结核患者的痰液 , 共 100例。
临床微生物学检验模拟题含答案
临床微生物学检验模拟题含答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.不属于细菌合成代谢产物的是(2016 年中级师)A、细菌素B、热原质C、抗毒素D、抗生素E、色素正确答案：C2.某一脓标本,涂片革兰染色镜检:革兰阳性球菌,直径1μm 左右,呈单个、成对或短链排列;血琼脂平板分离培养:菌落表面光滑湿润,圆形,边缘整齐。
黄色,凸起,直径 1~1.5mm,菌落周围有完全透明的溶血环;菌落涂片革兰染色镜检:革兰阳性球菌,呈单个、双、短链和葡萄串状排列,以葡萄串状排列为主;生化试验:触酶阳性,血浆凝固酶(试管法)阳性,发酵葡萄糖产酸,发酵甘露醇产酸,对新生霉素敏感。
应报告(2019 年中级师)(2012 初级师)(2020初级士)A、家畜葡萄球菌生长B、表皮葡萄球菌生长C、腐生葡萄球菌生长D、中间型葡萄球菌生长E、金黄色葡萄球菌生长正确答案：E3.细菌通过分泌何种酶,将菌体外的多糖分解为单糖(2014 年初级士)A、胞外酶B、氧化酶C、过氧化物酶D、凝固酶E、胞内酶正确答案：A4.下列符合革兰阴性杆菌尿路感染的诊断标准是(2014 年中级师)A、106cfu/LB、105cfu/LC、108cfu/LD、107cfu/LE、104cfu/L正确答案：B5.为了破坏沙门菌属的表面 Vi 抗原,通常采用下列方法中的(2019 年中级师)A、加热56℃,5 分钟B、0.4%甲醛处理C、煮沸D、紫外灯照射 1 小时E、冷冻 1 小时正确答案：C6.革兰染色液中稀释复红的作用是(2011 年初级士)A、脱色B、媒染C、固定D、初染E、复染正确答案：E7.链球菌与葡萄球菌可用于属间初步鉴别的试验是(2012 年中级师)A、葡萄糖发酵试验B、触酶试验C、血浆凝固酶试验D、蔗糖氧化试验E、氧化酶试验正确答案：B8.对铜绿假单胞菌生化特征的描述,错误的是(2016 年初级师)A、不产生吲哚B、氧化酶阳性C、不利用枸橼酸盐D、氧化分解葡萄糖E、还原硝酸盐正确答案：C9.以神经毒素致病的细菌是(2018 年中级师)A、伤寒沙门菌B、肉毒杆菌C、霍乱弧菌D、脑膜炎奈瑟菌E、乙型溶血性链球菌正确答案：B10.关于结核分枝杆菌的特性,下列哪项是错误的(2019 年中级师)A、营养要求高B、专性需氧C、生长快,3~12h 能形成肉眼可见菌落D、CO2 可刺激生长E、菌落呈颗粒状正确答案：C11.甲基红试验阳性结果为(2015/2017 年初级士)A、蓝色B、黄色C、绿色D、红色E、黑色正确答案：D12.下列哪种嗜血杆菌生长时,既需要 X 因子,又需要 V 因子(2015 年初级士)A、副流感嗜血杆菌B、流感嗜血杆菌C、杜克嗜血杆菌D、埃及嗜血杆菌E、嗜沫嗜血杆菌正确答案：B13.患者女,70 岁,因急性支气管炎发作入院,抗生素治疗后症状缓解,7 天后出现腹泻,粪便革兰染色镜检发现大量革兰染色阳性球菌,其中含少量的革兰阴性杆菌,最可能的致病菌是(2020 年初级师)A、消化链球菌B、痢疾杆菌C、耐药性的金黄色葡萄球菌D、粪肠球菌E、霍乱弧菌正确答案：A14.下列不属于医院感染特点的是(2011 年中级师)A、医院感染加大患者、家庭、社会经济支出B、医院感染的发生与医院的建立相依并存C、医院感染造成患者住院日的延长D、医院感染的病原学诊断必须依据柯赫原则E、医院感染自身特点随医疗技术的发展而改变正确答案：D15.下列细菌中神奈川试验阳性的是(2014 年初级士)A、产单核李斯特菌B、副溶血性弧菌C、鼠疫耶尔森菌D、奇异变形杆菌E、铜绿假单胞菌正确答案：B16.患者男,36 岁。
结核分枝杆菌
（1）原发感染
结核分枝杆菌 侵入肺泡 被肺泡中 吞噬细胞吞噬 在吞噬细胞内繁殖 导致 巨噬细胞裂解释放出的细菌 释放出大量细 菌在肺泡内引起渗出性炎症即为原发性灶。细菌 随淋巴管到达肺门淋巴结，引起淋巴结肿大称原 发综合征 感染3-6周，机体产生特异性细胞免疫，同 时也产生迟发超敏反应
机体免疫力低下时，原发感染灶恶化，结核 分枝杆菌经气管淋巴道或血流播散，形成全身性 粟粒性结核 。 当机体抵抗力强时，使感染灶形成结核结节。 淋巴结病灶逐渐纤维化和钙化，不治自愈。但病 灶内常有一定量的细菌长期潜伏，不断刺激机体 产生免疫。也可成为以后内源性感染的来源
2 肺外感染 结核杆菌可经血液循环引起肺外感染， 如脑、肾、结核，痰被咽入可引起肠结核、 结核性腹膜炎等。一般认为血中播散的大 多是L细菌
(三) 免疫性 人类对结核分枝杆菌的感染率甚高，但发病率 不高。这表明人体对结核分枝杆菌有相当强的 免疫力。 （1）结核的免疫为有菌免疫或称传染性免疫 。这种免疫系指结核分枝杆菌(或BCG) 进入机 体后使机体对细菌再次入侵有免疫力；而当细 菌或其成分从体内彻底消失后机体的免疫力也 随之消失。遗传因素决定对结核病的易感染性 ， HLA-Bw15为易感个体。
（三）抵抗力 结核分枝杆菌因细胞壁含有大量脂类，故对 理化因素抵抗力较强。耐干燥，在干燥的痰内 可存活6-8个月。含有结核分枝杆菌痰液的尘埃 经8-10d仍有传染性。此菌对化学消毒剂的抵抗 力也较一般细菌强，在3%HCl或6%H2SO4中不被杀 死。因此常用于处理有杂菌污染的检材，以便 进行分离培养。对湿热敏感，60℃30min可杀死 细菌；在70%-75%乙醇中数分钟即被杀死 ，对 紫外线敏感
结核分枝杆菌的重要生物学特性
结核分枝杆菌的重要生物学特性
形态：细长或略带弯曲；培养基中可呈球状或丝状；陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状排列。
显微镜下常堆积成团、成束，排列无序，也有呈链状、索状。
染色：G+。
抗酸染色红色。
金胺“O”染色菌体可发荧光。
特殊结构：无鞭毛和芽胞，近年发现有荚膜。
·培养特性
营养要求：较高。
气体环境：专性需氧。
温度环境：35～40℃，最适35～37℃；pH6.5～6.8。
特殊：还需适当的湿度。
兼性胞内寄生菌。
少量铁质可使细菌产生分枝杆菌生长素，促进生长。
菌落特点：
生长缓慢，最快的分裂速度为18h一代。
固体培养基（罗氏培养基）：需2～6周才能长出菌落。
菌落呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。
液体培养基：生长较快，形成菌膜。
有毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长。
选择培养基：常用选择剂有结晶紫、孔雀绿、青霉素、萘啶酸、林可霉素、多黏菌素B等。
结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长特征
结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长特征
结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长特征如下：
1. 生长速度缓慢：结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长速度比较缓慢，通常需要2-3周才能形成可见的菌落。
2. 菌落形态：结核分枝杆菌在罗氏培养基上形成的菌落通常呈现圆形、凸起或平整的外观，菌落表面光滑，颜色为淡黄色至黄色。
3. 非透明性：结核分枝杆菌在罗氏培养基上形成的菌落不具有透明性，即不会透过菌落看到培养基的背景。
4. 酸性反应：结核分枝杆菌在罗氏培养基上生长时，会产生酸性代谢产物，导致培养基逐渐变成黄色。
5. 低营养要求：结核分枝杆菌对于营养素的需求相对较低，因此罗氏培养基是一种较为适合分离和培养结核分枝杆菌的培养基。
14.结核分枝杆菌
三、结核杆菌的免疫性
三、结核杆菌的免疫性
三、结核杆菌的免疫性
病例讨论
查 体 ： T38℃ ， BP120/70mm Hg，P80次/分，R16次/分。患者非 急性病病容。右上肺叶可闻及啰音。 叩诊无浊音。胸部X光：右上肺叶后 段浸润提示空洞。
病例讨论
问题： 1. 应做哪二项痰液检查，才能 提供有关疾病病原的快速诊断？ 病程记录：痰的革兰染色法显 示，无优势细菌的混合菌群。抗酸 染色法显示有大量细长、粉红色杆 菌。痰标本送去做分离培养。
机体致敏
对结核菌素产生迟发型超敏反应
蛋白质也可刺激机体产生相应抗体。
二、结核杆菌的致病性
多糖（与蜡质结合）： 中性粒细胞增多，引起局部病灶 细胞浸润。
核酸（核糖体核糖核酸rRNA）： 刺激机体产生特异性细胞免疫。
二、结核杆菌的致病性
荚膜 与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用） 致 病 脂质 含多种酶（分解利用营养物质）
超敏反应与koch现象三结核杆菌的免疫性第1次1014天结菌健康豚鼠局部皮下注射出现溃疡不易痊愈附近淋巴结肿大扩散全身多数豚鼠死亡原发感染特点三结核杆菌的免疫性第2次12天结菌存活豚鼠局部较皮下注射浅溃疡易痊愈附近淋巴结不肿大结菌不扩散全身豚鼠无死亡原发后感染特点三结核杆菌的免疫性以前感染过或免疫豚鼠正常豚鼠2448小时1014天局部红肿浅溃疡局部红肿溃疡不扩散脱落后自行愈合坏死经久不愈有毒tb菌全身扩散皮下郭霍现象三结核杆菌的免疫性大剂量结菌存活豚鼠局部和皮下注射全身严重的迟发型超敏反应豚鼠死亡严重而恶化的肺结核三结核杆菌的免疫性m活化rrnat细胞亚群递呈il2抑制m内结菌繁殖等ifnr活化m杀灭结菌免疫反应与超敏反应同时存在三结核杆菌的免疫性结核菌素m活化另一亚群t细胞递呈蜡质dil1抑制m移动等il6炎症反应增强m内结菌繁殖免疫反应与超敏反应同时存在四微生物学检查法1痰液标本的抗酸染色法镜检2分离培养应考虑作细菌l型培养3pcr五防治原则1
微生物中细菌的培养形状
1、白喉棒状杆菌（营养要求高）吕氏培养基——异染颗粒明显亚碲酸钾血平板——黑色或灰黑色菌落液体培养基——膜状生长麦康凯——平板不生长2、产单核李斯特菌）血平板——狭窄β-溶血环的菌落半固体培养基——细菌自穿刺线向四周蔓延生长，呈倒伞状3、红斑丹毒斯菌三糖铁培养基上——产H2S明胶穿刺培养——”试管刷”状生长4、炭疽芽胞杆菌培养后竹节状营养琼脂培养基上——灰色扁平粗糙菌边缘呈卷发状液体培养基——絮状沉淀物、液体澄清无菌膜5、蜡样芽胞杆菌营养琼脂培养基上——沿画线蔓延扩展成片如同白蜡血平板——毛玻璃样、草绿色溶血环或透明溶血环卵黄培养基上——卵磷脂分解形成白色沉淀环（乳光反应）液体培养基——生长均匀混浊，有菌毛6、结核分枝杆菌（专性需氧、营养要求高、生长缓慢）在不含表面活性剂的液体培养基上——菌膜状生长有毒菌株在液体培养基上——索状生长改良罗氏培养基——菌落粗糙‘菜花状’7、星形诺卡菌（专型需氧菌、缓慢生长）液体培养基——膜状生长8、破伤风梭菌（严格厌氧）9、血平板上——薄膜状生长庖肉培养基——微变黑，产少量气体10、肉毒梭菌（严格厌氧）网球拍状血平板——β-溶血环卵黄琼脂平板——混浊圈11、艰难梭菌（严格厌氧）CCFA平板上生长的菌落——紫外线照射下黄绿色荧光12、幽门螺杆菌（微需氧）镜检——鱼群样排列13、鲍特菌（严格需氧）鲍-金培养基——水银滴状的β-溶血14嗜血杆菌（营养要求特殊）和金黄色葡萄球菌一起培养——卫星现象15、产碱杆菌（专性需氧）肉汤培养基——均匀混浊、有菌膜、管底沉淀含蛋白动的肉汤中——产氨16铜绿假单胞菌（严格需要）血琼脂平板上——透明溶血环17、霍乱弧菌镜检——鱼群样排列碱性琼脂平板——水滴状亚碲酸钾血平板——黑色或灰黑色菌落血平板——β-溶血环（Eltor型）18、鼠疫耶尔森肉汤培养基中——开始混浊生长；24小时后沉淀生长；48小时后形成菌膜；摇动后菌膜呈钟乳石状下沉。
19、变形杆菌波纹薄膜状生长（迁徙生长)20、克雷伯菌用接种环蘸菌落可拉起长丝。
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结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长特征
结核分枝杆菌是一种革兰氏阳性细菌，是导致结核病的病原体。
在罗氏培养基上，结核分枝杆菌的生长特征具有一定的特殊性。
结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长速度较慢。
一般情况下，经过一周左右的时间，结核分枝杆菌才能开始显现出生长的迹象。
这是因为结核分枝杆菌的生长速度较慢，需要一定时间才能适应罗氏培养基的环境。
结核分枝杆菌在罗氏培养基上的形态特征也具有一定的特殊性。
在罗氏培养基上，结核分枝杆菌的菌落呈现出一种黄色或橙色的颜色，这是由于结核分枝杆菌产生的胡萝卜素所致。
此外，结核分枝杆菌的菌落通常呈现出一种粘稠的质地，而且在生长过程中会逐渐变硬，这也是该细菌独特的特征之一。
结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长需要一定的氧气。
由于该细菌是兼性厌氧菌，因此在罗氏培养基上的生长需要一定的氧气供应。
如果缺乏氧气，结核分枝杆菌的生长速度会受到影响，并且可能会导致菌落的形态不规则。
结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长还具有一定的耐酸性。
这是由于结核分枝杆菌细胞壁中含有大量的脂质物质，并且其菌落中还会产生一定量的酸性物质。
这些特殊的特征使得结核分枝杆菌能够在罗氏培养基等低pH值环境中生长繁殖，而其他细菌则难以生存。
结核分枝杆菌在罗氏培养基上的生长特征具有一定的特殊性，包括生长速度较慢、菌落呈现黄色或橙色、质地粘稠、需要氧气供应以及具有一定的耐酸性等特点。
这些特征有助于识别和检测结核分枝杆菌，为结核病的预防和治疗提供了重要的帮助。