非衍生化串联质谱技术筛查上海部分地区新生儿遗传代谢病的回顾性分析
串联质谱技术在新生儿筛查上的应用
串联质谱技术在新生儿筛查上的应用
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串联质谱技术优势
特异性：检测分子量，内标定量显著降低假阳 性率
敏感性：显著降低假阴性率
高通量：一次能够检测几十种小分子物质（ 30-50各种疾病），一台仪器天天检测500～600个 样品，每个标本2-3分钟
采血简单，能够寄送
串联质谱技术在新生儿筛查上的应用
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串联质谱能筛查哪些疾病
• 氨基酸—氨基酸障碍疾病 • 酰基肉碱—有机酸及脂肪酸代谢障碍疾病 • 溶酶体病及脑白质营养不良 • SCID（重症联合免疫缺点）比较成熟 • 临床应用范围不停扩大
• 半乳糖血症、糖原累积症、 Wilson病及 线粒体脑肌病等等不能筛查
串联质谱技术在新生儿筛查上的应用
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串联质谱技术在新生儿筛查上的应用
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串联质谱技术在新生儿筛查上的应用
LC-MS/MS检测到离子流图
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岛津液相串联质谱
• 岛津企业针对新生儿筛查工作专门开发了Neonatal Solution 新生儿筛查软件，配合强大LabSolutions工作站，为新生儿 筛查工作提供完整方法建立、数据采集、数据分析及自动 准确度管理工具，可便捷、高效处理、分析、管理大批量 新生儿筛查数据。
串联质谱技术在新生儿筛查上的应用
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引用文章
• 无锡地 区新生儿耳聋基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ因 M A LD I．TO F ．M S筛查分 析 --------中华检验医学杂志年 2月
• 基于质谱D NA 序列测定进展 -------化学通 报年2期
• 串联质谱技术在新生儿遗传代谢性疾病筛 查中应用 --------山东省济南市妇幼保健院新 生儿疾病筛查中心 250001
探索新生儿疾病串联质谱筛查技术的挑战与解决方案
探索新生儿疾病串联质谱筛查技术的挑战与解决方案新生儿疾病是指出生后28天内发生的各种疾病。
新生儿疾病的早期筛查对及时诊断和治疗儿童疾病至关重要。
传统的新生儿疾病筛查方法存在许多限制，而串联质谱筛查技术（LC-MS/MS）作为一种高效、准确、快速的新生儿疾病筛查方法，近年来引起了广泛的关注。
然而，实施LC-MS/MS技术的挑战也仍然存在，包括标准化、操作复杂、数据分析等方面的问题。
针对这些挑战，我们还需要进一步的解决方案。
首先，新生儿疾病串联质谱筛查技术的一个挑战是标准化。
由于LC-MS/MS是一种高度复杂的技术，不同实验室之间存在方法和操作的差异。
为了保证结果的准确性和可比性，有必要制定统一的标准操作流程和质控规范。
此外，建立一个国家级的质控中心，进行质控样品的制备和分发，可以使得不同地区的实验室使用相同的样品进行质量控制，提高筛查结果的准确性和可靠性。
其次，操作复杂性也是应用LC-MS/MS技术的一个挑战。
这项技术需要熟练的操作技能和严格的实验室操作流程，包括样品采集、制备、质控和仪器操作等环节。
为了解决这个问题，培训和认证在LC-MS/MS技术的应用中起着至关重要的作用。
相关机构可以组织培训课程和认证考试，提供必要的培训和指导，确保实验室的操作人员具备足够的技术水平和经验来进行有效的筛查工作。
此外，数据分析是LC-MS/MS技术应用中的另一个挑战。
从LC-MS/MS的仪器输出数据中提取并分析目标代谢物的数据需要专业的数据处理和解释的技巧。
为了解决这个问题，开发和应用高效的数据分析软件是重要的。
这些软件可以帮助实验室快速且准确地处理和解释大量的数据，提高筛查的效率和可靠性。
此外，建立一个数据共享平台，将不同实验室产生的数据集中到一起，可以进一步促进研究和开发新的筛查方法。
同时，成本也是应用LC-MS/MS技术的一个挑战。
相比传统的新生儿疾病筛查方法，LC-MS/MS技术的设备和耗材成本较高。
为了降低成本，可以通过与供应商进行合作，争取特价购买设备和耗材。
串联质谱和气相色谱质谱技术在遗传代谢病检测和诊治中的应用
串联质谱遗传性代谢病检测相关资料
串联质谱检测氨基酸和酰基肉碱指标：100
患者串联质谱检测疾病种类：45种疾病
正常儿童
保留时间（min)离子强度
尿气相色谱－质谱图
保留时间（min)丙酸血症儿童
GC-MS 检测的遗传代谢病种类
T1 FLAIR，低信号T2 FLAIR，高信号DWI，高信号
1岁6个月男婴，MRI显示脑萎缩性改变，双侧基底节T1 FLAIR稍
低、T2 FLAIR高信号(如箭头所指)，DWI高信号。
男，2天，头颅CT男，49天，头颅MRI
男，5岁，MRI 显示轻度脑萎缩性改变，枕部脑白质略减少(如箭头所指)。
T1 FLAIR ，低信号
T2 FLAIR ，高信号
4个月，女，T1 FLAIR 显示双侧内囊前后肢低信号（长
箭头指内囊前肢，短箭头指内囊后肢），脑积水
丙酸血症，MS10，女，2岁丙酸血症，MS10，女，
MS-42，男，8个月，头颅MRI脑萎缩
谢谢。
串联质谱技术新生儿遗传代谢病筛查
智力障碍
部分遗传代谢病可能导 致智力发育障碍，影响 患儿的认知和学习能力。
生理功能异常
患儿可能出现呼吸、消 化、心血管等系统的生 理功能异常，影响身体
健康。
死亡风险
部分严重遗传代谢病可 能导致患儿死亡，如甲
基丙二酸血症等。
新生儿遗传代谢病筛查的意义
01
02
03
04
早期发现
新生儿遗传代谢病筛查能够在 患儿症状出现前早期发现疾病 ，为后续治疗争取宝贵时间。
1 2
推动遗传代谢病早期筛查
通过串联质谱技术的广泛应用，实现对遗传代谢 病的早期筛查，降低疾病的发生率和危害性。
个性化医疗的普及
串联质谱技术为个性化医疗提供了技术支持，有 助于实现个体化预防、诊断和治疗方案。
3
医学教育和培训
串联质谱技术的应用将促进医学教育和培训的发 展，提高医生对遗传代谢病的认识和诊疗水平。
样本处理
将血滤纸片进行脱脂、萃取等处理， 得到可用于串联质谱分析的干血滤纸 片。
串联质谱分析
将干血滤纸片放入串联质谱仪中进行 检测，得到各种代谢产物的谱图和浓 度。
结果解读
根据检测结果，结合临床表型和家族 史，对新生儿进行遗传代谢病的诊断 和风险提示。
04
串联质谱技术筛查的案例分 析
案例一：新生儿苯丙酮尿症筛查
感谢您的观看
THANKS
利用串联质谱技术对药物代谢和药效进行深入研究，为新药研发 和个性化用药提供有力支持。
精准医学
将串联质谱技术与基因测序、影像学等技术相结合，实现精准医学 在疾病预防、诊断、治疗和预后评估中的应用。
食品安全和环境监测
利用串联质谱技术检测食品中的有害物质和环境中的污染物，保障 公众健康和生态安全。
新生儿遗传代谢性疾病筛查中串联质谱的应用效果分析与探讨
新生儿遗传代谢性疾病筛查中串联质谱的应用效果分析与探讨摘要：目的：探讨新生儿遗传代谢性疾病筛查中串联质谱的应用效果。
方法：选择2018年8月-2022年8月银川市新生儿遗传代谢性疾病筛查人数125081例为对象，采用串联质谱技术筛查。
结果：本次筛查总人数125081，召回复查人数7724。
确诊的疾病和人数：氨基酸代谢病65例，尿素循环障碍8例，有机酸代谢病10例，脂肪酸氧化障碍18例。
结论：串联质谱技术可使筛查效率提高，对新生儿遗传代谢性疾病干预有指导作用。
关键词：新生儿；遗传代谢性疾病；筛查；串联质谱遗传代谢性疾病主要是基因编码突变引起的代谢异常、代谢缺陷，常见的情况有酶、载体蛋白或者膜等，患儿有编码产物改变的情况，血液中有代谢物蓄积，导致患儿产生对应的病理改变，有一定的临床症状，危及患儿的生命质量。
据调查显示，我国遗传代谢性缺陷儿出生率高，对患儿家庭与社会的影响大，应高度重视新生儿疾病筛查，施以针对性预防[1]。
串联质谱技术用于疾病鉴定与筛查的效果显著，本次对新生儿遗传代谢性疾病筛查中串联质谱应用情况进行分析，探讨串联质谱技术的应用效果。
1、资料与方法1.1一般资料选择2018年8月-2022年8月银川市新生儿遗传代谢性疾病筛查人数125081例为对象，男性63957例，女性61124例；出生时间平均（4.52±1.24）d，范围2-10d；出生体质量平均（3.26±0.34）kg，范围2.0-4.2kg。
纳入标准：（1）新生儿母亲产前检查资料完整。
（2）新生儿家属知晓研究内容，愿意配合临床研究。
（3）新生儿疑似有遗传代谢性疾病[2]。
排除标准：（1）出生3d内死亡。
（2）出生3d内哺乳次数＜6次[3]。
（3）家属不愿意配合研究。
1.2方法用SCTEX API 3200LC/MS/MS串联质谱分析仪为新生儿进行检测，以非衍生化多种氨基酸、琥珀酰丙酮以及肉碱测定试剂盒作为本次检测试剂。
串联质谱在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用价值
串联质谱在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用价值李丽【摘要】目的分析临床上对新生儿是否患有遗传代谢性疾病进行筛查的过程中串联质谱的应用价值。
方法本次研究中,选取2016年5月-2017年5月期间入院进行常规筛查的200例儿童作为研究对象,对其进行足跟血样的采集,将采集得到的血液滴在采血专用的滤纸上,使用非衍生化多种氨基酸肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒对样本进行处理,采用串联质谱仪进行血片中的多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮浓度的分析工作。
结果经过对200例研究对象的血液标本进行分析后发现,3例标本的检测结果为阳性,占研究对象总数的1.5%,其中,1例研究对象患有异戊酸血症,2例研究对象患有甲基丙二酸尿症。
结论在对于新生儿的遗传代谢性疾病进行筛查的过程中,应用串联质谱技术具有良好的检测效果,其对于脂肪酸代谢的紊乱、有机酸代谢的紊乱以及氨基酸代谢的紊乱等造成的疾病都能很好地进行检测,在临床上具有良好的推广价值。
【期刊名称】《临床检验杂志(电子版)》【年(卷),期】2019(008)001【总页数】3页(P60-62)【关键词】儿童筛查;遗传代谢性疾病;串联质谱;临床效果【作者】李丽【作者单位】德州市妇女儿童医院检验科,山东德州253015;【正文语种】中文【中图分类】R725.96科技水平的提升促进了医学领域的蓬勃发展。
同时，由于人们对健康问题的高度关注，进一步提升新生人口的素质逐渐成为了预防医学领域中的主要研究方向[1]。
相关研究表明，先天性的遗传代谢性疾病是造成新生儿身体素质较差的主要问题，该病的主要表现为新生儿在体内生化水平与激素水平上发生了一定的改变。
在临床上，对儿童采取相应的筛查工作，可以在疾病出现前，对其作出明确的诊断，从而尽早进行相应的治疗措施，对此类疾病的控制与治疗具有积极的意义[2]。
近年来，伴随着疾病筛查技术的不断进步，用于筛查的方法日渐丰富，目前，串联质谱技术凭借其高效、精准的优势，广泛应用于临床过程中，受到了医务工作者的一致好评。
串联质谱
串联质谱技术在新生儿疾病筛查中的应用遗传性代谢病( inborn error of metabolism，IEM)是一类涉及氨基酸、有机酸、脂肪酸、尿素循环、碳水化合物、类固醇等多种物质代谢的疾病。
其种类繁多，是儿科临床的疑难杂症。
虽然其单一病种患病率较低，但总体发病率较高，对人口素质、家庭乃至社会的发展构成了极大的威胁。
其诊断主要依赖实验室的特异性检查。
我国每年出生约2200万新生儿，仅高苯丙氨酸血症（包括苯丙酮尿症）这类疾病，每年就新增患儿1600~1800例。
LC-MS/MS 技术的发展使得这类疾病在发病前进行干预成为可能。
即在新生儿出生后体内某些代谢产物出现异常,而尚未出现临床症状或者症状不明显时就早期明确诊断，并进行及时而有效的对症治疗，以避免患儿的重要脏器出现不可逆性损害，进而保障儿童正常的体格发育和智能发育。
这就是新生儿疾病筛查（neonatal screening）。
国际新生儿疾病筛查发展趋势逐步提高到以串联质谱（MS/MS）技术为中心的筛查，如欧美等国目前已经广泛采用LC-MS/MS法对新生儿遗传疾病筛查。
串联质谱即两个质谱仪串联后一次进行二级质谱检测,利用超敏性、高特异性、高选择性和快速检验的串联质谱技术，能在2~3 min内对1个标本进行几十种代谢产物分析，通过对这些产物的分析,可以对40种左右遗传性代谢病(包括氨基酸代谢紊乱、有机酸代谢紊乱和脂肪酸代谢紊乱性疾病)进行筛查和诊断。
2004年12月美国食品药品管理局（FDA）专门制订了“用串联质谱法分析新生儿氨基酸,游离肉毒碱和酰基肉碱筛选检测系统”的指导性文件。
串联质谱技术不仅实现了“一项实验检测一种疾病”向“一项实验检测多种疾病”的转变，提高了检测的效率,同时使筛查过程中常见的假阳性或者假阴性的发生率显著降低,使新生儿疾病筛查在内容和质量上都提高到一个新的水平。
串联质谱在临床遗传性代谢病高危患儿选择性筛查方面也发挥着重要作用，上海第二医科大学附属新华医院新生儿筛查中心检测了1000多例全国各地送检的遗传性代谢病高危标本，发现阳性标本达9% ~10%，在22700例新生儿中筛查出阳性病例6例。
上海市新生儿遗传代谢病筛查技术规范(2024年版)
上海市新生儿遗传代谢病筛查技术规范（2024版）一、遗传代谢病的定义遗传代谢病是由于基因改变导致代谢途径中相关酶或蛋白功能下降或缺乏，引起某些特异代谢物增高或降低，造成机体损伤的一大类疾病，可通过检测这些特异代谢物，筛查或协助诊断相关疾病。
二、新生儿遗传代谢病筛查新生儿遗传代谢病筛查是指在新生儿群体中，通过采集其血液对一些严重危害儿童身心健康的先天性、遗传代谢病进行检测，以期在临床症状出现前或发病早期及时给予治疗，避免或减轻患儿机体各系统受到不可逆的损害。
本市确定对先天性甲状腺功能减低症（CH）、苯丙酮尿症（PKU）、先天性肾上腺皮质增生症（CAH）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症（G6PD）、甲基丙二酸血症（MMA）、原发性肉碱缺乏症（PCD）、希特林蛋白缺乏症（NICCD）、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（MCADD）、丙酸血症（PA）、异戊酸血症（IVA）、戊二酸血症-Ⅰ型（GA-Ⅰ）、枫糖尿病（MSUD）、极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（VLCADD）、瓜氨酸血症Ⅰ型（CITⅠ）和同型半胱氨酸血症Ⅰ型（HCYⅠ）等15种疾病开展全市性筛查。
三、血片采集（一）机构设置本市开展的新生儿遗传代谢病筛查采血工作由本市各级各类经批准开展助产技术服务以及接受新生儿转诊的医疗机构承担。
（二）人员要求必须具有与医学相关的中专以上学历，并从事医学临床工作2年以上，同时接受过相关知识和技能的培训并取得合格证书。
培训内容包括新生儿遗传代谢病筛查的目的、原则、方法以及网络运转，血片采集、保存、递送相关知识，相关信息和档案管理等内容。
（三）血片采集步骤1.血片采集人员清洗双手并佩戴无菌、无滑石粉的手套。
2.按摩或热敷新生儿足跟，选择足跟内侧或外侧缘并用75%乙醇消毒皮肤。
3.待乙醇完全挥发后，使用一次性采血针针刺消毒部位，深度小于2毫米，挤压局部使流出的血液呈“水滴”状，用干棉球拭去第1滴血，从第2滴血开始留取标本。
4.将滤纸片接触血滴，切勿触及足跟皮肤，使血液自然渗透至滤纸背面，避免重复滴血，根据筛查病种，至少采集5个血斑。
串联质谱技术在新生儿遗传代谢病筛查诊治中的应用分析
JOURNAL OF HEZE MEDICAL COLLEGE第33卷第2期VOL.33NO.2菏泽医学专科学校学报2021年2021DOI:10.3969/j.issn.1008-4118.2021.02.020串联质谱技术在新生儿遗传代谢病筛查诊治中的应用分析王庆华（菏泽市妇幼保健院，山东菏泽274000）摘要：目的探讨串联质谱技术在新生儿遗传代谢病筛查诊断中的应用价值，了解本市新生儿遗传代谢病的发病率。
方法收集菏泽市2015年5月—2020年12月出生的266609例新生儿的足跟血，应用串联质谱技术检测、分析氨基酸及酰基肉碱等指标，结合尿有机酸分析、基因二代测序等检查。
结果确诊新生儿遗传代谢病236例，发病率为1/1130。
共筛查出14种疾病，包括5种氨基酸类遗传代谢病91例，4种有机酸类遗传代谢病120例，5种脂肪酸类遗传代谢病25例，其中单病种以有机酸代谢障碍所致的甲基丙二酸血症（MMA ）发病率最高（共106例，发病率为1/2515），由氨基酸代谢障碍导致的高苯丙氨酸血症（HPA ）次之（共74例，发病率为1/3603）。
结论串联质谱技术是筛查诊断新生儿遗传代谢病的特异性检测手段，有效提高了本市新生儿遗传代谢病的诊治和预防水平，推动了本市新生儿遗传代谢病筛查的发展。
关键词：串联质谱技术；遗传代谢病筛查；干血滤纸片中图分类号：R722.11文献标识码：A文章编号：1008-4118（2021）02-0050-03Application analysis of tandem mass spectrometry in screening and diagnosis of neonatal genetic andmetabolic diseases WANG Qinghua(The Maternal and Child Health Hospital of Heze,Heze 274000,Shandong)Abstract ：Objective To explore the application value of tandem mass spectrometry in screening and diagnosis of newborn genetic and metabolic diseases and understand the incidence of neonatal genetic and metabolic disease in this city.Methods Heel blood of 266609newborns in Heze were collected from May 2015to December 2020.The amino acids and acyl carnitine were detected and analyzed by tandem mass spectrometry combined with urine organic acid analysis and gene second generation sequencing.Results A total of 236newborns were diagnosed with genetic and metabolic disease,with a total incidence rate of 1in 1130.A total of 14diseases were identified,including 91cases with genetic and metabol⁃ic diseases of 5kinds of amino acids,120cases with genetic and metabolic diseases of 4kinds of organic acids,?and 25cas⁃es with genetic and metabolic diseases of 5kinds of fatty acids.Methylmalonic acidemia (MMA)caused by metabolic dis⁃order of organic acids was the highest single disease (106cases in total,the incidence was 1/2515).Hyperphenylalaninemia (HPA)due to impaired amino acid metabolism was the next most common (74cases,incidence 1in 3603).Conclusions Tandem mass spectrometry technology is a specific detection method for screening and diagnosing genetic and metabolic diseases of newborns,which effectively improves the diagnosis,treatment and prevention of genetic and metabolic diseases of newborns in this city and promotes the development of screening for genetic and metabolic diseases of newborns in this city.Key words:Blood tandem mass spectrometry;Genetic and metabolic disease screening;Dry blood filter paper50JOURNAL OF HEZE MEDICAL COLLEGE第33卷第2期VOL.33NO.2菏泽医学专科学校学报2021年2021遗传代谢病(inherited metabolic diseases ,IMD)是由于遗传物质发生改变，导致体内产生异常生化代谢物的一大类疾病，大多数为常染色体隐性遗传病，临床表现复杂多样，缺乏特异性，极易漏诊或误诊[1]。
串联质谱技术选择性筛查遗传代谢病高危患儿552例初步分析
参考内容
液相串联质谱筛查高危儿和新生儿重症监护室患儿遗传代谢病的应用价值研究
引言
遗传代谢病是一种由基因突变引起的代谢性疾病，严重影响着新生儿的健康。 早期诊断和治疗对于改善患儿的预后具有重要意义。液相串联质谱（LCMS/MS）是一种灵敏度极高、特异性强的技术，已被广泛应用于遗传代谢病的 筛查。本次演示旨在探讨液相串联质谱筛查高危儿和新生儿重症监护室患儿遗 传代谢病的应用价值。
此外，随着精准医学和个体化治疗的发展，串联质谱技术在遗传代谢病高危患 儿筛查中的应用将更加广泛。未来可以结合其他检测方法和技术，如基因测序、 蛋白质组学等，实现多层次、全方位的疾病筛查和诊断，为患儿提供更加精准 和个性化的治疗方案。
综上所述，串联质谱技术在遗传代谢病高危患儿筛查中具有巨大的潜力和广阔 的前景。我们期待该技术在未来能够为更多患儿带来福音，为人类健康事业做 出更大的贡献。
研究现状
近年来，国内外学者针对液相串联质谱筛查遗传代谢病进行了大量研究。该技 术通过测定血液、尿液等样本中异常代谢产物的浓度，为早期诊断遗传代谢病 提供了可能。目前，已发现的遗传代谢病种类繁多，发病率为0.1%～0.5%。 常见的遗传代谢病包括氨基酸代谢异常、脂肪酸代谢异常、碳水化合物代谢异 常等。
串联质谱技术选择性筛查遗传 代谢病高危患儿552例初步分
析
目录
01 一、串联质谱技术与 遗传代谢病筛查遗传代谢病高危患儿 筛查中的应用
04 参考内容
串联质谱技术（LC-MS-MS）是一种先进的分析技术，可以对目标化合物进行 物理分离并监测其质量。近年来，该技术已被广泛应用于不同基质中的小分子 和大蛋白质分子的分析，如蛋白质组的定量、活性药物成分中遗传毒性杂质的 定量、生物液体中药物代谢物的定量、食品原料和膳食补充剂中掺杂物的检测 等。本次演示将探讨串联质谱技术在遗传代谢病高危患儿筛查中的应用。
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非衍生化串联质谱技术筛查上海部分地区新生儿遗传代谢病的回顾性分析田国力;王燕敏;许洪平;周卓;郭静;姚静【摘要】目的回顾性分析用串联质谱技术筛查新生儿遗传代谢病的可行性和新生儿遗传代谢病的发病率.方法用非衍生化串联质谱技术检测2010年至2016年上海部分地区126 579例新生儿滤纸干血片上11种氨基酸、游离肉碱和30种酰基肉碱,对新生儿进行氨基酸代谢异常、有机酸代谢异常和脂肪酸氧化代谢异常三大类疾病筛查.结果 126 579例新生儿中确诊遗传代谢病26例,包括氨基酸代谢异常13例、有机酸代谢异常7例和脂肪酸氧化代谢异常6例,总发病率为1∶4 869;另确诊2例母源性原发性肉碱缺乏症和1例母源性3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症.结论非衍生化串联质谱技术可有效用于新生儿遗传代谢病的筛查和诊断,还可对无症状母亲作出诊断.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)012【总页数】4页(P909-912)【关键词】串联质谱;非衍生化;新生儿筛查;遗传代谢病【作者】田国力;王燕敏;许洪平;周卓;郭静;姚静【作者单位】上海市儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海市儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海市儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海市儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海市儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海市儿童医院新生儿筛查中心,上海200040【正文语种】中文【中图分类】R446串联质谱分析技术(tandem mass spectrometry, MSMS)应用于新生儿遗传代谢病筛查，通过分析干血滤纸片上氨基酸谱和酰基肉碱谱，可同时检测氨基酸代谢异常、有机酸代谢异常和脂肪酸氧化障碍等，扩大了新生儿筛查的疾病谱，实现了一次检测多种疾病[1-2]。
本新生儿筛查中心于2010年率先在国内引进非衍生化串联质谱技术，对上海部分地区新生儿进行遗传代谢病筛查。
现对2010年12月至2016年9月筛查新生儿遗传代谢病的结果作一回顾性分析如下。
1.1 样本滤纸干血片。
选取2010年12月至2016年9月出生于上海长宁区、普陀区、浦东新区等接产医院新生儿，在新生儿父母知情同意的前提下，用MSMS 筛查新生儿遗传代谢病。
新生儿出生72 h后针刺足跟，采集微量血滴于Scheicher and Schuell 903滤纸上，室温下自然晾干，形成滤纸干血片标本，经专用冷链通道递送至上海市儿童医院新生儿筛查中心检测，共计筛查126 579例新生儿。
1.2 主要仪器与试剂 Quatto micro串联质谱仪、1525u高效液相仪、2777自动进样系统(美国Waters公司)；iEMS孵育震荡仪(芬兰雷勃公司)；流动相和萃取溶液试剂包(美国PerkinElmer公司)，含甲醇、水和草酸；非衍生化串联质谱试剂盒(美国PerkinElmer公司)，包含11种稳定同位素标记的氨基酸标准品和13种稳定同位素标记的游离肉碱和酰基肉碱标准品。
氨基酸内标分别为2H4-丙氨酸(2H4-Alanine, 2H4-Ala)、2H4,13C-精氨酸(2H4,13C-Arginine，2H4,13C-Arg)、2H2-瓜氨酸(2H2-Citrulline，2H2-Cit)、15N,2-13C-甘氨酸(15N,2-13C-Glycine，15N,2-13C-Gly)、 2H3-亮氨酸(2H3-Leucine，2H3-Leu)、2H3-甲硫氨酸酸(2H3-Methionine, 2H3-Met)、2H6-鸟氨酸(2H6-Ornithine, 2H6-Orn)、13C5-脯氨酸(13C5-Proline，13C5-Pro)、13C6-苯丙氨酸(13C6-Phenylalanine, 13C6-Phe)、13C6-酪氨酸(13C6-Tyrosine, 13C6-Tyr)、2H8-缬氨酸(2H8-Valine, 2H8-Val)，可对丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、瓜氨酸(Cit)、甘氨酸(Gly)、亮氨酸_异亮氨酸_羟脯氨酸(Leu_Isoleucine_Hydroproline,Leu_IIe_ProOH)、甲硫氨酸(Met)、鸟氨酸(Orn)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)和缬氨酸(Val)共11种氨基酸进行定量。
游离肉碱和酰基肉碱的标准品分别为2H9-游离肉碱(2H9-carnitine,2H9-C0)、2H3-乙酰基肉碱(2H3-acetylcarnitine,2H3-C2)、2H3-丙酰基肉碱(2H3-propionylcarnitine, 2H3-C3)、2H3-丁酰基肉碱(2H3-butyrylcarnitine, 2H3-C4)、2H9-异戊酰基肉碱(2H9-isovalerylcarnitine,2H9-C5)、2H6-戊二酰基肉碱(2H6- glutarylcarnitine,2H6-C5DC)、2H3-己酰基肉碱(2H3-hexanoylcarnitine,2H3-C6)、2H3-辛酰基肉碱(2H3-octanoylcarnitine,2H3-C8)、2H3-葵酰基肉碱(2H3-decanoylcarnitine,2H3-C10)、2H3-月桂酰基肉碱( 2H3-lauroylcarnitine, 2H3-C12)、2H3-肉豆蔻酰基肉碱(2H3-myristoylcarnitine,2H3-C14)、2H3- 棕榈酰基肉碱(2H3-palmitoylcarnitine,2H3-C16)、2H3-十八碳酰基肉碱(2H3-octadecanoylcarnitine,2H3-C18)，可对C0、C2、C3、丙二酰肉碱_3-羟基丁酰肉碱(malonylcarnitine_3-hydroxybutyrylcarnitine, C3DC_C4OH)、C4、丁二酰肉碱_3-羟基异戊酰肉碱(methylmalonyl_3-hydroxyisovalerylcarnitine,C4DC_ C5OH)、C5、异戊烯酰肉碱(tiglylcarnitine, C5:1)、C5DC_3-羟基己酰肉碱(C5DC_3-hydroxyhexanoylcarnitine,C5DC_C6OH)、C6、己二酰肉碱(adipylcarnitine ,C6DC)、C8、辛烯酰肉碱(octylenoylcarnitine, C8:1)、C10、葵烯酰肉碱(decenoylcarnitine, C10:1)、葵二烯酰肉碱(decadienoylcarnitine,C10:2)、C12、月桂烯酰肉碱(dodecenoylcarnitine,C12:1)、C14、肉豆蔻烯酰肉碱(tetradecenoylcarnitine，C14:1)、肉豆蔻二烯酰肉碱(tetradecadienoylcarnitine， C14:2)、3-羟基肉豆蔻酰肉碱(3-hydroxyl-tetradecanoylcarnitine，C14OH)、C16、棕榈烯酰肉碱(hexadecenoyl carnitine，C16:1)、3-羟基棕榈酰肉碱(3-hydroxypalmitoylcarnitine，C16OH)、3-羟基棕榈烯酰肉碱(3-hydroxypalmitoleylcarnitine C16:1OH)、C18、十八碳烯酰肉碱(oleylcarnitine,C18:1)、十八碳二烯酰肉碱(linoleylcarnitine,C18:2)、3-羟基十八碳酰肉碱(3-hydroxystearoylcarnitine， C18OH)，3-羟基十八碳烯酰肉碱3-hydroxyoleylcarnitine，C18:1OH)共30种酰基肉碱定量检测。
因Leu_IIe_ProOH、C3DC_C4OH、C4DC_ C5OH、C5DC_C6OH为同分异构体，故串联质谱检测无法区分。
1.3 方法1.3.1 实验原理与步骤用包含稳定同位素标记的氨基酸和酰基肉碱内标准品的溶剂萃取滤纸干血片中的氨基酸、游离肉碱和酰基肉碱，然后用MSMS系统分析。
质谱将被测物质分子电离成各种质荷比(m/z)不同的带电粒子。
这些带电粒子按照m/z大小在空间或时间上产生分离，形成质谱图谱。
通过测定每个待测物与其对应的同位素内标的离子峰强度，由已知水平的内标，即可自动计算出所测样本的氨基酸、游离肉碱和酰基肉碱水平。
具体步骤如下：用1 mL萃取液溶解内标干粉制成储备工作液，于2～8 ℃保存待用。
标本处理时，按萃取液与内标液110∶1的比例配制萃取工作液，用直径3 mm打孔器取样滤纸血片，置于96孔板中，每孔加入含氨基酸和酰基肉碱同位素内标工作液每孔100 μL，45 ℃密封孵育震荡(650～750 r/min)45 min，提取75 μL萃取液转移至V型底检测板内，铝膜覆盖，放置在自动进样器上等待上机检测。
1.3.2 仪器设置流动相采用80%甲醇，四元泵流速设置为变速，即0～0.23 min，0.116 mL/min；0.24～1.35 min，0.016 mL/min；1.36～1.5 min，0.6mL/min；1.6～0 min，0.116 mL/min。
用电喷雾阳离子扫描，多反应监测(multiple reaction monitor，MRM)模式收集数据。
每份样本测定时间为1.5 min，进样量为30 μL。
用Masslynx V4.0软件(美国Waters公司)处理数据，软件换算直接得出42个指标的浓度和相应的比值。
1.4 判断标准以人群指标浓度分布的0.1%～99.9%作为参考值[3]，同一指标二次结果均显著超过参考值，判为筛查阳性者立即召回。
对筛查阳性病例按提示疾病种类选择性进行血常规、血气分析、血糖、血氨、乳酸、血同型半胱氨酸、尿有机酸分析、血氨基酸分析和基因分析等，明确诊断。
对C0和C4DC_ C5OH等指标异常的筛查阳性病例，同时对其母亲进行检测，排除因母亲疾病引起的异常。
1.5 统计学分析用Excel 2010以及SPSS 19.0软件进行，以P<0.05为差异有统计学意义。
2.1 新生儿筛查总体结果共筛查126 579例(男68 605，女57 974)新生儿，平均年龄5 d(范围3～55 d)，平均体重3 359 g(范围1 350～5 400 g)，母亲平均孕周为39 周(范围30～44周)。
初筛阳性1 012例，阳性率0.8%(1 012/126 579)，召回798例，其中26例确诊为遗传代谢病，阳性预测值为3.3%(26/798)，未发现漏诊病例。
结果见表1。