紫外分光光度计测定的单位
仪器分析课件 第3章 紫外分光光度法
检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制
和结果处理
记录装置
二、分光光度计的类型
（一）单光束分光光度计
光源 单色器
参比 样品
检测器
显示器
• 只有一条光路，通过变换参比池和样品池的位 置，使它们分别置于光路来进行测定
国产751型、752型、721型、722型、UV-1100 型、英国SP-500型
E2a ca E2b
(3) 图计算法----两组分吸收光谱完全重叠--混合样品测定 (3)图中，a,b 吸收光谱双向重迭，互相干扰，在最大波长处互相
吸收。处理方法如下：
解线性方程组 过程：
（三）示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量 较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。
第三节 紫外-可见分光光度计
依据朗伯-比尔定律，测定待测液吸光度A的仪器。（选择不同波
长单色光λ、浓度） 分光光度计外观 分光光度原理图:
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器 信号处理及显示
信号处理 显示器
单色器
分光光度计外观
吸收池 检测器
光源
721型可见分光光度计
一、主要部件
1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光
浓度C及液层厚度L的乘积成正比。
注意! 适用范围
①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。 ③吸光度A具有加和性。Aa+b+c= Aa &光系数
A=k c L
k = A /c L
1、摩尔吸光系数或Em： 在一定λ下，c=1mol/L，L=1cm时的吸光度。单位：L/(mol.cm)
紫外分光法实验报告
一、实验目的1. 掌握紫外分光光度法的基本原理和操作方法。
2. 学会使用紫外分光光度计进行物质的定量分析。
3. 熟悉标准曲线的制作和样品浓度的测定。
二、实验原理紫外分光光度法（Ultraviolet Spectrophotometry）是利用物质分子对紫外光和可见光范围的电磁波的吸收特性，通过测量吸光度来定量分析物质浓度的方法。
根据朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law），吸光度A与溶液的浓度c和光程l成正比，即A = εcl，其中ε为摩尔吸光系数，单位为L·mol^-1·cm^-1。
本实验采用紫外分光光度法测定未知样品中特定物质的浓度。
首先，配制一系列已知浓度的标准溶液，测定其吸光度，绘制标准曲线。
然后，测定未知样品的吸光度，根据标准曲线计算样品的浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外分光光度计、石英比色皿、移液管、容量瓶、玻璃棒、电子天平等。
2. 试剂：特定物质的对照品溶液、溶剂、缓冲液等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作：（1）准确移取一定量的特定物质对照品溶液，分别加入不同浓度的溶剂，配制成一系列已知浓度的标准溶液。
（2）使用紫外分光光度计，在特定波长下测定各标准溶液的吸光度。
（3）以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品浓度的测定：（1）准确移取一定量的未知样品溶液，加入适量溶剂，稀释至一定体积。
（2）使用紫外分光光度计，在特定波长下测定稀释后样品溶液的吸光度。
（3）根据标准曲线，计算样品的浓度。
五、实验结果与讨论1. 标准曲线的制作：根据实验数据，绘制出标准曲线。
从图中可以看出，在一定浓度范围内，吸光度与浓度呈线性关系。
2. 样品浓度的测定：根据标准曲线，计算未知样品的浓度为X mol/L。
六、实验总结本实验通过紫外分光光度法测定了特定物质的浓度，成功绘制了标准曲线，并计算了未知样品的浓度。
实验结果表明，紫外分光光度法具有操作简便、准确度高、灵敏度高、应用范围广等优点，是定量分析物质浓度的一种有效方法。
紫外分光光度计确认方案精选全文
可编辑修改精选全文完整版UV-1800紫外分光光度计确认方案1 概述1.1紫外-分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范围内的吸收度，对该物质进行定性和定量的方法。
本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
TU-1901双光束紫外可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器等组成，波长范围为900nm-190nm，光谱带宽分6档（5,2,1,0.5,0.2,0.1），操作简便，测量快速，自动化程度高。
1.2基本情况设备名称：紫外可见分光光度计型号：生产厂家：安装日期：使用部门：质量控制部工作间：质量控制部2 确认目的确认紫外可见分光光度计测定数据准确可靠，适用于预期用途。
3 确认范围3.1 文件的适用范围本文件适用于质量控制部紫外可见分光光度计的确认。
3.2 确认的范围质量控制部紫外可见分光光度计的确认。
4 职责4.1 质量控制部职责✧负责起草确认方案、总结报告；✧负责整个确认方案的实施，并做记录、总结报告；✧负责该确认得出可靠的确认理论，适用于产品检验。
4.2 质量保证部职责✧做好过程监控，确保方案执行过程符合法规要求；4.3 动力部职责负责仪器的正常运行本仪器经实验确认，确认过程是否严格按照仪器操作规程和仪器说明书进行，试验结果稳定是否可靠，是否存在任何实验风险。
7 确认实施7.1相关文件a.仪器、仪表校验情况7.2 安装确认7.3.1 一般检查7.3.2 波长准确度以仪器中氘灯的656.1nm特征谱线检查。
在主菜单中激活光谱扫描窗口，选择【测量】菜单下的【参数设置】子菜单进行设置。
选择能量方式（Es），扫描范围（653nm-659nm），显示范围（0.0000E-50.00E）慢速扫描，采样间隔0.1nm，上述分别确认后，开始扫描。
扫描结束后按读取测得的峰值波长，其与标准波长（656.1nm）之差应不超过±7.3.3 吸光度的准确度取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg ，精密称定，置1000ml 量瓶中，用0.005mol/L 硫酸溶液溶解并稀释至1000ml ，用配对的1cm 石英池，以0.005mol/L 硫酸液位空白，在235、257、313、350nm 分别测定吸光度，然后换算成%1E ,测得值应符合下表的允差范围。
紫外分光光度计的吸光值
紫外分光光度计的吸光值1 紫外分光光度计简介紫外分光光度计是现代化学实验室中常用的仪器之一，可以用来测量样品在紫外光范围内的吸光度。
它主要由光源、单色器、样品室、检测器和信号处理系统等组成。
其中，光源和单色器负责发射单色光，样品室则用来容纳待测样品，检测器则测量样品对单色光的吸光度，信号处理系统则将检测到的数据进行处理和输出。
2 紫外吸收光谱的基本原理分子内部含有多种基团，分别对不同波长的紫外光吸收能力不同，从而表现出不同的吸收谱。
当样品中存在吸收性能较强的物质时，其对波长较短的紫外光吸收程度就越大。
紫外吸收光谱的图像展示了一系列吸收峰，每个峰对应一种基团，在实际操作中，检测出来的数据会根据样品与基准溶液的比较得到最终结果。
3 紫外分光光度计测量的吸光值紫外分光光度计测量的吸光值是指样品对紫外光的吸收程度，对应的单位为吸光度。
吸光度是指样品通过光强减少的程度，根据它可以表征样品的浓度和解离程度。
吸光度的计算公式为:A=ECL其中A为吸光度，E为吸光系数，C为溶液中的物质浓度，L为光程长度。
吸光系数是一个物质特有的物理量，不同物质的吸光系数不同。
4 紫外分光光度计的常见应用紫外分光光度计的常见应用包括测量DNA、蛋白质、核酸、激素、维生素、色素、药物等物质在紫外光谱范围内的吸光度，以及碳氢含量的测定等。
在工业中，紫外分光光度计也用于检测玻璃、塑料、油漆、涂料、橡胶等材料的光学性能，还可以用于特征指控、反应动力学规律的研究。
5 紫外分光光度计的使用注意事项在使用紫外分光光度计时，需要注意以下几点:1. 安全使用。
紫外光有一定的辐射能力，要避免对身体造成伤害，操作时应注意安全。
2. 校准仪器。
在实验开始前需要先对仪器进行校准，以保证数据的准确性。
3. 合理选择检测波长。
选择检测波长需要根据样品的不同特性进行合理选择。
4. 保证样品的同质性。
样品不同的取样位置可能会影响到测得的结果，因此要保证样品同质性。
紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
工作中直线经常发生弯曲，这称为朗伯-比
尔定律旳偏离。
原因：
吸光物质浓度较高；非单色光引起；介质
不均匀引起；吸光物质不稳定引起。
摩尔吸收系数ε：
1mol/L浓度旳溶液，液层厚度为1cm时旳吸
收度。
强吸收：ε＞104；
中档强度吸收：102 ＜ ε ＜ 104；
度。（吸收池厚度为10.0mm)。
c.
4、紫外-可见分光光度计旳构成、类型和使用
（1）构成：光源、单色器、吸收池、检测器、
信号处理器、显示屏
可见光源：碘钨灯、钨灯：320-2500nm
紫外光源：氢灯、氘灯、汞灯：150-400nm
玻璃吸收池：仅用于可见光区
石英池：可用于紫外光区和可见光区
选择原则：
能完全溶解样品；
在所用旳波长范围内有很好旳透光性；
纯度为“光谱纯”或经检验其空白符合要求。
处理措施：
蒸馏水煮沸清除气泡；
乙醇清除醛类、苯等杂质；
环己烷、正己烷清除苯；
氯仿预防光和空气破坏；
乙醚清除过氧化物；
烃类吸附除杂
（3）参比溶液旳选择
1）. 溶剂参比：试样构成简朴、共存组份少（基体
注意事项：
粗酶液制备时根据目旳酶旳性质选择缓冲液、温度、
时间等条件；
酶和底物旳反应条件也要恰当；
一般以检测产物变化量居多。
二、紫外-可见分光光度法
在食品检测中旳应用
（一）、食品酶分析
1、-半乳糖苷酶（乳糖酶）
以ONPG（邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷）为
底物测定-半乳糖苷酶活力。
紫外分光光度法测蛋白酶酶活
2013/05/13紫外分光光度法测蛋白酶酶活1、原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。
根据吸光度计算其酶活力。
酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。
2、试剂和溶液三氯乙酸、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乳酸、乳酸钠、硼酸钠（硼砂）均为分析纯，酪素、酪氨酸为生化试剂。
2.1 三氯乙酸c（CCL3·COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。
2.2 氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L按GB601配制。
2.3 盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HＣＬ:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
0.1 mol/L HＣＬ：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
2.4 缓冲溶液a、磷酸缓冲液（pH＝7.5）适用于中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。
b、乳酸缓冲液（pH＝3.0）适用于酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取乳酸钠（70％）16g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液8 mL，加乙液1 mL，混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液。
c、硼酸缓冲溶液（pH＝10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液500 mL、乙液400 mL混匀，用水稀释至1000mL。
紫外分光光度计法测定共聚物组成
紫外分光光度法测定聚合物的共聚组成一、实验目的1. 熟悉紫外分光光度计的基本原理2. 掌握使用紫外—可见分光光度计测定聚（苯乙烯—异丁烯）共聚组成的方法。
二、实验原理在紫外光谱中，波长单位是以毫微米（nm）表示。
1毫微米等于10-9米，一般称185或200—400nm这一段为紫外光，因为他能通过空气和石英（水晶），而小于上述波长的紫外光，因能被空气中的氧吸收，只能在真空中进行工作，所以成为真空紫外光或远紫外光。
真空紫外光的测定操作不方便，仪器复杂，研究的较少，在实际工作中是不用的。
从400—800nm就是可见光。
一般的紫外分光光度计，是包括可见光在内的，这类仪器的光谱分为一般是185—1000nm（光栅型）或200—1000（石英棱镜型）。
本实验用的UV2450紫外—可见分光光度计，他的光谱范围是190—1100nm。
有机化合物的各个原子间，大部分是以共价键结合起来的，共价键有σ键合π键两种主要形式。
键和键中电子的运动各有不同形式的成键轨道，分别成为σ轨道和π轨道。
每一种成键轨道的存在，必然伴随有一个相应的反键轨道（用σ*和π*表示）。
稳定分子中的各个原子的价电子，都分布在σ轨道和π轨道中运动，电子要跃迁到σ*和π*轨道，则需要提高很多的能量（此键能高很多），隐刺在一般情况下，反键轨道σ*和π*都是空着的。
σ轨道中的电子跃迁到σ*轨道，所需能量比π→π*跃迁大得多。
有些原子如氮、氧、卤素等，他们的外层电子中只有一部分参加σ键和π键的生成，还有一对到二对电子在原来原子中的轨道中运动，称为孤电子对，它们的运动轨道，称为非键轨道，以“n”轨道表示，这些电子的轨道能量在由原子结合成分子的过程中基本没有变化。
各种轨道能级的变化见图2—24。
有机物的烷烃，C—C和C—H都只含有σ键，其能级如图2—24（1）所示。
烯类中的C C键，有一对电子在σ轨道中运动，另一对在π轨道中运动，有不同键的能级，如图2—24（2）所示。
紫外分光光度计操作步骤
紫外分光光度计使用操作步骤1、开机1.1．打开电源测试前需让仪器至少预热15分钟.1.2空白校正UV-4802型光度计，由于机内储存有系统基线，一般情况下，可不做空白校正，只要将参比放入参比光路，样品放入样品光路即可获得测试结果。
1 对于定点测试，若欲得到更为准确的测试结果，可按如下步骤进行： a. 将盛参比液的参比比色皿放入参比光路，盛参比液的样品比色皿放入样品光路，按【0Abs/100%T】键，进行空白校正。
b.将样品比色皿中的参比液倒出，经过冲洗，盛入样品溶液，置入样品光路，读取试验结果或按【START】键进行测量并得到结果。
2.对于定性测试（光谱扫描），在设置好扫描参数后，将盛参比液的参比比色皿放入参比光路，盛样品的样品比色皿放入样品光路，按【START】键可直接得到扫描图谱，为了消除系统基线可能带来的影响，可将盛参比液的参比比色皿放入参比光路，盛参比液的样品比色皿放入样品光路，按【0Abs/100%T】键得到当前设置下的用户基线，再将盛样品的样品比色皿放入样品光路，按【START】键得到扫描图谱。
1.3．波长设置在“光度计模式”中设置波长步骤如下：按【SETλ】键，用数字键输入欲去波长。
2、测定功能2.1光度计模式在主菜单中按【1】键便进入“光度计模式”测试界面，将盛参比液的参比比色皿放入参比光路，盛参比液的样品比色皿放入样品光路，按【0Abs/100%T】键，进行空白校正，将样品比色皿中的参比液倒出，经过冲洗，盛入样品溶液，置入样品光路，读取试验结果。
若按【ESC/STOP】则回到主菜单.2.2光谱扫描按【3】直接进入“光谱扫描”界面，按F1设置扫描参数，包括扫描的开始波长，结束波长，扫描时间间隔和速度。
将参比液置入参比光路和样品光路后，按【0Abs/100%T】键可建立当前扫描参数设置下的用户基线. 按【ESC/STOP】键可以停止扫描; 用用户基线扫描：将待分析样品置入光路后，按【START】键进行样品扫描。
紫外分光光度法测定未知物
紫外分光光度法测定未知物1.仪器1.1紫外分光光度计（uv-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个1.2容量瓶（100ml）：10个；容量瓶（250ml）1个1.3吸量管（10ml、5ml）：各1支1.4移液管（20ml、25ml、50ml）：各1支2.试剂2.1标准溶液（1mg/ml）：维生素c、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别硝酸锶1mg/ml的标准溶液，做为储备液。
2.2未知液：浓度约为（40~60ug/ml）。
（其必为给出的五种物质之一）3.实验操作3.1比色皿配套性检查石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。
3.2未知物的定性分析将五种标准储备液均吸收成10ug/ml的试液（酿制方法由球手自的定）。
以蒸馏水为滴定法，于波长200~350nm范围内读取五种溶液，绘制稀释曲线，根据所获得的稀释曲线对照标准谱图，确认被测物质的名称，并依据稀释曲线确认测量波长。
五种标准物质溶液的稀释曲线参五种标准物质溶液的稀释曲线参五种标准物质溶液的稀释曲线参五种标准物质溶液的稀释曲线参照吴际顺托福附图附图附图附图。
3.3未知物定量分析根据未明液稀释曲线上测量波长处的喷光度，确认未明液的吸收倍数，并酿制试样溶液3份，展开平行测定。
所推荐方法3.3.1维生素c含量的测定：准确吸取1mg/ml的维生素c标准储备液50.00ml，在250ml容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/ml）。
再分别准确移取1、2、4、6、8、10ml上述溶液，在100ml容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20ug/ml）。
准确移取20.00ml维生素c未知液，在100ml容量瓶中定容，于最小稀释波长处分别测量以上溶液的喷光度。
由标准曲线上Malvaleix未明液的浓度。
3.3.2苯甲酸含量的测量：精确汲取1mg/ml的苯甲酸标准储备液25.00ml，在250ml容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/ml）。
紫外分光光度法检测标准操作规程完整
1. 目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2. 引用标准：《中华人民国药典》（2015年版四部）通则。
3. 围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4. 责任人： QC检验员对本标准的实施负责，QC主管负责检查监督。
5. 容：5.1定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长围光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数计算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处该化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
5.2 原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm）或可见光区（400~760nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长围为190~900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：A=lg 1=ECL T式中：A 为吸光度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，１ｃｍ则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
5.3. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
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紫外分光光度计测定的单位
紫外分光光度计是一种常用的实验室仪器，用于测量物质在紫外光区的吸收光谱和定量分析。
其测定的单位涉及到一些物理量和计量单位。
1.吸光度（Absorbance）：吸光度是紫外分光光度计测
定的主要物理量之一，它表示物质对紫外光的吸收程度。
吸光度的单位通常为“A”，其数值越大表示物质对紫外光的吸收越强。
2.波长（Wavelength）：紫外分光光度计测定的另一个
重要物理量是波长，它表示紫外光的波长范围。
波长的单位通常为“nm”（纳米），其数值越小表示紫外光的波长越短。
3.透射率（Transmittance）：透射率是紫外分光光度
计测定的另一个物理量，它表示物质对紫外光的透过程度。
透射率的单位通常为“%”，其数值越大表示物质对紫外光的透过越强。
4.浓度（Concentration）：紫外分光光度计还可以通过
比较样品溶液和标准溶液的吸光度来测定样品溶液的浓度。
浓度的单位通常为“mol/L”（摩尔每升）或“g/L”（克每升）等，其数值越大表示样品溶液中目标物质的浓度越高。
5.吸光系数（Absorption Coefficient）：吸光系数是描
述物质吸光能力的一个常数，它与物质的性质、波长和温度
等因素有关。
吸光系数的单位通常为“L/（g·cm）”，其数值越大表示物质在特定波长下的吸光能力越强。
6.摩尔吸光系数（Molar Absorption Coefficient）：
摩尔吸光系数是吸光系数的另一种表示方式，它表示每摩尔物质在特定波长下的吸光能力。
摩尔吸光系数的单位通常为“L/(mol·cm)”，其数值越大表示每摩尔物质在特定波长下的吸光能力越强。
7.能量（Energy）：紫外分光光度计测定的另一个相关
物理量是能量，它表示紫外光的能量大小。
能量的单位通常为“eV”（电子伏特），其数值越大表示紫外光的能量越强。
这些是紫外分光光度计测定中涉及的主要物理量和计量单位，它们在实验研究和定量分析中具有重要意义。
需要注意的是，不同国家和地区的计量单位可能存在差异，因此在国际交流和合作中需进行单位转换和统一。