血清甘油三酯测定
十三血清甘油三酯的测定血清甘油三酯测定方法较多但主要
十三血清甘油三酯的测定血清甘油三酯测定方法较多但主要血清甘油三酯（TG）的测定方法较多，主要可以分为光度测定法、酶法、高效液相色谱法（HPLC）和质谱法等。
下面将对其中几种常用的测定方法进行详细介绍。
1.光度测定法光度测定法是通过测量样品中TG与其中一试剂反应生成的有色产物的吸光度来确定TG浓度。
常用试剂有酚氨法、儿茶酚法和浮选酶法等。
这些方法简单、灵敏度高，但可能会受其他物质的干扰，如胆固醇、胆汁酸等。
2.酶法酶法是利用氧化酶来催化TG水解产生的氢过氧化物与试剂发生比色反应来测定TG浓度。
常用的试剂包括脂肪酶、过氧化氢酶和色氨酸等。
此类方法操作简便，测定结果准确可靠，但可能会受到干扰物质的影响。
3.高效液相色谱法（HPLC）HPLC是一种高效的分离和定量分析方法，常用于测定血清中各种代谢产物，包括TG。
一般使用反相色谱柱，流动相通常为乙腈-水或甲醇-水体系，通过在不同条件下分离目标化合物，并通过检测器进行定量分析。
该方法具有灵敏度高、特异性好的特点，但需要较复杂的设备和操作，且耗时较长。
4.质谱法质谱法是一种非常准确和灵敏的方法，可以用于测定血清中TG的浓度。
常用的质谱方法有气相色谱-质谱联用（GC-MS）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）。
这些方法可以通过比较样品与内标物的质荷比来确定TG的浓度。
质谱法具有高灵敏度、高分辨率和高特异性等优点，但设备和操作成本较高。
综上所述，血清甘油三酯的测定方法较多，每种方法都有其优缺点。
在选择测定方法时，需要根据实验目的、样本特点以及实验条件来综合考虑，选择最适合的测定方法。
《生物化学试验》实验四：血清甘油三酯含量测定
A standard
0.2
M standard = C standard× V standard
正常参考值为10-150 mg/dl。
注意事项
抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 选用小试管时试管口径不能太细；
试管使用时必须要干燥；
实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净，甩干
组成与含量 总 脂 400~700mg/dl (5 mmol/L) 甘油三酯 10~150mg/dl (0.11 ~ 1.69 mmol/L) 总 磷 脂 150~250mg/dl (48.44 ~ 80.73 mmol/L) 总胆固醇 100~250mg/dl (2.59 ~ 6.47 mmol/L) 游离脂酸 5~20mg/dl (0.195 ~ 0.805 mmol/L)
实验四
血清甘油三酯含量测定
Assay of Triglyceride content
一、目的与要求
1、了解血清(serum)甘油三酯含量测定的 正常值与临床意义
2、掌握血清甘油三酯化学法测定的基本原 理及主要技术方法
BACKGROUND
血浆所含脂类统称血脂， 包括：甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯以及游离脂酸。
PRINCIPLE
甘 FA 油 FA
FA
1、血清脂蛋白中的甘油三酯经正庚烷-异丙醇混合 溶剂抽提(isolated )后，脂蛋白变性，结合的甘 油三酯分离。
2、用氢氧化钾皂化(saponified)，使甘油三酯水解 成脂肪酸和甘油。
3、游离的甘油被过碘酸氧化(oxided)成甲醛，甲 醛与乙酰丙酮在铵离子存在下，缩合成黄色的3, 5-二乙酰-1, 4-二氧二甲基吡啶，
19 生物化学实验--乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯含量
乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯含量【目的】1 ．掌握乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯含量的实验方法。
2 ．熟悉乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯含量的实验原理。
【原理】血清中的甘油三酯，经正庚烷 - 异丙醇混合剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化水解生成甘油和脂肪酸钾。
甘油被过碘酸钠试剂氧化生成甲醛。
甲醛与乙酰丙酮在氨离子存在下，加热生成黄色的 3.5 一二乙酰—1.4 一二氢二甲基吡啶衍生物。
与同样处理过的三油酰甘油酯标准液进行比色后，求得血清中甘油三酯的含量。
此法称为乙酰丙酮显色法又称为 Hantzsch 化学法，是最经典可靠的测定血清甘油三酯含量的实验方法，也是国内各实验室最多采用的方法。
其反应过程如下：1 ．皂化反应甘油三酯+ 3KOH → 甘油 + 3RCOOK2 ．甘油氧化反应甘油+ HIO 4 → HCHO + HCOOH + HIO 3 + H 2 O过碘酸甲醛甲酸碘酸3 ．显色反应【器材】1 ．分光光度计2 ．恒温水浴3 ．微量移液器4 ．混匀器5 ．中号试管【试剂】1 ．抽提剂正庚烷 / 异丙醇以 2/3.5(V/V) 比例混合，即正庚烷 200ml 与异丙醇 350ml 混匀，置棕色瓶中保存。
该试剂在室温下可保存两个月。
2 ． 0.04mol/L 硫酸溶液取浓硫酸 ( 比重 1.84 ， 95%)2.24ml ，缓慢加入约 100ml 蒸馏水中，冷却后再加蒸馏水至 1000ml 。
3 ．皂化剂取氢氧化钾 ( 分析纯 ) 60g ，溶于 600ml 蒸馏水中，再加异丙醇 400ml ，混匀，置棕色瓶中保存，于室温下保存可使用两个月以上。
4 ．氧化剂称取过碘酸钠 650mg ，溶于 500ml 蒸馏水中，然后加无水醋酸铵 77g ，溶解后，再加冰醋酸 60ml 。
5 ．显色剂取 4ml 乙酰丙酮，加到 1000ml 异丙醇中，混匀，置棕色瓶中，室温保存。
6 ．三油酸甘油酯标准溶液：（ 1 ）贮存液 (10mg/ml) ：精确称取三油酸甘油酯 1.00g ，用少量抽提剂溶解后，移入 100ml 容量瓶中，最后以抽提剂稀释至 100ml 刻度处。
血清甘油三酯的酶法测定
—— 在规定 温度下 保 持 稳 定 1年 ;
——试 剂批 间差小 于 1%。
4,2 校 准物质 和质控 物
酶法测定甘油三酯使用 的校准物 和质控物应符合如下要求 : ——可使 用血清校 准 物 ,在 测 定 总甘 油 的方 法 中也 可使 用 甘油水 溶 液 校 准物 ;
情 况 下 甘 油 二 酯 和 甘 油 一 酯 之 和 不 足 甘 油 三 酯 的 3%,游 离 甘 油 约 0.11mmo1/L)。 甘 油 三 酯 重 量 多 以
三 油 酸 甘 油 酯 (相 对 分 子 质 量 885.5)计 。
3 方法概述
3.1 总 甘 油 测 定
目前 ,临 床 实 验 室 普 遍 采 用 酶 法 测 定 血 清 甘 油 三 酯 。首 先 ,用 脂 肪 酶 水 解 甘 油 三 酯 为 甘 油 和 脂 肪
质 、血 红蛋 白等有 色 物 质 的干扰物 质 。
7.2 精 密 度 和 准确 度 的评 价
无论 选 用 何 种 原 理 测 定 甘油 三酯 的酶试 剂 ,均 应 对 其 适 用 性 、线 性 范 围 、检 测 限 、灵 敏 度 、特 异 性 等 进 行评 价 。选 用 的分 析 系统 (试 剂 、校 准物 质 和仪 器 )应 在 评 价 并 保 证 其 精 密 度 和准 确 度 之 后 用 于 病 人 样 品分 析 ;应 用 中 的分 析 系统应监 测 和保 持其精 密 度 和 准 确 度 。应 尽 量 选 用 分 析结 果 可 溯 源 至 公 认 参 考 系统 (见 附 录 B)的 分 析 系统 。可应 用 二 级参 考 物 质 或参 考 测 量 程 序评 价 准确度 。选 用 的分 析 系 统 的 测 定结 果 与参 考 测 量 程 序测 定 结果 之 间 的相 对 不 准 确 度 (相 对 偏 差 )小 于 ±5%。
血清甘油三酯2.05
血清甘油三酯2.05
血清甘油三酯的正常范围为0.45-1.7mmol/L，而甘油三酯2.05mmol/L说明存在偏高的情况。
这一结果可能与不良饮食习惯、生活方式、身体过度肥胖或高血糖等原因有关。
为了改善这一状况，可以采取以下措施：
1. 控制饮食：避免经常食用动物内脏、肥肉、油炸食品以及蛋黄、鱼籽等食物，以控制脂肪和胆固醇的摄入量。
2. 适当运动：进行适当的运动以加速脂肪燃烧，如快走、慢跑、游泳、登山等有氧运动。
在饮食控制和运动管理下，甘油三酯水平可能在2周左右得到显著改善。
3. 药物治疗：如果经过2周左右的饮食控制和运动管理后，甘油三酯复查仍然处于较高水平，可以考虑口服一些药物，如贝特类降脂药、力平之和新型的药物海博麦布、依折麦布等，这些药物能对甘油三酯的效果达到很好的疗效。
4. 定期检查：血清甘油三酯水平过高可能与一些疾病有关，如糖尿病或心血管疾病。
如果血清甘油三酯水平持续偏高，应定期进行身体检查，以便及时发现并治疗潜在的疾病。
甘油三酯(TG)测定操作规程(SOP)
甘油三酯(TG)测定操作规程（SOP）一、用途体外定量测定血清、血浆样品中甘油三酯（TG）的含量。
二、临床意义（一）概述甘油三酯（TG）分子量约为885道尔顿，是血液中主要的脂质成分，主要参与体内能量代谢。
（二）临床意义甘油三酯是最常用的高脂血症筛查指标。
甘油三酯升高常见于糖尿病、肾病综合征、脂肪肝及其他肝病、SLE、胰腺炎、糖原累积病等。
妊娠中后期TG升高。
先天性脂蛋白脂肪酶缺陷时TG异常升高。
甘油三酯降低见于甲状腺功能低下，肾上腺皮质功能降低和肝功能严重低下。
甘油三酯与HDL－C间呈负相关，而HDL－C和冠心病的流行呈负相关。
测定血清TG评估HDL－C降低是否由于血中TG过多引起，以制定治疗方案有意义。
血清TG＞2．8mmol／L时，HDL－C下降的机会增大。
（三）医学决定水平0.45mmol/L：此值在正常下限附近，低于此值多与营养不良有关，应进行正确的诊断和治疗。
1.69mmol/L：年轻男性此值接近参考范围上限，为动脉粥样硬化性心血管的一个危险因子，应给予病人提供合适的预防建议。
4.52mmol/L：高于此水平常预示会发生动脉粥样硬化性心血管疾病，应给予适当治疗，如控制饮食和用降脂药物等。
三、检验原理甘油三酯＋H2O−−→−LPL甘油＋脂肪酸甘油＋ATP−→−GK 3-磷酸-甘油＋ADP3-磷酸-甘油＋O2−−→−GPO磷酸二羟丙酮＋H2O2H202＋4-AAP＋4-氯酚−−POD醌亚胺＋H2O−→醌亚胺的生成使505nm波长处吸光度上升，吸光度的变化与TG的含量成正比。
通过与同样处理的甘油三酯校准品比较，即可计算出样品中TG的含量。
四、样品血液样品原则上采集空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
血清甘油三酯(Triglyceride,TG)含量测定试剂盒使用说明
血清甘油三酯（Triglyceride，TG）含量测定试剂盒使用说明产品简介：TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是体内能量的主要来源。
血清甘油三酯/三酰甘油（TG）是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视。
血清中加入异丙醇抽提取甘油三酯，经KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸，甘油在过碘酸作用下氧化成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色的3，5二乙酰，1，4二氢甲基吡啶，其颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1瓶，70mL，4℃保存；试剂二×1瓶，15mL，4℃保存；试剂三×1瓶，30mL，4℃保存；试剂四×1瓶，10mL，4℃避光保存；试剂五×1瓶，30mL，4℃避光保存试剂六×1瓶，30mL，4℃避光保存标准品×1支，10mg/ml甘油三酯，临用前用试剂一稀释10倍，即为1mg/ml标准甘油三酯溶液。
操作步骤：一、甘油三酯的提取：空白管标准管测定管双蒸水0.1//1mg/ml标准液（ml）/0.1/血清（ml）//0.1试剂一（ml） 1.25 1.25 1.25试剂二（ml）0.250.250.25加试剂一后充分混匀，再加试剂二，剧烈震荡30s，静置，待分层后取上层溶液0.15ml，置于新的EP管中。
二、甘油三酯含量的测定：按下表操作：空白管标准管测定管上层溶液0.150.150.15试剂三0.50.50.5试剂四0.150.150.15充分混匀，65℃水浴3min试剂五0.50.50.5试剂六0.50.50.5充分混匀，65℃水浴15min取出EP管，待冷却后，于420nm处比色。
甘油三酯含量计算：血清甘油三酯含量（mg/dl）＝100×OD测定管/OD标准管注意事项：1，试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩。
血清甘油三酯酶试剂法测定法
血清甘油三酯酶试剂法测定法1.实验原理脂蛋白酯酶（LPL）、甘油激酶（GK）、甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）、过氧化物酶(POD)、Trinder反应偶联比色终点法。
反应式如下：LPL甘油三酯+ H2O 甘油+ 脂肪酸GK甘油+ ATP 甘油-3-磷酸+ ADPGPO甘油-3-磷酸+ O2二羟丙酮磷酸+ H2O2POD2H2O2+ 4-氨基安替比林+ 4-氯酚醌亚胺+ HCl + 4H2O2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存至少可稳定1年。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂申能甘油三脂试剂盒（货号：112 5717170 1 试剂8×70ml）6.1.1 试剂组成Good’s缓冲液pH 7.2 50mmol/L4-氯酚4mmol/LATP 2mmol/L镁离子15mmol/L4-氨基安替比林0.5mmol/L甘油激酶（GK）≥400U/L过氧化物酶（POD）≥2000U/L脂蛋白酯酶（LPL）≥2000U/L甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）≥500U/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
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Biochemistry Experiments
5
加入物(ml) 上清液
空白管 —
标准管 —
测定管 0.2
参考血清
蒸馏水 抽提液 硫酸溶液
—
0.2 2.5 0.5
0.2
— 2.5 0.5 充分摇匀剧烈震荡15秒 静止分层 取0.3ml 上层液
—
— 2.5 0.5
异丙醇 皂化试剂
1.0 0.3 混匀56度6分钟hemistry Experiments
2
甘油三酯(TG)的结构：
2016/6/3
Biochemistry Experiments
3
1.实验原理
抽提:正庚烷一异丙醇 皂化 氧化 显色 比色计算
0.2 × 100 0.2 ＝ mg% ×
测定管吸光度 标准管吸光度
血清甘油三酯测定
血清甘油三酯测定
血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合
溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，
并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的
存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙 酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的 黄色物质。与同样处理的标准液比色计算， 即得血清中甘油三酯的含量。
2016/6/3
Biochemistry Experiments
4
2.操作
测定管 标准管 空白管
正庚烷一异丙醇
抽提 充分摇匀 准确抽吸0.3ml
上层液至
测定管 加皂化试剂 标准管 混匀56度6分钟 空白管
显色剂
混匀56度25分钟
测定管 标准管 空白管
冷却 420nm 分别比色 计算
2016/6/3
1.0 0.3
1.0 0.3
氧化试剂
乙酰丙酮
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
2016/6/3
Biochemistry Experiments
6
3.注意事项
• 提取时,充分震荡,吸量上层液时注意不要吸到
到下层液;
• 每一步骤均应混匀,保温时间要准确;
2016/6/3
Biochemistry Experiments