实验九血清肌酐的测定(碱性苦味酸法)
肌酐的测定实验报告
一、实验目的1. 了解肌酐测定的原理和方法。
2. 掌握肌酐测定的操作步骤。
3. 学会使用肌酐测定试剂盒，并对其结果进行分析。
二、实验原理肌酐是人体肌肉代谢的终产物，主要由外源性和内源性两种组成。
外源性肌酐主要来源于食物中的肉类，内源性肌酐则是由人体肌肉代谢产生。
在正常情况下，肌酐主要通过肾脏滤过排出体外。
因此，通过测定血液或尿液中肌酐的浓度，可以评估肾脏的滤过功能。
本实验采用肌酐测定试剂盒，通过碱性苦味酸终点比色法测定血清肌酐浓度。
三、实验材料1. 肌酐测定试剂盒2. 血清样品3. 移液器4. 一次性吸管5. 比色皿6. 移液器吸头7. 混匀器8. 水浴锅9. 移液器吸头10. 洗耳球11. 计时器四、实验步骤1. 标准曲线的制备（1）取6个比色皿，分别加入不同浓度的肌酐标准溶液。
（2）在每个比色皿中加入适量的肌酐测定试剂A和B，混匀。
（3）将比色皿放入水浴锅中，加热至50℃恒温反应10分钟。
（4）取出比色皿，用洗耳球吹洗内壁，使其充分混合。
（5）用移液器取标准溶液和样品，分别加入比色皿中，混匀。
（6）用移液器将样品转移到比色皿中，立即放入比色仪中测定吸光度。
2. 样品测定（1）取3个比色皿，分别加入血清样品、试剂A和B，混匀。
（2）将比色皿放入水浴锅中，加热至50℃恒温反应10分钟。
（3）取出比色皿，用洗耳球吹洗内壁，使其充分混合。
（4）用移液器取样品，分别加入比色皿中，混匀。
（5）用移液器将样品转移到比色皿中，立即放入比色仪中测定吸光度。
3. 结果计算根据标准曲线，将样品的吸光度对应到肌酐浓度，即可得到样品的肌酐浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制备根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程：Y = 0.0162X - 0.0178（R² = 0.9989）2. 样品测定通过测定样品的吸光度，根据标准曲线计算得出样品的肌酐浓度为XX mg/dL。
六、实验结论本实验通过碱性苦味酸终点比色法测定血清肌酐浓度，操作简便，结果准确。
碱性苦味酸法测定血清肌酐试剂的配制
碱性苦味酸法测定血清肌酐试剂的配制
张洪波
【期刊名称】《武汉市职工医学院学报》
【年(卷),期】2001(029)004
【摘要】目的：配制直接测定血清肌酐的试剂碱性苦味酸，使得方法简单，结果可靠。
方法：改变氢氧化钠与苦味酸的浓度及配比，采用固定时间法测定。
结果：一法测定两种批号RANDOX质控血清与其靶值比较P＞0．05，精密度批内分别是CV＝3．4％和2．7％，批间分别是CV＝3．96％和3．34％。
本法与除蛋白滤液法，上海试剂（速率法）测定100份血清结果分别是
113±71μmol/L,110±70μmol/L,115±64μmol/L,P>0.05。
结论：本法准确度，精密度，回收率，线性均良好。
【总页数】2页(P12-13)
【作者】张洪波
【作者单位】江汉大学附属医院检验科，湖北武汉430015
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
【相关文献】
1.同位素稀释质谱法、酶法和碱性苦味酸法测定血清肌酐方法比较 [J], 宋云霄;欧美贤;李水军;张海晨;余琛
2.将单试剂苦味酸法改成双试剂法测定血清肌酐 [J], 黎哲斌
3.双试剂苦味酸法测定血清肌酐的改进 [J], 朱建洲;王景顺;田浩
4.确定碱性苦味酸法测定血清肌酐的时间 [J], 王宏坤;韩丽红;智胜利
5.速率法测定肌酐中碱性苦味酸试剂的改进 [J], 于瑞雪;刘凌云
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血清肌酐苦味酸法测定
血清肌酐（Creatine）苦味酸法测定1.实验原理不去除蛋白的Jaffe碱性苦味酸连续监测比色法。
肌酐与苦味酸在碱性条件下形成橙红色复合物，在固定的时间内吸光度增加速率与样品中肌酐浓度呈正比。
肌酐+ 苦味酸肌酐苦味酸复合物2. 标本采集2.1 病人准备：早晨空腹采血（空腹12小时左右），静脉采血。
2.2 类型：血清，肝素血浆，尿液。
3. 标本存放：血清、血浆的稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存至少可稳定3个月。
尿液的稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定6天；-20℃保存可稳定6个月对尿液用蒸馏水作1:49稀释后检测，结果乘50后报告。
4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收的标准：细菌污染的标本不能作测定。
6. 实验材料6.1 上海申能肌酐检测试剂盒（142 1717170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）。
6.1.1 试剂组成：试剂1（R1）：氢氧化钠0.16mol/L试剂2（R2）：苦味酸 4.0mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂1中含氢氧化钠。
请按以下条例处理：R36/38: 刺激眼睛和皮肤。
S26:如与眼睛接触应立即用大量水冲洗并请医生诊视。
S37/39:戴上手套并采取合适的眼/脸的防护。
S45:如发生事故或感觉不适立即请医生诊视。
试剂2中含苦味酸。
吸入、接触皮肤、吞咽将会中毒。
戴上手套并采取合适的眼/脸的防护。
如与皮肤接触应立即用聚乙二醇400（DAB8）或大量水冲洗。
如情况严重，立即请医生诊视。
使用实验室试剂应采取必要的预防。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
肌氨酸氧化酶法与碱性苦昧酸法测定血清肌酐的实验比对
肌氨酸氧化酶法与碱性苦昧酸法测定血清肌酐的实验比对[摘要] 目的评价肌氨酸氧化酶法（简称酶法）、碱性苦味酸法（简称苦味酸法）测定血清肌酐的可靠性。
方法分别采用两种方法测定血肌酐值进行精密度试验，并按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP9-A文件进行评估，将测定结果进行相关回归分析，计算两种方法间的偏倚。
结果酶法3个水平的定值质控血清CV日间%分别为3.77%、2.53%、1.23%；苦味酸法3个水平的定值质控血清CV日间%分别为5.23%、4.05%、2.46%。
两种方法测定的血清肌酐浓度，经组内、组间离群值检验后得线性回归方程：Y（苦味酸）=0.9772X（酶法）+5.1911，r2 = 0.9910。
两种方法间各有明显恒定偏倚。
结论苦味酸法特异性不高，易产生交叉污染，但成本低廉，操作简便；肌氨酸氧化酶法特异性高、线性范围宽，抗干扰能力强，是比较理想的方法。
【关键词】肌氨酸氧化酶法；碱性苦味酸法；肌酐1 材料与方法1.1材料与仪器试剂和校准品由浙江伊利康生物技术有限公司提供，定值质控血清由美国贝克曼一库尔特试剂公司提供。
血清样本均来自当日临床病人新鲜血清。
仪器：凯美雅S3600全自动生化分析仪，参数均按厂家要求设置。
1.2方法1.2.1精密度测定按NCCLS精密度评价方法[1]，取低、中、高值3份定值质控血清，白天跟随样本作双份检测，连续20天，对结果作统计学分析。
1.2.2线性回归方程采用酶法和碱性苦味酸法分别测定50例患者血清肌酐含量，两种方法测定肌酐浓度经组内、组间离群值检验后得线性回归方程。
1.2.3结果偏倚估计根据酶法测定值分组：I组（0～94μmol/L）24例，Ⅱ组（95～800μmol/L）17例，Ⅲ组（801～1200μmol/L）9例。
2 结果2.1精密度结果见表1。
表1 日间精密度测定结果（单位：μmol/L ，n=20）2.2两种方法相关性方程为：Y（苦味酸）=0.9772X（酶法）+5.1911，r2 = 0.9910。
肌酐的测定
丙酮酸 + ATP
乳酸脱氢酶
丙酮酸 + NADH +H+
乳酸 + NAD+
340nm比色
• 2.肌酐亚氨水解酶法：
肌酐酶水解
肌酐
N-甲基内酰 + NH3
溴酚蓝电极
或离子电极
测NH3
酶法优点：特异性高、准确性好
缺点：酶试剂昂贵、来源困难、不易保存
（三）高效液相色谱法：
准确性、特异性好，一般作为参考方法
• 3.速率法（动力学法）： 根据肌酐和碱性苦味酸形成复合物
的速度与非肌酐干扰物的不同，且肌酐 的反应速度与浓度成正比的原理。
干扰物质：
a.快反应物质 最初30s内反应 b.慢反应物质 120s以后反应 肌酐反应：31~60s 该法有助于解决反应的特异性，可消除 某些非化学反应的干扰且简单、快速
• 4.双pH法（二次读数法）：
肌酐的测定
• 血清非蛋白含氮化合物的一种，肌肉组 织中肌酸或磷酸肌酸代谢的最终产物。
• 肌酐的排出量相当恒定，不受食物蛋白 质含量及尿量的影响而与肌肉发达程度、 性别及年龄有关。
• 肌酐的测定是临床诊断的重要指标。
• 分类： （一）化学法：碱性苦味酸法
1.漂白土碱性苦味酸法 2.阳离子交换树脂法 3.速率法 4.双PH法（二次读数法） （二）酶法： 1.肌酐酰胺水解酶法 2.肌酐亚氨水解酶法 （三）高效液相色谱法
• 3. 0.75 mol/L 氢氧化钠溶液 • 提供碱性环境
• [操作步骤] 见书
• [注意事项] • 1.制备去蛋白血滤液时，钨酸溶液应缓慢
的滴入血清中，边加边摇，将试剂与血 清充分混匀以利蛋白质沉淀。
• 2.呈色后应在30分钟内比色为宜。过久会 使测定管吸光度增加，可能与标本中存 在的非特异性物质有关。
肌氨酸氧化酶法、碱性苦味酸法、干化学法测定血清肌酐结果的分析
肌氨酸氧化酶法、碱性苦味酸法、干化学法测定血清肌酐结果
的分析
张守柱
【期刊名称】《现代中西医结合杂志》
【年(卷),期】2009(018)010
【摘要】目的分析碱性苦味酸法、肌氨酸氧化酶法、干化学法测定血清肌酐的一致性,对3种方法进行平行对比和偏倚评估.方法按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件进行评估,将测定结果进行相关回归分析,计算3种方法间的偏倚.结果 3种方法测定的血清肌酐浓度,经组内、组间离群值检验后得线性回归方程:Y苦味酸=0.982X酶法+16.52,Y干化学＝1.016X酶法+9.52.3种方法间各有明显恒定偏倚.结论碱性苦味酸法特异性不高,易产生交叉污染,但成本低廉,操作简便;干式化学法操作简便、快速、准确度好、抗干扰能力强;肌氨酸氧化酶法特异性高、线性范围宽,抗干扰能力强,是比较理想的方法.
【总页数】2页(P1159-1160)
【作者】张守柱
【作者单位】安徽省合肥市第一人民医院,安徽,合肥,230061
【正文语种】中文
【中图分类】R0446.112
【相关文献】
1.肌氨酸氧化酶法与碱性苦昧酸法测定血清肌酐的实验比对 [J], 冯乔健
2.肌氨酸氧化酶法和碱性苦味酸法测定血清肌酐的比较 [J], 席云;肖刚;朱远航;刘延科
3.维生素C对苦味酸法及肌氨酸氧化酶法测定肌酐结果的干扰分析 [J], 史玲玲;安淑霞;董林
4.肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定血清肌酐的比较 [J], 肖刚;董杰明;朱远航
5.肌氨酸氧化酶法和碱性苦味酸法测定血清肌酐的比较 [J], 席云;肖刚;朱远航;刘延科
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肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定血清肌酐的比较
肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定血清肌酐的比较【关键词】肌酐；肌氨酸氧化酶法；苦味酸法；方式比较［摘要］目的：评测肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定血清样本肌酐(Cre)的偏倚。
方式：依据美国国家临床实验室标准协会EP9A 文件，天天取临床样本8份，别离用两种方式测定血清样本Cre含量，共测定5 d，记录结果，去除离群点，计算线性回归方程和相关系数，进行偏倚估量。
结果:在测定患者新鲜非黄疸血清样本Cre时，肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定结果的预期相对偏倚在Cre浓度<100 μmol/L时，两种方式的预期偏倚≤-1.8%，酶法的测定结果低于苦味酸法; 当Cre浓度>200 μmol/L时，两种方式的预期偏倚≥11.9%，酶法的测定结果高于苦味酸法，当Cre浓度>500 μmol/L时，两种方式的预期偏倚≥20.1%。
结论：随血清Cre浓度上升，酶法和苦味酸法的测定结果的预期偏倚增加，临床实验室在换用不同仪器或试剂时必需对肌酐测定的不同方式成立不同的参考值范围。
［关键词］肌酐；肌氨酸氧化酶法；苦味酸法；方式比较Measurement of Serum Creatinine by Sarcosine Oxidase and Picric Acid MethodsComparison between Two MethodsAbstract: Objective To determine the bias between two methods for measuring the serum creatinine (CRE). Methods Following the protocol described by the NCCL approved guideline (method comparison and bias estimation using patient samples)，40 patient samples were analyzed in 5 operating days， each sample was analyzed in duplicate by both enzymatic assay and Jaffe kinetic assay. The duplicates were assessed for each method within the same run. The coefficient of correlation was calculated and the bias between the two methods was calculated accordingly. Results The bias between the enzymatic assay and Jaffe kinetic assay were -1.8% at 100 μmol/L， 11.9% at 200 μmol/L and 20.1% at 500 μmol/L for creatinine. Conclusion The bias between the two methods increases as the concentration of the serum creatinine increases. New reference range for creatinine should be established when new instrument or new reagent is applied.Key words：Creatinine；Sarcosine oxidase；Picric acid methods； Method comparison血中的肌酐(Cre)由外源性和内源性两类组成，要紧由肾小球滤过，肾小管大体不重吸收。
实验九血清肌酐的测定(碱性苦味酸法)
教研室 生物化学 课程 内容 生物化学检验 专业 07 检验 指导教师 徐燕 学时 3 实验九 含氮化合物测定 ——两点法测定肌酐
教材 生化检验实验 教学 目的 和要 求 教学 内容 教学 重点 难点 教学 媒体 复习 旧课
掌握两点法测定肌酐的原理及操作方法。 两点法测定肌酐 重点：掌握两点法测定肌酐的原理及操作方法。 难点：把握反应时间。 学生动手操作为主，课堂演示为辅 肌酐测定方法 （一）原理 肌酐与碱性苦味酸试剂反应生成黄红色络合物，在 500nm 处选择线性较好 的两个吸光度值，与通过同样处理的标准液比较，即可计算出血中肌酐含量。 肌酐 + 苦味酸 （二）操作步骤 加入物（ml） 碱性 橙红色复合物 标准管 1.5 0.1 0.1 样品管 1.5
教 学 要 求
试剂空白 1.5
教 学 过 程
讲 授 新 课
工作试剂 标准液 样品
混匀，37 水浴 9min，用试剂空白调零，分光光度计 520nm 处，读取标准管 和样品管的吸光度。 （三）结果与分析
CT控制很重要，10℃以下会抑制 Jaffe 反应，温度升高可使碱 性苦味酸溶液显色加深。 课堂 两点法测定肌酐为什么要严格把握反应时间？ 提问 课堂 两点法测定肌酐的原理及操作方法。 小节 布置 简述两点法测定肌酐的注意事项。 作业 参考 钱士匀主编．临床生物化学和生物化学检验实验指导．第 2 版，北京：人民卫生 书目 出版社，2003
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教 学 要 求
试剂空白 1.5
教 学 过 程
讲 授 新 课
工作试剂 标准液 样品
混匀，37 水浴 9min，用试剂空白调零，分光光度计 520nm 处，读取标准Βιβλιοθήκη 和样品管的吸光度。 （三）结果与分析
CT
AT CS AS
（四）注意事项 测定中，温度控制很重要，10℃以下会抑制 Jaffe 反应，温度升高可使碱 性苦味酸溶液显色加深。 课堂 两点法测定肌酐为什么要严格把握反应时间？ 提问 课堂 两点法测定肌酐的原理及操作方法。 小节 布置 简述两点法测定肌酐的注意事项。 作业 参考 钱士匀主编．临床生物化学和生物化学检验实验指导．第 2 版，北京：人民卫生 书目 出版社，2003
山东医学高等专科学校《生物化学检验》实验教案
教研室 生物化学 课程 内容 生物化学检验 专业 07 检验 指导教师 徐燕 学时 3 实验九 含氮化合物测定 ——两点法测定肌酐
教材 生化检验实验 教学 目的 和要 求 教学 内容 教学 重点 难点 教学 媒体 复习 旧课
掌握两点法测定肌酐的原理及操作方法。 两点法测定肌酐 重点：掌握两点法测定肌酐的原理及操作方法。 难点：把握反应时间。 学生动手操作为主，课堂演示为辅 肌酐测定方法 （一）原理 肌酐与碱性苦味酸试剂反应生成黄红色络合物，在 500nm 处选择线性较好 的两个吸光度值，与通过同样处理的标准液比较，即可计算出血中肌酐含量。 肌酐 + 苦味酸 （二）操作步骤 加入物（ml） 碱性 橙红色复合物 标准管 1.5 0.1 0.1 样品管 1.5