光激化学发光免疫检测技术与临床应用研究进展
光激化学发光在光电子学中的应用与发展

光激化学发光在光电子学中的应用与发展光激化学发光是一种利用光能激发化学物质发出荧光的现象,其在光电子学领域中具有广泛的应用前景。
本文将探讨光激化学发光的基本原理、应用情况以及未来的发展方向。
一、光激化学发光的基本原理光激化学发光是指通过外界光能的激发,使得化学物质发生激发态与基态之间的能量转换,并伴随着光子的辐射发出荧光。
这种现象是光电子学领域中的一个重要研究对象,研究其基本原理对于实现新型光电子器件的设计与制备具有重要意义。
二、光激化学发光的应用情况1. 生物医学领域:光激化学发光在生物标记、病理诊断和生物传感等方面具有重要的应用价值。
通过将特定的化学物质与生物分子结合,可以实现对生物分子的高灵敏度检测。
此外,光激化学发光还可用于荧光显微镜成像,提高生物组织的可视化效果。
2. 光电子器件:光激化学发光在光电子器件中的应用日益广泛。
例如,光激化学发光可用于LED显示屏的背光源,提高显示屏的亮度和颜色还原度。
同时,光激化学发光还可用于激光器、太阳能电池等器件的制备,提高器件的性能和效率。
3. 环境监测:光激化学发光可应用于环境监测领域,实现对污染物的快速检测和监测。
利用特定的化学发光反应,可以对大气中的有害气体、水中的污染物等进行高效、敏感的检测,为环境保护和污染治理提供技术支持。
4. 安全防伪:光激化学发光在安全防伪领域有着重要的应用。
通过使用特定的化学物质和发光标记技术,可以制备防伪标签、防伪图案等,用于商品的真伪鉴别、身份证明等方面,提高产品的安全性和可信度。
三、光激化学发光的发展方向1. 材料研究:进一步深入研究光激化学发光材料的性能与结构之间的关系,开发出更高效、更稳定的发光材料,以满足不同应用领域的需求。
2. 技术创新:发展更加便捷、高效的光激化学发光激发技术,探索新型的光源和激发方式,提高光激化学发光的发光效率和响应速度。
3. 应用拓展:加强与其他学科的交叉合作,将光激化学发光技术与微纳制造、生物医学、环境监测等领域相结合,开发出更多新颖的应用方向。
化学发光免疫分析技术在临床诊断中的应用

化学发光免疫分析技术在临床诊断中的应用化学发光免疫分析技术是一种基于特定抗体和荧光标记物的检测方法,通过测量样品中的荧光强度,可对特定生物分子(如蛋白质、激素、抗体等)进行定量检测。
这种技术广泛应用于医学领域,特别是在临床诊断和药物研发方面,发挥着重要的作用。
一、化学发光免疫分析技术的原理与优势化学发光免疫分析技术是基于光致化学反应的原理,当样品中存在特定生物分子与荧光标记物结合时,激发荧光标记物时产生能量,并在光致化学反应的过程中释放荧光。
通过检测荧光信号的强度,可以测量样品中特定生物分子的含量。
与传统的ELISA(酶联免疫吸附测定法)相比,化学发光免疫分析技术具有很多优势。
首先,其检测灵敏度高,可以检测到非常低浓度的生物分子,能够提高疾病诊断的准确性。
其次,化学发光免疫分析技术具有高度的特异性,可以仅检测到特定的生物分子,而不受其他交叉反应的影响。
此外,该技术快速、可靠,自动化程度高,具有批量分析的能力,大大提高了分析效率和精度。
二、化学发光免疫分析技术在临床诊断中的应用非常广泛,例如:1. 甲状腺功能检测甲状腺功能检测是临床常用的一项检查,常用T3、T4、TSH等指标来确定甲状腺功能的异常。
化学发光免疫分析技术可以用来准确测量这些指标的含量,从而确定甲状腺功能异常的类型和严重程度。
2. 肝功能检测肝功能检测可通过检测ALT、AST、ALP、GGT等多种指标来确定肝功能异常。
使用化学发光免疫分析技术,可以快速、准确地测量这些指标的含量,以及检测血清中的乙型肝炎病毒等。
3. 细胞因子水平检测细胞因子是调节免疫反应的重要分子,其水平的异常会导致许多免疫性疾病的发生。
化学发光免疫分析技术可以用来检测细胞因子的含量,从而确定免疫反应的程度和类型。
4. 肿瘤标志物检测肿瘤标志物检测是诊断肿瘤的重要手段之一,常用于癌症的早期筛查和治疗效果监测。
化学发光免疫分析技术可以用来检测血液或尿液中特定肿瘤标志物的含量,从而提高癌症的检测准确率和治疗效果监测的精度。
化学发光免疫分析技术及其在临床检验中的应用

化学发光免疫分析技术及其在临床检验中的应用化学发光免疫分析技术,实质上就是将免疫分析方法与化学发光有机结合在一起的一项技术,也是现阶段最为先进的一项标记免疫分析技术,具备免疫分析的高选择性与化学发光的高灵敏度,在药物分析与临床监测中的应用范围非常广泛,尤其是在临床检验中的应用。
本文主要针对化学发光免疫分析技术进行深入分析,探究化学发光免疫分析技术在临床检验中的应用方法与效果。
Abstract:Chemiluminescence immunoassay technology,essentially immune analysis method in combination with chemical luminescence of a technology,is also a mark immune analysis at present the most advanced technology,with high selectivity and chemiluminescence immune analysis of high sensitivity,and its application in pharmaceutical analysis and clinical monitoring scope is very broad,especially the application in the clinical laboratory.This paper focuses on analyzing the chemiluminescence immunoassay technology,explore the chemiluminescence immunoassay technology application in the clinical test methods and results.Key words:Chemiluminescence immunoassay technology;Clinical trial;Application临床检验过程中,经常需要检测与分析一系列表征性物质,以此对疾病进行判断[1]。
临床免疫分析发展趋势及化学发光技术应用

➢ CLIA试剂盒国产化程度已经较高,质量与国外产品的差距逐渐减小。 型
原理
试剂
化学发光免疫分析 (CLIA)
化学发光物质直接标 吖啶酯
记抗原(体)
异鲁米诺
鲁咪诺系统
化学发光酶免疫分析 在酶免疫分析完成后 AMPPD系统
(CLEIA)
加入底物
电致化学发光与电化
临床免疫分析发展趋势 及化学发光技术应用
- 免疫扩散 - 免疫沉淀/免疫凝集 - ELISA - IFA - RIA - ICT
- 化学发光 - 荧光偏振 - 微粒子酶放大化学发光 - 电化学发光 - 时间分辨免疫荧光 - 抗体芯片 - 透射和散射比浊 - 流式细胞技术
免疫学和自动化技术在临床免疫学诊断领域中的应用将大大加速
4.2光激化学发光(Lica) 博阳
4.3多种技术综合
美国雅培 AxSYM MEIA 日本东曹MEIA
时间分辨荧光免疫分析 TRFIA
基本原理 TRFIA是用镧系稀土元素螯合物标记抗
体或抗原,检测标本中相应的抗原或抗体, 用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定反应产 物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对 荧光强度的比值,判断反应体系中分析物的 浓度,从而达到定量分析。
化学发光免疫分析方法与应用进展

化学发光免疫分析方法与应用进展【摘要】化学发光免疫分析在药品检验、食品检验等多领域广泛应用。
本文对当前化学发光免疫分析方法以及发展进行分析,以供参考。
【关键词】化学发光免疫;应用;发展一、前言化学发光免疫分析方法灵敏度高、适用范围广泛受到了人们的认可,在医学、食品、药品等众多领域广泛使用。
传统的免疫分析需要的培育时间长,因此,提高分析的时间和效率是当前研究人员重点解决的问题。
二、化学发光免疫分析法化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法。
化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合,用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与待测的抗原或抗体反应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或定性检测。
化学发光免疫分析中使用最多的4类标记物为鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物,吖啶酯衍生物,过氧化物酶和碱性磷酸酶。
以酶为标记物的化学发光仍然是化学发光免疫分析的主流,辣根过氧化物酶(HRP)与碱性磷酸酶(ALP)是两种常见的标记酶,均有其相应的化学发光底物,在临床检验中有广泛应用,开发催化活性更高、稳定性更好、发光动力学曲线更符合免疫分析的酶和底物是化学发光免疫分析的研究热点之一。
三、PEC免疫分析的基本装置PEC分析需要在光电检测系统中实现.该系统主要包括激发光源、吸收池以及三电极体系的电化学装置.在光激发条件下,电解质溶液中光电活性材料的表面将发生电荷的分离与跃迁,电极表面发生一定的氧化还原反应从而在外电路产生电流,这一过程由电化学装置所记录并用于特定检测对象的测定.PEC免疫分析的基本原理是基于免疫反应前后光电流信号的变化。
在一个简单典型的PEC免疫系统中,免疫探针分子(通常是特异性的抗体或抗原)首先被固定在光电换能器(transducer)表面作为识别元件(recognitionelement),抗原(或抗体)作为待测物与探针分子在电极表面形成免疫复合物,导致光电流信号的增强或降低.本节将介绍PEC免疫传感界面的基本构建过程,主要包括光电极的选择与制备、免疫探针分子的固定等重要步骤。
光激化学发光在生物医学成像中的应用与进展

光激化学发光在生物医学成像中的应用与进展光激化学发光,作为一种重要的荧光标记技术,在生物医学成像领域具有广泛的应用前景。
本文将探讨光激化学发光在生物医学成像中的应用与进展。
一、光激化学发光技术简介光激化学发光是一种基于可见光或近红外光激发荧光物体发射荧光的技术。
其原理是通过光激活荧光分子内的激发态,使其产生荧光发射。
由于荧光发光的特异性和高灵敏度,光激化学发光技术被广泛应用于生物医学成像领域。
二、光激化学发光在生物医学成像中的应用1. 细胞成像光激化学发光技术可以用于对细胞进行高分辨率成像。
通过选择合适的荧光标记剂,可以实现对细胞器和分子的准确标记。
这不仅有助于研究细胞组织的结构与功能,还可以用于研究细胞的病理变化。
2. 活体小动物成像光激化学发光技术在活体小动物成像中起到了重要作用。
利用激光光源和高灵敏度的光学成像系统,可以实现对小动物体内组织和器官的高分辨率三维成像。
这为深入研究小动物的生理和病理过程提供了强大的工具。
3. 荧光探针成像光激化学发光技术被广泛用于荧光探针成像。
荧光探针是一种特殊的荧光标记剂,通过与目标分子的结合发出特定的荧光信号。
利用光激化学发光技术,可以实现对生物体内各种分子和生物过程的高灵敏度检测和成像。
4. 癌症诊断和治疗光激化学发光技术在癌症诊断和治疗中具有巨大潜力。
通过选择合适的荧光标记剂和针对靶向分子的光敏剂,可以实现对癌细胞的高灵敏度诊断和定位。
同时,光激化学发光技术也可以用于光动力疗法,通过激活局部的光敏剂,来杀灭癌细胞。
三、光激化学发光在生物医学成像中的进展随着技术的不断发展,光激化学发光在生物医学成像中取得了许多重要进展。
1. 提高成像分辨率通过改进荧光标记剂和光学成像系统,光激化学发光技术在成像分辨率上取得了较大突破。
新型的荧光探针和高分辨率显微镜的应用,使得生物体内微小结构和细胞器的成像更加清晰和精准。
2. 增强成像深度针对传统光激化学发光技术在成像深度上的限制,研究人员利用近红外光等长波长的光激发方式,成功增强了光激化学发光技术的成像深度。
化学发光免疫分析技术及其应用研究进展

化学发光免疫分析技术及其应用研究进展作者:姚彦红张芳妮来源:《中国保健营养·下旬刊》2014年第03期[摘要] 目前化学发光免疫分析技术在医学以及食品安全检测中都有着较多的应用,本文主要通过介绍化学发光免疫分析技术的基本原理,来介绍化学发光免疫技术的应用以及化学发光免疫分析技术的研究进展。
[关键词] 化学发光免疫分析技术;研究进展;应用章编号:1004-7484(2014)-03-1787-01化学发光免疫分析起源于1977年,化学发光免疫分析主要利用了化学发光测定技术和免疫反应,化学发光测定技术有着非常高的灵敏性同时免疫反应有着非常高的特异性,通过两者的结合使得化学发光免疫技术成为现今最新的免疫分析技术。
化学发光免疫分析技术较其他免疫分析技术而言拥有着高灵敏度、价格低以及操作简便等多种优点,正因为这些优点使得化学发光免疫分析技术被广泛的运用。
1 化学发光免疫分析技术的基本原理化学发光免疫分析最关键的步骤就是化学发光以及免疫,免疫分析技术就是对分析的抗原进行标记,而化学发光分析技术就是对所产生的微观反应进行检测,以此来达到分析的目的。
免疫分析就是利用抗原与抗体之间的特异性结合所产生的明显现象来检测所检测物质,而采用标记免疫分析就是通过对抗原进行放射性的标记,这样就能够更好的检测微观物质所发生的化学反应[1]。
化学发光技术则是化学反应中的一种现象,化学反应必然伴随着能量的迁移,而具备能量的分子为了达到稳定的状态就要释放多余的能量,能量则是通过光形式释放出来,对所发出的光和能量迁移进行分析便可以知道内部所发生的化学变化。
2 化学发光免疫分析技术的应用由于化学发光免疫分析技术不仅拥有较好的灵敏度以及较高的自动化程度,而且其还有较高的精密程度,所以得到了较多的应用。
化学发光免疫分析技术在兽医学、临床医学以及食品分析中都得到了相当多的应用,下面将进行详细介绍。
2.1 化学发光免疫分析技术在兽医学中的应用化学发光免疫分析技术在兽医学中的应用还处于早期阶段,因此没有得到较多的应用。
化学发光免疫分析技术的临床应用及研究进展

化学发光免疫分析技术的临床应用及研究进展【摘要】本文介绍了化学发光免疫分析技术的基本原理、分类及其在临床医学上的应用研究进展。
【关键词】化学发光免疫分析技术;基本原理;分类;应用近10多年来,当代生物技术的研究和应用取得高速发展的同时,也大大推动了化学发光免疫分析方法(CLIA))的更新换代速度。
化学发光免疫分析法(CLIA)是建立在放射免疫分析技术(RIA)理论的基础上,以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法,具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单、操作方便、分析速度快和容易实现自动化和不污染环境等优点,特别是能在较短的时间内得到实验结果,因此深受检验医学工作者和临床医师的好评。
1 化学发光免疫分析的原理化学发光免疫分析技术的基本原理,化学发光免疫分析含有免疫分析和化学发光分析两个系统[1]。
免疫分析系统是将化学发光物质或酶作为标记物,直接标记在抗原或抗体上,经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体免疫复合物。
化学发光分析系统是在免疫反应结束后,加入氧化剂或酶的发光底物,化学发光物质经氧化剂的氧化后,形成一个处于激发态的中间体,会发射光子释放能量以回到稳定的基态,发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测[2]。
根据化学发光标记物与发光强度的关系,可利用标准曲线计算出被测物的含量。
2 化学发光免疫分析的分类化学发光免疫分析根据应用发光体系应用于免疫分析中的方式不同可分为直接标记发光物质的免疫分析,酶催化化学发光免疫分析,电化学发光免疫分析(ECLIA)。
直接标记发光物质的免疫分析,目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。
3 化学发光免疫分析的临床应用CLIA已广泛应用于基础和临床医学的各个领域,成为替代RIA的首选技术。
Amersham公司针对AmerliteTM发光增强酶免疫分析系统研制出的试剂盒项目有甲状腺功能检测的促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素,与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮,以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。
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光激化学发光免疫检测技术与临床应用研究进展高云朝近半个世纪以来,临床化学微量免疫分析技术从放射免疫分析、酶联免疫分析,到化学发光免疫分析,经历了检测方法的革新与技术的进步,医学检验质量和数量得到了迅速的提高;20世纪90年代问世的LOCI(Luminescent oxygen channeling immunoassay,LOCI)技术以其独特的检测方法,实现了均相、一步、免清洗和高通量的检测,并以其高灵敏度和特异性等突出的检测性能为世人所瞩目。
该技术最初由Ullman等[1]在1994年报道,由美国德灵公司研发成功,后由PerkinElmer公司生产相关试剂(AlphaScreen TM),西门子公司生产免疫诊断试剂(LOCI)。
国产光激化学发光免疫检测系统由博阳生物科技(上海)有限公司建立在该技术之上,并称之为LiCA(Light Initiated Chemiluminesence Assay,LiCA TM)。
仅此对该技术基本原理和特点,以及目前国内外研究现状综述如下。
一、技术原理和特点1.LOCI检测原理:基于非竞争的免疫检测方法类似于ELISA,而基于的竞争的免疫检测方法类似于放射免疫分析法。
以前者为例,双抗体夹心结构(抗体包被发光珠-抗原-生物素化抗体)与链霉亲和素包被的感光珠,通过链霉亲和素与生物素结合到一起,并拉近发光珠和感光珠的间距。
然后,感光珠在680nm激发光的照射下,使周围氧分子激发变成单线态氧(1△g O2,带有1个激发态电子的氧分子),后者扩散至发光珠并传递能量,发光珠发射520-620 nm荧光信号并被光子计数器探测。
此过程中,单线态氧的半衰期只有4μs,且最大扩散距离大约200nm。
而一般而言,当体系中不存在抗原抗体复合物时,发光珠和感光珠之间的距离大于200nm。
因此,此三级发光系统只有结合态发光珠才能传递单线态氧的能量并发光;非结合态发光珠由于相距较远,无法获得能量而不发光[1-6](图1)。
注:光激化学发光检测时,a 图为感光珠和发光珠结合时则发光,b 图为感光珠和发光珠不结合则不发光图1 光激化学发光检测感光珠和发光珠的原理示意图2.技术特点:光激化学发光技术的特点是基于偶联在供体-受体微球表面的发光物质经光激发和能量传递而诱导发光,能量传递依赖于受体-配体结合所致的供体-受体微球相互靠近而实现,而常见的受体-配体系统如抗原-抗体、生物素-亲和素、蛋白酶-底物。
其采用纳米级微粒作为固相载体,增加了反应的比表面积,极大地提高了检测灵敏度和缩短了反应时间;恰当的荧光波长及时间分辨计数模式,有效提高了信噪比,增加了特异性[1-2];均相反应模式实现了一步、免清洗检测。
检测过程不易受到荧光淬灭、样本常见干扰物质、pH值、离子强度及温度等因素的影响,保证了检测的稳定性[7-9]。
样本用量少(一般2.5μl),易于实现机器的小型化和样本的高通量检测[10],且有利于基于小动物的基础研究[7]。
二、国内外研究现状和应用光激化学发光技术应用广泛,涵盖蛋白质、多肽激素、核苷酸等领域,在受体/配体、蛋白质/蛋白质、蛋白质/DNA之间相互作用方面的研究成果,对发病机制的研究和新药研发具有重要指导意义。
(一)小分子半抗原1.地高辛:临床检验急症项目要求准确而快速的结果回报(TAT),。
目前,全自动化学发光法的反应时间一般为18 min;LOCI法通常只需要5 min,甚至可以缩短至l min,且不明显影响其检测性能,有效检测范围为0.5-5μg/L[2]。
2.环孢霉素A(CsA):CsA是接受器官移植时通常采用的免疫抑制剂,其在不同个体的生物利用率和药代动力学不同,不同个体对其敏感性和耐受性也存在较大差异。
因此,血药浓度检测及药代动力学研究,对器官移植的成败非常重要。
传统方法(高压液相、放免分析等)一般在全血样本溶解后,需要离心去除细胞碎片;LOCI方法可直接在上述混合溶液中进行,由此简化了操作步骤,减少了实验误差,其有效检测范围为0-750μg/L[2]。
3.其他:如茶碱、雌二醇、游离甲状腺素、叶酸等,都可以采用光激化学发光法检测。
与传统分析方法相较,具有反应时间短、样本用量少、免洗、高通量等优点[1-2]。
(二)抗原分子1.促甲状腺素(TSH):在甲状腺功能评价中,TSH检测范围为0.01-300 mU/L,对于甲状腺机能减低(TSH升高)或甲状腺机能亢进(TSH降低)的诊断和疗效评价具有重要意义。
LOCI检测TSH的灵敏度达0.002 mU/L,优于化学发光法的0.01 mU/L,这对于亚临床甲状腺机能亢进的诊断与治疗更为有利。
此外,当反应时间由14 min缩短至2 min以内时,灵敏度仍然可达0.007 mU/L,完全满足临床诊治需要,同时,极大地提高检测效率,有效缩短TAT时间。
通过对20例垂体切除后患者血清TSH(期望值为0)检测表明,其平均浓度与0 mU/L差异无统计学意义。
为适应高通量和小型化芯片技术,Dafforn等[10]将样本用量由常规的80μl(一般免疫分析方法用量为100-200μl)减少至l0μl,虽然检测灵敏度出现轻度下降,但仍可满足临床要求。
2.绒毛膜促性腺激素(hCG):孕妇血清或后穹隆穿刺液中hCG浓度常常高于目前绝大多数免疫分析方法的检测上限(1000 U/L),需要稀释后重新检测,有时甚至需要多次稀释,这既浪费了时间,又增加了成本。
Ullman等[2]用LOCI技术检测hCG的上限达100000 U/L,使绝大多数样本1次检测即可获得准确结果;而且,与常规免疫检测方法比较,样本用量更少(10μl)、检测时间更短(7.5 min),这对于穿刺液量少和急诊患者极为有利。
3.胰岛素:胰岛素既是一种药物,也是评价胰岛B细胞功能的生物标志物,其浓度检测对于糖尿病的发病机制研究、分型、疗效检测等具有重要价值。
特别在药代动力学和药效学研究领域.快速、高通量、微量样本检测技术无疑是非常重要的,而大批量小动物实验研究尤其如此。
Poulsen和Jensen [7]应用LOCI检测技术在384孔板上测定人血浆胰岛素,样本用量仅5μl,分析灵敏度为0.3 pmol/L,功能灵敏度为1.0 pmol/L,最高浓度可以达到10000 pmol/L。
同时具有较高的批内(1.9%-3.8%)和批间(4.6%-7.3%)精密度;中度溶血、黄疸、脂血、生物素、维生素C对检测无明显影响(严重溶血时,回收率降低到73%);与酶免分析方法具有很好的相关性。
4.β淀粉样蛋白:脑内淀粉样蛋白斑块的形成和沉积是老年性痴呆(Alzheimer病)的病理特点,准确测量生物体液中的淀粉样蛋白含量对该病的研究有重要意义。
Szekeres等[11]建立的血清β淀粉样蛋白1-40和1-42 LOCI检测法灵敏度<2 pg/ml,且较ELISA分析方法更灵敏,适用于Alzheimer病的早期诊断。
5.其他:在心肌梗死的早期诊断和疗效评价方面,国内学者[12-13]用LOCI检测血清肌钙蛋白I和肌红蛋白。
结果表明该方法具有很高的灵敏度,对血红蛋白、总胆红素、三酰甘油等具有较好的抗干扰性,其方法学特性和临床检测性能可完全满足临床要求。
(三)核苷酸与前述的抗原-抗体免疫反应不同,LOCI技术对核苷酸的检测采用的是碱基互补配对原则和定量PCR扩增原理(图2)。
Patel等[14]采用该技术对目标DNA分别进行了实时(real-time)和终点(end-point)测量,可检测目标DNA浓度的范围分别为103倍和106倍,对单链DNA扩增片段的检测灵敏度达2-10 mol/L。
Beaudet等[15]将LOCI技术与等位基因特异性扩增(ASA)和等位基因特异性杂交(ASH)结合后。
建立了单核苷酸多态性(SNP)分析平台,可对基因组DNA 每个基因型进行精确定量,其灵敏度< 2 ng。
与目前绝大多数SNP分析方法比较,该技术省去了扩增后PCR产物纯化和酶反应过程,减少了污染,而且样本用量减少至2μl,为实现高通量检测提供了可行性。
图2光激化学发光法检测核苷酸原理简图(碱基互补配对原则)(四)配体与受体1.OX40和OX40L:OX40(CD134)属于肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族成员,其配体OX40L与TNF具有同源性,属Ⅱ型膜蛋白,与CD4+T淋巴细胞介导的多种炎症效应有关,包括实验性自身免疫性脑脊髓炎、类风湿性关节炎、炎症性皮肤病和移植物抗宿主疾病等。
因此,高通量筛选OX40与OX40L特异性结合干扰物(拮抗剂)在药物开发(抗炎)领域具有非常重要的价值。
Wilson等[16]的研究表明,OX40和OX40L的特异性结合可被拮抗剂——苏拉明抑制,而且这种抑制作用在一定范围内具有浓度依赖性;研究者还试验了一系列OX40L结构类似物,筛选出了新的拮抗剂——PV肽(含31个氨基酸的短肽),它在浓度为50μmol/L时,对反应的抑制率达73%,这无疑对抗炎药物的开发有重要价值。
2.孤儿核受体I型类固醇生成因子(SF-1):SF·1作为核受体家族成员,在肾上腺和生殖腺等内分泌腺体及其上级控制中枢的分化与发育等方面发挥重要作用,是个体发育过程中最重要的内分泌功能调节因子之一。
因此,对其配体(内源性和外源性)及其拮抗剂和受体激动剂的甄别具有重要的基础研究和临床应用价值。
Li等[8]研究发现,SF-1的转录活性受磷脂调节,其与配体的相互作用因磷脂脂肪酸侧链长度不同,可表现为激活作用或抑制作用。
3.其他:众多学者用LOCI技术还研究了DAF-12受体-配体结合[9]、蛋白激酶及其抑制物[17]、蛋白质与多肽或基因之间的相互作用[17-20],这些研究成果均为药物开发提供了新的思路和方向。
综上所述,LOCI技术实现了均相、一步、免清洗、免分离检测,使分析过程简单化,并彻底避免了由于清洗和分离所带来的误差,保持高度灵敏度和特异性;随着样本用量的大幅度减少,使检测小型化、芯片化和高通量成为可能,为临床超微量分析和新药开发提供了一个便捷高效的研究平台,也为科学研究提供了又一有力工具。
志谢:博阳生物(上海)科技有限公司赵卫国教授、吴旸技师等给予本研究协助参考文献[1] Ullman EF,Kirakossian H,Singh S,et a1. Luminescent oxygen channeling immunnoassay: measurement of particle binding kinetics by chemiluminescence.Proc Natl Acad Sci U S A,1994,91:5426-5430.[2] Ullman EF,Kirakossian H,Switchenko AC,et a1.Luminescent oxygen channeling assay(LOCI): sensitive,broadly applicable homogeneous immunoassay method.Clin Chem,1996,42:1518- 1526.[3] Kricka LJ.Clinical applications of chemiluminescence.Anal Chlm Acta,2003,500:279-286.[4] Peppard J,Glickman F,He Y,et a1.Development 0f a high-throughput screening assay for inhibitors of aggrecan cleavage using luminescent oxygen channeling(Alphascreen).J Biomol Screen。