最新 高速逆流色谱研究进展
高速逆流色谱技术
l 高速逆流色谱是液相色谱的一种新技术，无需载体，从几种色谱原理方法可以清晰说明。
大约50年前，根据对两种液体进行分配的理念，产生了两种相似的方法：逆流分配技术和液-液色谱分配技术，即：逆流色谱和液相色谱。
30年前，日本Sanki Engineering Ltd.利用前一种技术开发出了高性能的逆流色谱仪（HPCPC），它结合了液相色谱中的快速、高效和先进技术。
HPCPC尤其在利用色谱技术进行半制备和全制备的应用中倍受瞩目，它和采用色谱柱技术的液相色谱在四个方面具有显著优势：● 无样品损失：因为流动相和固定相都是液体，样品可以全部回收。
● 大容量和高的分离能力：流动相和固定相的体积比明显很高，从而无需更大的理论塔板数，就可以获得更大的容量和更高的分离能力。
● 十分灵活的两相系统：（两种、三种、四种溶剂混合）为了获得一种纯的化合物，实验中需要比较灵活的更改流动相，HPCPC可以很方便地调整两相的极性。
● 溶剂消耗少：相对于色谱柱制备系统，对于同样的制备量，HPCPC的溶剂消耗量只有十分之一，使用逆流色谱在实验室完成分离后，可以直接放大到生产规模。
● 固定相价格低：另一个显著优点是逆流色谱的固定相是溶剂，相比色谱柱中的填充材料价格低很多；而且固定相可以很容易再生，一些添加的物质如手性选择剂或复杂的配位体可以无损失地回收，国际上出版的论文可以提供十分有用的信息和应用参考。
新型的高速逆流色谱仪HPCPC广泛地应用于化学领域的纯化，如抗生素、缩氨酸、丹宁酸、皂角苷、油脂、药品等，将来的发展可以预见更大规模和产量的HPCPC设备出现，在化学领域将更加广泛地应用，如手性药物分离等。
与传统制备液相的优势● 逆流色谱仪HPCPC十分快速由于固定相溶剂通过离心力保留在分配通道中，可以不用顾及分离精度的高低要求而让流动相的流速保持很高。
● 明显优于传统制备液相由于逆流色谱仪HPCPC不需要固定相，不会出现对十分昂贵的样品产生不可逆转的保留，而在传统色谱柱的液相色谱中，经常出现的变性和分解现象在逆流色谱不会产生，同时保留了原来的生物活性。
高速逆流色谱的原理及活性成份提取的进展
雷公藤 春碱
．
陈皮 ］
石油醚一 乙酸 乙酯一 甲醇一 （体积 比为 ２４： ： ： 水 ： ３３）
正 已烷一 乙酸 乙酯一 甲醇一 （体积 比 ３ ５ ３ ５ 水 ： ： ：） 石油醚一 乙酸 乙酯一 甲醇一 （ 水 体积 比 ２ ：５ ２ ：７ ２ ２ ：３ １ ）
陈皮苷 、 桔皮素
⑤ 抗 生素的分离纯化 ；
图 １ 多级 萃 取 技 术
⑥ 天然产物未知有效成分 的分离纯化（ 新化合物 开发） ；
⑦ 海洋生物活性成分 的分离 纯化 ；
⑧ 放射性 同位素分离 ；
⑨ 多肽和蛋 白质等生物 大分 子分离以及手性分离等 。 我 国是继美 国、 日本之后最早开 展逆流色 谱应用 的 国家 ，
３ （ － ｙ ｒ ｘ －ｎ ｙ ）５ ７ｄｈ ｄ ｏ ｙ ６ｍｅｈ － ４ｈ ｄ ｏ ｙｅ ｚ １ － ， － ｉｙ ｒ ｘ － 一 ｔ —
叶黄素 异戊烯基黄酮
黄 酮 茄 尼 醇 １羟 基 一一 一 ２ 甲基 一 蓖 蒽 二 苯 乙 烯 苷 菊 苣 酸
大 麻 ］ 乌 药 叶 ］
关键词 ： 高速逆流色谱 ； 应用 ； 研究进展
ｄ ｉ１ ．９ ９ Ｊ ｉ ｎ ０ ４４ ３ ． ０ １０ ．３ ｏ：０ ３ ６ ／ ．ｓ ．１ ０－３ ７ ２ １ ．６ ０ ２ ｓ
逆流色 谱 （ ｏ ｎｅｃ ｒｅｔ ｈｏ ｔｇ ａｈ ， Ｃ ） 合 了 Ｃ ｕ ｔｒｕｒｎ ｒｍａｏ ｒｐ ｙ Ｃ Ｃ 结 Ｃ
赵 芳
（ 石河 子大 学化 学化 工学 院
新疆 石 河子 ８ ２０ ） ３００
要 ： 综 述 Ｈ Ｃ Ｃ的原理及从天然产物中提取活性成份 的应用及 进展 ： ＳＣ 高速逆 流色谱 （ ｉ －ｐｅ ｏ ｎｅ ｕｒ ｔ ｈｏ ａ ｈ ｈｓ ｅ ｃ ｕ ｔ ｃ ｒ ｎ ｒｍ — ｇ ｄ ｒ ｅ ｃ
高速逆流色谱高速逆流色谱高速逆流色谱高速逆流色谱
高速逆流色谱High Speed Countercurrent Chromatography（HSCCC）逆流色谱是利用溶质在两种互不相溶的溶剂中的分配系数不同，应用色谱层析的方法，将不同溶质分离。
逆流色谱的发展从逆流分配、液滴逆流色谱直至现在的高速逆流色谱，经历了近60年的历程，技术和设备均已日益成熟，现越来越多地应用于中药及天然药物的研究开发。
高速逆流色谱特点：! 无不可逆吸附# 液—液层析系统，无样品与固定相之间的不可逆吸附! 高回收率# 流动相和固定相均为液体，样品可全部回收! 操作简便# 固定相为液体，体系更换、平衡方便、快捷。
高速逆流色谱原理：高速逆流色谱是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。
在流动相中分配比例大的先被洗脱，反之，在固定相中分配比例大的后被洗脱。
图1是螺旋柱中互不相溶的两相溶剂在行星运动时的流体动力学运动及分配示意图。
上图，在达到稳定的流体动力学平衡态后，柱中呈现两个截然不同的区域：在靠近离心轴心大约有四分之一的区域（混合区）呈现两相的激烈混合。
其余区域（静置区）两溶剂相分成两层：较重的溶剂相在外部，而较轻的溶剂相在内部，两相形成一个线状分界面。
下图，I到IV的展开柱，分别与上图中I到IV位置相对应，每一混合区以跟柱旋转速度相同的速度向柱头端移动（与海面波的运动相似）。
在螺旋柱中任何一部分，两相溶剂都在反复进行混合和静置的分配过程，这一过程频率极高，当柱以800rpm旋转时，频率超过13次/秒，流动相则不断地穿过固定相。
所以高速逆流色谱在一个较宽的流动相流速范围内，仍有相当高的分配效率。
图1 螺旋柱中两溶剂相流体动力学运动及分配高速逆流色谱应用：1. 旋转速度在逆流色谱中，留在柱中固定相的量是影响溶质峰分离度的一个重要因素，一般说来，高保留量会大大改进峰分离度。
应用高速逆流色谱分离中药中有效成分及质谱结构研究
应用高速逆流色谱分离中药中有效成分及质谱结构研究I. 研究背景在中医药学的发展过程中，中药已经成为了人们日常生活中不可或缺的一部分。
随着科技的进步，人们对中药的研究也越来越深入，尤其是对中药中有效成分的提取和分离技术。
高速逆流色谱(HSLC)作为一种高效的分离技术，已经在中药研究领域得到了广泛应用。
本研究旨在通过HSLC技术分离中药中的有效成分，并利用质谱技术对其进行结构解析，以期为中药的现代化研究和开发提供理论依据和技术支撑。
在过去的几十年里，我国中医药事业取得了世界公认的辉煌成果。
然而随着现代医学的发展，中医药面临着前所未有的挑战。
为了更好地传承和发扬中医药文化，我们需要不断地对中药进行创新研究，提高其药效和安全性。
高速逆流色谱作为一种新兴的分离技术，具有操作简便、分离效率高、适用范围广等优点，为中药的有效成分提取和分离提供了有力保障。
质谱技术作为现代分析科学的重要手段，已经在生物医药领域取得了显著的应用成果。
通过对中药中有效成分的结构解析，我们可以更深入地了解其药理作用机制，为新药的研发提供理论依据。
此外质谱技术还可以用于中药的质量控制和评价，确保药品的安全性和有效性。
中药中有效成分的研究意义及现状在我们的日常生活中，中药已经成为了许多人的日常调理和疾病治疗的重要手段。
而其中最让人着迷的，莫过于中药中那些神奇的有效成分。
这些成分不仅能够治病救人，还能够为我们的生活带来诸多健康益处。
因此研究中药中有效成分的意义不言而喻。
然而尽管中药有着悠久的历史和丰富的经验，但在现代科学技术的发展下，我们对中药中有效成分的认识仍然有限。
这主要是因为中药中的有效成分种类繁多，分离提取难度较大，而且很多成分的结构性质尚不清楚。
因此如何高效、准确地从中药中提取出这些有效成分，成为了一个亟待解决的问题。
近年来随着高速逆流色谱等现代分离技术的不断发展，我们对中药中有效成分的研究取得了一定的进展。
通过对大量中药样品的分析，我们已经发现了许多具有潜在药用价值的化合物。
高速逆流色谱应用及发展
2 抗生素
用HSCCC 分析抗生素时，进样量一般为 1mg~5g，分离度和样品回收率高的优势，使 得 HSCCC 在抗生素单组份标准品的制备和多组分同 系物的分离纯化得到更为广泛的应用。 在HSCCC 中，一般用疏水性体系分离抗生素。 对于强极性组分用含有正丁醇的体系，中等疏水体 系用含有氯仿的体系，疏水性用含有正己烷的体系。
较小：多次萃取
逆流分配法，20世纪40年代,创始人Craig
高速逆流萃取：利用螺旋柱在行星运 动时产生的多维离心力场，使互不相溶的 两相不断混合，同时保留其中的一相（固 定相），利用恒流泵连续输入另一相（流 动相），随流动相进入螺旋柱的溶质在两 相之间反复分配，按分配系数的次序，被 依次萃取分离出。 在流动相中分配比例大的先被洗脱， 反之，在固定相中分配比例大的后被洗脱， 从而实现分离。
（ 1 ）天然产物已知有效成分的分离纯化 （ 2 ）化学合成物质的分离纯化 （ 3 ）中药一类、五类新药的开发 （ 4 ）中药指纹图谱和质量控制研究 （ 5 ）抗生素的分离纯化 （ 6 ）天然产物未知有效成分的分离纯化及新 化合物开发 （ 7 ）海洋生物活性成分的分离纯化 （ 8 ）放射性同位素分离 （ 9 ）多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手 性分离等
l
l
l
③相对于错流萃取和逆流萃取等传统的溶 剂萃取技术，具有适用范围广、操作灵活、 快速、制备量大、费用低、环保高效等优 点。 ④由于不需要固体支撑体，物质的分离依据 其在两相中分配系数的不同而实现，因而 避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、 失活、变性等，不仅使样品能够全部回收， 回收的样品更能反映其本来的特性，特别 适合于天然生物活性成分的分离。 ⑤由于被分离物质与液态固定相之间能够充 分接触，使得样品的制备量大大提高，是 一种理想的制备分离手段。
高速逆流色谱技术在药物研究开发中的应用
高速逆流色谱技术在药物研究开发中的应用*□曹学丽** (北京工商大学化学与环境工程学院/北京市植物资源研究开发重点实验室 北京 100037) 收稿日期:2006210210 修回日期:2006211230* 北京市教育委员会科技发展教育计划项目(K M200410011001);天然药物活性成分分离纯化技术研究,负责人:曹学丽;北京市自然科学基金项目(2042006)高速逆流色谱螺线形圆盘柱分离系统的研究,负责人:曹学丽。
** 联系人:曹学丽,博士,教授,主要从事天然植物和药物活性成分的逆流色谱分离纯化技术研究。
Tel:010*********,E 2mail:Caoxl@th .btbu .edu .cn 。
摘 要:对高速逆流色谱(HSCCC )技术。
在天然药用植物活性成分分离及标准品制备、中药指纹图谱分析、天然新药的研发和活性部位筛选等方面中的应用及其在生物药物以及药物工业化领域的应用发展趋势进行了综述。
关键词:高速逆流色谱 药物研究开发 活性成分分离 高速逆流色谱(H igh -Speed Countercurrent Chr o 2mat ography,HSCCC )是一种连续高效的液2液分配色谱分离技术。
该技术由于不需要固体支撑体,物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现,因而避免了因不可逆吸附引起的样品损失、失活、变性等,特别适合于天然生物活性成分的分离。
而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触,使得样品的制备量大大提高,是一种理想的制备分离手段,目前已广泛应用于生物医药、天然产物、食品和化妆品等领域,尤其是在我国生物医药以及中药现代化等领域的应用愈来愈广。
HSCCC 在过去的20～30年中发展十分迅速,产生了一系列新型的分离技术,积累了大量的科研成果。
自1995年以来,国外已有5本英文专著出版[1-5],我国目前也已出版两本中文专著[6,7]。
本文将重点就近年来HSCCC 在药物研究开发中的应用进行讨论和综述。
高速逆流色谱技术的应用研究进展
2019,38(2)河南大学学报（医学版）・143・文章编号：1672-7606(2019)02-0143-05高速逆流色谱技术的应用研究进展宋如峰，宗兰兰，袁琦，蒲晓辉回河南大学药物研究所，河南开封475004摘要:高速逆流色谱技术（HSCCC）因其结果物纯净、制备量大、技术成本低等优点，正在发展成为一种备受关注的新型液液分配色谱分离纯化技术，广泛应用于天然药物有效成分的分离及制备、中药活性成分指纹图谱的分析、食品色素 等添加剂的分离与制备，以及蛋白质等方面的分离与纯化等领域。
通过查阅文献，论述HSCCC在天然药物、中药、食品、蛋白质等方面的应用及发展现状。
HSCCC具有高回收率、高制备量、高纯度、高活性保留、低试剂消耗等优点，在科学研究过程中具有很好的应用前景。
关键词：高速逆流色谱;两相溶剂；天然产物;指纹图谱;应用中图分类号:R283.3文献标志码：AApplication and recent development of high-speed countercurrent chromatographySONG Ruf eng,ZONG Lan lan,YUAN Qi,PU Xiaohui13Institute of Materia Medica of Henan University,Kaifeng475004,ChinaAbstract：Through the literature,expositing the principles and characteristics of High Speed Counter-Current Chromatography (HSCCC),and focusing on the status of its application and development in natural medicine,Chinese herbology,food and other aspects of protein.HSCCC is a new kind of liquid-liquid partition chromatography technique,used for isolation and preparation of effective components of natural medicine preparation,analysis of the active ingredient in traditional Chinese medicine fingerprint, isolation and preparation of pigments and other additives in food,separation and purification of protein,and other aspects.With the high recovery,high levels of preparation,high purity,high activity retention,low reagent consumption and other advantages, HSCCC has a good prospect in the scientific process.Key words:high-speed counter-current chromatography;two-phase solvent;natural products;fingerprint;application高速逆流色谱技术（high speed counter-current chromatography,HSCCC）是一种新型的无固体载体的连续、高效的液液分配色谱技术，采用多层缠绕的螺旋管柱，由柱体的高速行星式运动产生的不对称离心力场实现两相溶剂体系的高效混合、分配及充分保留，形成连续流萃取，从而实现不同溶解分配系数的溶质在两相溶剂中的高效分离。
高速逆流色谱溶剂体系筛选及其联用技术
02 03
拓展高速逆流色谱与其他技术的联用范围
将高速逆流色谱与更多的分析技术联用，如红外光谱、拉 曼光谱等，以实现对复杂样品中目标化合物的更全面、更 准确的分析和鉴定。
拓展应用领域
将所建立的方法应用于更多领域的实际样品中，如环境污 染物、生物大分子等，以拓展其应用范围和应用价值。同 时，积极探索高速逆流色谱技术在其他领域中的潜在应用 前景。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
研究高速逆流色谱溶剂体系筛选及其联 用技术，对于提高天然产物、药物等复 杂体系的分离纯化效率具有重要意义。
溶剂体系筛选是HSCCC技术中的关键 环节，直接影响分离效果和分离纯度。
国内外研究现状及发展趋势
01
国内外学者在HSCCC溶剂体系 筛选方面进行了大量研究，涉 及不同类型的溶剂体系和实验 条件。
时监测和分离纯化。
案例分析：成功应用实例分享
中药活性成分分离纯化
利用HSCCC-MS联用技术，成功从中药复杂体系中分离出多种活性ห้องสมุดไป่ตู้分，并进行结构鉴定和定量 分析。
天然产物化学成分研究
利用HSCCC-NMR联用技术，对天然产物中的化学成分进行在线结构解析和定量分析，为天然产 物的开发利用提供有力支持。
分离等。
实验结果可靠性
对实验结果的重复性、稳定 性和准确性进行评估，确保 实验结果的可靠性。
存在问题及改进方向
实验操作问题
反思实验过程中可能存在的操作不规范、误差较大等问题， 提出改进措施，提高实验操作的准确性和可重复性。
溶剂体系选择局限性
讨论当前溶剂体系选择的局限性，探索更多可能的溶剂组 合，以扩大高速逆流色谱的应用范围。
02 高速逆流色谱技术基础
高速逆流色谱实验在有效成分分离中溶剂体系的选择
Ｓ ｌｃｉｎ ｏ ｏｖ ｎ ｙ ｔｍ ｏ ｇ － ｐ ｅ ｕ ｔｒ ｕ ｒ ｎ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈ ｅｅ ｔ ｆＳ ｌｅ ｔＳ ｓｅ ｆ ｒＨｉｈ ｓ ｅ ｄ Ｃｏ ｎ ｅ ｃ ｒｅ ｔＣ ｒ ｍａｏ ｒ ｐ ｙ ｏ
（ ｉ —ｐ ｅ ｃｕ ｔ — ｕｒｎ 定 的借鉴和指导作用。 ｈｇ ｓｅｄ ｏ ｎｅ ｃ ｒ ｔ ｈ ｒ ｅ
高 速 逆 流 色 谱
ｃｒｍ ｔｇａｈ ，Ｈ Ｃ Ｃ 是 ２ ｈｏ ａ ｒｐ ｙ Ｓ Ｃ ） ｏ ０世 纪 ８ ０年 代 发 展 起 １ 溶剂 体 系 （ 系统 ）的选 择 来 的 ，一种 不 使用 固态支 撑体 或 载体 连续 高效 的 ． 液一 液分 配色谱 技 术 ，利用 溶质 在两 种互 不相 溶 的溶 １１ 选择 原 则 溶 剂体 系 是所 有逆 流 色谱 的心 脏 ，它构 成逆 流色 剂 中分配 系数 的不 同 ，将 不 同物 质进 行有 效分 离 。相
ｉ ｅ ａ ａｉｎ ｏ ｅ Ａｃｉｅ Ｉ ｇ ｅ ｉｎ ｎ Ｓ ｐ ｒ ｔ ｆｔ ｔ ｎ ｄ ｅ ｔ ｏ ｈ ｖ ｒ
Ｇｕ ｏ“ ｌ，．ｊ ｉｇ ｈ ｎ，Ｃａ ｎ ｉ 】ｕＪ ｓ ｅ ｇ Ｌ ｎ ｉ Ｄａ
（ ｏｌｇ ｆ ｏ ｄ Ｓ ｉｎ ｅａ ｄＥｎ ｉｅｒｎ ， Ｊｌ ｎ ｕｔｒｌＵｎｖ ｒｉ ， Ｃｈ ｎ ｃ ｕ Ｃ ｌ ｅｏ ｏ ｃｅ ｃ ｎ ｇｎ ｅ ｇ ｉｎＡｇ ｃ ｌ ａ ｅ Ｆ ｉ ｉ ｕ ｉｅｓｔ ｙ ａ ｇｈ ｎ， Ｊｌ １ ｉｎ １ ０１ Ｃ ｉａ ｉ ３ ８， ｈｎ ） Ａｂ ｔ ｃ： Ｔ ｅＨｉｈ ｓ ｅ ｄｃ ｕ ｔｒｕ ｒｎ ｈｏ ｔｇａ ｈ （ Ｃ Ｃ） ｗａ ｅ ｉｕｄ ｌ ｕｄ ｄｓｒ ｕｉｎｃ ｒｍａｏ ｒｐ ｙ Ｉ ｓｒ ｔ ｈ ｇ — ｐ ｅ ｏ ｎｅｃ ｒｅ ｔｃ ｒｍａｏ ｒｐ ｙ ＨＳ Ｃ ａ ｓａ ｎ ｗ ｌ ｉ－ ｉ ｉ ｉ ｉ ｔ ｈ ｏ ｔｇａ ｈ ． ｔ ｑ ｑ ｔｂ ｏ
高速逆流色谱
高速逆流色谱综述高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)，于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术。
该技术由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附引起的样品损失、失活、变性等问题，具有传统的液-固色谱所不具备的独特优势，特别适合于天然生物活性成分的分离。
而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段，因此此项技术己被广泛应用于中药成分分离、保健食品、生物化学、生物工程、天然产物化学、有机合成、环境分析等领域[1]。
1 高速逆流色谱原理[1-2]图.1高速逆流色谱仪利用螺旋管的自转和公转同步同向行星式运动所产生的变化离心力场将固定相保留在螺旋管中，允许流动相快速流过螺旋管并与固定相进行连续高效的混合和分配，达到一种特殊的流体动力学平衡——单向流体动力学平衡，此时在螺旋柱中任何一部分，两相溶剂都反复进行着混合和静置的分配过程，这一过程频率极高，在800rpm转速下时，混合和分配的频率可以达到13次/s。
大大提高了两相溶剂的混合效率，可以极大地缩短分离时间，这就是高速逆流色谱分离效率高的原因。
如图.1。
2 高速逆流色谱(HSCCC)的特点及与制备型高效液相色谱（prep-HPLC）的比较[3-4]目前制备出高纯度的天然产物的方法中，制备型高效液相色谱是使用最为广泛的。
与其相比，高速逆流色谱具有以下一些突出的优点。
（1）HSCCC回收率高：由于HSCCC不需要固体支撑体，避免了样品在分离过程中的不可逆吸附、分解、变性等问题。
理论上，滞留在柱中的样品可以通过多种洗脱方式予以完全回收；实验中只要调整好分离条件，一般都有很高的回收率。
粗样可以直接上样而不会对柱内固定相造成任何损害。
而prep-HPLC在样品吸附过程中会出现死吸附的现象，在制备高纯品的过程中，必然会以牺牲得率为代价，这是prep-HPLC不可避免的。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高速逆流色谱分离原理及特点
图( b)则表示将对应于不同位置( Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ)的螺旋管拉直，以更明显地表示混合区域在螺旋 管内的移动，即每个混合区带都向螺旋管的首端行 进,其行进速率和管柱的公转速率相同。这表明，当 流动相恒速通过固定相时，在管柱内部的两溶剂相 都以极高的频率经历着混合和沉积分配过程。在 800rpm的转速下，混合和沉积的频率可达到13次/s。
高速逆流色谱分离原理及特点
2.2 特点
HSCCC技术所有的优点都源于其不用固体固定相，具有广 泛的溶剂体系可供选择。其优点有： ①避免了样品在分离过程可能存在的变性问题； ②滞留在柱中的样品可以通过多种洗脱方式予以完全回收； ③粗样可以直接上样而不会对柱子造成任何损害； ④柱子可以用合适的溶剂很容易地洗清，可重复使用； ⑤通过改变溶剂体系，实现对不同极性物质的分离； ⑥比高效液相色谱的制备量大，而且费用低，因为其不需要 昂贵的色谱柱。
高速逆流色谱分离原理及特点
2.1
分离原理
HSCCC是利用螺旋柱在类行星运动时产生的 离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其 中的一相(固定相) ，利用恒流泵连续输入另一相(流 动相) ，随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反 复分配，按分配系数的大小次序被依次洗脱。在流 动相中分配比例大的先被洗脱，在固定相中分配比 例大的后被洗脱。
高速逆流色谱分离原理及特点
HSCCC仪器的装置示意图如下，它的公转轴为 水平设置，螺旋管柱在距公转轴R 处安装，二轴线 平行。通过齿轮传动，使螺旋管柱实现在绕仪器中 心轴线公转的同时，绕自转轴作相同方向相同角速 度的自转。
•HSCCC仪器装置示意图
高速逆流色谱分离原理及特点
对用选定溶剂体系的下相作流动相时，管柱里会出现如 图2所示的分布区带。在达到稳定的流体动力学平衡态后,柱 中呈现两个截然不同的区域：在靠近离心轴心大约有四分之 一的区域，呈现两相的激烈混合(混合区)，其余区域两溶剂 相分成两层(静置区) ，较重的溶剂相在外部，较轻的溶剂相 在内部，两相形成一个线状分界面。
高速逆流色谱
高速逆流色谱是建立在的流体动力学平衡基础 上，利用螺旋管的高速行星式运动产生的不对称离 心力场，实现两相溶剂的充分保留和有效混合及分 配，从而实现物质在两相溶剂中的高效分离。
高速逆流色谱
图中 ①为恒流泵 ②为紫外检测仪 ③为恒温循环器 ④为高速逆流色谱主机
②
*
①
④
③
pH-区带精制逆流色谱
高速逆流色谱分离条件的优化
*
液滴逆流色谱
液滴逆流色谱使流动相形成液滴, 通过作为固定相的液柱达到分离纯化 的目的。其装置一般由一组直立的、 小孔径的硅烷化玻璃管柱通过聚四氟 乙烯毛细管连接起来而组成的。 由于流动相形成的液滴, 在细玻 璃管中与固定相有效地接触，不断形 成新的表面, 促进溶质在两相溶剂中 的分配, 所以分离效果好, 且不产生 乳化现象。 液滴逆流色谱解决了操作自动化 的问题, 但仍存在分离时间长, 使用 易破碎的玻璃管, 分离度还不高等问 题。 *
HSCCC螺旋管内溶剂体系的区域分布图
高速逆流色谱分离原理及特点
右图为旋转一周混合区域 的变化示意图，每一混合区域 以与柱旋转速度相同的速度向 柱端移动。图 ( a)所示为螺旋 管在连续转动的不同位置( Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)时，观察到的其中 两相分布情况。如图中箭头所 示,螺旋管柱在以角速度ω公转 的同时，以相同角速度和相同 方向自转。
pH-区带逆流色谱是分离制备离子型化合物的一种有效 方法。它利用溶质具有酸、碱特性来进行聚焦和分离，它具 有高分辨率，能分离和纯化许多具备酸碱特征的有机化合物， 并可用于制备克量级的分离等特点。 该技术的具体操作是，在样品溶液中加入微量的酸， 然后用碱性流动相以一定流速穿过固定相，由于酸碱反应， 最后两相达到平衡，以有机酸在固定相和流动相的浓度比来 标度分配系数。溶质的分配系数与标度值的差异决定了出峰 时间，从而实现分离。
2002年，Ito在第二届国际逆流色谱会议上提出 了一种将螺线形圆盘装置代替多层缠绕的螺旋管柱 的高速逆流色谱柱设计思想。 这种柱设计的优点是：将其装配到目前通用的 高速逆流色谱分离仪上，无论对含有机相体系还是 双水相聚合物体系都能达到良好的保留，尤其对双 水相聚合物体系的保留有显著的提高，且实现工业 化放大的可能性非常大。
*
离心沉淀色谱
离心沉淀色谱是在管柱的中间加一层半透膜来 实现蛋白质等的连续沉淀分离。 它为生物大分子以及细胞等生物物质的分离开 辟了一条新的渠道。可用于利用密度梯度进行细胞 的分离，利用盐或pH梯度进行生物大分子的分离， 甚至利用有机溶剂进行小分子物质及其聚合物的沉 淀分离。
*
螺线形圆盘式高速逆流色谱
高速逆流色谱研究进展
主要内容
1.逆流色谱简介
2.高速逆流色谱分离原理及特点 3.高速逆流色谱分离条件的优化 4.高速逆流色谱的应用
逆流色谱简介
1.1
概念
逆流色谱是基于样品在两种互不混溶的溶剂之 间的分配作用，溶质中各组分在通过两溶剂相的过 程中因分配系数不同而得以分离。 它是一种不用固态支撑体的液-液分配色谱技 术，因此避免了样品的不可逆吸附、失活和变性等 问题。
逆流色谱简介
1.2
逆流色谱的发展 20世纪50年代 —逆流分溶法 20世纪70年代 —液滴逆流色谱 20世纪80年代 —高速逆流色谱 20世纪90年代 —PH-区带精制逆流色谱 1998年 ——离心沉淀色谱 2002年 ——螺线形圆盘式高速逆流色谱
逆流分溶法
它利用不同物质在所选择的两相溶剂中的分配 系数不同通过多次逆流分溶对物质进行分离。采用数 百个分离管进行操作，每一次操作后, 上层液体被转 移至盛有新的下层溶剂的分离管中，而往原分离管中 加入新的上层溶剂， 看起来好似两相的液体以相反 的方向流动，故称为逆流分溶法。 逆流分溶法存在些缺点，如使用玻璃仪器易破碎， 分离时间长， 需要连续稀释样品。