新生大鼠心肌细胞原代培养方法

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、
实验材 料
试 剂盒 （ 武汉 博 士德 生物 工 程有 限公 司 ） 恒 温 二 氧 ， 化碳 培 养 箱 （ ｈｒｏ ， 置 相 差 光 学 显 微 镜 （ ｅ． Ｔ ｅｍ ） 倒 Ｌｉ ｅ） 新颖 立式 小 容量 恒 温 摇 床 （ ａ， 上海 世 平 实验 设 备
有 限公 司 ） 高速 冷冻 离心 机 。 ，
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原 代 心 肌 细 胞 培 养 技 术 被 广 泛 应 用 于 心 血 管 疾病 的研 究 之 中 ， 有 操 作 简 便 、 济 、 重 复 性 等 具 经 可
拘 。由天 津市 山川 红 实 验 动 物科 技 有 限 公 司 提供 ， 动物合 格证 号 ：０ ４ ３ 。 ０ ０ ０ ６
优点 ， 同时排 除 了神 经 、 液 等 因素 的干 扰 ， 可 从 体 并
世界中西医结合杂志 ２ １ ０２年第 ７卷第 ４期
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‘２９ ・ ３
・
实 验 研 究 ・
心室肌 ， 以混合消化酶 （ ．６ ０ ０ ％胰蛋 白酶 和 ０ １ １型胶原酶均量混合液 ） ．％ Ｉ 反复进行 短时 间多次消化 ， 用差速贴壁法纯化 心肌 细胞 ， 并加入 ５一溴脱氧尿 嘧啶抑制 非心肌细胞分裂增 殖 ， ２ｄ后首 次换液 ， 以 后隔 日换液 。结果 心 肌细胞 ２ 左 右 已基本贴 壁 ， 可见单 个细胞 搏动 ， ６ ｄ形成单层 心肌 细 ４ｈ 并 ２～ 该方法是一种较为理想 的乳 鼠原代 心肌 细胞 培养方法 ， 值得进 一步推广 。 胞和其细胞簇 的同步搏 动 ， 经培 养所 获细胞搏动 良好 ， 存活率 高 ， 免疫 组化鉴 定显示 培养 的心肌细 胞 纯度 ９ ％ 以上 。结论 ５
【 关键词】 心肌细胞 ； 原代培养 ； 鼠 乳 【 中图分类号 】Ｑ １ ． １ 【 ８ ３ １ 文献标识码 】Ａ 【 文章 编号 １１７ ６ １ （０ ２ ０ ０９ ０ ６ ３— ６ ３ ２ １ ）４— ２ ３— ３
Ｍ ｅ ｈｏ ｓ ｏ ｈｅ Ｐｒｍ ａ ｙ Ｃｕｌｕｒ ｆ Ｃａ ｄ ｏ ｙ ｅ ｏ ｈｅ Ｎｅ ｙ． ｂ ｒ ｔ ｔ ｄ ｆｔ ｉ ｒ ｔ ｅ ｏ ｒ ｉ ｃ ｔ ｓ ｆ ｒ ｔ ｗｌ ． ｏ ｎ Ｒａ ｓ
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原 酶 （ ｉｃ ） Ｄ Ｍ —Ｆ ２（ ｙｌ ｅ ， 牛 血 清 Ｇ ｂｏ ， ＭＥ １ Ｈ ｃｎ ） 胎 ｏ （ ｉ ｎ ） ５一溴 脱 氧 尿 嘧 啶 （ ｉ ） 一横 纹肌 肌 Ｂｏ ｄ ， ｉ Ｓｇ ， ｍａ 动 蛋 白单克 隆抗 体 （ —ｓｒｏ ｒ ｃｃ ｎ ｏ 一Ｓ 及 ａｃｍｅｉ ａｔ ，【 Ａ） ｉ 链霉 素 亲和 素一 生物 素一 过氧化 物 酶复合 物 （ ｔ ｐ Ｓｒ — ｅ ｔｖｄｎ—Ｂｏ ｎｐｒｘ ｄｓ ｏ ｐｅ ，Ａ Ｃ） Ａ ｉｉ ｉｔ ｅｏｙ ａｅＣ ｍ ｌ Ｓ Ｂ 免疫 组化 ｉ ｘ
细胞 分 子水平 阐明 机制 问题 ， 其 较 低 的再 生 能 力 但 限制 了实 验模 型 的 理 想 建 立 。本 文 阐 述 了较 为 理
想 的实验 方法 ， 报道 如下 。 现 材 料与 方法
一
２ 主要 试剂 和 仪器 ： 蛋 白酶 （ ｉ ） １型胶 ． 胰 Ｓｇ ｍａ ，Ｉ
ＺＨＡＮＧ ｎ ， Ｔｅ ｇ ＧＵＯ Ｌｉ— ｐ ｎ ｉｇ
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和 少量 １ ％双 抗 的培 养皿 中 ， 洗 ３次 ， 除 残 留 血 清 去 液， 第二 次 清 洗 时 去 掉 结 缔 组 织 、 房 组 织 及 部 分 心
１ 心肌 细胞 的原代 培养 ： １～３ｄ龄 Ｗ来自百度文库ａ 大 ． 取 ｓｒ ｔ
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世界中西医结合杂志 ２ １ ０ ２年第 ７卷第 ４期
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新 生 大 鼠心 肌 细 胞 原 代 培 养 方 法
张滕 郭利 平
【 摘要 】 目的 探讨乳 鼠心肌细胞 的原代 培养方 法 ， 更好地 获取高 存活率 、 搏动率及 高纯 度 高
的心 肌 细 胞 ， 以建 立 良好 的原 代 心 肌 细胞 研 究 模 型 。方 法 无 菌 状 态 下 取 出 生 ３ｄ以 内 Ｗｉａ 乳 鼠 ｓｒ ｔ
ｔ ｒｄ ｃ ｒ ｉｃ ｔ ｓｗａ ｖ ｒ９ ％ ． ｎ ｌ ｓｏ Ｔ ｉ ｍｅｈ ｄ ｉ ｓ ｔ ｆｃ ｏｙ ｆ ｒ ｈ ｒｍａ ｙｃ ｌ ｒ ｆ ｈ ａ ｄ ｕ ｅ ａ ｄ ｏ ｙ ｅ ｓｏ ｅ ５ Ｃｏ ｃｕ ｉｎ ｈｓ ｔ ｏ ａｉ ａ ｔｒ ｅ ｐ ｓ ｓ ｏ ｔ ｉ ｒ ｕ ｔ ｅｏ ｅ ｃ ｒ — ｕ ｔ
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．
鼠， 于含 ７ ％ 酒精 的无 菌 小烧 杯 中浸 泡 ５～ 后 迅 ５ ６Ｓ 速 取 出置 于无 菌培 养 皿 中 ， 菌 开 胸 ， 露 心 脏 ， 无 暴 于 心 脏收 缩期 剪 下心 脏 ， 于 预 冷 的 盛有 Ｐ Ｓ缓 冲 液 放 Ｂ
形 成 细胞簇 或 单 层 细 胞 ， 呈 现 同 步 性 搏 动 ， 动 且 搏 频 率 多在 ８ ０～１０次 ・ ｎ ５ ｍｉ～。结果 见 图 １ 图 ２ 、 。
二、 实验 方法
１ 实 验动 物 ： ｄ内的 Ｗｉ ａ 新 生 大 鼠 ， 雄 不 ． ３ ｓｒ ｔ 雌
基 金 项 目 ： 家 自然 基 金 资助 项 目（ ｏ ８０ ２ ６ ） 国 Ｎ ． １７ ９ ５
作者单位 ：． １ 天津 中医药大学 ２０ ０ ９级硕士研究 生 ， 天津 ３０ ９ ； ． ０ １３ ２ 天 津 中医药大学 ， 天津 ３ ０ ９ ０ １３ 通讯作者 ： 张滕 ， ｍａ ：ａ．ｈｎｔｎ １３ ６ ．ｏ］ Ｅ ｉ ａａ ｚａｇ ｇ２ ＠１ ３ ｃｎ ｌ ｅ