淋病奈瑟菌的分类与鉴定
2012淋球菌生物安全评估
淋病奈瑟菌危害评估报告一．危害程度分类（一）分类等级在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中将此菌列为第三类病原微生物（危险程度为Ⅱ级），属能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原微生物。
（二）不同实验操作生物安全实验室级别要求根据《名录》的规定，大量活菌操作包括实验操作涉及“大量”病原菌的制备，或易产生气溶胶的实验操作；样本检测包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取、涂片、显微观测活动可在BSL-2实验室进行。
非感染性材料的实验，如不含致病性活菌材料的分子生物学、免疫学等实验可在BSL-1实验室进行。
二．背景资料（一）一般生物学特征1．形态染色：革兰氏阴性双球菌。
2．培养特性：初次培养时需要5%--10%CO2。
氧化酶阳性，分解葡萄糖，不分解麦芽糖，硝酸盐还原试验阴性。
（二）在外界环境的稳定性：为条件致病菌。
（三）致病性和感染数量：1．致病性：是淋病的病原菌。
2．感染数量：在一定条件下引起感染。
（四）传播途径及暴露后果：1．传播途径：主要通过性接触传播。
2．暴露后果：可引起男性的尿道炎、附睾炎、前列腺炎，咽喉炎，女性的尿道炎、阴道炎、子宫炎。
（五）宿主范围：宿主范围较为广泛。
（六）预防、诊断和治疗：1．预防：实验室工作人员加强生物安全防范意识，规范操作，同时锻炼身体，增强机体免疫力，尽量避免暴露事件的发生。
2．诊断：感染后是否发病依据可疑症状，血液等常规检查、病原学检查来判定。
3．治疗：选用青霉素、头孢菌素、四环素、壮观霉素和环丙沙星等敏感药物治疗。
三．实验室实验活动及其危险性与预防措施（一）实验室实验活动背景资料1．实验活动内容：本实验室主要从事临床常规标本的病原菌分离、鉴定、药物敏感试验；室内质量控制监测工作等。
2．实验涉及的菌毒种背景资料临床标本中尚未分离出此菌2株。
（二）可造成不良后果的因素与预防措施1．实验样品的接收与开启：由于打开盛装菌株容器瞬间可能使一些菌体产生气溶胶扩散进入空气而造成污染，帮要求接收和打开样品人员应当子解样品对身体健康的潜在危害，接受如何采用常规预防措施的培训，样品要在生物安全柜内打开，缓慢向安瓶中加入液体来重悬冻干物，避免出现泡沫。
三种检测淋病奈瑟氏菌方法结果比较
三种检测淋病奈瑟氏菌方法结果比较摘要】目的：本次探究将使用聚合酶链反应（PCR）、直接涂片染色、细菌培养这三种方式对淋病奈瑟氏菌的检测结果进行对比分析。
方法：本次实验选取了2015年10月23日—2016年10月23在我院检测的1277例患者，并对783例男性患者和494例女性患者采用PCR扩增仪分别进行尿道分泌物和宫颈分泌物检测。
结果：在PCR检测中，女性患者NG-DNA阳性率为20.73%，男性患者NG-DNA阳性率为41.38%，男女患者数据对比差异显著，具有可比性。
在直接涂片染色的结果中，阳性检测率为16.19%；在细菌培养的检测结果中，阳性检测率为19.25%；在PCR检测结果中，阳性检测率为33.41%。
结论：通过三种不同的检测方式，我们认为PCR检测的灵敏度较高，是淋病奈瑟氏菌检测的首选方案，其次为细菌培养，而直接涂片染色的检测率最低。
对于基层医院而言，直接涂片染色是一种经济、实惠的检测方式，且该检测特异性高，具有可行性。
【关键词】聚合酶链反应（PCR）；直接涂片染色；细菌培养；淋病奈瑟氏菌【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）10-0394-02淋病是常见的性传播疾病之一，其病原体为淋病奈瑟氏菌（NG）。
此外，在性病的病种构成中居于第二位，仅次于非淋菌性尿道炎。
该病菌作为人体寄生细菌之一，常存在于急性尿道炎和阴道炎的脓性分泌物的白细胞中，具有一定的自我调节能力，在变异的作用下可以获得抗药性。
该疾病的检测方式较多，本次实验选取了2015年10月23日—2016年10月23在我院检测的1277例患者，通过聚合酶链反应（PCR）、直接涂片染色、细菌培养三种检测方法进行分析，比较其临床应用价值，从而有效地控制该病情的发展，具体报告如下。
1.资料与方法1.1 一般资料本次实验选取了2015年10月23日—2016年10月23在我院检测的1277例患者，其中男性783例，女性494例，患者年龄在24～35岁之间，女性患者均为已婚。
各类细菌的分类鉴定
④V~W变异：失去全部Vi抗原的变异。
变形 杆菌 属
G-b
有周身鞭 毛（摩根 菌属的部 分菌株在 30℃以上 不形成鞭 毛） 无芽孢 无荚膜
营养琼脂和血琼脂平板：迁徙扩散生 长（普通变形和奇异变形），可被0.1% 苯酚、4%硼酸、5%~6%琼脂及同型血清 或胆盐所抑制。普罗威登斯菌和摩根 菌属无迁徙生长现象。
H2O2（+）；多数致病性葡萄球菌能分 解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆 凝固酶。
①蛋白抗原：SPA蛋白 （存在于葡萄球菌表 面，结合在细胞壁的黏 肽部分，具有抗吞噬作 用），有种属特异性。
②多糖抗原：有型特异 性。
1.侵袭性疾病：①皮肤及软组织感 染（毛囊炎、疖、痈）；②全身性 感染（败血症、心内膜炎）；③呼 吸道感染；④医院内感染
伯菌
属
G-b
无鞭毛 无芽孢 有荚膜
血平板：圆形，凸起，灰白色，不溶血的菌 落。有时菌落呈黏液性，用接种环挑取时呈 长丝状。
肠道选择培养基：乳糖产酸菌落。
液体培养基：浑浊生长，可形成菌膜与黏性 沉淀物。
糖类发酵：发酵乳糖；h2o2（+）；脲酶（+）；OX（-）；鸟氨酸（-）；动力（-）。
本菌对氨苄西林天然耐药。 对产ESBLs菌株的治疗可用 碳青酶烯类、B-内酰胺类抗 生素/酶抑制剂或头孢菌素 类进行治疗。
糖类发酵：发酵乳糖；
OX（-）；DNA酶（-）；
^夫
尼亚
菌属
G-b
无荚膜 无芽孢 有周鞭毛
糖类发酵：发酵葡萄糖产酸产气； 可利用枸橼酸盐、乙酸盐和丙二酸 盐作为唯一碳源；
H2S（-）；山梨醇（-）；DNA酶（-）；赖氨酸（ +）；
淋病的实验室诊断
3，培养鉴定：
• • • •
培养基: GC和TM 培养条件：5-10％CO2，35C，70％湿度 标本接种：分区划线 注意事项：1 取材要合格
2 培养基用前应孵箱预热。 3 排尿后4小时。 4 5-10％淋球菌万古酶素敏感.
Smear and inoculation
PPNG detection
方法： 1 菌悬液：盐水悬液1X108cfu/ml
– – – – – 2 接种平板：有棉签沾取菌液涂布GC平板 3 贴药敏片 4 35C、 CO2环境下培养， 5 记录抑菌环的直径。 6 参照批准判断结果。
1 培养基的质量 2 平板的厚度 3 菌液的浓度 4 纸片的种类和含量及质量 5 最好有标准菌株质控。
2）琼脂稀释法
方法：
1 抗生素选择及其溶液的配制。 – 2 制备含不同浓度抗生素平板。 – 3 菌悬液的制备与接种。 – 4 35C、CO2培养，24－36小时读结果。 – 5 记录最小抑菌浓度（MIC），根据标准判断 结果。
世界卫生组织淋球菌抗生素敏感性判断标准 抗生素 敏感 中敏 青霉素 ≤0.03 0.06－0.5 四环素 壮观霉素 ≤32 头孢三嗪 ≤0.03 0.06－0.5 环丙沙星 ≤0.03 0.06－0.5 *质粒介导高度耐四环素。 耐药 ≥1 ≥64* ≥64 ≥1 ≥1
4，初步鉴定：
• 菌落形态 菌落形态差别较大
24h培养：细小、圆、凸、光、湿润、半透明、灰白色。 48h培养：菌落增大、表面变粗、边缘皱褶，
• 菌落涂片染色镜检：
25％典型形态，75％单球和四联
• 氧化酶试验：
阳性
• 氧化酶试验：
淋病奈瑟氏菌的鉴定及耐药性分析
积水仅表现为蛛网膜下腔 内脑脊液潴留。颅骨透照
细胞活化剂 。 降颅压 ， 促进积液吸收。临床常用能量 试验多为双侧对称性。而硬膜下积液 Ｃ Ｔ扫描示硬 合剂， 脑多肽 ， 神经生长因子 ， 甘露醇 、 口服乙酰唑胺 脑膜下积液 ， 多伴有脑室受压。颅骨透照试验局限
或用如意金黄散调以黄酒局部外敷 。 ｉ３ 结果 （） 疗效标准： ． １ 痊愈： 治疗 ３ 个月后前 囟无隆起 、 无呕吐及抽搐 ，Ｔ检查示正常。好转 ： Ｃ 治 疗３ 个月后 囟虽隆起 ， 但无呕吐及抽 搐，Ｔ检查示 Ｃ 于单侧 ， 如为双侧也多不对称。硬膜下积液多由于 脑膜炎症和外伤所致。故临床上要注意区分外部性 脑积水及硬膜下积液的病因及诊 断， 重视 围生期 的 养护及防治 ， 因导致外部性脑积水的病 因与高危新 生儿有关。
１ 材料 与方 法
颈 口和阴道壁， 用阴道窥镜压迫子宫阴道部 ， 以无菌
ｉｉ 材料 ．
（） Ｉ菌株来源 ： ９ １ ８年 ６ ９ 月至 ２０ 年 ５ ０１
棉试子采集标本。合并 有直肠炎患者， 用棉试子采
月来医院及门诊患者 的标本 ， 其中 ， 尿道 １ １ ， ２株 宫
取直肠腺窝粘膜的粘液。无菌手续留取中段尿。淋 颈分泌物 ６ ， ３株 前列腺 ７ 株 ， ８ 眼结膜 ３ 株 ， ３ 共计 病性结膜炎以无菌手续取结膜脓性分泌物。（ ） ２ 分 ２６ 其中男性 １ 例． ８ 株， ５ ２ 女性 １ 例。最小年龄 ３ ， ３ ４ ｄ 最大年龄 ５ 岁 ． ２ 平均年龄 ２ ． 岁。（） ２３ ２ 主要试剂 ： 离培养及菌株鉴定。标本采取后 ， 即（ 立 床头接种 ）
ｉ２ 治疗 ． 外部性脑积水的治疗主要是对症 ， 神经
性脑积水的疗效满意治愈率 １０ ０ ％。
淋病实验室诊断
3、淋球菌培养鉴定
培养法为诊断淋病的金标准. 对女性淋病、直肠、咽部的确诊应做淋球菌培养 培养的敏感性81~100%。 培养的优点有：
— 特异性极高（100%）； — 可发现无症状淋球菌感染患者； — 可用于进一步作药敏试验； — 可用于治疗后的判愈试验。
3、淋球菌培养鉴定
1、培养基 淋球菌对营养要求较复杂,培养基中应含有动物蛋
基本无细胞重叠为宜； * 火焰固定以涂片在腕背皮肤接触时仅感微热为
宜； * 避免用加热法使湿片干燥，避免固定时过度加
热,以免扭曲细胞形态。
显微镜检查
染色方法:
革兰染液 美兰染液 姬姆萨染液 荧光抗体
革兰染色为一传统方法，因简便、快捷及价廉、仍然 为最广泛采用的方法。革兰染色将菌分为二大类，即染成 紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。
淋球菌培养-观察结果
2、显微镜检查
1.染色涂片的制备： 涂片方法
在干净玻片上预加一小滴生理盐水。 * 用白金耳蘸取样时，应将白金耳半悬状态使分 泌物洗脱于盐水； * 用棉拭子取样时，应将棉拭子在盐水处轻轻 “滚动”，而不是涂抹。 * 自然干燥后, 涂漠面朝上快速通过火焰三次固 定。
显微镜检查
注意事项： * 涂片手法要轻，避免细胞破裂。薄厚得当，以
直接显微镜检查的临床意义
男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%～99%，具诊断价值。
宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅40～70%。
不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部，以及女性宫颈 淋球菌感染。 亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞 外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。
接种标本
取材后标本应尽可能及早接种。培养基应先置 于室温或孵箱中预温。将取材的拭子转动涂布于平 皿的上1/4范围，然后用接种环分区划线，以保证 获得较纯的单个菌落。
淋病奈瑟菌
Redness and inflammation around the mouth, spreading to entire skin surface.
Any pressure causes skin to blister and come loose. Entire epithelium can come loose and is replaced after 7-10 days
条件致病菌，常见尿路感染。
甲型溶血性链球菌
• 条件致病菌，可引起亚急性细菌性心内膜炎 • 变异链球菌与龋齿发病有关。
拔牙后， 30%患者可有链球菌血症， 从而引起亚急性细菌性心内膜炎，尤其是 D群链球菌
变异链球菌(S.mutans) : G+， 兼性厌 氧，出生后18-36月可感染，引起龋齿。
Scarlet fever tongue
/bingli/Content/N26/list45.htm 2018/9/18 医学微生物学
蜂窝织炎 (Cellulitis) The organism may gain entry into the
skin through broken areas, such as cuts, abrasions, stasis ulcers, or fissures caused by dermatophytes. Clinically, the affected area is inflamed, erythematous, and edematous, with ill-defined margins
第7章 球菌
化脓性球菌：能引起机体化脓性炎症的球菌.
革兰阳性球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球 菌、肠球菌。
淋球菌初步鉴定依据
淋球菌初步鉴定依据
淋球菌的初步鉴定依据主要包括以下几个方面：
1. 细菌形态特征：淋球菌为革兰氏阴性菌，具有细长的杆状或曲杆状形态。
2. 细菌培养特征：淋球菌能够在专门的培养基上生长，如新叶状体液培养基。
淋球菌生长速度较慢，通常需要3-5天形成菌落。
3. 线粒体试验：淋球菌通常能够氧化葡萄糖产生酸，但不能氧化岛果糖。
4. 鉴定酶：淋球菌被一些特定酶产物发酵或产生的酶反应所特征化，如麦立克林试验（正反应为麦立克林试剂变红）和尿素酶试验（能产生氨气泡）。
5. 免疫学鉴定：传统上，淋球菌可通过酶标记免疫吸附试验（ELISA）或荧光抗体试验（IFA）等方法检测其特异性抗原。
这些初步鉴定依据可以帮助确定是否为淋球菌，但最终的确诊还需要结合其他鉴定方法，如分子生物学技术进行进一步的确认。