生化检验项目校准ppt
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生化检验项目校准—盐城市第一人民医院左月媛
可将校准品作为控制品分析，每日测量2次，共10日，绘制
控制图；如需要我室可以做，但有的项目每天都校准怎么做？ 质控靶值变化大于1.0的SD，可认为有统计显著差异，并必
须对校准品值是否真正正确做出决定。？
校准过程需要讨论的其他问题
试剂因素 应该维持在日常工作状态这样才 能与患者样本同步
贮存稳定性„有效期标准， --10% ？ ‟ 开瓶稳定性„标准， K值cv±2% ？ ！ ‟ 新旧混合使用 不同批号使用
系统，有助于开放系统对测试结果进行追
溯，保证测试结果的准确和可靠。
校准品的浓度 ——校准需哪几个浓度水平？
ISO 11095:1996标准——3个（对于初次校准应该增加校准水平的数量） EURACHEM “分析方法的目标适用性”指南——包括空白至少6个浓度水平 Commission Decision 2002/657/EC规定：包括零浓度至少5个浓度水平 ISO 15302:2007标准规定了4个校准水平 LGC/VAM “校准曲线的制备” 指南规定7个校准水平（包括空白） ISO 8466-1:1990甚至要求10个浓度水平
115(89U/L)
总
4942.04
4983.12
17
354
ALP不同批号校准品
校准品批号 111(109U/L) 112(206U/L) 113(205U/L) 114(216U/L) 115(212U/L) 总 均值 5446.9 5477.8 5398.1 5836.0 5631.2 5545.7 次数 171 89 55 102 17 434 CV 5.13 4.05 2.89 3.97 4.21 3.21
生化检验项目校准
盐城市第一人民医院
2012.12
【2024版】生化检验基础知识-PPT课件
2. 血液标本的采集
生化检验用的血液标本可来自于静脉、 动脉或毛细血管。静脉血是最常用的标本， 静脉穿刺是最常用的采血方法。毛细血管采 血主要用于儿童，血气分析多使用动脉血。
（1） 采血前准备
为了使实验室结果有效地用于临床，实验室 应了解在收集标本前和收集标本时，所有会 影响实验室的非患者内在疾病因素。采取各 种措施，提出对患者采集标本前以及采集时 的要求，称之为患者准备。
（2） 注意事项 收集尿液标本的容器必须清洁干燥， 最
好是一次性使用的容器。若容器反复使用， 则须用洗涤液和自来水清洗， 再用蒸馏水冲 洗。尿标本要防止混入月经血、阴道分泌物、 精液、前列腺液、粪便等异物。尿标本收集 后应 12 时内送检，以免细菌作用和化学成分 分解。若不能及时检验（如收集 24 小时尿 液），将标本置冰箱保存，若加入防腐剂， 保存效果更佳。
对不是因操作不当引起的溶血、脂血或胆红 素血，应在检验报告上注明，供医生参考。
尿液、脑脊液和胸腹水等标本常需离心，取 上清液进行分析
Байду номын сангаас
分离后的标本若不能及时检测或需保留以备 复查时，一般应放于4℃冰箱，某些检测项 目的标本存放于-20℃冰箱更稳定。标本存 放时需加塞，以免水分挥发而使标本浓缩。
3.尿液标本的采集
尿液标本的采集 （1） 采集方法 尿液标本有随机新鲜尿、定时尿及 24 小时尿， 根据检查项目选择标本的采集类型。定量生化分析 多收集 24 小时尿液， 24 小时尿标本采集方法如 下：
嘱病人在早晨 8 时排尿弃去，以后每次排尿均 收集于一大容器内，至次日早晨 8 时最后一次尿亦 收集于容器内。测量并记录 24 小时尿液总量，然 后混匀尿液，取适量尿液送检。
通常用量为0．5 ～1．0ml 浓盐酸／100 ml 尿液，适用于24 小时尿儿茶酚胺、秀草 扁桃酸（V M A）、17 －羟皮质类固醇和 17 －酮类固醇等定量测定。
临床生化检查PPT课件
元素 1、增高：FBG > 7.0mmol/L---高血糖症
心肌 标志
生理性↑：餐后1/2～1h, 摄糖过多 病理性↑：糖尿病，内分泌疾病，应激性
高血糖，药物影响，其他。
甲功 检查
2、降低：FBG < 2.8mmol/L---低血糖症
生理性↓：饥饿，长期剧烈运动，妊娠期 病理性↓：胰岛素过多,缺乏抗胰岛素激素
血脂
体恒定供能来源，存在于β脂蛋白和
检查
乳糜微粒中，血中TG直接参与CHO及
无机 元素
CE形成，是动脉粥样硬化的危险因素 【参考值】 ≤1.7mmol/L
心肌 【临床意义】 标志 1.升高:冠心病、原发性高脂血症、肥胖症等
甲功 检查
2.降低:甲亢、严重肝病、肾上腺皮质功能 降低、低（无）β脂蛋白血症等。
无机 【参考值】 ＜5.2mmol/L
元素 【临床意义】
心肌 标志
1.增高:动脉粥样硬化、高脂血症、胆道梗阻、 肾病综合征、糖尿病、甲减等
甲功 2.降低:严重肝病（肝黄，门脉性肝硬化） 、贫
检查 血、营养不良、甲亢、恶性肿瘤。
Chapter7 临床常用生化检查
血糖 (二)血清甘油三脂测定
代谢 【原理】 TG由肠道摄取入血，肝脏也合成。机
检查 温开水中,5min内服完并计时,于30min,1h,2h,
3h抽静脉血1ml,每次抽血后留尿标本送检。
血糖 代谢 血脂 检查 无机 元素 心肌 标志 甲功 检查
(二)口服葡萄糖耐量试验(OGTT) 葡萄糖耐量曲线
Chapter7 临床常用生化检查
血糖 (二)口服葡萄糖耐量试验 代谢 【临床意义】
无机 ④妊娠期,复摄甲糖正亢常后,肝，病为血时耐糖出糖浓现现度糖象急尿。剧者升；高，短时
医学生化临床检验精品PPT课件
清(白)蛋白（A） 溴甲酚绿法 40-55 g/l
球蛋白（G） G=STP-A 20-30 g/l
原理：在PH8.6的碱性环境中， 清蛋白带负电荷，向阳极泳动， 球蛋白带正电荷，但因等电点和 相对分子量的差异，泳动速度不 一而得以分离从阳极依次……..
血 清 蛋 白 质
血 清 蛋 白 电 泳
白/球比值 (A/G) 1.5-2.5:1
血清总胆红素（STB）
应用J-G方法，使用茶碱和甲醇作为溶
剂，以保证血清中结合胆红素与非结
合胆红素完全被溶解，并与重氮盐试
剂起快速反应，即为STB。
参考值
新生儿 0～1天 34～103μmol/L
可溶性结合胆红素
1～2天 103～171μmol/L 不溶性非结合胆红素
CB
3～5天 68 ～137μmol/L
升高程度判断黄疸类型
STB ↑UCB ↑ ↑溶血性黄疸 STB ↑CB ↑ ↑胆汁淤积性黄疸 STB ↑UCB ↑ CB ↑ 肝细胞性黄疸
判断有无黄疸、黄疸程度（STBμmol/L）
隐形黄疸 轻度黄疸 中度黄疸 重度黄疸
17.1-34.2 34.2-171 172-342 >342
① ③ 胆红素
临床意义
急性肝炎，GGT中度升高， 慢性肝炎、肝硬化的非活动 期时，酶活性正常，若GGT 持续升高，提示病情恶化。
非病毒非性肝病 如酒精性肝炎、药物性肝炎、脂肪肝和肝癌等，转氨酶轻度上 升或正常，ALT/AST<1;酒精性肝病时AST可显著升高,ALT几乎 接近正常.
14
ALT、AST的临床意义
血清氨基转移酶测定（3）
肝硬化 转氨酶活性取决于肝细胞坏死程度，终末期转氨酶正常或 降低
球蛋白（G） G=STP-A 20-30 g/l
原理：在PH8.6的碱性环境中， 清蛋白带负电荷，向阳极泳动， 球蛋白带正电荷，但因等电点和 相对分子量的差异，泳动速度不 一而得以分离从阳极依次……..
血 清 蛋 白 质
血 清 蛋 白 电 泳
白/球比值 (A/G) 1.5-2.5:1
血清总胆红素（STB）
应用J-G方法，使用茶碱和甲醇作为溶
剂，以保证血清中结合胆红素与非结
合胆红素完全被溶解，并与重氮盐试
剂起快速反应，即为STB。
参考值
新生儿 0～1天 34～103μmol/L
可溶性结合胆红素
1～2天 103～171μmol/L 不溶性非结合胆红素
CB
3～5天 68 ～137μmol/L
升高程度判断黄疸类型
STB ↑UCB ↑ ↑溶血性黄疸 STB ↑CB ↑ ↑胆汁淤积性黄疸 STB ↑UCB ↑ CB ↑ 肝细胞性黄疸
判断有无黄疸、黄疸程度（STBμmol/L）
隐形黄疸 轻度黄疸 中度黄疸 重度黄疸
17.1-34.2 34.2-171 172-342 >342
① ③ 胆红素
临床意义
急性肝炎，GGT中度升高， 慢性肝炎、肝硬化的非活动 期时，酶活性正常，若GGT 持续升高，提示病情恶化。
非病毒非性肝病 如酒精性肝炎、药物性肝炎、脂肪肝和肝癌等，转氨酶轻度上 升或正常，ALT/AST<1;酒精性肝病时AST可显著升高,ALT几乎 接近正常.
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ALT、AST的临床意义
血清氨基转移酶测定（3）
肝硬化 转氨酶活性取决于肝细胞坏死程度，终末期转氨酶正常或 降低
生化检验室内质控 PPT
质控品的使用与保存应注意
❖ 严格按照说明书操作。 ❖ 冻干质控品复溶要确保所用溶剂的质量。 ❖ 冻干质控品复溶时所加溶剂的量要准确，并尽量保持
每次加入量的一致性。 ❖ 冻干质控品复溶时应轻轻摇匀，使内溶物完全溶解，
切记剧烈振摇。 ❖ 质控品要在与患者标本同样测定条件下进行测定。 ❖ 质控品应严格按照使用说明书规定的方法保存，不使
液体试剂与干粉试剂
1.液体试剂 ❖ 不需加水复溶，使用方便 ❖ 批间误差小，重复性好 ❖ 杜绝干粉试剂复溶时因水质不好引起试剂变质 ❖ 有利于急诊标本
2.干粉试剂 ❖ 有效期长（18个月），有利于保存 ❖ 复溶的操作、蒸镏水质等都应符合说明书要求，
否则会影响测量结果 ❖ 批间误差大 ❖ 价格稍贵
试剂的使用及保存
一 制定室内质量控制程序文件
❖ 对仪器、试剂、质控品、校准品等的使用进行 详细规定，参与质量控制的工作人员必须严格 执行。
❖ 对相关人员进行培训，充分了解质量控制的理 论、方法和技术操作。
购置论证书、仪器说明书、使用说明书。 建立相关的安装调试、仪器维护、使用、惟一标识、用途、工作条 件、工作状态、适用范围等记录。
操作者：
按规定做质控并记录 发报告前检查有无失控 无失控，签字发出报告 失控，报告质量负责人 按规定程序检查失控原因
三 建立标准操作规程与仪器维护程序
❖标准操作规程(SOP):
是指与实验相关的操作过程文件。最 有可操作性，也是使用频率最高的文件， 如仪器的操作使用、校准及维护；检验项 目的操作程序等。
❖ 概念 由实验室工作人员采用一系列的方法，连
续的评价本实验室工作的可靠程度，确立报 告能否发出的过程。一般通过检测质控品来 实行。
室内质量控制的意义
生物化学检验ppt课件
酶类CK-MB,α-AMY等。
底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA， UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，NH4+,CO2 等。
无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl 等。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
吸收曲线
波长从200nm-400nm 的电磁波，称为紫外光，波长从400nm-760nm 的电磁波，称为可见光。以波长(λ)为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘 制出的一条曲线称为吸收曲线，在一段波长范围内，有最大吸收波长 λmax 和最小吸收波长λmin，在最大吸收波长处测定可获得最大的测 定灵敏度。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
二、连续监测法
连续监测法属于动态法检测的一种，适用于酶活性测 定和代谢物检测，多有酶的参与。该法是通过适当的 仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物 的浓度随时间变化的情况。原理是：在酶反应的最适 条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反 应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定 时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速 度计算出酶活力大小代谢物的浓度。计算方法有：1） 绝对法：酶活力（U/L）=△A×（反应液体积/样品体 积）×（1000/消光系数）；2）相对法：酶活力 （U/L）=〔 △A （测定）/ △A （标准） 〕标准物的 活力或浓度。
两点终点法
两点终点法也称因定时间法，它可以用一种试剂或两 种试剂。这种方法是近年来，可加双试剂的生化分析 仪问世后，才被广泛应用。优点是可以消除样品、试 剂的颜色、浊度，以及一些干扰物对测定的干扰。原 理是：加入样品→试剂1 →读取A1 →试剂2 →读取 A2，其中要读取两次吸光度值，第一次相当于读出样 品空白的值，加入试剂2至第二次读数才是实际呈色 反应，因此A=A1-A2。比浊法也是一种终点法，不过 是一种浊度测定，而不是比色测定。比浊法可分为化 学比浊法与免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊 法和散射比浊法。免疫比浊法目前主要用于血清特种 蛋白的测定，如载脂蛋白(apoAI,apoB 等)、补体类(C3、
底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA， UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，NH4+,CO2 等。
无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl 等。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
吸收曲线
波长从200nm-400nm 的电磁波，称为紫外光，波长从400nm-760nm 的电磁波，称为可见光。以波长(λ)为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘 制出的一条曲线称为吸收曲线，在一段波长范围内，有最大吸收波长 λmax 和最小吸收波长λmin，在最大吸收波长处测定可获得最大的测 定灵敏度。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
二、连续监测法
连续监测法属于动态法检测的一种，适用于酶活性测 定和代谢物检测，多有酶的参与。该法是通过适当的 仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物 的浓度随时间变化的情况。原理是：在酶反应的最适 条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反 应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定 时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速 度计算出酶活力大小代谢物的浓度。计算方法有：1） 绝对法：酶活力（U/L）=△A×（反应液体积/样品体 积）×（1000/消光系数）；2）相对法：酶活力 （U/L）=〔 △A （测定）/ △A （标准） 〕标准物的 活力或浓度。
两点终点法
两点终点法也称因定时间法，它可以用一种试剂或两 种试剂。这种方法是近年来，可加双试剂的生化分析 仪问世后，才被广泛应用。优点是可以消除样品、试 剂的颜色、浊度，以及一些干扰物对测定的干扰。原 理是：加入样品→试剂1 →读取A1 →试剂2 →读取 A2，其中要读取两次吸光度值，第一次相当于读出样 品空白的值，加入试剂2至第二次读数才是实际呈色 反应，因此A=A1-A2。比浊法也是一种终点法，不过 是一种浊度测定，而不是比色测定。比浊法可分为化 学比浊法与免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊 法和散射比浊法。免疫比浊法目前主要用于血清特种 蛋白的测定，如载脂蛋白(apoAI,apoB 等)、补体类(C3、
生化检测系统性能验证PPT课件
基本概念
误差（error）指对于真值或对于可接受 的、预期真值或参考值的偏离，分为随 机误差和系统误差。
总误差（total error）指某实验室用某方 法在多次独立检验中分析某样品所得各 个结果值与靶值之差在一定置信区间内 的最大值。包括随机误差和系统误差， 是不准确度的估计值。
文件依据
CLSI 颁布的EP15-A文件《用户对精密度 和准确度性能的核实指南》
通常是生产厂家完成。
什么是性能验证？
对他人或厂商的评价资料中的几个主 要性能进行证实。
通常由实验室自己完成。
性能验证试验
对配套系统，一般验证下列指标： ―准确度(accuracy)---EP15 -A ―精密度(precision)---EP5-A2 ―线性范围（linear range )---EP-6 ―可报告范围(reportable range)---EP-6 ―参考区间(reference interval)---C28-A2
基本概念
3. 不同测量系统可使用不同测量程序。 4. 应在实际程度上给出改变或不改变条 件的说明。
基本概念
中间精密度
在一组测量条件下的测量精密度，这些 条件包括相同的测量程序、相同地点并且对 相同或相似的被测对象在一长时间段内重复 测量，但可包含其它相关条件的改变。
1. 应在实际程度规定改变和未改变的条件， 特别是如校准物、试剂批号、设备系统、操 作者和环境条件等变量。
文件依据
CLSI 颁布的EP-17A文件进行灵敏度 性能评价。
功能灵敏度实验程序
将校准品或质控品稀释后，在仪器上分 别对不同浓度的样品连续测定20次，
计算均值、标准差和变异系数， 以不精密度（CV）≤ 20%时对应检测
检验科讲课—生化(PPT精选课件)
正常人 溶血性黄疸
DBIL 0~6.8 轻度增高
肝细胞性黄疸 中度增高
阻塞性黄疸 明显增高
IBIL 1.7~10.2 明显增高
中度增高
轻度增高
DBIL/TBIL >35% <20%
>35%
>35%
14
-谷氨酰转移酶（-GT）
• -GT广泛分布于肝、肾、胰、脾、脑、肺、骨骼肌、心肌等处。 在肝脏的活性强度居第三位，分布于肝细胞毛细血管一侧和整个 胆管系统，在胆汁淤滞，肝内-GT合成亢进。酒精性肝损害时此 酶亦升高。
• 血清胆红素分为结合与非结合胆红素，二者合称总胆红素。 TBIL=DBIL+IBIL
• TBIL:<34为隐性黄疸， <170为轻度黄疸， <340为中度黄疸， >340为高度黄疸，完全阻塞性黄疸为340~510；不完全阻塞者为 170~265，肝细胞性黄疸17~200；溶血性黄疸<85
13
三种黄疸的胆红素变化比较
• 影响ALT活力的生理因素，饮酒和剧烈运动后其轻度升高，但很 少超过100 IU
6
谷丙转氨酶GPT、ALAT
• ALT增高常在肝炎早期症状出现之前，约经4~8周后多数降至正常。 特别是乙型肝炎，此酶持续时间较长，且恢复正常较慢。但轻型 无黄疸肝炎仅有短暂或一时性升高，且程度不显著，甚至2~3天 后降至正常。如果此酶长期波动在较高水平，持续半年以上，应 考虑迁延型或慢性肝炎的活动期，至肝炎静止期或代偿期的肝硬 变，常不增加。
• AST/ALT<1 ，见于一般急、慢性肝炎； AST/ALT >2，则有肝硬变可能；12% 的肝硬化患者
>3 AST/ALT >3 ，则有肝癌变可能性，或应进行相关检
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浓度分别设置为：0、10、33umol/L。
二、了解情况： 查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实
际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.0027 10：-0.0344 33：-0.0738，但参与最终结果 计算的Cal Factor（校准因数）却显示为0，说 明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合 ，故出现“校准失败”报警。
logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升 高而吸光度表现为收束的工作曲线。
样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的 吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线 ，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。
•logit-logXp与样条函数法
•抛物线型(左下图)，则多考虑用logic方法拟合。 •曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示 的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。
冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出 样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化 ，温和混匀。
冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室 温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻 拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小 心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确 加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温 下使之完全溶解，温和混匀。
生化检验项目校准
泸州市人民医院
校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或 测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考 物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量 值之间关系的一组操作。
仪器的性能验证：
• 零点漂移 • 波长准确度及重复性 • 杂散光 • 吸光度正确度 • 吸光度重复性 • 吸光度线性误差 • 交叉污染率 • 温度正确度 • 比色杯间差距
Cal Factor 吸光度
0 umol/L 5 umol/L 10 umol/L
-87.2
-213.5
16.5 umol/L -279.6
33 umol/L -365.3
-0.0032 -0.0195 -0.0366 -0.0558 -0.0744
5、之后校准显示通过，质控在控，证明校准成功
四、分析： 1. 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或
非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据 试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。 2. 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模 式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式 校准。 3. 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进 行两点校准即可。 4. 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品 进行多点校准。
应按厂家提供说明书操作。
校准品浓度水平及个数选择 • 校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。 • 校准范围也定义为分析方法的工作范围。 • 个数要与仪器要求相匹配
案例分析
一、现象： 某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），avelength：340nm；
Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3；
三、处理： 1. 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍
稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 2. 把参数中校准品个数修改为：5； 3. 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 4. 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准
顺利通过，结果如下：
检测项目校准
校准目的是准确度的传递
一级标准品
决定性方法
参考方法
溯
二级标准品
校
源
厂家方法
准
校准品
常规分析
项目校准主要涉及内容
• 校准方法的选择 • 校准品的选择及准备 • 校准频率的选择 • 校准后的验证 • 问题讨论
校准方法的选择
线性
• 线性校准方法需选用1个或多个已知浓度的标准物 质或校准品，1点线性校准通常被定义为K因子校 准，仅空白溶液用于校准；在生化分析仪上最常
5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品 个数是不同的。 例如： ① 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的
校准品即可进行非线性拟合； ② 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的
用的2点线性校准等同于分析化学中的外标2点法， 需使用空白溶液和1个已知浓度的校准品。
非线 性
• 如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反 应（如免疫分析方法），则应选用非线性校准模式，
需涉及3至6个校准品，采用曲线拟合、多项式、对 数等方式建立非线性函数。
K因子法（+ -）： 理论k值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试 剂生产厂家给出的k值都属于。 实测K值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K 值 校准k值：是根据仪器当前的实际状态，试剂的稳 定性等通过校准品校准后得到的K值。
K因数法适用的分析方法有一点终点法，两点 终点法，两点速率法，多点速率法。
线性校准（Linear）：其反应为线性（直线） ，一般只需一个校准品进行校准。
非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包 括logit-log法、指数函数法、样条函数法等 方法 Logit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓 度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P表 示参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参与 计算。S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜 率，a表示近似常数。
校准品的选择及准备
校准品：含有已知量的欲测物，用以校准该测定 方法的数值，它与该方法、试剂、仪器是相关联 的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂 等造成的系统性误差。
最好为人血清基质，减少基质效应 仪器、试剂、校准品的配套性 如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质 要有明确的不确定度
二、了解情况： 查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实
际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.0027 10：-0.0344 33：-0.0738，但参与最终结果 计算的Cal Factor（校准因数）却显示为0，说 明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合 ，故出现“校准失败”报警。
logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升 高而吸光度表现为收束的工作曲线。
样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的 吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线 ，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。
•logit-logXp与样条函数法
•抛物线型(左下图)，则多考虑用logic方法拟合。 •曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示 的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。
冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出 样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化 ，温和混匀。
冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室 温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻 拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小 心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确 加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温 下使之完全溶解，温和混匀。
生化检验项目校准
泸州市人民医院
校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或 测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考 物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量 值之间关系的一组操作。
仪器的性能验证：
• 零点漂移 • 波长准确度及重复性 • 杂散光 • 吸光度正确度 • 吸光度重复性 • 吸光度线性误差 • 交叉污染率 • 温度正确度 • 比色杯间差距
Cal Factor 吸光度
0 umol/L 5 umol/L 10 umol/L
-87.2
-213.5
16.5 umol/L -279.6
33 umol/L -365.3
-0.0032 -0.0195 -0.0366 -0.0558 -0.0744
5、之后校准显示通过，质控在控，证明校准成功
四、分析： 1. 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或
非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据 试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。 2. 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模 式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式 校准。 3. 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进 行两点校准即可。 4. 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品 进行多点校准。
应按厂家提供说明书操作。
校准品浓度水平及个数选择 • 校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。 • 校准范围也定义为分析方法的工作范围。 • 个数要与仪器要求相匹配
案例分析
一、现象： 某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），avelength：340nm；
Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3；
三、处理： 1. 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍
稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 2. 把参数中校准品个数修改为：5； 3. 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 4. 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准
顺利通过，结果如下：
检测项目校准
校准目的是准确度的传递
一级标准品
决定性方法
参考方法
溯
二级标准品
校
源
厂家方法
准
校准品
常规分析
项目校准主要涉及内容
• 校准方法的选择 • 校准品的选择及准备 • 校准频率的选择 • 校准后的验证 • 问题讨论
校准方法的选择
线性
• 线性校准方法需选用1个或多个已知浓度的标准物 质或校准品，1点线性校准通常被定义为K因子校 准，仅空白溶液用于校准；在生化分析仪上最常
5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品 个数是不同的。 例如： ① 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的
校准品即可进行非线性拟合； ② 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的
用的2点线性校准等同于分析化学中的外标2点法， 需使用空白溶液和1个已知浓度的校准品。
非线 性
• 如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反 应（如免疫分析方法），则应选用非线性校准模式，
需涉及3至6个校准品，采用曲线拟合、多项式、对 数等方式建立非线性函数。
K因子法（+ -）： 理论k值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试 剂生产厂家给出的k值都属于。 实测K值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K 值 校准k值：是根据仪器当前的实际状态，试剂的稳 定性等通过校准品校准后得到的K值。
K因数法适用的分析方法有一点终点法，两点 终点法，两点速率法，多点速率法。
线性校准（Linear）：其反应为线性（直线） ，一般只需一个校准品进行校准。
非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包 括logit-log法、指数函数法、样条函数法等 方法 Logit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓 度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P表 示参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参与 计算。S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜 率，a表示近似常数。
校准品的选择及准备
校准品：含有已知量的欲测物，用以校准该测定 方法的数值，它与该方法、试剂、仪器是相关联 的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂 等造成的系统性误差。
最好为人血清基质，减少基质效应 仪器、试剂、校准品的配套性 如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质 要有明确的不确定度