第四章茎尖分生组织培养
植物脱病毒方法
物理方法
化学方法
生物方法
高温处理
珠心培养
愈伤脱毒
热处理脱毒
茎尖培养
微体嫁接
三、脱毒的方法
（一）热处理脱毒法
热处理脱毒原理 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一 起复制。 热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性， 使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传 染能力。 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂， 使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。
2、在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，
使病毒无法进行复制。
3、在茎尖中存在高水平内源激素，可以抑制
病毒的增殖。
4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”，
它在分生组织中的活性应最高，因而使分生
组织不受侵染。
以上是四种可能原因，无论哪种说 法正确，事实是分生组织一般不带病毒。
因此，利用这一原理，进行茎尖培养，
Hale Waihona Puke 热处理的优缺点 优点: 方法简单，效果明显。 缺点: 1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形 病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃 薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病 毒）无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使 植物材料受热枯死，造成损失 3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时 也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处 理效果。
6-BA → 一个月后长出不定芽，高于5cm时从基部切 下，MS基本培养基上 → 长大后，1-2个节间一段， 新的MS基本培养基上继代培养，进行扩繁 → 炼苗4 天左右，移栽沙子中 → 成活后，移栽塑料棚，再
扩繁 → 田间栽培
3.培养基与培养方式 ： （1）培养基：常用MS， White等培养基。 （2）培养方式：茎尖培养一般采用半固体培 养基
（三）、热处理与茎尖培养结合脱毒
果树等木本植物，热处理后新芽顶端嫁接成活率较 低。 茎尖培养时，茎尖过小成活率太低，而茎尖太大又 脱除不掉病毒
将热处理后的较大茎尖进行培养获得无病毒植株， 可以克服这些缺点。
4、酶联免疫法
在血清法的基础上，结合酶反应发展起来。在 抗体上带上某种酶，抗原和抗体结合成的免疫
复合物就有了酶活性，在反应体系中加入酶底
物，底物在酶的催化下，形成有色反应物。从
而使检测的灵敏度大大提高。
第三节 以甘薯为例介绍脱毒过程
甘属育苗 → 取茎顶5cm，去掉老片 → 表面杀菌→
剥取茎尖 → 培养， MS + 0.2mg/L NAA + 2 mg/L
（四）微体嫁接离体培养脱毒法
应用微体嫁接的原因： 木本植物茎尖培养难以生根形成植株。 具体做法： 将极小的茎尖（0.1mm~0.2mm）作为接穗嫁接到不 带病毒的种子实生苗砧木上，然后将砧木、接穗一起 在培养基上培养。 优点：接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培 养，去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。 微嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接穗大小 呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关
芽培养（>1mm）
与辐射育种结合
二、茎尖分生组织培养一般方法
1.材料的制备 健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水 冲洗 消毒 75%的酒精30秒 0.1%升汞或 20倍次氯酸钠消毒8-10min 无菌水 修剪 剥离茎尖，通常切割下顶端0.2~0.5 mm 叶原基的茎尖（无菌水） 接种。
2.培养基 多为MS培养基及其改良配方，还有White、 B5等。 3.培养条件 （1）温度：26℃~28℃ （2）光照：光培养的效果通常比暗培养好。 （3）湿度：与其他器官培养相似。
厚 叶 莲 花 掌
植物病毒的症状
植物病毒引起植株的症状是各异的，在观赏植物上 由病毒引起外部症状主要有以下几种：
（1）变色：褪绿、黄化、花叶、斑驳、红叶等，常见病 毒有；香石竹斑驳病毒、黄瓜花叶病毒、芋花叶病毒等。
（2）坏死：常见的坏死是病斑或斑点。有轮斑、环斑、 条斑‘条纹等。如香石竹坏死斑点病毒、，凤仙花坏死斑 点病毒草等。 （3）畸形：植株可出现矮缩、矮化或叶片皱缩、卷叶、 蕨叶等病状。 （4）萎蔫 ：主要是指植物根或茎的维管束组织受到破坏 而发生供水不足所出现的凋萎现象。
目前，对细菌和真菌侵染的病害，可以通过药物处
理达到治愈的目的，如多菌灵等。但目前，还没有
药物能治病毒病。
种子一般不带病毒，种子繁殖植物可以得到无菌植 株。但对于无性繁殖植物，必须采用一种有效的方 法，脱去病毒，才能达到提高产量和质量的目的。
二、病毒侵染的特点
早在 40 年代，就有科学家 (White 等 ) 发现病毒在
（2）接种 材料置10～40倍的双筒解剖镜下，解 剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶 原基的茎尖，接种到培养基上。
（3）培养
接种后材料置25+2℃ ，光照度1500-5000LX，每日 光照10-16h条件下培养。但一般光照培养比暗培 养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基 中BA的浓度可形成大量从生芽。
茎尖分生组织培养除可以生产脱毒苗外，还具有 方法简便，繁殖迅速，遗传性比较稳定，易保持植株 的优良性状的优点，在基础理论研究和实际应用中具 有重要价值。 2.意义：
1.形态建成研究 3.进行营养繁殖
4.育种中的应用
茎尖分生组织（不带叶原基，<250um）
2.用于无病株生产 茎尖（带1-3个叶原基，100-1000um）
第四章 茎尖分生组织培养 及脱毒苗生产
第一节 茎尖分生组织培养
一、概念和意义 1.概念 茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎尖 或几十微米的茎尖进行的培养。 特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间长。 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎 尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易 成活、成苗时间短、繁殖速度快。
微体嫁接法
脱除病毒的关键：
①要求剥离技术很高
②需要考虑砧木和接 穗对营养组成的不 同要求； ③与接穗的取材季节 有密切关系（苹果 4~6月取材嫁接成活 率较高。）
（五）无病毒种苗的保存、应用及繁殖
（1）无病毒原种的保存 获得无毒原种不易，若保存不好会很快重 新感染病毒。为防止再度感染，应在隔离条件 下保存。 若原种保存得好，无毒原种可以利用5-10年， 在生产上可以创造更多的经济效益。
1、隔离种植保存 通过无毒原种要在隔离区或隔虫网室内种植保 存。植物病毒的传播媒介主要是昆虫如蚜虫、叶蝉 2、离体保存 脱毒苗经鉴定后，选择无病原种株系，回接于 试管内，可长期保存，是最理想的保存方法。
（2）无毒原种的应用
获得无毒原种后，一方面要积极进行无毒苗 的推广，另一方面还要做好无病毒种的繁育。 无毒苗的推广应在发展良种的新区使用才能 取得良好的效果；在老病区使用时应实行统一的 防治措施，一次性全区换种，才能取得应有的效 果。
第二节 脱毒苗的培育和病毒检测
一、病毒的危害
多数栽培植物，尤其无性繁殖植物，都易受 到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如，草 莓感染60多种病毒。并且随着栽培时间的推移，侵 染病毒的种类越来越多。 受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大幅 度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。因此 说，病毒带来极大的危害。
2.茎尖培养脱毒的方法 （1）取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。 采顶芽与侧芽消毒接种。
消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去 大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中 浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7% 的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水 冲洗材料4-5次。
（3）无病毒原种的繁殖 可在无毒源和其他病虫害的大田中进 行，场地土壤要进行消毒，防治蚜虫、线 虫和其他传毒媒介，并建立一套严格的原 种繁育制度和栽培管理制度，防止病毒的 再次感染。
四、植物脱毒苗的鉴定
1、视觉观察法 (直接检测法) 看植株的茎叶是否有该病毒所有可见症状。
番 茄 无 菌 小 苗
根上和茎上的分布是不均匀的，离根尖和茎尖越
近，病毒的密度越低。反之，越高。即病毒在植
物体内的分布是不均匀的，分生组织一般无病毒
侵染。
分生组织之所以能避开病毒侵染，可能有4方面 原因： 1、在植物体中，病毒的移动主要靠两条途径， 一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维 管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒 移动速度非常缓慢，难以追赶上活跃生长的茎 尖和根尖。
优点:方法简单\灵敏\准确\擦方便,仍为一种经济有
效的方法 缺点:枯斑法不能测出病毒总的核蛋白浓度,而只能 测出相对的感染力
3、电子显微镜鉴定法
小于0.1mm的病 毒颗粒 用电子显微镜直接 观察经脱毒培养的叶 片，检查是否有的病 毒粒子存在，还可测 量病毒颗粒的大小、 形状和结构。 较为先进的方法，但 需一定的设备和技术
其它效果
• 香石竹（康乃馨）在38℃～40℃下经两个 月处理可除去全部病毒。
马铃薯在37℃下处理10～20天能除去卷 叶病毒。
（二）茎尖培养脱毒
1.茎尖培养脱毒的原理 （1）病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖 或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。 必须指出的是，所谓无病毒，只是相对的，不是 绝对的。 （2）茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生 组织不能合成自身需要，生长素，细胞分裂素， 因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。因此茎 尖越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适 宜的茎尖大小不同。
热处理法有：温汤处理（热水浸泡）和热风 处理两种。
具体方法： 第一，热水浸泡处理，适用于切下的材料，在50度 左右的温水中浸渍数分钟至数小时，方法简便易行 但材料易受伤。 第二，热风处理，将生长的盆栽植物移入室内或生 长箱内，处理温度因植物种类、生理状况而异。一 般为35~40度，短则几十分钟，长达数月。
植物组织培养技术第三章第四章植物器官的培养
营养器官的培养——茎尖的培养 营养器官的培养——茎尖的培养
1、 取材 、
取1-2㎝顶梢 ①直接取材：在生长旺盛、枝 直接取材：在生长旺盛、 条健壮、 条健壮、无病的母株上选生 长不久、杂菌污染少的顶梢 长不久、 （1－2cm）（取前可喷杀菌 cm）（取前可喷杀菌 ）（ 药，可顶芽或侧芽）。 可顶芽或侧芽）。 ②从试管苗获取。 从试管苗获取。
第一节 一、离体根的培养 意义： （一） 意义： ①生理代谢研究的优良实验体系 ②研究器官分化形态建成的良好体系 ③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种 营养器官的培养
营养器官的培养——根的培养 营养器官的培养——根的培养
（二） 培养方法 1. 培养基选择 White培养基；2/3或1/2 MS 和 B5培养基 培养基； 或 培养基 培养基 注：离体根生长要求 提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好， 提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，加入 B1、B6最重要 生长素对离体根影响不一致。 最重要， B1、B6最重要，生长素对离体根影响不一致。培养 温度25 27℃，暗光培养。 25－ 温度25－27℃，暗光培养。
离 体 根
脱分化培养基
愈 伤 组 织
再分化培养基
分 化 芽
再 生 植 株
植物器官的培养
二、茎尖的培养
•1.茎尖培养概念及类型 1.茎尖培养概念及类型 1. •2.茎尖培养方法及步骤 2.茎尖培养方法及步骤 2.
营养器官的培养——茎尖的培养 营养器官的培养——茎尖的培养
（一）茎尖培养概念及类型
茎尖培养： 茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行 无菌培养。 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： 微茎尖培养: 微茎尖培养 带有1-2个叶原基的生长锥, 其长度不超过0.5mm 普通茎尖培养： 普通茎尖培养：较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽 这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便， 茎尖容易成活，成苗所需时间短
第四章植物器官的培养
第四章植物器官的培养1、器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。
以器官作为外植体进行离体培养。
器官培养的意义:研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成在生产实践上具有重要的应用价值,可在短期内提高繁殖速率,进行名贵品种的快速繁殖;利用茎尖培养可得到脱毒试管苗,解决品种的退化问题,提高产量和质量;将植物器官作诱变处理,用器官培养可得到突变株,进行细胞突变育种等。
第一节营养器官的培养一、茎尖的培养茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分,进行无菌培养。
这是组织培养中用得最多的一个取材部位。
茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥,其长度不超过0.5mm。
普通茎尖指较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽。
普通茎尖培养(1)取材: 挑选杂菌污染少,生长不久的茎尖。
(2)消毒接种: 将茎尖切成0.5-1.Ocm长将茎尖置于流水冲洗2-4h在75%的酒精中处理30s在稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min无菌水冲洗数次接种(3)接种: 为了减少污染,可在接种前再剥掉一些叶片,使茎尖为0.5cm左右大小。
(4)培养的方法和程序①培养基多数茎尖培养采用MS作为基本培养基,常用的其他培养基有White,Heller.培养基中生长素:2,4-D,IAA,NAA,浓度一般用0.1mg/L左右,高于此浓度,往往产生畸变芽或形成愈伤组织。
茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。
生长太慢:接种后茎尖不增大,只是茎尖逐渐变绿,出现绿色小点,细胞逐渐老化而进人休眠状态,或者逐渐变褐死亡。
引起的原因:生长素浓度太低,或是温度过低或过高;生长太快型是接种后茎尖迅速增大,在茎尖基部产生愈伤组织,并迅速增殖,而茎尖不伸长,久之茎尖也形成愈伤组织,从而丧失发育成苗的能力。
引起的原因:一是生长素浓度过高,引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。
简述茎尖分生组织培养脱毒的原理
茎尖分生组织是植物中生长最快的组织之一，可以通过组织培养技术脱毒。其原理是：将带毒的植物茎尖取出，培养在含有植物生长所需营养物质和生长调节物质的无菌培养基上，利用细胞分裂和分化的特性，使茎尖分生组织不断增殖，从而获得大量干净的组织。通过培养一定时间，能够使植物细胞分裂过程中的病毒等有害物质逐பைடு நூலகம்消失，从而达到脱毒的目的。茎尖分生组织培养脱毒技术可以应用于各种作物，是植物繁殖、病毒检测、遗传改良等领域的重要手段。
组培复习资料
植物组织培养复习资料（开卷考试）第一章导论【本章知识点】1.组织培养的含义2.组织培养的理论基础（细胞全能性）3.植物组织培养的类型及特点4.植物组培在农业生产上的应用一．组织培养的含义：用无菌的方法使植物离体器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有的培养技术的总称，也称为离体培养或试管培养。
二、植物组培的理论基础1、植物细胞全能性：植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部的遗传物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。
2、细胞分化：导致细胞形成不同结构、引起功能改变或者潜在发育方式改变的过程。
3、脱分化：将以分化的不分裂的静止细胞放在培养基上培养，细胞重新进入分裂状态。
一个成熟的细胞转化为分生状态的过程成为脱分化。
（形成愈伤组织）4、再分化：经脱分化形成的愈伤组织在一定培养条件下可转化为不同的细胞类型，形成完整植株的过程。
5、外植体：由活体植物上切去下来的，用于植物组织培养的各种接种材料。
包括各种器官、组织、细胞和原生质体等。
6、愈伤组织：外植体离体培养下经脱分化产生的无特定结构和功能的薄壁细胞。
三、组织培养的类型及特点【类型】1.按培养材料分：愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养等2.按培养器官分：叶培养、跟培养、花药培养等3.按培养成分分：固体培养、液体培养（也叫液体震荡培养）4.按是否有需要光分：光培养、暗培养5.按培养方法分：平板培养、微室培养、悬浮培养等6.按培养过程分：初代培养（外植体的最初培养）、继代培养（培养物在培养基上生长一段时间以后由于营养物枯竭，水分散失及代谢产物的积累，必须转移到新鲜的培养基上培养，这种反复多次移植的组织培养称为继代培养）【特点】1.培养条件人为可控2.培养生长周期短，繁殖效率高3.管理方便，便于工厂化生产和自动化控制四、植物组培在农业生产上的应用1．用于种苗的快速无性繁殖2．用于种苗的脱毒（EG马铃薯）3. 用于某些植物的远缘杂交4.用于突变育种5.用于单配体育种6.种质保存7.基因工程8．植物性药物和生物制品的生产第二章植物组培实验室的构建和基本操作技术【本章知识点】 1.植物组培实验室结构设计及主要实验设备2.常用培养基MS 、B5、White 、N6、KM-8P 等3.母液的配制方法4.培养基成分及其配制、分装和高压灭菌过程5.有关灭菌、接种、培养、驯化和移栽的相关技术6.接种的无菌操作程序要点7.试管苗的特点及其不能成活的原因8.试管苗的驯化和移栽应注意的问题一、植物组培实验室构建和主要实验设备【实验室构建】【仪器设备与用具】1、 仪器设备与器皿用具：超净工作台、空调、除湿机或加湿机、恒温培养箱、高压灭菌锅、冰箱、天平、显微镜、水浴锅、摇床与转床、蒸馏水发生器、酸度计、离心机等2、 各类玻璃器皿：培养器皿（试管、三角瓶、培养皿、圆形培养瓶或果酱瓶等）分注器、离心管、刻度移液管、细菌过滤器、实验器皿（量筒、烧杯、容量瓶、试剂瓶、塑料瓶、酒精灯等）3、 器械用具：镊子、尖头镊子、枪形镊子、剪刀、解剖刀、接种针、钻孔器等。
第四章茎-茎的显微结构(茎尖的结构)
茎的显微结构 （茎尖的构造）
3
茎的显微结构
1 茎尖的结构
茎尖的结构
茎尖的构造基本上与根尖相似，主要不同在于其前端无根 冠的类似构造，生长锥由叶原基和芽原基保护。茎尖分为 分生区，伸长区和成熟区，成熟区不产生根毛但有气孔构
分生区：细胞具有强烈的细胞分裂能力，又称为 生长锥。 伸长区：细胞在纵向迅速拉长。 成熟区：细胞分化成熟，成熟区不产生根毛但有 气孔和毛茸。
脱毒苗培养
2、指示植物鉴定法：利用特定的易于感染某些 病毒的指示植物的特征进行病毒鉴定。
指示植物
CMV病毒感染的植株叶片
3、抗血清鉴定法：利用抗原和抗体的特异性反应原理 进行病毒鉴定。用已知病毒的抗血清（antiserum）鉴 定未知病毒。
近年来又在此基础上发展出酶联免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA），方法是将抗 原固定在支持物上，加入待检血清，然后加入酶（过氧 化物酶或碱性磷酸酶）标记的抗体，使待检血清与对应 抗原的特异性抗体结合，最后用分光光度计进行诊断。
二、脱毒方法：
（一）茎尖分生组织培养脱毒： 1. 脱毒原理：病毒在植物体内的分布不均匀，越靠近
顶端区域，带毒越少，顶端分生组织（0.2-0.5 mm）不带 病毒或含病毒量极低。因此，分离分生组织细胞进行培 养，可以获得无病毒种苗。
2. 茎尖分生组织培养脱毒的基本程序：
一般包括培养基选择和制备、带脱毒材料的表面、灭 菌、茎尖分生组织分离、接种和培养、诱导芽分化和小 植株增殖、诱导生根、驯化移栽等环节。 茎尖分生组织的分离需要在超净工作台上借助体视显 微镜进行。茎尖放在培养皿内进行解剖，一只手用镊子 固定，另一手用解剖针将叶片和叶原基层层剥掉，当露 出半圆形顶端分生组织时，将分生组织切下，接种与培 养基上。
（四）其他脱毒方法：
1. 花器官培养脱毒：由植物的花器官培养脱分化形成愈伤 组织，然后再分化不定芽，可以获得无毒苗。如草莓花 药培养。 2. 珠心胚培养脱毒：柑橘类珠心胚与微管组织没有联系，一 般不带毒，可以利用珠心胚进行培养获得。
3.化学脱毒:采用病毒唑等试剂处理材料或添加到培养基中可 以钝化病毒，达到一定的脱毒效果。
（2）茎尖嫁接：在超净工作台上，将幼苗的上胚轴和子叶去掉， 根系截短，在离上胚轴顶端越0.5cm处斜向下切一深达木质 部，长2-3cm的切口，在斜切口末端横切一刀，用去掉切下 部分。在体视显微镜下，从待脱毒样品上切取0.2mm的茎尖 分生组织，小心放于切口的水平面上，切面向下并与砧木切 口形成层组织紧密贴合，然后接于培养基上。
细胞工程课后题答案
第二章细胞工程实验室组成及无菌操作技术1、目前，常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特点？1）MS培养基特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的平衡溶液。
2）5B培养基其主要特点是含有较低的铵，这是因为铵对不少培养物的生长有抑制作用。
3）White培养基其特点是无机盐数量较低，适于生根培养N培养基其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。
4）65）KM8P培养基其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合培养。
2、简要说明MS培养基的基本组成。
1）大量元素母液配制MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸镁（MgSO4•7H2O）和氯化钙（CaCl2,CaCl2•2H2O）五种化合物。
2）微量元素母液配制MS培养基的微量元素由7种化合物（除Fe外）。
3）铁盐母液配制MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4•4H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2•EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。
4）有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸吡哆素。
5）激素母液配制MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素3、配制培养基时，为什么要先配制母液？如何配制母液？为了避免每次配制时都要称量各种化学药品，常常把培养中必需的一些化学药品，以10倍、50倍或100倍的量，配制成一种浓缩液，这种浓缩液被称为母液。
配制母液不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移去，而且还便于低温保藏。
确定培养基--按照扩大倍数称量--溶解--按顺序混合--定容--母液分装--贴标签--保存于冰箱。
大量元素应配成浓度为10倍的母液，--般将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
配置时化合物应分别称量，分别溶解;混合时注意先后顺序，防止产生沉淀;混合时要边搅拌边混合。
4、常用的灭菌方法有哪些，各有哪些优缺点？（一）物理灭菌1）湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）优点：高温高压蒸汽对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡，是一种最有效的灭菌方法。
园艺植物组织培养ppt课件
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15
植物组织培养的应用原理
▪ 细胞的分化和形态建立：由脱分化的 细胞再分化出完整植株有两种途径：一 种叫做不定器官形成(adventitious organ formation)或叫做器官形成 (organogenesis)，即在愈伤组织的不 同部位分别形成独立形成不定根和不定 芽，另一种叫做体细胞胚胎发生 (somatic embryogenesis) ，即在愈 伤组织的表面形成类似于合子胚的结构， 我们称其为为体细胞胚，不定胚 (adventitious embryo)或胚状体 (embryo )，体细胞胚胎所经历的发育 阶段与合子胚相似，一般经历球形胚、 心型胚、鱼雷形胚和子叶胚4个发育阶段。
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21
奠基阶段
▪ 20世纪50年代开始以后
1952年Morel和Martin
1953-1954年Muir 1955年Miller 1957年skoog和Miller
1958年Steward
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22
迅速发展阶段
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1
绪论 第一章、实验室设备和基本操作技术 第二章、植物组织器官培养 第三章、茎尖分生组织 第四章、单倍体细胞培养 第五章、细胞培养 第六章、种质保存 第七章、组培苗工厂化生产的经营与管理
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2
参考书
✓ 植物细胞组织培养， 刘庆昌、吴国良，中国农业大 学出版社，2003.1
11
组织培养类型
➢ 根据培养方法
1 平板培养 2 微室培养 3 悬浮培养 4 单细胞培养
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12
组织培养类型
➢ 根据培养基的作用 :1 诱导培养; 2 增殖培养; 3 生根培养 ➢ 根据培养目的: 1 脱毒繁殖; 2 微体快繁; 3 试管育种;试管嫁接 ➢ 根据培养条件:1 光培养; 2 暗培养 ➢ 根据培养过程:1 初代培养;2 继代培养
园艺植物生物技术课后习题答案
第一章至第五章一、主要名词和概念：一．1. 植物细胞全能性：植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传物质，在一定条件下具有发育成为完整植物体的潜在能力。
2. 脱分化：将已分化的不分裂的静止细胞放在培养基上培养后，细胞重新进去分裂状态，一个成熟细胞转变为分生状态的过程。
3. 再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。
4. 器官发生途径：由外植体或愈伤组织诱导形成不定根或不定芽，再获得再生植株的方法5. 体细胞胚胎发生途径：在组织培养中起源于一个非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程，形成具有双极性的胚状结构而发育成再生植株的途径。
6. 外植体：由活体植物体上切去下来的，用于组织培养的各种接种材料。
包括各种器官、组织、细胞或原生质体等。
7.褐化现象：指在外植体诱导初分化或再分化过程中，自身组织从表面想培养基释放褐色物质以至培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。
8. 看护培养：利用活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的培养方法。
9. 分批培养；把细胞分散在一定容积的培养基中培养，当培养物增值到一定量时，转接继代，建立起单细胞培养物。
10. 连续培养：利用特质的培养容器进行大规模细胞培养的一种培养方式。
11. 体细胞杂交：使分离出来的不同亲本的原生质体，在人工控制条件下，相互融合成一体，形成杂种细胞，并进一步发育成杂种植株的技术。
12. 雄核发育：在适宜的离体培养条件下，花粉（小孢子）的发育可偏离活体时的正常发育转向孢子体发育，经胚状体途径或器官发生途径形成完整植株。
13. 雌核发育：以未受精子房或胚珠为外植体诱导单倍体的方法。
14. 非整倍体：生物体的核内染色体数不是染色体基数整数倍，而发生个别染色体数目增减的生物体。
15. 代换系：生物体的染色体被异源种属染色体所代换的品系。
16. 易位系：某染色体的一个区段移接在非同源的另一个染色体上，具有发生染色体易位的品种。
植物组织培养6-4
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(2)茎尖剥离与培养 将消毒后的材料放在10～40倍的双筒解剖 镜下，用解剖针剥去外部幼叶，直至露出圆亮的生长点，用解 剖刀切取0.1～0.3mm、带有1～2个叶原基的茎尖，并迅速接种
到诱导培养基上。
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(3)病毒检测 病毒检测是马铃薯茎尖脱毒不可缺少的环节，检 测方法有指示植物鉴定法、目测法、抗血清鉴定法及电镜检测
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(5)驯化移栽 马铃薯试管苗生根容易，一般在增殖扩繁过程中 就能形成有根苗，所以可以不需再进行生根培养即可移栽。
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(5)驯化移栽 马铃薯试管苗生根容易，一般在增殖扩繁过程中 就能形成有根苗，所以可以不需再进行生根培养即可移栽。
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(5)驯化移栽 马铃薯试管苗生根容易，一般在增殖扩繁过程中 就能形成有根苗，所以可以不需再进行生根培养即可移栽。
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1.茎尖培养脱毒
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2.病毒检测
(1)目测法 甘薯病毒为系统感染，薯苗、薯块均可带毒。 (2)指示植物鉴定法 常用指示植物有巴西牵牛，该植物对多种侵 染甘薯的病毒敏感，受病毒侵染后叶片上易产生系统性症状。
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2.病毒检测
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(3)血清学检测法 将待检测的茎尖苗叶片制样，用几种病毒的抗 血清做琼脂双扩散(SDS)酶联免疫吸附法(ELISA)或斑点结合酶联 免疫法(Dot-ELISA)检测，呈阳性反应的为带毒苗。
(1)试管内生产微型薯 试管内生产微型薯要求条件较严格，费 用较高，但产品的质量好，整齐度一致，一般只有1～5g。
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(1)试管内生产微型薯 试管内生产微型薯要求条件较严格，费 用较高，但产品的质量好，整齐度一致，一般只有1～5g。