血铅临床检测指南

目录

一、简介

二、适用范围

三、测铅的临床意义

四、铅含量测定的几种途径

五、儿童/成人的安全血铅含量

六、血铅分析方法

1．阳极溶出伏安法（ASV）

2．石墨炉原子吸收光谱法（GFAAS）

3．火焰原子吸收光谱法（AAS）

4．红细胞原卟啉法（EP）

七、采血程序

1．指血采血步骤

2．静脉血采血步骤

八、GFAAS法操作

1．仪器要求

2．石墨炉工作参数

3．其他材料

4．试剂

5．试剂、标准品、样品的准备

6．石墨炉操作和维护

九、ASV法操作

1．仪器要求

2．样品准备

3．仪器校准

4．仪器操作和维护

5．线性范围

十、血铅标准品和质控

1．标准品

2．质控

一、简介

本指南的主要目的是为了给临床实验室提供血铅检测的简明指导，对于日常血铅检测常用的、能达到质控要求的两种分析方法，即石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)和阳极溶出伏安法（ASV），本文分别介绍了其不同的采样和检测过程，同时还包括质控(QC)指导内容。

二、适用范围

所有需要检测血铅的实验室。

三、测铅的临床意义

铅中毒是一种由于铅的累计吸收而导致的慢性病，该过程有时会伴随一些明显的症状，当表现为易怒、没有食欲、性格改变、腹绞痛等症状时，其血铅含量一般在50μg/dL左右，但是这些症状很容易被认为是其他原因引发的。如果在该阶段没有被意识到，血铅很容易升高到100μg/dL以上，这时儿童表现的症状通常为颅内压升高，引起放射性呕吐、知觉改变、痉挛等；成人在血铅浓度为50-60μg/dL时如果继续铅中毒，会导致肾衰、反应迟钝、周围神经系统病症、痛风等。

铅中毒不易治愈，其对人体的危害即使在血铅含量降低后还会持续很长的时间。铅中毒至少损害到三种人体器官：1、周围及中枢神经系统；2、亚铁血红细胞的生物合成途径；3、肾脏功能。铅中毒对于儿童和成人的伤害不尽相同，因为儿童的神经系统没有发育完全，而且成人吸收饮食中的铅为10%，儿童可达40-50%，因此对于儿童的神经系统的损害会高于成人，对于孕妇的伤害主要是造成了胎儿的先天铅中毒。

四、铅含量测定的几种途径：

血铅作为铅中毒的指标：静脉血的铅含量可以有效的表征人体铅中毒情况，末梢血可用于铅中毒筛查；

尿铅作为铅中毒的辅助检测：可以作为降铅效果的指标；

X射线荧光检测骨铅：反映铅在人体内的沉积；

发铅、汗铅及其他组织液：发铅虽然有取样简单、不用侵入人体等优势，但是样品暴露于外界、环境污染影响大，同时没有规范的处理方式，而且没有明确的定义含铅正常范围值，不象血铅那样有标准品，因此很少用来作铅测定。汗铅、指甲铅等也不是科学的铅含量测定途径。

五、儿童/成人的安全血铅含量

大量研究结果表明，反映儿童近期(1－3个月内)铅接触的最佳指标是全血铅含量(以下简称血铅)。血铅一直是铅中毒研究的最重要的生物学监测指标，儿童血铅与铅接触之间的相关系数较高，特别是在环境铅污染较严重的情况下，血铅能较好地反映铅接触水平。在稳定的、低水平铅接触状态下，血铅也能较好地反映儿童体内铅负荷状况。

其实并没有真正意义的安全血铅含量，只是从统计学的角度阐述这样的一个安全概念。1991年美国疾

病控制中心提出安全的血铅含量应≤10μg/dL。1994年，在第一届全球儿童铅中毒预防大会上来自世界30多个国家和地区的官员和学者进一步认定了这一标准。

六、血铅的分析方法

血液中的铅大部分都是处于非游离型状态，与血液中的血细胞和蛋白形成多种多样的结合物，要测定血液中铅的必须先要将结合型的铅离子释放出来，由于血液中铅的含量非常低（一般在10ppb至1ppm之间），因此要求铅的释放效率要达到100%，而且必须要排除外源性铅离子的干扰。所以对测量设备及测量方法的灵敏度、精度要求非常高。

目前公认能够精确测定血铅浓度的仪器和方法中最常用的是阳极溶出伏安法(ASV)和石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)。

等离子体质谱法（ICP－MS）等虽然可精确测定血铅含量，但因成本太高，不适合做日常分析，只有一些专业实验室才拥有这种设备。

1．阳极溶出伏安法（ASV）

作为成功测定血铅浓度的检测方法，在国外应用已有30年多的历史。用ASV分析血铅首先由Matson 等人在1971年提出，其后显示出它在微量测定中特有的优势。血液中结合状态的铅离子，经试剂处理释放成游离的铅离子，当在电极中施加一定的负电压时，所有的铅离子将被还原成铅且附着在电极上，然后再在电极上施加更正的电压，电极上的铅再电离成铅离子，释放一定的电子并产生电流信号。此电流信号与溶液中铅浓度成比例关系，从而测定出铅离子的浓度。ASV有两种血样制备过程，一种是酸消化法；一种是置换法，即用含(CH3COO)2Ca、CrCl3、Hg2+置换血蛋白中的2价铅离子，其主要优势在于分析速度的提高，有人声称全部的置换过程只需要3-5分钟，而用HClO4消化100μL血样需要大约20分钟。两种方法均得到比较可靠的结果。已有的临床比较结果显示ASV和GFAAS的一致性很好。

2．石墨炉原子吸收光谱法（GFAAS）

是目前国际上公认的检测血铅的标准方法之一。火焰原子吸收（AAS）方法直接测血铅，其灵敏度欠佳，1970年石墨炉的介入使灵敏度得到显著的提高（约50倍），最终实现无需样品富集过程，只需μL级样品量。19世纪80年代因为背景的干扰，倾向于采用同介质（血）标准曲线法。19世纪90年代，现代石墨炉的所有重要理论才得到理解和应用，并且陆续总结出许多不同的应用方法。

1993年塞曼石墨炉测量血铅技术的发展才告别了同介质（血）标准曲线法的应用。此方法规定必须用塞曼背景修正系统，并保证用于分析铅的波长稳定在283.3nm。而且此方法对样品处理和工作环境的要求很苛刻，在操作时要注意以下几点：

（1）在采血和对血样进行处理过程中，由于此过程血样是完全暴露在环境中，因此一定注意环境中的铅污染血样（如空气中微粒带来的铅污染、使用了被污染的器具）。

（2）在采血后对血样进行硝化，硝化的作用是去除血液里的纤维素，使铅以游离态的形式存在于溶液中。处理过程中有时使用国产硝酸本身的铅含量就很高，甚至会高于血样的铅含量，因此有必要在使用硝酸对血样进行硝化处理前先检测硝酸的铅含量并采取措施降低硝酸的铅的含量，避免血样的二次污染，假阳性的出现。

（3）在使用塞曼效应石墨炉原子吸收光谱来测定血铅时必须要有专业技术人员来完成此操作过程。