自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血PBMC增殖及杀瘤

IL-2 / TS A3
0. 37± 0. 04
0. 58± 0. 12
* P < 0. 01与单独 IL-2诱导比较 表 2 细胞表型测定结果 (% )
表型 CD+3 CD+4 CD+8 CD+25 * P < 0. 01
IL-2诱导 79 16 68 15
IL-2 / TS A协同诱导 84 19 92* 52*
本 工 作 表 明 , 一 定 剂 量 T SA 使 IL- 2 诱 导 PBMC细胞群体中 CD+8 及 CD+25表达率显著增高。 提示这种增高为杀瘤活性增强的细胞基础。已知 IL- 2激活 PBMC系 统为非均一性细 胞群体 ,推 测 TSA也可能激活了其中单核细胞、巨噬细胞及 B细 胞等 ,共同导致杀瘤活性增强。本文为研究 TAK细 胞提供了实验依据 ,提示该类细胞具有临床过继免 疫治疗应用的潜能。
四、细胞表型检测及体外杀瘤活性 培养 7天 时 , 10μg /ml TSA协同 IL-2诱导 PBMC与单独 IL2诱导表型差异见表 2。其中 CD+8 及 CD+25表达率增 高 ,差异有显著性 ( P < 0. 01)。当效 /靶比为 80∶ 1 时 , IL-2 诱 导 的 PBMC 杀 瘤 活 性 为 48. 6% , 而 10μg /mlTS A协同诱导 PBMC杀瘤活性为 86. 3% ,
导 PBM C增殖及杀瘤作用。 方法 分三组用 APAAP 法观 察细胞表 型 , M TT 法测 定 细胞 增殖 及 杀瘤 活性 (靶细 胞 为 MNK45系人胃低分化腺癌细胞 )。 结果 培养第 7天 TSA ( 10μg /ml)协同 IL- 2诱导 PBM C增殖显著高于单独 IL- 2诱 导 (P < 0. 01)。且 CD+8 及 CD+25表达率增高 , 差异有显著性 (P < 0. 010,当 效 /靶比为 80∶ 1时 IL- 2诱导 的 P BM C杀瘤 活 性为 48. 6% ,而 10μg /ml TSA协 同诱导 PBM C杀 瘤活性 为 86. 3% 。 结论 为研究 TAK细胞提供了实验依据 , 提示该 类细胞具有临床过继免疫治疗应用的潜 能。
0. 33± 0. 08 0. 27± 0. 05
0. 54± 0. 11 0. 45± 0. 09
TS A3 ( 40μg /ml )
0. 31± 0. 02
0. 48± 0. 10
IL-2 / TS A1 IL-2 / TS A2
0. 46± 0. 03 0. 42± 0. 06
0. 74± 0. 23* 0. 62± 0. 18
TSA单独均不能诱导 PBMC增殖 ,即使与 IL-2协 同诱导 , 3天时 也未发现增 殖差异。培 养 7天时 , 10μg /ml TSA与 IL- 2共同诱导 PBMC增殖显著高 于单独 IL-2诱导。说明机体免疫细胞识别外来抗原 需一定反应周期 ,另外该现象也与免疫反应中剂量 - 反应规律相吻合。合适的抗原浓度对促发免疫反 应是必需的。 TSA促进 IL-2诱导 PBMC增殖具体 机制不明 ,是否患者 PBMC群体中存在记忆性细胞 ( CTL前体 )仍有待探讨。
关键词 抗原 , 肿瘤 自身抗原 IL- 2 P BMC
肿瘤过继免疫治疗中 ,体外诱导高效细胞毒淋 巴细胞 ,扩大培养并加以转输是重要课题之一。有实 验证实同种异体肿瘤抗原可以协同 IL-2诱导外周 血 PBMC增殖 ,并增强其杀瘤作用 [1 ]。作者以往工 作 [2 ]也表明肿瘤细胞膜表面糖蛋白抗原组份也有类 似作用。迄今未见有自体肿瘤可溶性抗原与 IL-2共 同诱导 PBMC的报道 ,作者对此进行研究。
肿瘤 1997年 10月 (第 17卷 第 5期增 刊 )
· 359·
说明 TSA应用显著增强了 PBMC体外杀瘤活性。
表 1 各组细胞增殖情况 ( x-± s )
培养条件
3天
7天
IL-2( 400U /ml )
0. 42± 0. 10
0. 58± 0. 12
TS A1 ( 10μg /ml ) TS A2 ( 20μg /ml )
· 358·
TUMO R( Sha nghai) Octobe r 1997, Vol. 17 No. 5( Suppl)
自 体 可 溶 性 肿 瘤 抗 原 协 同 IL- 2诱 导 外 周 血 PBM C增 殖 及 杀 瘤 *
刘振华 蓝 兰 林秋华 王清水
目的 探讨自体可溶性肿瘤抗原 ( TSA)与 IL- 2共 同诱
参 考 文 献
1 陈毓仙 ,石 卫 , 万云霞 ,等 . 可溶性肿 瘤抗原和 CD3 单 克隆抗 体 共同诱导的杀瘤细胞 TAK细胞 . 中华微生物和免疫学杂志 , 1995, 15( 5): 293
2 刘振华 ,蓝 兰 ,王清水 . 肿瘤疫 苗对人胃 腺癌 L AK增 殖及杀 瘤活性的影响 . 中国肿瘤生物治疗杂志 , 1996, 3( 2): 119
四、细 胞增殖 ,表型 及杀瘤 活性检 测 [6 ] 细胞表型检 测用 APAAP 法 [ 5] ; M T80∶ 1,靶细胞 MNK45系人胃低分化腺癌细胞 ,引自上海中科院细 胞生物研究所。
结 果
一、提取的 TS A含量为 91μg /ml ,电泳显示提 取 TSA为非均一区带 ,分子量在 14～ 24KD。
4 袁 玫 ,张晓平 ,李 力 . 检测粪便中的癌相关抗原 S- Tn, Tn及 CEA诊断胃癌 . 癌症 , 1994, 13( 5): 405
5 刘振华 ,蓝 兰 ,王清水 . 胃肠道肿瘤 相关抗原的免 疫电泳检测 . 福建医药 , 1995, 17( 6); 212
6 刘振华 ,蓝 兰 ,王清水 . CD3 AK细 胞的增殖 , 杀瘤活性 及临床 初步应用 . 中国人兽共患病杂志 , 1996, 12(3): 52 (收稿: 1996-10-17 修回: 1997-03-10)
二、间接 ELISA试验证实 ,提取 TSA确系自体 可溶性肿瘤抗原组份。
三、各组细胞增殖情形 三浓度 TSA单独诱导 及与 400U /ml的 IL-2共同诱导 PBMC, 3天时均与 IL- 2 单 独诱 导 无 统计 差 异。第 7 天 时 , 10μg /ml TSA协同 IL-2诱导 PBMC增殖显著高于单独 IL- 2 诱导 ( P < 0. 01)。而单独 TSA诱导未见明显促增殖 效应。其他剂量 TSA协同 IL-2诱导与单独 IL-2诱 导亦无统计差异 (见表 1)。
* 本工作受福建省科委 95 J13课题资助 作者单位: 福建省立医院肿瘤生物治疗研究中心 (福州 350001)
子量。 三、细胞培养 无菌抽取患者自体外周肝素抗凝
血 ,经 Ficoll- Hypaque密度梯度离心分离得 PBMC, 分 三 组: ( 1) 1× 106 / ml 的 PBMC 与 IL-2( 400U / ml ) ; ( 2) 1× 106 /ml 的 PBMC与不同浓度的 TSA; ( 3) 1× 106 /ml 的 PBMC与不同浓度 T SA与 IL- 2 ( 400U / ml)。 37℃ , 5% CO2 饱和湿度培养。
讨 论
近年有学者 利用同种异体 肿瘤抗原协同 CD3 单抗及 IL-2体外诱导扩增出 T AK细胞 ,观察到其 较 CD3 AK及 LAK体外增殖快 ,增殖倍数大 ,低依 赖 IL-2,且呈现非 M HC限制杀伤特征。但目前仍未 见有自体肿瘤抗原协同 IL- 2诱导 C TL的报道。
作者的实验表明 ,经生化抽提等步骤 ,经间接 ELISA证实 ,获得了为抗人胃肠道肿瘤单抗所识别 的肿瘤抗原 TSA组分。细胞培养结果发现 ,各剂量
3 Rot zsch ke O, Flak K, Nat urall y occuring pepti de anti gens d rei ved from th e M HC class I- res t rict ed proces sing pathway. Imm unology Today, 1991, 12: 447
材料和方法
一、肿瘤可溶 性抗原提 取 [3 ] 自胃腺癌手术标本制 得单细胞悬液 ,经 3mol KCl 抽提 ,饱和硫酸铵盐析 及低温高速离心等步骤 ,取细胞膜及细胞内可溶性 蛋白 ( T SA) , Beckman紫 外透射仪蛋白定 量 ,过滤 除菌 , - 20℃备用 [2 ]。
二、肿 瘤抗原 ( TSA)的鉴 定 抗人胃肠道肿瘤单抗 Cl- 3及 PS- 9由 301医院袁玫 教授惠赠 ,采用间接 ELISA法鉴定 [4 ]。醋酸纤维膜电泳 [ 5 ]测定其大约分