大鼠白蛋白放射免疫分析试剂盒的研制
大鼠S100蛋白(S100B)酶联免疫分析试剂盒 说明书
大鼠S100B蛋白（S100B）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：312pg/ml-20000pg/ml最低检测限：78pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠S100B，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中S100B 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗S100B抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗S100B抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的S100B呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
白蛋白酶联免疫分析试剂盒的研制
白蛋白酶联免疫分析试剂盒的研制官国英;刘忠瑞;李丽波;侯惠仁;王晶晶;韩世泉【摘要】采用竞争性ELISA法检测人尿中自蛋白(Albumin,Alb)的含量.将Alb抗体包被96孔微孔板,Alb与辣根过氧化物酶结合形成酶标记物,建立了白蛋白酶联免疫分析(Alb-ELISA)方法.结果显示,本方法分析灵敏度为0.28 mg/L;批内、批间变异系数分别为2.63%～5.28%和2.40%～4.26%;回收率为95.0%～106.4%;高浓度Alb样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为r=0.997 4.本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用.【期刊名称】《同位素》【年(卷),期】2010(023)003【总页数】4页(P182-185)【关键词】白蛋白(Albumin;Alb);酶联免疫分析(ELISA);试剂盒【作者】官国英;刘忠瑞;李丽波;侯惠仁;王晶晶;韩世泉【作者单位】中国原子能科学研究院,同位素研究所,北京,102413;中国原子能科学研究院,同位素研究所,北京,102413;中国原子能科学研究院,同位素研究所,北京,102413;中国原子能科学研究院,同位素研究所,北京,102413;中国原子能科学研究院,同位素研究所,北京,102413;中国原子能科学研究院,同位素研究所,北京,102413【正文语种】中文【中图分类】R446.61白蛋白(Albumin,Alb)是血浆的主要成分,由肝脏产生,相对分子质量为66 300。
当肾脏病变时,肾小球滤过膜通透性发生改变,孔径变大,Alb漏出,尿液中Alb升高。
尿中白蛋白排出量的多少,可反映肾小球损伤的程度,是诊断肾小球肾病的灵敏指标。
尿白蛋白测定用于肾脏病的早期诊断,也是目前检查糖尿病以及高血压患者肾脏早期损伤的最灵敏的方法之一[1-2]。
尿白蛋白与β2-微球联合测定,可用于鉴别诊断肾脏损伤的部位。
尿白蛋白测定在肾脏移植及肾小球药物损伤的监测等方面亦有一定的价值[3]。
大鼠白蛋白酶联免疫分析试剂盒的研制
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原子高科 白蛋白放射免疫分析药盒 说明书
核准日期核准日期：：修改日期修改日期：：白蛋白蛋白放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析药盒药盒说明书【药品名称】通用名称：白蛋白放射免疫分析药盒 英文名称：Albumin Radioimmunoassay Kit 汉语拼音：Baidanbai Fangshemianyifenxi Yaohe 简 称：白蛋白放免药盒【成份】[药盒组成、试剂配制及贮存条件]1. 白蛋白标准品 6 瓶，冻干品，每瓶加蒸馏水1.0ml 溶解，其对应浓度为1、2、5、10、20、50μg/ml 。
2.125I-白蛋白 1瓶，溶液（红色）50管：每瓶放射性小于2.5µCi 。
100管：每瓶放射性小于5µCi 。
3. 白蛋白抗体 1瓶，溶液（兰色）。
4. 温育液 1瓶5. 分离试剂 1瓶 悬浮液，含驴抗羊血清和PEG ，使用前要充分摇匀。
6. 质控品 使用方法及参考值见附页。
以上试剂均在2～8℃下贮存。
[操作步骤]待试剂充分溶解，平衡至室温后，按下表顺序加样及操作。
白蛋白白蛋白放免分析放免分析放免分析操作程序表操作程序表单位：μl[结果计算]NSB 管（CPM ）－ 本底（CPM ）非特异结合率（NSB/T % ）= ———————————————×100%T 管（CPM ）－ 本底（CPM ）零标准管（CPM ）－ NSB 管（CPM ）零管结合率（B 0 /T %） = ————————————————×100%T 管(CPM )－ 本底（CPM ）标准或样品管（CPM ）－ NSB 管（CPM ）B / B 0% = ———————————————————×100%零标准管（CPM ）－ NSB 管（CPM ）以标准品的B/B 0%为纵座标，浓度为横座标，在半对数纸上绘制标准曲线，尿标本白蛋白的含量可根据B/B 0%值从标准曲线上查得。
若尿液经过稀释，则其含量应乘以稀释倍数。
大鼠白介素1β (IL-1β)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。
2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-1β抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-1β抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-1β呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
大鼠S100B蛋白S-100B试剂盒使用方法
大鼠S100B蛋白(S-100B)试剂盒使用方法检测范围：96T4 ng/L -120 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中S100B蛋白(S-100B)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠S100B蛋白(S-100B)水平。
用纯化的大鼠S100B蛋白(S-100B)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入S100B 蛋白(S-100B)，再与HRP标记的S100B蛋白(S-100B)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的S100B蛋白(S-100B)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠S100B蛋白(S-100B)浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
大鼠蛋白Z(PZ)ELISA试剂盒技术指导
大鼠蛋白Z(PZ）ELISA试剂盒技术指导大鼠蛋白Z(PZ）ELISA试剂盒技术指导大鼠蛋白Z(PZ）ELISA试剂盒实验原理大鼠蛋白Z(PZ）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大鼠蛋白Z(PZ）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠蛋白Z(PZ）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂盒器材1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水1、标准品浓度依次为：详见说明书；2、经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。
放射免疫诊断试剂盒
20-1000 (pg/ml)
非平衡法 24h+24h
50 100
490 700
RP-004
降钙素基因相关肽 (CGRP)
20-1200 (pg/ml)
非平衡法 48h+24h
50 100
490 700
RP-005 RJ-005 (原装进口) 心钠素 (ANP)
50-1600 (pg/ml) 0.0625-2 (ng/ml)
肾性高血压， 原发性 醛固酮增多症
25 尾加压素 UII (UII) 皮质醇结合球蛋白 (CBG) 皮质类固醇结合球蛋 白(VP)
37℃/45m
200
48/RT 2h/RT +35m
100
7200 糖尿病及 Cushing 综 合症，Add-isuan 病 及 Sheehan 综合症 糖尿病及 Cushing 综 合症，Add-isuan 病 及 Sheehan 综合症
1000 1500
RP-050
P 物质 (S.P)
5-1215 (pg/ml)
非平衡法 24h+24h
50 100
1000 1500
RP-051
血管活性肠肽 (VIP)
40-5120 (pg/ml)
非平衡法 24h+24h
50 100
1000 1500
RP-052
生长抑素 (SS)
40-5120 (pg/ml)
肌钙蛋白 (C-TnT) 脂肪酸结合蛋白 (FABP) 血管紧张素Ⅰ （肾素活性） (AⅠ/PRA) 肾素活性 （Renin） 血管紧张素Ⅱ (AⅡ)
RK-016 RJ-016 (原装进口) RK-017
高血压分型， 治疗用 药指导
白蛋白酶联免疫分析试剂盒的研制
脏病 变 时 ， 肾小 球 滤过 膜 通透 性发 生 改 变 ， 径 孔 变 大 ， ｂ漏 出 ， 液 中 Ａｌ Ａｌ 尿 ｂ升高 。尿 中 自蛋 白
血压 患 者 肾 脏 早 期 损 伤 的 最 灵 敏 的 方 法 之
一
ｒ ］ 】
。
尿 白蛋 白与 ｌ一 球联合 测 定 ， ３微 。 可用 于鉴
别 诊断 肾脏 损 伤 的部 位 。尿 白蛋 白测 定 在 肾脏
移 植及 肾小球 药 物损 伤 的监测 等 方 面 亦有 一 定
的价 值 。 ］
排 出量 的多少 ， 可反 映 肾小 球损 伤 的 程度 ， 诊 是 断 肾小球 肾病 的灵 敏指 标 。尿 白蛋 白测 定用 于
第 ２ ３卷 第 ３ 期
２１ ０ ０年 ８月
同 位 素
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白 蛋 白酶 联 免 疫 分 析 试 剂 盒 的 研 制
官 国英 ， 忠瑞 ， 丽 波 ， 惠仁 ， 晶 晶 ， 刘 李 侯 王 韩世 泉
ｃｅ ｔ ｃ ｒ ｅ ａ ｉ ｓ ０ ９９ ４ Ｔｈｉ ｅ ｈｏ ｏ ａ ｕ ｉ ｂ ｗａ ａ ｉ ｓ ｎ ｉｉ ｅ ａ ｏｎ ｉ ｎ ｏ ｒ ｌ ｔｏｎ ｗａ ． ７ ． ｓｍ ｔ ｄ ｆ ｒ ｍｅ ｓ ｒｎｇ Ａｌ ｓ ｒ ｐ ｄ。 ｅ ｓ ｔｖ ｎｄ ｃ — ｖ ｎ ｅ ｔ Ｉ Ｓ ｓ ｔ ｂｌ ｏ ｌｎｉａ ｔ ｃ ｉ ｎ ａ ｄ ｒ ｓ ａ ｃ ｐｐ ｉａ ｉ ． ｅ ｉ ｎ ． ｔｉ ｕｉａ ｅ ｆ ｒ ｃ ｉ ｃ １ｄｅ ｅ ｔｏ ｎ ｅ ｅ ｒ ｈ ａ ｌｃ ｔｏｎ
大鼠AKT蛋白(AKT)说明书
大鼠AKT蛋白（AKT）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T5ng/L - 300ng/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中AKT蛋白（AKT）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠AKT蛋白（AKT）水平。
用纯化的大鼠AKT蛋白（AKT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入AKT蛋白（AKT），再与HRP标记的AKT蛋白（AKT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的AKT蛋白（AKT）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠AKT蛋白（AKT）浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
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图 ?! 抗体稀释度曲线
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( 常数为"9 ! # 选用* 种与大鼠白蛋白 ’i% " > J , 1
类似的物质 $ 人血清蛋白 & 小鼠血清蛋白 & 牛血清 蛋白和大鼠 3 做 交 叉 反 应" 抗体与人血清蛋 A% F 白& 小鼠血清蛋白 & 牛 血 清 蛋 白 和 大 鼠3 A 交叉 F 反应 " 反应率很小 " 分别为 "& "9 " )Y & " 和"9 <Y ’
标准曲线的影响
R%# + R%# + +& ,F +% ,F #9 #A U <9 )A U )+ * + N N R% + +<9 ,F " &A U ++ N
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同 ! 位 ! 素 !!!!!!!!!!!!!!!!! 第 % ( 卷!
免疫分析 !! 一 般 情 况 下 标 记 物 比 活 度 高 时! 的灵敏度也会相应提高 " 在本研究中 ! 由于大鼠 尿样中白蛋白的含量较高 ! 因此要求免疫分析方 法的测量范 围 也 较 宽 " 一 般 情 况 下 的 标 记 物 比 需加入未标记的大鼠 活度不能满足分析的需要 ! 白蛋白降低标记物的比活度 " D@ E! 反应动力学 !! 反应时 间 对 分 析 的 影 响 示 于 图 &" 图 & 中 系列标 : ‘ U 为非特 异 结 合 " 由 图 & 可 以 看 出 ! 准品与大鼠白 蛋 白 反 应 ! 在& "J E /均可达到平 衡 " 本工作选反应时间为 * #J E /" D@ P! 方法学鉴定 R D@ P@ ?! 标准曲 线 ! 经 一 系 列 条 件 优 化 实 验 后 !
定" 结 果 示 于 图 %’ 由 图 % 可 知 " 抗体稀释 结合率 1 ! % # "" " "倍 后 " 4$ 4 为总的计数率
R% $ % % 为# 本工作确定滴度为 %j J E / "Y ’ 因此 " % # "" " "’
D@ A! 抗体的特异性鉴定 )* 采用 ‘ H 0 5 H I 0 . C’ 作图法计算得抗 体的 亲 和
大鼠白蛋白放射免疫分析试剂盒的研制 ! 第 * 期 !!!!!!!!! 袁志刚等 (
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放射性浓度约为% ! 美国杜邦公司产品 # %A U >" N 温育 液 $ 含 "9 !Y U ‘ @ 和 "9 %Y : 0 : " # & 的 "9 ! 磷 酸 $ % 缓 冲 液 % & 佐 剂 和 分 离 J , 1 >6 ^<9 * V U 试剂 $ & 均 "9 (Y: 0 T 1 *YV ? A& *Y 驴 抗 羊 二 抗 % 为本实验室配制 # T A $ % ! 型 & 计数器为美国德普 公司产品 # 紫外分光光度计为 8 0 . E 0 / 公司产品 ’ ?@ A! 实验动物 普通 级 健 康 雄 性 绵 羊 ( 羊 龄 *!’ 月 " ! 只" 北坊村农场提供 ’
第% (卷 第*期 ! " " ’年 % %月
同!位!素
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大鼠白蛋白放射免疫分析试剂盒的研制
袁志刚 ! 韩世泉 ! 刘一兵 ! 许文革
" 中国原子能科学研究院 同素研究所 $ 北京 !% # " ! * % &
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提供 % 本工作拟 用 羊 抗 大 鼠 白 蛋 白 抗 体 开 发 出 适应药物代谢的大鼠白蛋白试剂检测盒 %
%测定大鼠尿白
蛋白 对 糖 尿 病 大 鼠 肾 病 的 诊 断 具 有 重 要 价 % 目前 $ 国外 已 有 用 于 大 鼠 药 理 学 实 验 的 检测试剂盒 $ 而国内所用的试剂盒基本为代理商
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对尿样进行倍比稀释 Z"9 " (! -S%9 " " "" 表 明 ! 后! 不 影 响 测 量 结 果! 同时说明本试剂盒健全性 良好 " D@ P@ P! 回收率 ! 向大鼠尿样中加入 & 种不同浓 测定其 回 收 率 ! 结 果 列 于 表 &" 度的大鼠白蛋白 ! 由 表 & 可 知 !本 方 法 回 收 率 为 ( <9 )Y ! % " )9 *Y "
摘要 !采用大鼠白蛋白免疫绵羊得到羊抗大鼠白蛋 白 抗 血 清 $ 建立了大鼠白蛋白放射免疫分析方法%本方 法 的测量范围为 %!# & 灵敏度为 "9 & 回收率为 ( 批内 ’ 批间变异系数分别 % "J >$ % !J >$ <9 )Y !% " )9 *Y $ F F 高浓度大鼠尿样系列倍比稀释 后 测 定 $ 实 测 值 和 计 算 值 呈 线 形 相 关$ 相 关 系 数 ’"9 *9 "Y 和 )9 !Y ! ( ( "% 大 鼠白蛋白放射免疫试剂盒的研制为肾病药物的开发及肾损伤的研究提供了方便 % 关键词 !放射免疫分析 ! 大鼠白蛋白 ! 肾损伤 中图分类号 ! " # c ) % < $ & &! c * * ’9 ’!! 文献标识码 (@!! 文章编号 ( % " " " $ < # % ! ! " " ’ " * $ " ! % ) $ " #