新肿瘤标志物SP70在液体活检中的应用 潘世扬
液体活检在肿瘤检测中的应用进展
（１０）：１４１２９－１４１４０． ［２６］刘欣欣，冯爱平，陈善娟．ＣＤ１０９的研究进展［Ｊ］．临床与实验
肿瘤诊断方法包括血清肿瘤标志物、影像学、组织病理 学和液体活检等，其中影像学、肿瘤标志物和病理学在预测 复发和转移方面并不尽如人意，如影像学检查，昂贵费时且
接受日期：２０１８－０３－０９ 作者单位：１安徽医科大学病理学教研室，合肥 ２３０００１
２安徽医科大学第二附属医院病理科，合肥 ２３０６０１ 作者简介：王 弦，男，硕士，实验师。Ｔｅｌ：（０５５１）６３８６９４８９，Ｅｍａｉｌ：
［２１］ ＬｉＬ，ＰａｚＡＣ，ＷｉｌｋｙＢＡ，ｅｔａｌ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈａｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅ ｍｕｔａｎｔＩＤＨ１ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｏｎｃｏｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ２ｈｙｄｒｏｘｙｇｌｕｔａｒａｔｅｉｎｈｕｍａｎｃｈｏｎ ｄｒｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１５，１０（９）：ｅ０１３３８１３．
［２０］ ＲｏｐｋｅＭ，ＢｏｌｔｚｅＣ，ＮｅｕｍａｎｎＨＷ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃａｎｄｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｉｎｔｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｉｎａｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄｃｈｏｎｄｒｏｓａｒｃｏ ｍａ［Ｊ］．ＰａｔｈｏｌＲｅｓＰｒａｃｔ，２００３，１９９（６）：４３７－４４４．
临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０１８Ｍａｙ；３４（５）
一文看懂“液体活检”在国内的发展现状
一文看懂“液体活检”在国内的发展现状贾雅希徐友界财新智库莫尼塔是国内最早面向投资机构及企业的独立研究与金融服务机构。
提供研究内容包括：海内外宏观政策研究、A股投资策略、行业研究、草根调研、海外调研等。
研究是财新智库莫尼塔的立足之本，我们提供深入、权威和差异化的研究成果。
莫尼塔与财新强强联手，成为财新智库的一员；借助财新的资源和影响力，提升研究实力。
2016年7月21日-22日，液体活检产业发展论坛在上海举办，来自学术、产业、临床的各位嘉宾分享了自己在液体活检领域的研究，交流了关于技术、政策、科技转化等多方面的展望。
液体活检领域“CTC、ctDNA、外泌体”三足鼎立液体活检即液体检材，通常指血液、唾液、尿液等可以进行身体健康诊断的体液。
此处液体活检特指用以检测癌症信息的血液。
基因改变是肿瘤产生与发展的重要原因，几乎所有癌症患者都携带有DNA突变。
这些突变通常只存在于肿瘤细胞而不存在于正常细胞，因此为肿瘤组织的检测与跟踪提供了方便的特异性生物标记。
种类繁多的突变位点及基因型也为肿瘤的精确诊疗提供了必要的信息。
循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs）是游离于血液循环系统中的肿瘤细胞，是肿瘤细胞转移的重要方式，也是肿瘤患者术后复发的重要原因，同时还是激发癌症致死机制的重要因素。
CTC作为肿瘤细胞，不仅包含肿瘤的DNA信息，同时还包含基因组、蛋白质组等信息，是研究肿瘤组织信息的丰富来源。
循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）是游离于血液循环系统中的肿瘤DNA，是肿瘤细胞死亡后释放出的小片段DNA，主要来源为坏死的肿瘤细胞、凋亡的肿瘤细胞、循环肿瘤细胞、以及肿瘤细胞分泌的外排体。
外泌体（exosome）是细胞经过外排的小囊泡，直径通常为几十纳米。
肿瘤细胞释放的外泌体数量远高于正常细胞，并且通常包含DNA、mRNA等物质，因此不仅可以进行肿瘤DNA的检测，还可以mRNA对融合基因等通过ctDNA难以获取的信息进行检测。
液体活检在肿瘤转移早期诊断中的应用
ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２１．０３．１４·综述·液体活检在肿瘤转移早期诊断中的应用王梦妍，娄加陶（上海胸科医院，上海交通大学附属胸科医院检验科，上海２０００３０）摘要：液体活检作为一种新技术，具有方便、快捷、非侵入性、可重复性强等优点，其可以对体液中肿瘤相关ＤＮＡ、ＲＮＡ、外泌体及细胞进行检测，对早期检测肿瘤转移、复发具有重要意义。
尽管各种肿瘤分子相关标志物的研究不断深入，近年来对于液体活检技术的探索不断取得新的突破，然而，目前临床医生判断肿瘤患者是否发生转移依然停留在通过原位肿瘤大小和区域淋巴结状态等标准大体估测肿瘤发生转移的风险。
限制液体活检应用于临床的主要因素包括：液体活检的研究进展和临床数据的结合应用非常有限；各种分子标志物的检测和参考区间尚未建立统一标准；缺乏足够状态良好、数据完整、长期随访的样品进行原发和转移肿瘤的比较等。
近年来，随着检测技术的不断更新，对液体活检的研究逐渐深入，对其各项指标的生物学特征及临床意义的研究均取得了较大进展。
关键词：液体活检；肿瘤转移；循环肿瘤细胞；循环肿瘤ＤＮＡ；微小ＲＮＡ中图分类号：Ｒ４４６ 文献标志码：Ａ 肿瘤转移是影响患者预后最直接的危险因素［１］。
传统的肿瘤转移检测金标准———组织活检作为一种侵入性的检查手段，对于年龄较大、病情较重的患者适用性差。
而目前临床应用的许多影像学方法也存在不同程度的缺陷，如１８Ｆ ＮａＦ（一种带有药代动力学性能的ＰＥＴ成像的示踪剂）结合正电子发射计算机断层显像（ｐｏｓｉｔｒｏｎｅｍｉｓｓｉｏｎｔｏｍｏｇｒａｐｈｙＰＥＴ）／电子计算机断层扫描（ｃｏｍｐｕｔｅｄｔｏｍｏｇｒａｈｙ，ＣＴ）对监测肿瘤骨转移非常敏感，但１８Ｆ ＮａＦ会极大地影响患者的治疗效果［２］。
ＰＥＴ试剂———氟化葡萄糖也常用于转移性前列腺癌，且具有较高的预后价值，但其主要用于晚期且很难评估其是否具有足够的敏感性。
支气管肺泡灌洗液和血清肿瘤标志物检测在肺癌诊断中的应用
支气管肺泡灌洗液和血清肿瘤标志物检测在肺癌诊断中的应用金淑华【摘要】目的研究在诊断肺癌中应用血清肿瘤标志物与支气管肺泡灌洗液的临床价值.方法选取我院2015年9月—2017年3月收治的26例肺癌患者作为实验组,选取我院同期收治的26例肺部良性病变患者作为参照组,所有患者均实施血清肿瘤标志物检查与均实施支气管肺泡灌洗液检查,对比两组患者经不同方式检查之后SCC、NSE、CEA、CYFRA21-1指标情况.结果实验组受检人员在支气管肺泡灌洗液中SCC(7.54±1.25)μg/L、NSE(10.21±1.05)μg/L、CEA(9.34±2.51)μg/L、CYFRA21-1(14.52±2.27)μg/L,与参照组各数据对比,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组患者经血清肿瘤标志物检查之后SCC(9.87±0.85)μg/L、NSE(21.54±5.51)μg/L、CEA(9.68±0.65)μg/L、CYFRA21-1(12.57±1.65)μg/L,各指标与参照组对比,差异具有统计学意义(P<0.05).此外,血清中肿瘤标志物与支气管肺泡灌洗液诊断敏感性92.59％、特异性96.30％.结论将血清肿瘤标志物、支气管肺泡灌洗液应用在诊断肺癌中效果显著.【期刊名称】《中国继续医学教育》【年(卷),期】2017(009)019【总页数】2页(P53-54)【关键词】支气管肺泡灌洗液;血清肿瘤标志物;肺癌;诊断价值【作者】金淑华【作者单位】赤峰市传染病防治医院检验科,内蒙古赤峰 024000【正文语种】中文【中图分类】R734肺癌是恶性肿瘤的一种，存在较高恶性程度高，且死亡率也比较高，大约有一半患者确诊时已经处于晚期[1]，所以早诊断、早治疗十分重要，可显著改善预后及生存率。
先对我院2015年9月—2017年3月收治的26例肺癌患者以及我院同期收治的26例肺部良性病变患者诊断结果予以报道。
肿瘤标志物检测技术的最新研究进展
肿瘤标志物检测技术的最新研究进展近年来，肿瘤标志物检测技术在肿瘤早期诊断以及治疗效果监测等方面起到了重要的作用。
随着科学技术的不断进步，对肿瘤标志物检测技术的研究也日趋深入。
下面将介绍一些最新的研究进展。
液体活检技术成为最新的研究热点之一。
传统的肿瘤检测多依赖于活检组织的获取，然而，这种方法存在创伤性高、有限的样本量等问题。
液体活检技术通过从体液中获取循环肿瘤标志物，可以非侵入性地对肿瘤进行检测。
这种技术的发展为肿瘤早期的筛查提供了新的思路。
多组学技术在肿瘤标志物检测领域也取得了突破性进展。
多组学技术是指通过整合基因组学、转录组学、蛋白质组学以及代谢组学等多种高通量技术的手段，全面地研究一个生物系统。
在肿瘤标志物检测方面，多组学技术可以同时分析多个标志物，提高检测的灵敏性和特异性。
同时，利用多组学技术可以对肿瘤的发展和进展进行较为全面的研究，为个性化治疗提供了新的思路。
研究人员还在探索新的肿瘤标志物。
传统的肿瘤标志物如癌胚抗原(CEA)和前列腺特异性抗原(PSA)虽然在某些肿瘤中有较高的敏感性，但也存在不足之处。
因此，寻找新的肿瘤标志物成为研究的重点之一。
一些最新的研究表明，细胞自由DNA(circulating cell-free DNA, cfDNA)、细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)以及肿瘤相关RNA等可能具有较高的敏感性和特异性。
这些研究成果为未来肿瘤标志物检测的发展提供了新的方向。
人工智能技术在肿瘤标志物检测方面也发挥着重要作用。
近年来，深度学习等人工智能技术在医学领域得到了广泛应用。
在肿瘤标志物检测方面，人工智能技术可以通过大规模数据的分析和模式识别，提高肿瘤标志物的预测准确性。
通过训练算法，人工智能技术可以识别和提取出与肿瘤相关的特征，从而帮助医生进行更精确的诊断和治疗决策。
总结起来，肿瘤标志物检测技术的最新研究进展主要集中在液体活检技术、多组学技术、寻找新的肿瘤标志物以及人工智能技术等方面。
专家共识：液体活检在临床肿瘤诊疗应用和医学检验实践中的专家共识2019
专家共识：液体活检在临床肿瘤诊疗应用和医学检验实践中的专家共识液体活检(liquid biopsy)在肿瘤临床诊断治疗领域的应用日益广泛，是实现对肿瘤"个体化精准医疗"的重要手段。
为科学规范液体活检技术在临床检验中的应用，中华医学会检验医学分会、国家卫生健康委员会临床检验中心共同制定了《液体活检在临床肿瘤诊疗应用和医学检验实践中的专家共识》。
本专家共识围绕CTC和ctDNA两种靶标，综合近年来发表的液体活检领域重要研究成果、结合我国肿瘤液体活检的临床实践需求，就相关的临床常用检测技术的实施和质量管理提供常规指导原则。
液体活检技术的选择(一)ctDNA检测技术的选择目前，实验室常用的ctDNA检测技术包括扩增受阻突变体系(amplification refractorymutation system，ARMS)、二代测序(next－generation sequencing，NGS)、数字PCR(digital PCR，dPCR)和核酸质谱检测等。
ARMS方法是目前获得中国食品药品监督管理局(China Food and DrugAdministration，CFDA)批准可用于临床ctDNA检测的方法，在临床实践中应用相对普及。
由于NGS方法在技术与成本方面存在瓶颈，使得ARMS在检测诸如EGFR等已知突变中具有明显优势。
针对未知突变的发掘，NGS方法则具有其他方法无可比拟的技术优势。
包括Nature Medicine、Lancet Oncology 及New England Journal of Medicine在内诸多顶级期刊所报道的多项临床试验结果证实NGS在耐药监测中具有重要的临床价值：通过NGS监测可有效发掘耐药新突变，及时调整干预措施，切实提高靶向治疗疗效。
dPCR和基于质谱的核酸检测方法尽管可应用于已知突变ctDNA的检测，但仅限于实验室自建，尚缺乏高等级循证医学证据的支持，目前仍难以进入临床实践。
动静脉血循环肿瘤细胞检测在肺癌诊治中的意义及应用
c
a
t
i
oni
sl
imi
t
ed Compa
r
i
s
ono
fCTCs
yi
c
on
t
en
ti
nl
ungc
anc
e
ra
r
t
e
r
i
a
landvenousvenousb
l
oodi
sexpe
c
t
edt
ob
r
e
akt
h
i
sl
imi
t
a
t
i
on The
c
on
t
en
to
fCTCsi
nl
ungc
anc
e
ra
r
t
e
r
i
a
lb
i
ngandd
i
agno
s
i
so
fl
ungc
anc
e
re
va
l
ua
t
i
ono
fme
t
a
s
t
a
s
i
sandr
e
cu
r
r
enc
e
ys
andi
nd
i
v
i
dua
l
i
z
edt
r
e
a
tmen
t
【
Ke
r
d
s】 Ne
op
l
o
s
t
i
cc
液体活检技术在肺癌分子诊断中的研究进展
液体活检技术在肺癌分子诊断中的研究进展摘要】液体活检技术近年来飞速发展，为肿瘤早期诊断、疗效监测、预后评估和精准治疗等方面提供了一种无创、实时、准确的解决方案。
本文对以ctDNA、CTC、外泌体为代表的液体活检技术在肺癌分子诊断领域的研究进展进行综述，以促进液体活检技术在肺癌临床诊治中的应用。
【关键词】CTC；ctDNA外泌体；肺癌；分子诊断【中图分类号】R734.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）17-000-02肺癌是中国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，由于缺乏可靠的早期诊断方法，约60%～80%的肺癌患者确诊时已属晚期，丧失了手术治疗的机会，再加上肺癌容易发生耐药和复发转移，导致十年来肺癌的总体存活率并没有得到显著增加，是当今社会严重威胁人类健康的主要因素之一[1]。
虽然肿瘤组织活检仍然是肺癌诊断和获取肿瘤细胞遗传变异的首要途径，但组织活检存在着不少局限性，主要为：不少晚期肺癌患者无法进行组织活检；肿瘤的异质性导致穿刺组织无法全面反映肿瘤的整体信息；穿刺活检可能造成较大的医疗风险等[2]。
近年来大量研究发现血液循环系统中存在的肿瘤遗传物质可以为肿瘤的早期诊断、基因分型提供可靠的信息，可以有效地弥补肿瘤组织活检的不足，这种从血液中获取肿瘤细胞遗传变异的途径我们称之为“液体活检”。
液体活检的优势在于能够通过非侵入性取样降低活检的不良反应，因此可以进行重复检测，动态地观察患者疾病的进展，对治疗反应进行实时监测[3]。
液体活检技术中最常见的获取肿瘤DNA的来源有三种：循环肿瘤DNA （Circulating tumor DNA，ctDNA）[4]、循环肿瘤细胞（Circulating tumor cells ，CTCs）[5]以及外泌体（Exosomes）[6]。
ctDNA是游离于血液中的小片段核酸，而循环肿瘤细胞是游离于血液中的可被捕获的完整肿瘤活细胞，外泌体是细胞外包含DNA、RNA、蛋白质、代谢产物等物质的小囊泡，也可被当做肿瘤的分子标记物，下文分别对ctDNA、CTCs和外泌体在肺癌分子诊断中的研究进展进行综述。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Discovery of SP70
2-DE / Western Blot
A
KDa 250 100 75 50 PH3
B
PH3
LOCUS： CAB70682 648 aa linear PRI 26-JUL-2016 DEFINITION: hypothetical protein, partial [Homo sapiens].
The Crucial Validation Step
• Key considerations include validating the proposed marker in clinically appropriate and large enough populations, establishing its costeffectiveness, addressing practical issues about sample collection, handling, and processing, and determining the best use of the test—as part of a screening or diagnostic strategy.
Benign Lung Disease Adjacent normal tissue
ADC, lung adenocarcinoma; SCC, squamous cell lung cancer. -, +: negative, ++,+++: positive. ＊ ADC vs SCC；※ NSCLC vs Benign Lung Disease ；△ ADC vs Adjacent normal tissue
Liquid biopsy
CTC DETECTION
CellSearch Technique
2004, approved by FDA ，2012approved by CFDA
Liquid biopsy
Disadvantage： Non-specific not sensitive too complicated Instability A good tumor biomarker is needed!
• • • • • • • • •
Molecular Diagnostics
Circulating Tumor DNA DNA Methylation—RASSFIA, APC, B4GALT1, KIF1A, MCAM, RarB, PAK3, SSBP2, TIMP-3 Messenger RNA—CK7, EGFR, RUNX3, SCCA, SFTPB, TGFBR3, TRGC2, TRBV9 MicroRNA—miR-15b, -21, -27b, -126, -210, -486-5p, -574-5p, -1254, -let-7d, has-miR-328, hasmiR-26a, has-miR-383, has-miR-92a, msa-miR-662 Proteomics—CA19-9, CA125, cAMP, CEA, chromogranin, CYFRA 21-1, cystatin A, fibroblast growth factor, macrophage migration inhibitory factor, NSE, NNMT, SAA, thymosin ß4, ubiquitin Autoantibodies—14-3-3 theta, annexin I, C-MYC, CAGE, GBU4-5, HER2, MUC1, NY-ESO-1, p53, RPSA Breath Tests—3-p microsatellite signature, endothelin, COX-2, DNA methylation, survivin Bronchoalveolar Lavage Samples—angiopoietin 2, DNA methylation Sputum—5p15, CEP 6, epidermal growth factor, MYC, RASSFIA
• •
中国排名前十肿瘤病种的发病率和死亡率（总体），死亡率占比84.27% 每年新发肿瘤病例约为312万例，8550人/天，全国6人/分钟被诊断为癌症
1. 2012中国肿瘤登记年报，赫捷/陈万青主编， 全国肿瘤防治研究办公室
Liquid Biopsy needs more effective tumor biomarkers
•
SP70 expression in tissues
Prognostic value of the NJ001 specific antigen
• The overall survival rate of 102 lung adenocarcinoma patients with high (3+, n=38) expression of the antigen was significantly lower than that with low (2+, n=47) and negative (1+, n=17) expression.
SP70
NJ001
How to identify the center of target (the key biomarker)?
Proposed Lung Cancer Biomarkers
Research efforts to uncover biomarkers of early-stage lung cancer have been extensive. Numerous biomarkers in a variety of body fluids have been proposed.
SP70 expression in tissues
Table 1 Expression of NJ001specific antigen in different tissues
Groups ADC NSCLC SCC Number 183 72 46 73 NJ001specific antigen 0 0 8 36 + 28 15 34 31 ++ 81 37 4 5 +++ 74 20 0 1 < 0.001※ < 0.001△ P Value 0.288＊
组织芯片
NJ001
affinity chromatography
SP70
differential expression ELISA
Pan S, Wang F, Huang P, Xu T, Zhang L, et al. (2012) , PLoS ONE 7(3): e33009. doi:10.1371/journal.pone.0033009
Fig4. Photomicrographs of immunohistochemistry staining with NJ001 (×200).
(A) NSCLC lung adenocarcinoma; (B) NSCLC squamous lung cancer; (C) SCLC; (D) Breast carcinoma; (E) Gastric cancer; (F) Colon cancer; (G) Ovarian cancer; (H) Liver cancer; (I) Pulmonary pseudotumor; (J) Adjacent nontumourous lung tissues.
Adapted from: Cancer J 2011;17:3-10.
How to identify the center of target (the key biomarker)?
1. 发现 Discovery 2. 评估 Qualification 3. 确认 Verification 4. 检测方法学优化 Assay Optimization 5. 临床验证 Clinical Validation 6. 产品上市 Commercialization
基于肿瘤特异性抗原SP70的 循环肿瘤细胞检测技术
（SP70 for Liquid Biopsy ）
SP70 ( NJ001 Specific Antigen ) A Novel Biomarker for NSCLC
生物标志与精准医疗
SP70: a novel biomarker for NSCLC
Table 2 Correlations of the NJ001 specific antigen expression with clinicopathological characteristics of lung adenocarcinoma • The relationship between tumor differentiation and NJ001 specific antigen expression was statistically significant (P =0.017). This antigen expression was also statistically associated with lymph node metastasis in lung adenocarcinoma (P < 0.001).
•
The positive rares of NJ001specific antigen in ADC, SCC, benign lung disease and adjacent normal tissue were 84.1%, 79.2% , 8.7% and 8.2%.
SP70 expression in tissues