体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立
大鼠视网膜微血管内皮细胞的分离培养及血管形成体系的建立
大鼠视网膜微血管内皮细胞的分离培养及血管形成体系的建立【摘要】目的应用Matrigel建立大鼠视网膜微血管内皮细胞(Retinal Microvascular Endothelial Cells， RMECs)血管形成的体外培养体系，为进一步探讨视网膜相关疾病提供实验基础。
方法体外培养RMECs，在Matrigel上建立血管形成的体外培养体系。
结果经分离培养的RMECs在 Matrigel上培养形成管腔样结构。
结论 RMECs能够在Matrigel上形成血管腔。
【关键词】视网膜微血管内皮细胞;细胞培养;血管形成Abstract: Objective To induce Rat Retinal Microvascular Endothelial Cells (RMECs) to Form New Blood Vessels by setting up a stable angiogenesis culture system on Matrigel. It would be a basic experimental study for the retinal-related disease. Methods By culturing RMECs in vitro and setting up a stable angiogenesis culture system on Matrigel. Results RMECs were lumina formation on Matrigel. Conclusions RMECs can be induced to form mew blood vessels on Matrigel in vitro.Key words: Retinal Microvascular，Endothelial Cells; cell culture; angiogenesis血管内皮细胞密切参与糖尿病微血管病变和肿瘤血管新生等病理过程[1，2]。
鼠胚心肌细胞体外培养模型的建立
ｈ ｓ ｈ ｇ ｌ ｆｅ ｔｖ ． ａ ｉ ｈ ｙ ｅ ｆｃ ｉ ｅ
［ ｙｗｏ ｄ］ ｍｙ ｃ ｒ ｉｌｃｌｓ ｒｍａ ｙｃ ｌ ｒｄ Ｋｅ ｒ ｓ ｏ ａｄａ ｅｌ；ｐ ｉ ｒ ｕｔ ｅ ｕ
动物 心肌 细胞作 为 一种 工 具 在细 胞 电生理 学 、 药 ａｔ ｃｉ ｎ免疫组 化 试 剂 盒 （ 美 生 物 工 程 有 限 公 司 ） 华 ，超 理 学 及毒 理 学 、 量 代 谢 研 究 等 方 面 已经 被 广 泛 认 净 工作 台 、 能 二氧 化碳 细胞 培养 箱 、 心 机 、 差倒 置显 离 相 可 。 由于在体 研究 心肌 细胞 具 有一 定 的局 限性 ， 因此 微镜 、 生物 学显 微镜 等 。
ｔ ｅ ｆ ｒ ｏ ｅ ｌ ｕ ｐ ｎ ｉ ｎ ｓ ｅ ｅ ｎ ｔ ｓ ｅｃ ｌｕ ｅ ｐ ａ ｅ ｐ ｅ ｏ ｔ ｄ ｗｉｈ ｆ ｔ ｌ ｏ ｉ ｅｓ ｒ ｍ ．ａ ｄ ａ ｄ ｄ ｗｉ ｍ ｃ ｎ ａｎ ｎ ｈ ｏ ｍ ｆｃ ｌ ｓ ｓ ｅ ｓｏ ｅ ｄ ｄ ｉ ｉ ｕ ｕ ｔ ｒ ｌｔ ｒ ｃ ａ ｅ ｔ ｅ ａ ｂ ｖ ｎ ｅ ｕ ｓ ｎ ｄ ｅ ｔ Ｈａ Ｆ１ ｏ ｔ ｉ ｉ ｇ ｈ ２ ２ Ｏ Ｆ Ｓ （ Ｈ ． ～ ７ ４ ，ａ ｄ ｆ ａ ｌ ｄ ｎ ｉｉｄ ｃ ｌ ｔ Ｂ ｐ ７２ ． ） ｎ ｉ ｌ ｉｅ ｔｆ ｅ ｌ ｗｉ ＰＡＳ ｓ ａ ｎ ｎ ｎ ｍｍｕ ｏ ｙ ｏ ｈ ｍｉ ａ ｔ ｏ ｓ ｎ ｙ ｅ ｓ ｈ ｔｉｉｇａ ｄ ｉ ｎ ｃ ｔｃ ｅ ｃ ｌ ｍｅ ｈ ｄ ，ｗｈ ｃ ｒ ｖ ｄ ｔ ｅ ｒ ｔ ｉｈ ｐ ｏ ｅ ｈ ａ ｅ
【 要】 目的 摘 建 立 经 济 适 用 的小 鼠胚 胎 心 肌 细 胞 的分 离 、 养 和鉴 定 方 法 。 方 法 培 取 不 同 胚 龄 小 鼠 心 脏 ， 用 不 同 方 法 进 行 采
成年大鼠心肌微血管内皮细胞的分离与培养
成年大鼠心肌微血管内皮细胞的分离与培养陈小燕;樊梦雅;李慧;蒋易楠;靖静;张海龙【摘要】目的本文建立一种简便、高效的成年大鼠心肌微血管内皮细胞分离及培养的方法.方法选取7~8周龄Wistar大鼠,麻醉后开胸取出心脏,采用离体心脏灌流和酶消化法进行心肌微血管内皮细胞的分离;取第3代细胞观察其增殖特征并绘制增殖曲线;用免疫细胞化学和免疫荧光对细胞的第Ⅷ因子相关抗原和CD31进行鉴定,利用基质胶检验其血管形成能力.结果体外培养心肌微血管内皮细胞呈多边形或梭形,具有典型的铺路石样生长特点;同时,第Ⅷ因子相关抗原和CD31呈阳性;具备血管形成能力.结论本方法培养的成年大鼠心肌微血管内皮细胞具有较高的纯度,方法简便易行,可用于心血管疾病基础及临床研究.%Objective To establish a simple and efficient method for isolation and culture of adult rat cardiac micro-vascular endothelial cells. Methods Wistar rats were anesthetized and thoracotomy was performed. Cardiac micro-vascular endothelial cells were isolated by heart perfusion and enzyme digestion. The morphology and growth curve of the third generation cells were examined by inverted microsc opy. Its molecular markers factor Ⅷ-related antigen and CD31 were detected by immunocytochemistry and immunofluoresence. The angiogenic ability was examined by matrigel. Results The primary cultured cardiac microvascular endothelial cells in vitro were polygonal or fusiform with typical paving stone-like growth characteristics. At the same time,the cells were positive stained by factorⅧ-related antigen and CD31 and showed angiogenic ability. Conclusions Cardiac microvascular endothelial cells cul-tured by this method possess high purity. The method is easy tooperate and can be used for laboratory and clinical research of cardiovascular diseases.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2018(038)004【总页数】5页(P530-534)【关键词】细胞培养;内皮细胞;成年大鼠;心肌微血管【作者】陈小燕;樊梦雅;李慧;蒋易楠;靖静;张海龙【作者单位】河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;郑州大学基础医学院,河南郑州450001;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004【正文语种】中文【中图分类】R331心肌微血管是深入心脏内的终末细小分支，在心脏内分布广泛，结构上与其他血管不同，由单层内皮细胞和细胞外基质组成；微血管内皮细胞在表型与功能上均表现出不同于大血管内皮细胞的异质性，且其性质与功能在不同组织器官之间也具有显著差异[1]。
大鼠不同部位内皮细胞的体外培养_李杰
第２７卷 第３期２０１２年７月北 京 农 学 院 学 报ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＥＩＪＩＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＥＶｏｌ．２７，Ｎｏ．３Ｊｕｌ．，２０１２ 收稿日期：２０１２－０４－２８ 基金项目：国家自然科学基金项目（３１１０１８５０）；北京市教委科技发展计划重点项目（ＫＺ２０１１１００２００２１）；兽医学（中医药）北京市重点实验室２００９年度开放课题（ＢＵＡ－ＴＣＶＭ－２００９０３） 作者简介：李杰（１９８７－），女，江苏人，硕士研究生，主要从事细胞微环境方面研究，Ｔｅｌ：１５２１０６４４９７５，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｊｉｅ＿１９８７０４＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 通讯作者：穆祥（１９６０－），男，教授，主要从事细胞微环境方面研究，Ｔｅｌ：０１０－８０９７９４８０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｕｘｉａｎｇ１１０９＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ大鼠不同部位内皮细胞的体外培养李 杰，董 虹，张 涛，段慧琴，刘小瑜，许光勇，郭 洋，穆 祥＊（北京农学院动物科学与技术学院兽医学（中医药）北京市重点实验室，北京１０２２０６）摘 要：为了建立一种能有效分离、培养和获取较高纯度的大鼠心肌膜微血管内皮细胞（ＲＭＭＥＣｓ）、肠黏膜微血管内皮细胞（ＲＩＭＥＣｓ）、主动脉内皮细胞（ＲＡＥＣｓ）、后腔静脉内皮细胞（ＲＰＶＥＣｓ）的模型，自７ｄＳＤ大鼠分别取左心室壁、空肠、主动脉、后腔静脉，采用ＩＩ型胶原酶消化、差速贴壁、差速消化法获得较纯的ＲＭＭＥＣｓ、ＲＩＭＥＣｓ、ＲＡＥＣｓ、ＲＰＶＥＣｓ。
结果表明：通过形态学特征及微血管内皮细胞和血管内皮细胞相关特异性抗原检测证实，得到高纯度ＲＭＭＥＣｓ、ＲＩＭＥＣｓ、ＲＡＥＣｓ、ＲＰＶＥＣｓ。
结论：利用胶原酶ＩＩ型消化法成功分离并培养大鼠的ＲＭＭＥＣｓ、ＲＩＭＥＣｓ、ＲＡＥＣｓ、ＲＰＶＥＣｓ，为进一步开展内皮细胞的生物学特性的相关研究提供有效的方法。
关键词：ＳＤ大鼠；细胞培养模型；微血管内皮细胞；内皮细胞中图分类号：Ｒ３６５．５４３ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－３１８６．２０１２．０３．００９文章编号：１００２－３１８６（２０１２）０３－００２９－０３Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏＬＩ Ｊｉｅ，ＤＯＮＧ Ｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｔａｏ，ＤＵＡＮ Ｈｕｉ－ｑｉｎ，ＬＩＵ Ｘｉａｏ－ｙｕ，ＸＵ Ｇｕａｎｇ－ｙｏｎｇ，ＧＵＯ Ｙａｎｇ，ＭＵ Ｘｉａｎｇ＊（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｎｉｍａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ａ ｍｏｄｅｌ ｗｉｔｈ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ，ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ａｎｄ ｇｅｔｔｉｎｇ ｈｉｇｈｅｒ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ｒａｔ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ ｍｉｃｒｏ－ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＲＭＭＥＣｓ），ｒａｔ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＲＩＭＥＣｓ），ｒａｔ ａｏｒｔｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＲＡＥＣｓ），ｒａｔ ｐｏｓｔｃａｖａｌ ｖｅｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＲＰＶＥＣｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｗａｌｌ，ｊｅｊｕｎｕｍ，ａｏｒｔａ，ｖｅｎａ ｃａｖａ ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ７ｄＳＤ ｒａｔｓ．Ａｆｔｅｒ ｕｓｉｎｇ ｔｙｐｅ ＩＩ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｒｅ ｐｕｒｅｒ ＲＭＭＥＣｓ，ＲＩＭＥＣｓ，ＲＡＥＣｓ，ＲＰＶＥＣｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｔｅｓｔ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ＲＭＭＥＣｓ，ＲＩＭＥＣｓ，ＲＡＥＣｓ，ＲＰＶＥＣｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐｕｒｉ－ｔｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ＲＭＭＥＣｓ，ＲＩＭＥＣｓ，ＲＡＥＣｓ，ＲＰＶＥＣｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒａｔ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｄ ａ ｕｓｅｆｕｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＳＤ Ｒａｔ；ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌ；ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ；ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ 血管内皮细胞（ＶＥＣ）位于血流和组织之间，为衬贴于血管内腔面的单层扁平细胞，其表面积可达１ ０００ｍ２以上［１］。
白藜芦醇抑制缺氧复氧诱导心肌微血管内皮细胞凋亡的研究
检测Ｃ ＭＥ Ｃ的凋亡； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法检 测 细胞 蛋 白 激 酶 Ｂ （ Ａ ｋ ｔ ） 、 磷酸化 Ａ ｋ ｔ 、 缺 氧诱 导因子 １ ｄ （ ＨＩ Ｆ １ ａ ） 蛋 白表 达 或磷酸化 水平。结果 与 缺 氧 复 氧 １组 比 较 ， 不 同 浓度 白藜 芦 醇 １组 均 可 增 加 Ｃ ＭＥ Ｃ增殖能力 ， 呈剂量依赖性 ， 以
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｒ ｅ ｓ ｖ ｅ ｒ ａ ｔ ｒ ｏ ｌ ｏ ｎ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ ／ ｒ ｅ ｏ ｘ ｙ ｇ ｅ ｎ （ Ｈ／ Ｒ） 一 ｉ ｎ —
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大鼠血管内皮细胞培养研究
大鼠血管内皮细胞培养研究血管内皮细胞是血管中重要的细胞类型，其在维护血管生理特性以及参与血管病理反应中都具有重要的作用。
大鼠作为实验动物，其血管内皮细胞的研究也是非常重要的。
在这篇文章中，我们将重点介绍大鼠血管内皮细胞的培养技术及其在血管生物学研究中的应用。
一、大鼠血管内皮细胞培养技术1.1 资源准备大鼠动脉、静脉组织、FBS、DMEM/F12、胰酶、胰酶抗性味粉、细胞凝集素、槲皮素、PBS、二氧化碳培养箱、显微镜、离心机、相位对比显微镜、细胞均质器等。
1.2 组织消化将新鲜的大鼠动脉或静脉取出，去除外膜及脂肪组织，用PBS缓冲液清洗数次。
接着，用胰酶液消化组织，割碎后转移到消化液中，37℃孵育1-2小时，直到组织消化完全。
1.3 筛选基质消化完全的组织过筛，筛子孔径为80目。
去掉筛子上的淋渣后，产出的细胞可以用显微镜观察并鉴定是否为血管内皮细胞。
1.4 细胞培养将产出细胞悬浮在完全培养基（DMEM/F12，10% FBS，100ug/mL嘌呤鸟嘌呤，100ug/mL青霉素和50ug/mL链霉素）中，在培养室内孵育。
按细胞密度不同，可选用不同的培养方法，比如单细胞悬浮培养、半贴壁培养和全贴壁培养等。
1.5 纯化细胞如果需要纯化大鼠血管内皮细胞，还需要使用血管壁内形成的凝集素贴壁分离技术，配合药物槲皮素进行消除非内皮细胞。
二、大鼠血管内皮细胞在血管生物学研究中的应用2.1 血管内皮损伤与修复在血管损伤修复研究中，常常会使用拉环法、加热法、切割法、放置血栓等手段产生不同程度的血管内皮损伤模型，进而观察、探究血管内皮细胞的响应和修复机制。
例如研究大鼠颈动脉内皮细胞在内膜损伤后的DNA修复机制是一个非常热门的研究课题。
2.2 血管疾病如高血压、动脉硬化、心血管疾病等，都与血管内皮细胞的损伤和功能异常有关。
通过培养大鼠血管内皮细胞，可以模拟这些血管疾病模型，如在培养基中将NO剂加入，从而模拟高血压或将脂质压入细胞内，模拟动脉硬化等，可以帮助我们更好的探究血管疾病的病理生理机制。
一种大鼠心肌缺血模型的制作方法
一种大鼠心肌缺血模型的制作方法目的：建立一种大鼠心肌缺血模型制作方法，保证模型制作的准确程度与术后大鼠存活率。
方法：大鼠麻醉后，先行明视经口气管插管，呼吸机供给氧气；次行开胸结扎冠状动脉左前降支术；再行肺复张术；另术前及术后三天予以抗生素注射与体温支持等措施。
结果：经过改进，造模准确率达到100%，术后四周存活率达到80%。
结论：控制结扎位置可提高模型准确率，术中供给氧气可提高大鼠存活率。
标签：心肌缺血；动物模型；大鼠；氧气；冠状动脉左前降支在心肌缺血（MI）动物模型制作中，SD大鼠是常用动物[1]，行结扎冠状动脉左前降支（LAD）手术是传统造模方法。
如何准确客观模拟心肌缺血的病理改变且提高大鼠术后存活率是模型制作的关键。
本研究课题组立足于本实验室实际并参考众多研究者经验[2、3]，建立了一种大鼠心肌缺血模型的制作方法，以期达到保证模型成功率与大鼠术后存活率的目的。
1实验材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物SD大鼠，20只，雌雄各半，2～4 月龄，体重250±30g，由四川省人民医院实验动物研究所中心提供（许可证号：SCXK（川）2013-15）。
动物在手术操作前适应饲养一周，饲养环境为自然光暗周期，温度23～26℃、相对湿度40%～70%，雌雄分开，5只/笼，自由饮水进食。
1.1.2手术器械及耗材显微持针钳，开睑器，7-0显微带线缝合针，4-0缝合线，○ 1/2 4×12医用逢合针，24G静脉留置针，铁丝，常规手术器械与耗材。
1.1.3药物水合氯醛、0.9%氯化钠注射液，注射用青霉素钠，碘伏、75%乙醇，PBS磷酸盐缓冲液、TTC染色液。
1.1.4仪器设备肯特Kent PhysioSuite （Monitor for Mice and Rats），氧气袋，CMA/450动物恒温控制器，BL-420S生物机能实验系统，自制鼠台，强光手电筒。
1.2实验方法1.2.1麻醉7%水合氯醛氯化钠溶液以280mg/kg（0.4ml/100g）比例对大鼠进行腹腔注射麻醉，再腹腔注射青霉素8万U预防感染，然后将其仰卧位固定于鼠台上，前胸部备皮，碘伏消毒。
大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养方法研究
大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养方法研究朱慧;柳景华【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2012(29)12【摘要】目的探讨大鼠心脏微血管内皮细胞的原代培养技术,以获取纯化的大鼠心脏微血管内皮细胞.方法应用体质量80 g的雄性Wistar大鼠左心室的微血管内皮细胞进行原代培养并传代培养；通过倒置显微镜扫描观察其形态,同时对培养细胞采用免疫组织化学荧光染色法进行内皮表面因子(vWF)鉴定,并用Hoechst染色,于荧光倒置显微镜下观察.结果体外培养的大鼠微血管内皮细胞呈梭形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列.采用Hoechst染色后,可见90％以上的细胞胞浆和核膜周围被染成红色,细胞核呈蓝色荧光；merge 3染色见细胞胞浆和核膜周围被染成黑色,细胞核呈蓝色；cy-3染色见细胞胞浆和核膜周围被激发出红色光.证明培养细胞为血管内皮细胞.结论通过改进的微血管内皮细胞分离方法培养获得的细胞,生长状态良好、纯度高,且能够稳定地传代培养.%Objective To study the primary culture methods for obtain purified cardiac microvascular endothelial cells in rats. Methods Microvascular endothelial cells of male rat's left ventricle were performed with primary culture and serial subcultivation. The cellular morphous was observed by inverted microscope scanning, vascular hemophilia factor was identified by immunofluorescence, and the result of Hoechst staining was observed by inverted microscope. Results The primary cultured cardiac endothelial cells in vitro were fusiform, and formed a monolayer of typical cobblestone orslabstone array. After Hoechst staining,above 90% of the cells were positive staining, red fluorescence existed in cytoplasm, and blue fluorescence existed in cell nucleus. The results of merge 3 staining showed black in cytoplasm and around caryotheca, and blue in cell nucleus. The result of cy-3 staining showed that the red fluorescence existed in cytoplasm and caryotheca. These results revealed that the cells were vascular endothelial cells. Conclusion The improvement methods can obtain the microvascular endothelial cells with good growth,highpurity,and stable serial subcultivation.【总页数】3页(P952-954)【作者】朱慧;柳景华【作者单位】首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科28病区,北京100029;首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科28病区,北京100029【正文语种】中文【中图分类】R331.3+2【相关文献】1.原代大鼠脑微血管内皮细胞的培养及鉴定 [J], 马华根;唐元瑜;纪立金2.新生大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养 [J], 张滕;郭利平3.大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法研究 [J], 姜文4.原代SD大鼠视网膜微血管内皮细胞的培养及鉴定 [J], 林华城;刘海琴;马华根;唐元瑜5.原代SD大鼠视网膜微血管内皮细胞的培养及鉴定 [J], 林华城;刘海琴;马华根;唐元瑜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立[发明专利]
(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.04.30C N 103756953A (21)申请号 201410022374.3(22)申请日 2014.01.20C12N 5/071(2010.01)(71)申请人四川大学地址610065 四川省成都市武侯区一环路南一段24号(72)发明人杨春蕾 邵鑫(54)发明名称SD 大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立(57)摘要SD 大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，是将SD 大鼠心肌细胞原代培养后，将其放在正常培养环境中培养。
之后，放在缺氧环境中培养一段时间，再放在正常培养环境中培养。
之后，通过电镜、MTT 实验、相关基因表达、WesternBlot和流式细胞术等方法对心肌细胞缺血再灌注后损伤情况进行观察和统计。
与以往常用的缺血再灌注损伤模型制备方法比较，本发明最突出的特点是实现了实验方法的标准化，可通过调整培养时间使损伤程度可调控，有很好的重复性。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书2页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书2页(10)申请公布号CN 103756953 A1/1页1.SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，包括以下步骤：将SD大鼠的乳鼠处死后取心脏,对心肌细胞进行原代培养，将细胞放入培养箱中培养在培养一段时间之后更换培养液在培养几天之后，将细胞用缓冲液洗涤几次加入模拟缺血液，将细胞置于缺氧装置中，通入混合气体一段时间后停止通入气体并密封继续培养缺血缺氧24小时之后，更换等体积的含5%血清的模拟再灌注液，培养1小时将培养后细胞进行检测。
2.根据权利要求1所述的SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，其特征是细胞置于缺氧装置中的时间为60分钟。
3.根据权利要求1所述的SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，其特征是缺血缺氧条件为98%N2、2%CO2。
丹参乙酸镁对缺氧／复氧条件下心肌微血管内皮细胞的保护及作用机制
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖａｓｃｕｌｏｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００００， Ｃｈｉｎａ （Ｄｕ ＪＪ，Ｌｕｏ Ｐ，Ｈａｎ ＹＧ，Ｗａｎ ｇ ＬＸ）；ｔｈｅ Ｎｉｎｔｈ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００００， Ｃｈｉｎａ（Ｌｉｕ ＨＱ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｗａｎｇ Ｌｉｘｉａ，Ｅｍａｉｌ：ｄｕｊｕａｎｊ￣ａｎｌｚ＠１２６。ｃｏｒ ｎ
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中 国实 用 医 刊 ２０１８年 ６月第 ４５卷 第 １１期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＰｒａｃｔｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｕｎｅ ２０１８，Ｖｏ１．４５，Ｎｏ．１１
丹 参 乙酸 镁 对 缺 氧／复 氧 条 件 下 心 肌 微 血 管 内皮 细胞 的 保 护 及 作 用 机 制
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．Ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—４７５６．２０１８．１１．０１７
【摘要 】 目的 探讨丹参 乙酸镁（ＭＬＢ）在抑制缺 复氧（Ｉ－Ｉ／Ｒ）诱 导心肌微 血管内皮细胞 凋亡 中的作 用及机制。 方法 体外培养及建立大鼠心肌微血管内皮细胞 Ｈ／Ｒ模型，ＭＬＢ浓度分别为 １２．５、２５、５０、６２．５ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ，通过 ＴＵＮＥＬ法检 测心肌微血管内皮细胞的凋亡率及 ＭＬ８的最适浓度。确定 ＭＬＢ最适浓度后分为正常对照组 、Ｈ／Ｒ组、Ｈ／Ｒ＋ＭＬＢ组 及 Ｈ／Ｒ＋ＭＬＢ＋锌 原 卟 啉 ＩＸ（ＺｎＰＰＩＸ）组 。采 用 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法 检 测 细 胞 迁 移 能 力 ，流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 凋 亡 率。 结果 与 Ｈ／Ｒ组 比较 ，不同浓度的 ＭＬＢ均可抑制细胞凋亡，并呈剂量依 赖性 ，５０ ｐ，ｍｏｌ／Ｌ ＭＬＢ组 出现 明显保护作用（Ｐ＜ ｎＯ１）。ＺｎＰＰＩｘ干预后 ，细胞迁移能力明显减弱（Ｐ＜０．０５），细胞凋亡率明显升 高（Ｐ＜Ｑ０１）。结论 丹参 乙酸镁能够减 少缺氧／复氧诱导的心肌微血管内皮细胞凋亡，其机制可能与上调血红素加氧酶 （ＨＯ一１）水平有关。
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中西医结合心脑血管病杂志 ２ ０ １ ４年 １月 第 １ ２卷 第 １ 期
・ ８ ３ ・
体 外培养大 鼠心肌微血 管 内皮 细胞 缺 氧 模 型 的 建 立 Ｄ
马培 泽 ， 宋宪 波 ， 刘 宁， 姜 月华 ， 戴 国华
摘要 ： 目的 建 立 大 鼠 心 肌 微 血 管 内皮 细 胞 （ Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ ） 缺 氧 模 型 。方 法 植 块 法培 养 Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ ， 免 疫 细胞 化 学 鉴 定 微 血 管 内 皮 细 胞 特 异 性 标 志 。将 原 代 培 养 的 Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ 在 １ Ｏ 一 ９ ４ Ｎ 一５ ｃ ０ ｚ 低 氧 气体 环 境 中培 养 ２ ４ ｈ制 备 低 氧 损 伤 模 型 （ Ｉ 组） ， 以 无 血 清 常 氧 培 养 作 为 对 照组 （ Ｎ组） 。倒 置相 差 显微 镜 观 察 缺 氧 前 后 细胞 形 态 变化 ， ＭＴ Ｔ 法测 定 细胞 活 力 ， Ａｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ Ｖ—Ｆ Ｉ ＴＣ和 Ｐ Ｉ 双 标 记 法 测 定 细 胞 凋 亡 率 。结 果 植 块 法培 养 的 大 鼠 Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ具 备 典 型 微 血 管 内皮 细 胞 特 征 ； Ⅷ 因子 、 ｃ Ｄ３ １相 关 抗 原 免 疫 染 色鉴 定 均 阳 性 。 缺 氧 前 后 细 胞 形 态无 明显 变化 ； 与 Ｎ 组 比较 ， Ｌ组 细 胞 活 力 明显 增 加 （ Ｐ ＜０ ． ０ ５ ） ； 细胞凋亡 率明显降低 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 其 中早 期 凋 亡 降 低 最 明显 （ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。结 论 本 方 法 可 以 成 功 建 立 简 便 、 易行 的 Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ细 胞 缺 氧 模 型 。 关键词 ： 心肌 微 血 管 内皮 细 胞 ； 缺 氧模 型 ； 细胞 活 力 ； 细 胞 凋 亡
Ｅｓ ｔ ａ ｂｌ ｉ ｓ ｈｍｅ ｎｔ ｏ ｆ ｌ ｔ ｕｒ ｉ ｎｇ Ｃａ ｒ ｄｉ ａ ｃ Ｍｉ ｃ ｒ ｏｖ ａ ｓ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ Ｅｎｄ ｏ ｔ ｈｅ ｌ ｉ ａｌ Ｃｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ Ｖｉ ｔ ｒ ｏ Ｍａ Ｐｅ ｉ ｚ ｅ， Ｓ ｏ ｎｇ Ｘｉ ａ ｎｂ ｏ， Ｌｉ ｕ Ｎｉ ｎｇ， ｅ ｔ ａｌ
中图分 类号 ： Ｒ ３ ２ ９ ． ２ Ｒ ２ ８ ５ ． ５ 文献 标识码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｒ Ｌ １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ ． ２ ０ １ ４ ． Ｏ １ ． ０ ４ ６ 文 章编 号 ： １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ ０ ８ ３ —０ ３
Ｔｈ ｅ ｏ ｒ ｉ ｇ ｉ ｎ ａ ｌ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ｕ ｌ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ＣＭ ＥＣ ｓ ｉ ｎ １
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