谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
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禾本科植物谷胱甘肽氧化物酶的活性测定
禾本科植物谷胱甘肽氧化物酶的活性测定摘要：本文以羊草的叶片和根为材料, 用0. 2 mo l /L pH 6. 2的磷酸缓冲液( 含1 mmo l/L EDTA-2Na，5%的水溶性PVP)作为谷胱甘肽过氧化物酶（GSH一PX）的提取介质，偏磷酸为酶促反应的蛋白质沉淀剂, 二硫代对二硝基苯甲酸(DTNB ) 与GSH显色反应3min, 在412 nm测定酶管和非酶管的OD值, 以测定谷胱甘肽过氧化物酶的活性关键词：盐碱胁迫；羊草；GSH-PX；酶活性Analyzing Soluble Sugar Content and Biomass of Sweet Sorghumunder Saline-alkali StressAbstract:Soil salinization is a global issue. Experiments prove that growing state of sweet sorghum shows growth inhibition，lower production and physiological disorders under soil salinity In this study,sweet sorghum as our material，was sowed in neutral soil and saline soil, respectively，exploring characteristics of salinity stress for the sweet sorghum and the change of soluble sugar and biomass. According to the particularity of different soils，we observed the relationship between different varieties and salt-alkali stress at different growth stages.Profound understanding of physiological mechanism of sweet sorghum response to salt-alkali stress for screening sweet sorghum germplasm,identifying salinity tolerance and cultivating the new sweet sorghum species is significance.Keywords: Salt stress; sweet sorghum; Glutathione peroxidase; enzyme actirityⅠ1前言植物是一个需氧代谢的有机体。
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
¾ 谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。如果以过氧 化氢为底物进行检测，则同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。本 试剂盒利用了一种间接测定的方法。谷胱甘肽过氧化物酶可以催化GSH产生GSSG，而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH 催化GSSG产生GSH，通过检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中，谷胱甘 肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤，因此NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。
e. 所有试剂使用前须在水浴中或PCR仪等设备上温育到25℃。
3. 样品测定：
表1
空白对照 (blank)
样品本底对照
样品 (sample)
谷胱甘肽过氧化物酶l
176-184 µl
待测样品
－
2-10 µl
2-10 µl
GPx检测工作液
10 µl
10 µl
10 µl
谷胱甘肽还原酶
0.4 µl
4 µl
8µl
GPx检测工作液体积
10.4 µl
104 µl
208µl
d. 15mM过氧化物试剂溶液的配制。取21.5微升过氧化物试剂(t-Bu-OOH)加入10毫升Milli-Q级纯水，混匀，即配制成
15mM过氧化物试剂溶液。配制好的15mM过氧化物试剂溶液仅限当日使用，且需尽量在冰浴上存放。
产品编号 S0056
谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
产品名称 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
离心 10min，取上清用于酶活性的测定。
GSH 工作液的配制：用 GSH 配制夜：GSH 储存液(100μ mol/L)=99:1 的比例稀释至 1mmol/L，即为 GSH 工作液(1mmol/L)，该溶液配制好以后可 4℃保存 1 天。
2、 GSH-Px 酶促反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
30.8mg 200ml 125ml 30ml 100ml 说明书
Storage
RT -20℃ RT RT -20℃ 避光 -20℃ 避光
操作步骤(仅供参考)：
1、 样本处理： ① 血清、血浆样本：从待测样本中分理出的血清或血浆丌应有溶血，如果含有应去除红细
胞后，直接检测，如超过检测范围，用生理盐水稀释后检测。血清去除红细胞的简易方 法如下：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。取至少 500μl 全血。弃上清，用冰冷的红细 胞沉淀 10 倍体积的样品匀浆液重悬沉淀，再同前离心，弃上清。加入约红细胞沉淀 4 倍体积的冰冷的 ddH2O 裂解红细胞。取上清。亦可采用红细胞裂解液去除红细胞，如 Leagene ACK 红细胞裂解液等。 ②组织样本：动物用含有 20U/ml heparin 的生理盐水(0.9% NaCl containing 20U/ml heparin)灌流清除血液后获取组织样品。按照每 20mg 组织加入 200μl 样品匀浆液的比例，
计算：
谷胱甘肽过氧化物酶酶活力单位的定义：1 个酶活力单位(1unit)是指在 37℃， 每 1L 血清，排除非酶促反应，1min 内可以催化 1μmol/L GSH 氧化所需(减少)的酶量为一个 GSH-Px 活性单位。
GSH-Px(U/L)= (A 本底－A 测定－A 空白)/(A 本底－A 空白)×200
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 比色法)说明书
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒自备材料：1、匀浆器或研钵、离心管或小试管、低温离心机、水浴锅2、蒸馏水、PBS或生理盐水、70%乙醇3、分光光度计、比色皿操作步骤(仅供参考)：1、配制GSSG标准储存液：取12.5mgGSSG标准加入2mlddH2O，溶解并混匀，即为GSSG 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、配制GSH清除剂工作液：在1mlGSH清除剂中加入9ml70%乙醇，溶解并混匀，即为GSH 清除剂工作液。
3、配制NADPH工作液：在33.2mgNADPH中加入4mlddH2O，即成NADPH工作液，一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
4、配制DTNB储存液：在79.2mgDTNB中加入16mlDMSO，溶解并混匀，即为DTNB储存液(12.5mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
5、配制GR工作液：按GR：GSSGassaybuffer=1:49的比例混合，即为GR工作液。
-20℃保存，1个月有效。
注意：试剂(I)量较少，使用前应先4℃离心后再使用。
6、配制标准品：把GSSG标准储存液(10mM)用蛋白清除试剂稀释成50μM标准溶液，然后依次稀释成25、12.5、6.25、3.125μMGSSH标准溶液，取空白、3.125、6.25、12.5、25、50μMGSSG标准溶液6个点作标准曲线。
注意：由于GSSG标准在蛋白清除试剂中不太稳定，用蛋白清除试剂配制的GSSG溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。
7、准备样品：①红细胞或血浆样品：取新鲜血液，600r/min离心10min，沉淀为红细胞，上清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次，取约50μl红细胞沉淀或血浆，加入50μl蛋白清除试剂，充分Vortex振匀。
4℃或冰浴放置10min，4℃10000r/min离心10min，取上清，用于GSSG测定，样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。
小鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)ELISA检测试剂盒说明书
小鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）ELISA检测试剂盒说明书小鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。
GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理：GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10μL×1支，-20℃保存。
试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
GSH-Px测定操作：1. 酶标仪预热30 min，调节波长到340 nm。
2. 混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。
3. 混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一20 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。
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离心。
—
1ml
1ml
Px 显色反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
加入物质 取上清液 空白对照
空白对照管 — 1ml
本底对照管 1ml —
测定管 1ml —
GSH 检测缓冲液 苯甲酸显色液
1.25ml 0.25ml
1.25ml 0.25ml
1.25ml 0.25ml
②混匀，置于室温孵育 1min。以 ddH2O 调零，用分光光度计或酶标仪检测 422nm 处吸 光度值，定义为 A 空白、A 本底、A 测定。如果用分光光度计，比色杯光径应为 1cm，加入的 上清量因根据比色杯的最小量程而定；如果用酶标仪，96 孔板每孔应加 250μl 上清液。
Leagene 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(Glutathione Peroxidase Assay Kit)是一种 以过氧化氢为底物，通 过比色法检测细胞 、组织或其它样 品中谷胱甘肽过 氧化物酶活性的 试剂盒。绝大部分细胞 内的谷胱甘肽过氧 化物酶都是含硒 的，且硒为该酶 的活性中性组成 部分。细胞 内也有 徆少量 的丌含硒 的谷胱 甘肽过氧 化物酶 存在。其 检测原 理是： GSH-Px 可催化谷胱甘肽(GSH)不苯甲酸显色液发生氧化反应，使之生成黄色阴离子，通过分光光度 计或酶标仪检测 422nm 处吸光度值测定该阴离子的浓度，间接推算 GSH 减少的量。本试 剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。
北京雷根生物技术有限公司
参考区间：
成年人血清 GSP-Px：115±140μmol/L
注意事项：
1、 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。 2、 本法中所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定，如果在样品中的还原剂无法避
免，例如 DTT、巯基乙醇等，则这些还原剂的总浓度至少低于 0.1mM。0.15mM 的 DTT 可以抑制 40%的酶活力。 3、 常用的 Triton X-100、Tween 20 等去垢剂都含有较高水平的过氧化物，会影响本试剂 盒的测定。如果必须使用这些去垢剂，最好使用纯度较高幵注明含较低过氧化物的 去垢剂。 4、 样品可以立即测定，也可以-70℃冻存待以后测定。 5、 一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。
30.8mg 200ml 125ml 30ml 100ml 说明书
Storage
RT -20℃ RT RT -20℃ 避光 -20℃ 避光
操作步骤(仅供参考)：
1、 样本处理： ① 血清、血浆样本：从待测样本中分理出的血清或血浆丌应有溶血，如果含有应去除红细
胞后，直接检测，如超过检测范围，用生理盐水稀释后检测。血清去除红细胞的简易方 法如下：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。取至少 500μl 全血。弃上清，用冰冷的红细 胞沉淀 10 倍体积的样品匀浆液重悬沉淀，再同前离心，弃上清。加入约红细胞沉淀 4 倍体积的冰冷的 ddH2O 裂解红细胞。取上清。亦可采用红细胞裂解液去除红细胞，如 Leagene ACK 红细胞裂解液等。 ②组织样本：动物用含有 20U/ml heparin 的生理盐水(0.9% NaCl containing 20U/ml heparin)灌流清除血液后获取组织样品。按照每 20mg 组织加入 200μl 样品匀浆液的比例，
计算：
谷胱甘肽过氧化物酶酶活力单位的定义：1 个酶活力单位(1unit)是指在 37℃， 每 1L 血清，排除非酶促反应，1min 内可以催化 1μmol/L GSH 氧化所需(减少)的酶量为一个 GSH-Px 活性单位。
GSH-Px(U/L)= (A 本底－A 测定－A 空白)/(A 本底－A 空白)×200
离心 10min，取上清用于酶活性的测定。
GSH 工作液的配制：用 GSH 配制夜：GSH 储存液(100μ mol/L)=99:1 的比例稀释至 1mmol/L，即为 GSH 工作液(1mmol/L)，该溶液配制好以后可 4℃保存 1 天。
2、 GSH-Px 酶促反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
组成：
名称 试剂(A): 样品匀浆液 试剂(B): GSH 试剂(E): 酸性沉淀剂 试剂(F): GSH 检测缓冲液 试剂(G): 苯甲酸显色液 试剂(H): ddH2O 使用说明书
编号
TO103 3 50T 50ml
15.4mg 100ml 62.5ml 15ml 50ml
TO103 3 100T 100ml
加入物质 GSH 工作液(1mmol/L) 待测样品
空白对照管 — —
本底对照管 0.2ml —
测定管 0.2ml 0.2ml
ddH2O
0.2ml
0.2ml
—
混匀，置于水浴。
氧化剂(提前 37℃预温)
—
0.1ml
0.1ml
3、 G 酸性沉淀剂 S
H 取上清液 -
混匀，置于水浴。
0.8ml
2ml
2ml
北京雷根生物技术有限公司
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
简介：
谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)是一种含硒的水溶性四聚体 蛋白酶。几乎在所有组 织中都有分布，在 一些病理状况下 谷胱甘肽过氧化 物酶的活力会发 生明显的变化，该酶可 以清除活细胞内过 氧化物，在保护 细胞免受自由基 损伤过程中起着 关键作用。细胞内的脂类容易和自由基发生反应。
北京雷根生物技术有限公司
用玻璃匀浆器在 4℃或冰浴匀浆。取上清用于酶活性的测定胰酶消 化细胞。可以
使用用细胞刮或 EDTA 处理细胞收集细胞。细胞用无菌的 PBS 或生理盐水洗涤 1 次。按照 每 106 细胞加入 300-500μl 匀浆液的比例用玻璃匀浆器在 4℃或冰浴匀浆，4℃ 12000g