最新茎尖分生组织培养
第六章 茎 第三节 茎尖分区
基本分生------皮层、髓射线
组织（部分）
原形成层-----------维管束
原体----髓分生组织----------基本分生组织-------------髓
（部分）
第四节 茎的初生生长和初生结构
一、双子叶植物和裸子植物 茎的初生结构 1、表皮：表皮毛、气孔器、
角质层、外分泌组织 2、皮层：厚角组织、薄壁组 织、内分泌组织、厚壁组织、 少数植物有淀粉鞘
维管束：
a、维管束鞘：由厚壁细胞组成，在维管束外围。 b、初生韧皮部：靠茎的外方，由筛管、伴管组成。 c、初生木质部：位于茎的内方，横切面上呈“V”字 形。由导管、木薄壁细胞、管胞、厚壁组织构成。 在“ V” 形的两臂上各有一个大型孔纹导管，中间 有薄壁细胞、管胞，称为后生木质部。 没有形成层，属于有限外韧维管束，只有初生结 构。
茎的初生结构——— ————— 茎的次生结构 生长锥 （成熟区的横切面） 表 皮 伸长区 厚角组织 木 栓 层 皮层 薄壁组织 木栓形成层 周皮 淀粉鞘（或不明显 栓 内 层 成熟区 或有内皮层） 树皮 初生韧皮部 次生韧皮部（韧皮射线） 维管束 束中形成层 初生木质部（内始式）（ 保留）维管形成层(分裂多年) 次生结构 或还有内生韧皮部 （老茎） 中柱 束间形成层 （维管柱）髓射线 次生木质部（木射线）
3、禾本科植物的居间生长和初生增粗生长
A、居间生长： 禾本科节间基部存在居间分生组织，它们 的活动使植物节间伸长，称为居间生长。 禾本科植物倒伏后背地弯曲生长、收割后 韭黄的生长等。 B、初生增厚生长： 初生增厚分生组织：叶原基下面靠近茎轴 外围部位排列规则的、扁平状的、具有分裂能 力的细胞。它们平周分裂的结果使茎尖增大和 茎轴增粗。
四、裸子植物茎的结构
简述茎尖分生组织培养脱毒的原理
茎尖分生组织是植物中生长最快的组织之一，可以通过组织培养技术脱毒。其原理是：将带毒的植物茎尖取出，培养在含有植物生长所需营养物质和生长调节物质的无菌培养基上，利用细胞分裂和分化的特性，使茎尖分生组织不断增殖，从而获得大量干净的组织。通过培养一定时间，能够使植物细胞分裂过程中的病毒等有害物质逐பைடு நூலகம்消失，从而达到脱毒的目的。茎尖分生组织培养脱毒技术可以应用于各种作物，是植物繁殖、病毒检测、遗传改良等领域的重要手段。
专题16 植物细胞工程(解析版)
专题16 植物细胞工程专题分析➢题型解读本专题常结合动物细胞工程进行综合性考查，常出现在简答题中的某一问。
结合现代科学技术的实践应用进而培养学生的科学思维和社会责任感。
➢考向分析围绕细胞的全能性、植物组织培养、植物体细胞杂交技术进行考查，重点考查学生的实践应用能力。
➢答题技巧作答本专题时，需具备一定的理解能力，并牢记课本的重要知识点，通过一定的习题练习形成思维定势，从而迅速准确的作答。
对点训练一、单选题1．（2023·辽宁·模拟预测）马铃薯普通栽培种是同源四倍体，这使得马铃薯的杂交育种变得十分困难。
植物细胞工程技术为马铃薯育种提供了可行的育种方案。
下列有关植物细胞工程的说法，错误的是（）A．利用茎尖分生组织培养脱毒苗，使植株具备抗病毒的能力，产品质量得到提高B．利用普通马铃薯的花粉进行组织培养，可以获得含有2个染色体组的马铃薯C．利用原生质体融合实现体细胞杂交，可以克服远缘杂交不亲和的障碍，充分利用遗传资源D．利用培养的愈伤组织进行诱变育种，可以显著提高变异频率，获得有用的突变体【答案】A【详解】A、利用茎尖分生组织培养的是脱毒苗，但脱毒苗并不具有抗病毒的能力，A错误；B、由题可知，马铃薯是四倍体，其花粉含有2个染色体组，经过花药离体培养后的植株含有2个染色体组，B正确；C、不同生物之间存在生殖隔离，不能通过有性方式繁殖后代，通过植物体细胞杂交技术，可以实现不同生物之间的细胞融合，克服远缘杂交不亲和的障碍，充分利用遗传资源，C正确；D、愈伤组织细胞分裂比较旺盛，利用培养的愈伤组织进行诱变育种，可以显著提高变异频率，获得有用的突变体，D正确。
故选A。
2．某种植物组织培养的过程如下图所示，其中甲、乙、丙、丁代表4个不同培养阶段。
下列叙述正确的是（）A．上述过程属于体细胞胚发生途径，此过程涉及植物组织的脱分化和再分化B．甲阶段和乙阶段培养基中的营养成分不同，但生长调节剂种类和配比相同C．丙阶段，将丛状苗分株后移栽到只有生长素没有细胞分裂素的培养基上生根D．丁阶段，试管苗移栽前需在蛭石和珍珠岩等介质上锻炼，增强对低湿、弱光的适应能力【答案】C【详解】A、图示过程为器官发生途径，A错误；B、甲阶段和乙阶段培养基生长调节剂种类和配比不同，B错误；C、与发芽培养基相比，诱导根分化需要较低的细胞分裂素浓度，可以只有生长素没有细胞分裂素，C正确；D、试管苗移栽前需在蛭石和珍珠岩等介质上锻炼，增强对低湿、强光的适应能力，D错误。
脱毒苗培养
2、指示植物鉴定法：利用特定的易于感染某些 病毒的指示植物的特征进行病毒鉴定。
指示植物
CMV病毒感染的植株叶片
3、抗血清鉴定法：利用抗原和抗体的特异性反应原理 进行病毒鉴定。用已知病毒的抗血清（antiserum）鉴 定未知病毒。
近年来又在此基础上发展出酶联免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA），方法是将抗 原固定在支持物上，加入待检血清，然后加入酶（过氧 化物酶或碱性磷酸酶）标记的抗体，使待检血清与对应 抗原的特异性抗体结合，最后用分光光度计进行诊断。
二、脱毒方法：
（一）茎尖分生组织培养脱毒： 1. 脱毒原理：病毒在植物体内的分布不均匀，越靠近
顶端区域，带毒越少，顶端分生组织（0.2-0.5 mm）不带 病毒或含病毒量极低。因此，分离分生组织细胞进行培 养，可以获得无病毒种苗。
2. 茎尖分生组织培养脱毒的基本程序：
一般包括培养基选择和制备、带脱毒材料的表面、灭 菌、茎尖分生组织分离、接种和培养、诱导芽分化和小 植株增殖、诱导生根、驯化移栽等环节。 茎尖分生组织的分离需要在超净工作台上借助体视显 微镜进行。茎尖放在培养皿内进行解剖，一只手用镊子 固定，另一手用解剖针将叶片和叶原基层层剥掉，当露 出半圆形顶端分生组织时，将分生组织切下，接种与培 养基上。
（四）其他脱毒方法：
1. 花器官培养脱毒：由植物的花器官培养脱分化形成愈伤 组织，然后再分化不定芽，可以获得无毒苗。如草莓花 药培养。 2. 珠心胚培养脱毒：柑橘类珠心胚与微管组织没有联系，一 般不带毒，可以利用珠心胚进行培养获得。
3.化学脱毒:采用病毒唑等试剂处理材料或添加到培养基中可 以钝化病毒，达到一定的脱毒效果。
（2）茎尖嫁接：在超净工作台上，将幼苗的上胚轴和子叶去掉， 根系截短，在离上胚轴顶端越0.5cm处斜向下切一深达木质 部，长2-3cm的切口，在斜切口末端横切一刀，用去掉切下 部分。在体视显微镜下，从待脱毒样品上切取0.2mm的茎尖 分生组织，小心放于切口的水平面上，切面向下并与砧木切 口形成层组织紧密贴合，然后接于培养基上。
茎尖分生组织培养
指
接
示
穗 嫁接后
植 物
的植物
指示植物法
定义:将一些对病毒敏感、症状特征显著 的植物作为指示植物 又叫鉴别寄主 ,利用 病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别 病毒,仍为一种经济有
效的方法
缺点:枯斑法不能测出病毒总的核蛋白浓度,而只能
测出相对的感染力
3、电子显微镜鉴定法
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生活
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尖、芽尖及侧芽的培养，操作技术简单、易 成活、成苗时间短、繁殖速度快，
茎尖分生组织培养除可以生产脱毒苗外,还具有 方法简便,繁殖迅速,遗传性比较稳定,易保持植株的 优良性状的优点,在基础理论研究和实际应用中具有 重要价值，
2.意义： 1.形态建成研究 茎尖分生组织 不带叶原基,<250um 2.用于无病株生产 茎尖 带1-3个叶原基,100-1000um 3.进行营养繁殖 芽培养 >1mm 4.育种中的应用 与辐射育种结合
2 茎尖大小与脱毒
茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比，茎尖分生 组织不能合成自身需要,生长素,细胞分裂素,因而 带叶原基的茎尖生长快,成苗率高，因此茎尖越大 培养成活率越高，因此对不同植物脱毒适宜的茎 尖大小不同，
2.茎尖培养脱毒的方法 1 取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种，
采顶芽与侧芽消毒接种，
二、茎尖分生组织培养一般方法
1.材料的制备 健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水 冲洗 消毒 75%的酒精30秒 0.1%升汞或 20倍次氯酸钠消毒8-10min 无菌水 修剪 剥离茎尖,通常切割下顶端0.2~0.5 mm叶 原基的茎尖 无菌水 接种，
第7章 茎尖培养和脱毒、快繁技术
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
③ 试管苗的壮苗与生根：
• 一般要分成单苗 ， 转移到盐浓度较低 、 不含细 一般要分成单苗， 转移到盐浓度较低、 胞分裂素， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基， 胞分裂素 ， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基 ， 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 • 问题：不易生根 （ 延长时间、 继代 ） ；易生根： 问题：不易生根（ 延长时间 、 继代） 壮苗阶段不加生长素， 壮苗阶段不加生长素 ， 试管外生根可减少费用； • 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
4. 提高试管苗繁殖速度的措施：
① 选择合适的繁殖途径 ② 改良培养基： 激素 （腋芽 、 不定芽 、 胚状体 ） 等； 激素（ 腋芽、 不定芽、 胚状体） ③ 改良培养条件 ： 温 、光 、 湿度、 气体（有利气体、 湿度 、 气体 （ 有利气体、
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 培养方法：固体培养、液体纸 桥培养（易愈伤化时）
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 对培养基和培养条件的要求： • 一般可用MS培养基，加少量的生长素（不 用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制 愈伤等有一定的效果。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
3. 茎尖培养技术： • 材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植 株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理； 在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶 片，进行常规的表面灭菌；
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌 培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或 解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的 解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下 来，直接接种到培养基上；
组培技术培训：茎尖培养简易流程--亚龙组培
茎尖培养是把茎尖的分生组织或包括有此分生组织的茎尖分离进行无菌培养的方法。
在植物组织的培养中，曾是很早以来就被应用的一种方法，茎尖培养除研究枝条的发育和花的形态形成外，也应用于无病毒植物的培养和兰花等园艺作物的营养繁殖等方面，目前此方式是生产无毒苗最基本的方法，下面简单介绍。
组培技术培训1、外植体的选取及预处理⑴外植体选取选取生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的生姜根状茎作为外植体。
⑵材料预处理取带芽的枝条或鳞茎球茎，先用自来水冲洗，冲洗掉灰尘、虫体和虫卵等，然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位（约1cm×1cm大小），顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。
继续清洗10分钟（可加清洗剂如洗洁精等），清洗时需不停晃动。
再用自来水冲洗干净，置空培养瓶备用。
2、超净工作台无菌操作准备检查超净工作台，是否已开机灭菌，酒精灯、酒精瓶、无菌水、培养瓶放置与位置、接种器械是否齐备与放置3、外植体消毒（1）酒精消毒75%酒精倒入装外植体的容器内，消毒外植体不超过30s，时间长短视植物材料情况而定，一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短，老材料或室外材料消毒时间长。
动作一定迅速，需晃动，然后将酒精倒去。
整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止。
（2）氯酸钠消毒1%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内，消毒外植体时间长短视情况而定，一般嫩的部位消毒时间较短，老的部位时间较长，同时需晃动。
（3）蒸馏水清洗用镊子将外植体取出，放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗，反复清洗3次。
4、材料的整理用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理，剥离外植体材料芽外部小叶片，露出尖端生长点和2-3片叶原基部分。
（需在超净台中的酒精灯前进行）5、接入培养基培养基瓶放入工作台内，将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内，盖上瓶盖，置培养篮内，写上培养时间、操作人及培养品名，入培养室培养。
（需在超净台中的酒精灯前进行）。
细胞工程课后题答案
第二章细胞工程实验室组成及无菌操作技术1、目前，常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特点？1）MS培养基特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的平衡溶液。
2）5B培养基其主要特点是含有较低的铵，这是因为铵对不少培养物的生长有抑制作用。
3）White培养基其特点是无机盐数量较低，适于生根培养N培养基其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。
4）65）KM8P培养基其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合培养。
2、简要说明MS培养基的基本组成。
1）大量元素母液配制MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸镁（MgSO4•7H2O）和氯化钙（CaCl2,CaCl2•2H2O）五种化合物。
2）微量元素母液配制MS培养基的微量元素由7种化合物（除Fe外）。
3）铁盐母液配制MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4•4H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2•EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。
4）有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸吡哆素。
5）激素母液配制MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素3、配制培养基时，为什么要先配制母液？如何配制母液？为了避免每次配制时都要称量各种化学药品，常常把培养中必需的一些化学药品，以10倍、50倍或100倍的量，配制成一种浓缩液，这种浓缩液被称为母液。
配制母液不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移去，而且还便于低温保藏。
确定培养基--按照扩大倍数称量--溶解--按顺序混合--定容--母液分装--贴标签--保存于冰箱。
大量元素应配成浓度为10倍的母液，--般将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
配置时化合物应分别称量，分别溶解;混合时注意先后顺序，防止产生沉淀;混合时要边搅拌边混合。
4、常用的灭菌方法有哪些，各有哪些优缺点？（一）物理灭菌1）湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）优点：高温高压蒸汽对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡，是一种最有效的灭菌方法。
第十讲茎尖分生组织培养
通气
提高通气性，利于培养物的脱分化、分裂及再分化 通气性差，则利于有害气体的积累，伤害培养物，且易 于出现玻璃化苗
四：脱毒苗的培育和病毒检测
脱毒苗的培育
病毒检测
1 脱毒苗的培育
定义及意义 脱毒苗培育的方法
热处理脱毒 茎尖培养脱毒 热处理结合茎尖培养脱毒 微体嫁接脱毒 抗病毒药剂脱毒
2）体细胞无性系变异的普遍性是指？
变异具有自发性 细胞、愈伤组织到再生植株都可能出现变异 物种、器官、组织都可以出现变异 变异引发的性状具有普遍性
3）影响体细胞无性系变异的因素有哪些？
基因型 外植体 培养基 继代培养时间 温度 组织原有倍数性
4）什么叫诱变？常用的诱变方法有？
该过程可以作为研究茎根系及芽的形态建成的体系1952年morel发现兰花茎尖可以培养形成原球茎状的扁平小球体可以不断切割形成无性繁殖系植物病毒已发现的超过500余种严重影响农业生产特别是以无性繁殖为主的农作物及经济植物等病毒引起的病害不同于真菌及细菌病害不能采用杀菌剂和抗生素防治生产上目前无法根治1952年morel和martin发现通过茎尖组织培养可以从感病的大丽花中获得无病毒植株茎尖组织培养可以严格控制营养激素成分及浓度温度及光照等培养条件是常规下无法生长和繁殖的植物材料顺利扩繁1960年morel最早以兰花茎尖繁育兰花克服了种子繁殖效率低及品种退化的问题掀起了兰花工业已经广泛应用于兰花菊花等名贵观赏植株的生产中几乎所有的植物均可以以茎尖组织培养进行快繁茎尖组织培养后植株遗传学稳定培养技术成熟因此可以用于常规繁育有困难的物种
光照
草莓组织培养
草莓组织培养组织培养法是培养草莓茎尖分生组织，诱导出幼芽，然后通过腋芽的增殖迅速扩大繁殖，幼株经训化培育后，移栽到草莓园中使用。
组织培养不受环境影响，可进行工厂化生产。
优点是可有效脱除病毒，获得无病毒种苗；并且繁殖快，1年内一个分生组织可产生几千甚至数万株优质组培苗，可迅速推广新品种。
组织培养繁殖的操作程序如下：一、取材和消毒在植株生长季节，最好8月份，取园中建苗的匍匐茎4～5cm长，先用1％洗衣粉水洗刷表面污物及绒毛，再用流水冲洗1小时。
在超净工作台或无菌室无菌条件下，将冲洗后材料再截成2～3cm长，先浸入70％酒精中半分钟，再浸入10％漂白粉上清液或0.1％升汞水中消毒15～20分钟，然后用无菌水冲洗3～5遍。
将消毒后的材料用摄子夹到盛有滤纸的培养皿中（已经过高压灭菌），置于双目解剖镜下剥取茎尖分生组织，一般保留1～2个叶原基，切取0.2mm左右。
若草莓植株经过40～41℃热处理4～6周，可剥取0.3mm左右的茎尖分生组织。
切取茎尖分生组织后立即置于培养基中。
二、诱导芽分化（初代培养）切取草莓茎尖分生组织，接种在含有0.1×10-6赤霉素，0.2×10-6吲哚丁酸、1×10-6BA （6－苄氨基嘌呤、30g／L蔗糖，6～7.5g／L琼脂，pH值5.8左右，经1.1kg／cm2高压消毒15分钟的MS培养基上。
在温度25～30℃、光照强度1500～2000勒克司、每日光照10小时左右的培养条件下，20～30天后即开始分化新芽，新芽不断生长和增殖，形成小芽丛。
接着小芽丛萌发，约经3个月，培养基上的一簇无根小植株即可长成2～3cm高。
将附加6-苄氨基嘌呤浓度控制到（0.2～0.4）×10-6，也可以获得较好的芽分化。
三、小植株增殖（继代培养）切取芽丛上小植株，在芽分化培养基上继代培养即可达到小植株增殖效果。
在培养基上适当提高6-苄氨基嘌呤浓度可提高增殖效果。
植株的增殖倍数因品种和培养基的不同有所差异。
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（3）培养
接种后材料置25+2℃ ，光照度1500-5000LX，每 日光照10-16h条件下培养。但一般光照培养比暗 培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养 基中BA的浓度可形成大量从生芽。
3.培养基与培养方式 ：
（1）培养基：常用MS， White等培养基。
（2）培养方式：茎尖培养一般采用半固体培 养基
茎尖分生组织培养
一、概念和意义
1.概念 茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎
尖或几十微米的茎尖进行的培养。
特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间 长。
普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎 尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、 易成活、成苗时间短、繁殖速度快。
2.茎尖培养脱毒的方法 （1）取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。
工厂化生产 4.能获得无菌苗木无性系 5.木本植物应用潜力大
植物离体快速繁殖的基本程序：
1.稳定无菌培养体系的建立时期
是指从外植体选择、采取、清洗、灭菌、接 种和茎芽发生，一直到获得茎芽稳定生长 和增殖，茎芽扩繁数量可以随意控制的整 个时期。
本时期主要包括外植体选择、外植体灭菌、 培养基选定和稳定化培养等环节。
3.抗病毒药剂脱毒
二、病毒检测
主要是对脱毒苗的鉴定。方法有
1.直接测定法：直接观察待侧植株生长状态是否异 常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而 可判断病毒是否存在。
2.指示植物法： 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为
指示植物（鉴定别寄生），用以检验待测植物体 内特定病毒的存在。即指示植物法。常用鉴定指 示植物有苋科植物千日红和藜属笕色藜。 特点：条件简单，操作方便，故一直沿用至今，仍 为一种经济而有效的鉴定方法，只能测出病毒的 相对感染力。
（四）、其他脱毒方法
1.热处理结合茎尖培养脱毒 2.微体嫁接脱毒
微尖嫁接技术（micrografting shoot-tip），指在人 工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（0.14-
1.0mm,带3-4个叶愿基）以培养脱毒苗的技术。
主要脱毒程序是：无菌砧木培养 茎尖准备 嫁 接 嫁接苗培养 移植。
3.抗血清鉴定法 植物病毒是由核酸和蛋白质组成的核蛋白复
合体，因而也是一种抗原，注射到动物体 内即产生抗体，抗体存在于血清之中，称 为抗血清。由于不同病毒产生的抗血清都 有特异性，用特定病毒的抗血清来鉴定该 种病毒，具有高度的专一性和特异性，几 分钟至几小时即可完成，方便简易，为常 用方法之一。
三、无病毒苗的保存和繁殖
（一）无病毒苗的保存 无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有
可能很快又被重新感染。所以一旦培育得 到无病毒苗，就应很好保存，这些原原种 或原种材料保管得好可以保存利，使用300目， 即网眼为0.4～0.5mm大小的网纱，也可用盆栽 钵，可以防止蚜虫、叶蝉、土壤线虫进入。栽培 用的土壤也应进行消毒，周围环境也要整洁，并 及时喷施农药防治虫害，以保证植物材料在与病 毒严密隔离的条件下栽培。 有条件的地方可以到 海岛或高冷山地种植保存，那里气候凉爽，虫害 少，有利于无病毒材料的生长，繁殖。另一种更 便宜的方法，是把由茎尖得到的并已经过脱毒检 验的植物通过离体培养进行繁殖和保存。
采顶芽与侧芽消毒接种。
消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去 大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精 中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无 菌水冲洗材料4-5次。
（2）接种
材料置10～40倍的双筒解剖镜下，解 剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶 原基的茎尖，接种到培养基上。
植物离体快速繁殖
植物离体快速繁殖又称微体快繁（微繁）： 是指利用植物组织培养技术进行的一种营 养繁殖方法；是在无菌条件下，把离体的 植物器官、组织，放在人工控制的环境中， 使其分化、繁殖，在短时间内产生大量遗 传性一致的完整新植株的技术。
植物离体快速繁殖的优点：
1.繁殖系数高，繁殖周期短，繁殖速度快 2.应用广泛，是推广良种的重要手段 3.繁殖材料用量少，不受季节限制，可实现
3.诱导茎芽生根形成小苗时期
本时期是使上一期培养出的微枝发出不定根， 形成完整的小苗，以便经过驯化，培养成 商品苗。
4.生根小苗移栽和驯化时期
这个阶段是将已生根的完整植株从培养室移 植到室外土壤中，使小苗继续长大。
即是所说的试管苗驯化。
试管苗驯化
试管苗驯化过程也叫炼苗，这是组织培养技 术应用于生产实践面临的一个重大问题。 要使试管苗移栽成功要做好以下工作：
2.稳定培养系的增殖、生长和增壮时期
是指使已经达到稳定状态的培养物，通过不 断的继代培养进行增殖，从而达到所要求 的数量；培养增殖后的培养物生长和壮大 到生根所需要的大小和壮实程度的时期， 是商品化组织培养的主要时期。
此阶段是整个商品化培养过程的关键。快繁 的目的就是在最短的时间内生产最多的优 质苗木。
1.培育壮苗（内因） 2.选择合适的移栽介质 3.注意移栽方式 4.加强载后的环境调控