高效液相荧光检测法测定柑橘中5-甲基四氢叶酸的含量
高效液相色谱法在多种维生素药物检测中的应用
高效液相色谱法在多种维生素药物检测中的应用摘要目的：采用高效液相色谱法测定药物中多种维生素的含量。
方法：利用迪马C18色谱柱（250mm*4.6mm），以乙腈-甲醇-水（16:4:80）为流动相测定软胶囊药物中多种维生素的含量。
结论：该方法简便、准确、灵敏、重复性好，可作为该药质量控制方法。
关键词：高效液相色谱法，多种维生素，含量测定高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
高效液相色谱法是目前在国外使用最普遍的测定维生素的方法，应用范围很广，灵敏度也高，具有样品前处理简单，样品用量少，分离速度快，可一次性分析多种维生素等优点。
1材料与试药1.1仪器分析天平（型号BP211D），由Sartorius生产高效液相色谱仪（型号LC-10ATvp），由日本岛津生产紫外-可见检测器（型号SPD-10A），由日本岛津生产色谱工作站（CS-Light），由日本岛津生产。
1.2试药多种维生素软胶囊样品，自制烟酰胺对照品试剂，由中国食品药品检定研究院生产维生素B1对照品试剂，由中国食品药品检定研究院生产维生素B2对照品试剂，由中国食品药品检定研究院生产维生素B6对照品试剂，由中国食品药品检定研究院生产。
2试验方法2.1色谱条件的优化①高效液相色谱法同时测定配方乳粉中7种脂溶性维生素，建立了高效液相色谱法（HPLC）同时测定配方乳粉中7种脂溶性维生素A、D2、E、K、叶黄素和胡萝卜素的方法，方法采用Poroshelll20SB-C18柱（150×4.6mm，2.7μm），以甲醇、乙腈、氯仿为流动相进行梯度洗脱，流速0.6Ml/min，25min内可对上述7种组分进行基线分离[1]；②利用高效液相色谱法同时测定食品中9种水溶性维生素，采用C18色谱柱进行分离，以pH2.5、25mmol/LKH2PO4-乙腈二元体系为流动相进行梯度洗脱，最后用高效液相色谱二极管阵列检测器对9种维生素进行测定[2]；③利用反相高效液相色谱法同时测定食品和多维片中8种水溶性维生素，建立了以0.05mol/LKH2PO4-甲醇为流动相的梯度洗脱反相高效液相色谱同时测定水溶性维生素C、B1、B2、B6、B12、烟酸、烟酰胺和叶酸的分析方法[3]；④复方卵磷脂多种维生素胶丸中烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6、采用反相高效液相色谱法，色谱柱为汉邦C18色谱柱（250mm*4.6mm），流动相为：乙腈-甲醇-水（16:4:80），水中含2.5mmol/L庚烷磺酸钠和0.12%三乙胺（磷酸调节至pH2.5），流速1.5ml/min，柱温20℃，检测波长为273nm[4]。
温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留
DOI :10.11895/j.issn.0253-3820.140200温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留张耀海1,3 张雪莲2 赵其阳1,3 陈卫军1,3 王成秋1,3陈爱华1,3 焦必宁*1,31(农业部柑桔产品质量安全风险评估实验室(重庆),西南大学柑桔研究所,重庆400712)2(襄阳市林业科学技术推广站,襄阳441021)3(农业部柑桔及苗木质量监督检验测试中心,重庆400712)摘 要 建立了QuEChERS-温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法快速检测脐橙中5种染色剂残留的分析方法㊂QuEChERS 前处理步骤:样品用乙腈快速提取,NaCl 和无水MgSO 4除水后,经N -丙基乙二胺净化㊂温控离子液体分散液液微萃取步骤:QuEChERS 前处理的净化液(1mL)为分散剂,1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐离子液体(60μL)为萃取剂,55℃水浴12min,将目标物富集㊂用高效液相色谱-紫外检测器分析,检出样品用超高效液相色谱-串联质谱确证㊂在0.01和0.05mg /kg 的添加水平下,5种染色剂的平均回收率为70.3%~93.6%,相对标准偏差为3.5%~9.2%,定量限为1.1~2.8μg /kg㊂关键词 QuEChERS;分散液液微萃取;离子液体;高效液相色谱;染色剂2014-05-18收稿;2014-06-19接受本文系农业部现代农业(柑桔)产业技术体系建设专项(No.CARS-27)㊁重庆市自然科学基金(Nos.cstc2013jjB80009,cstc2013jcyjA0435)和中央高校基本科研业务费(No.XDJK2012C059)资助项目*E-mail:jiaobining@1 引 言柑橘红2号和苏丹红(分为1㊁2㊁3㊁4号)均属于常见的人工合成色素(分子结构见图1)㊂毒理学研究表明,柑橘红2号有潜在的致癌危险[1],而苏丹红1㊁2㊁3㊁4号均具有致突变性和致癌性,苏丹红1号还可能造成肝脏细胞的DNA 突变㊂各国对人工合成色素在食品中允许使用的品种㊁范围和添加量做了严格的规定㊂多数国家禁止将苏丹红用于食品生产;美国食品药品管理局(FDA)明确规定,柑橘红2号仅限用于鲜食早熟甜橙的果皮增色,全果中最大残留量不得超过2mg /kg;我国GB 2760-2011‘食品添加剂使用标准“明确规定,柑橘红2号和苏丹红在食品中不允许使用㊂图1 5种染色剂的分子结构式Fig.1 Structure of 5dyes2004年广东和香港等地水果市场相继发现 染色橙 ,含有柑橘红2号㊂2013年部分市场出现 染色脐橙 ,检测出苏丹红2号㊂近年,政府相关部门加大了食品中柑橘红2号和苏丹红等染色剂的监测第42卷2014年10月分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry第10期1434~1440力度㊂目前,果蔬(以橙㊁辣椒和番茄为主)中柑橘红2号和苏丹红等染色剂,其检测方法主要包括高效液相色谱法(二极管阵列检测器(HPLC-DAD)[2~6]和紫外检测器(HPLC-UV)[7])和液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS /MS[8~10])等,但柑橘红2号和苏丹红同时测定的报道较少㊂而样品前处理方法多为繁琐㊁耗时㊁成本较高的液液萃取(LLE)[3,6,7]和固相萃取(SPE)技术[2,4,8~10]㊂近年来,样品前处理方法正朝着简单化㊁节约化和微型化发展㊂2003年,Anastassiades 等首次提出QuEChERS 前处理方法,与传统的SPE 相比,该方法快速㊁简单㊁廉价㊁可靠,已经广泛应用于果蔬中的农药残留分析[11~13]㊂但QuEChERS 方法存在富集效率低等缺陷㊂2006年,Rezaee 等首次提出分散液液微萃取(CDLLME)技术,该技术操作简单㊁快速㊁成本低㊁富集效率高㊁有机溶剂用量少[14]㊂传统的DLLME 使用高毒性的卤代烃作为萃取剂,存在一定的环境污染㊂同卤代烃相比,离子液体具有低蒸气压㊁良好的热稳定性㊁可调的理化性质等优点,因此基于离子液体的DLLME 技术已经被逐渐应用于污染物的分析检测[15,16]㊂但该方法仍存在净化能力差等缺陷,主要用于简单基质(以水体为主),在果蔬上的应用相对较少㊂2009年,研究者将两种前处理方法结合起来,形成了QuEChERS-DLLME 联用技术,既具有QuEChERS 的快速提取㊁净化等优点,也发挥了DLLME 的高效富集能力,并逐渐应用到果蔬中污染物的分析检测[17,18],但目前没有染色剂的研究报道㊂本研究采用QuEChERS-温控离子液体DLLME 法提取和净化样品,对离子液体的类型和用量㊁水浴时间和温度等条件进行了优化,结合HPLC-UV 技术检测脐橙中多种染色剂残留㊂本方法简便㊁快速㊁安全㊁价格低廉,重现性良好,能够满足脐橙中5种染色剂残留同时快速检测和确证的要求,并为制定染色剂在柑桔中的最大残留限量提供参考和依据㊂2 实验部分2.1 仪器、试剂与样品Agilent 1200液相色谱仪(美国Agilent 公司),配有紫外检测器;Quatrro-Premier XE 超高效液相色谱-串联质谱(美国Waters 公司),配有Acquity UPLC BEH C 18柱;Milli-Q A10超纯水器(美国Millipore 公司);CL31R 离心机(美国ThermoFisher 公司);GENIUS 3涡旋搅拌器(德国IKA 公司)㊂苏丹红1号(纯度>90.5%)㊁苏丹红2号(纯度>87%)㊁苏丹红3号(纯度>96%)和苏丹红4号(纯度>94%),均购于德国Dr.Ehrenstorfer 公司;柑橘红2号(纯度>90%)㊁1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C 8MIM][PF 6],纯度>98%)㊁1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C 4MIM][PF 6],纯度>98%)和1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C 6MIM][PF 6],纯度>98%),均购于上海安谱科学仪器有限公司;丙酮(色谱纯,成都市科龙化工试剂厂);乙腈(色谱纯)㊁甲醇(色谱纯)和N -丙基乙二胺(PSA,40~63μm,6nm),购于德国CNW Technologies GmbH 公司;NaCl 和无水MgSO 4(分析纯,国药集团化学试剂有限公司,140℃烘烤4h)㊂脐橙样品购于当地超市㊂2.2 实验方法2.2.1 液相色谱条件 Agilent C 18液相色谱柱(150mmˑ4.6mm,5μm);流动相A 为水,B 为乙腈;梯度洗脱程序:0~6min,60%~98%B;6~15min,98%B;15~20min,98%~60%B;20~25min,60%B㊂流速为1.0mL /min;进样量为10μL;柱温为35℃㊂2.2.2 超高效液相色谱-串联质谱条件 条件参考文献[9]㊂采用电喷雾离子源,正离子(ESI+)采集模式,多反应监测模式下检测㊂毛细管电压3.0kV,离子源温度120℃,脱溶剂气温度为350℃,雾化气流速700/h,锥孔气流速50L /h㊂2.2.3 标准溶液的配制 (1)标准工作液 准确称取10.00mg(精确至0.01mg)5种染色剂标准品,分别用甲醇溶解并定容至100.00mL,配成100mg /L 标准溶液,于-50℃避光保存㊂使用时用甲醇逐级稀释至所需浓度㊂(2)基质空白标准溶液 分别准确吸取100μL 10mg /L 标准工作液,用样品空白提取液稀释,配成100μg /L 基质空白标准溶液㊂此溶液应现用现配㊂本实验采用单点定量法测定㊂2.2.4 样品前处理方法 样品的取样参考相关标准[19]㊂用干净纱布轻轻擦去柑桔样品表面附着物,5341第10期张耀海等:QuEChERS-温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留采用对角线分割法,取对角部分,将其切碎㊁混匀,放入食品加工器中彻底粉碎,制成待测样,放入分装容器中备用㊂QuEChERS前处理步骤:准确称取样品10.0g,置于50mL离心管中,向其加入10.00mL乙腈,振荡30min;加入4.0g无水MgSO4和1.0g NaCl,振荡1min,离心5min(4000r/min);取2.00mL,转入已加有50mg PSA和150mg无水MgSO4的4mL离心管中,振荡1min,离心5min(4000r/min);取1.00mL上清液作为DLLME步骤的分散剂㊂温控离子液体DLLME步骤:将60μL1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐和上述1.00mL分散剂混合液涡旋1min,快速注入5.00mL去离子水,于55℃水浴12min,冰水浴10min,形成乳浊液,离心5min (4000r/min),取30μL离心管底部的萃取剂于进样瓶的内插管中,用30μL甲醇稀释,待测㊂加标实验:加标水平为0.01和0.05mg/kg两个水平,分别向10.0g空白样品中加入100μL的1和5mg/L标准溶液,混匀备用㊂前处理如上㊂脐橙染色实验:常温下,空白脐橙样品分别在不同浓度染色剂(250和500mg/kg)中浸泡,每次浸果时间为1min,浸果1次,捞起自然晾干药液,置于室内常温7天,每一处理重复3次,前处理如上㊂3 结果与分析3.1 仪器条件的优化柑橘红2号和苏丹红均为中等极性化合物,在C18色谱柱有较好的保留,因此本实验选常用的C18液相色谱柱㊂由于乙腈的粘度小于甲醇,因此流动相采用乙腈-水体系,并梯度淋洗,优化后的标准色谱图见图2㊂5种物质在14min内达到基线分离㊂3.2 样品前处理的条件优化3.2.1 离子液体的类型和用量在分散液液微萃取中,萃取剂和分散剂的类型和用量是影响萃取效率的重要因素㊂而QuEChERS-DLLME联用技术中,通常采用乙腈提取液作为分散剂,因此只需考虑萃取剂的类型和用量㊂本研究选择3种离子液体:[C8MIM][PF6]㊁[C4MIM][PF6]和[C6MIM][PF6],考察它们对染色剂的萃取效果㊂结果表明,[C8MIM][PF6]的萃取效果最好,故选其为萃取剂㊂分别选取40㊁50㊁60㊁70和80μL的[C8MIM][PF6],考察其用量对染色剂回收率的影响(图3)㊂结果显示:随着萃取剂用量的增大,5种染色剂的回收率均增大,但富集倍数也随之降低;当用量为60μL时,回收率最佳;用量高于60μL时,回收率有下降的趋势㊂因此选用60μL萃取剂㊂图2 5种染色剂标准溶液的色谱图(浓度为0.5mg/L) Fig.2 HPLC of5dyes standards at0.5mg/L1.Citrus red2;2.Sudan1;3.Sudan2;4.Sudan3;5.Sudan4.图3 萃取剂用量对染色剂回收率的影响Fig.3 Effect of extraction dosage on recoveries脐橙空白添加0.05mg/kg,水浴温度为60℃,水浴时间为12min㊂Spiked navel orange at0.05mg/kg,60℃water-bath for12min.3.2.2 水浴温度温控离子液体-分散液液微萃取技术是在一定温度下将离子液体融入水体中,然后在低温条件下将离子液体冷凝析出,达到富集目标化合物的目的[15]㊂当温度较低时,离子液体不能很好地分散在水相中;当温度过高时,分析物可能部分挥发,导致萃取效率降低㊂分别选取40,45,50,55 6341分析化学第42卷和60℃的水浴温度,考察其对染色剂回收率的影响(图4)㊂结果表明,随着温度升高,5种染色剂的回收率均有提高,当温度为55℃时,回收率最佳;温度高于55℃时,回收率开始降低㊂因此水浴温度选用55℃㊂3.2.3 水浴时间 固定水浴温度为55℃,选取4,8,12,16和20min 的水浴时间,考察其对染色剂回收率的影响(图5)㊂结果表明,随着水浴时间延长,5种染色剂的回收率均有提高,当时间为12min 时,回收率最佳;时间超过12min 时,回收率明显降低㊂因此水浴时间选用12min㊂图4 水浴温度对染色剂回收率的影响Fig.4 Effect of water-bath temperature on the recoveries脐橙空白添加0.05mg /kg,萃取剂用量为60μL㊂Spiked navel orange at 0.05mg /kg,60μL of extractionsolvent.图5 水浴时间对染色剂回收率的影响Fig.5 Effect of water-bath time on the recoveries脐橙空白添加0.05mg /kg,萃取剂用量为60μL,水浴温度为55℃㊂Spiked navel orange at 0.05mg /kg,60μL of extraction solvent and 55℃of water-bath temperature.3.3 其它条件进一步考察了超声辅助㊁盐效应㊁冰浴时间和离心时间对萃取效率的影响㊂超声辅助的引入,会带来更多的基质干扰,本实验不采用超声;加入盐后会导致回收率明显降低,本实验不加入盐;冰浴时间和离心时间能影响沉淀相的体积,过短或过长的冰浴时间及离心时间都会影响萃取效率㊂本研究采用文献中较常用时间:冰浴10min,4000r /min 离心5min㊂3.3 方法评价在优化的实验条件下,对系列浓度标准溶液进行检测,结果见表1㊂柑橘红2号和苏丹红4号在图6 经QuEChERS-DLLME 方法处理后,脐橙样品的色谱图(a)0.05mg /kg 水平加标;(b)0.05mg /L 标准溶液;(c)空白基质Fig.6 Chromatograms of (a)a spiked navel orange at 0.05mg /kgafterQuEChERS-dispersiveliquid-liquidmicroextraction (DLLME ),(b )a standard mixture at0.05mg /Land (c)a blank navel orange1.Citrus red 2;2.Sudan 1;3.Sudan 2;4.Sudan 3;5.Sudan 4.10~5000μg /L 范围内呈现较好的线性关系,苏丹红1㊁2和3号在5~5000μg /L 范围内呈现较好的线性关系,相关系数均达到0.999以上㊂仪器的检出限(S /N =3)在5~10μg /L 之间,定量限(S /N =10)在10~20μg /L 之间㊂保留时间和峰面积的日内偏差分别为0.8%~1.6%和1.2%~3.2%;日间偏差分别为1.6%~2.7%和3.8%~6.6%㊂采用QuEChERS-DLLME 联用技术处理样品,富集倍数达7.1~9.4,净化效果良好,对目标物质无干扰(脐橙空白基质和0.05mg /kg 水平加标的图谱见图6)㊂用空白基质加标方法进行回收率和精密度实验㊂分别进行0.01和0.05mg /kg 水平的加标回收实验,以2.2.4节的方法对样品进行前处理,平行测定6次,计算回收率和相对标准偏差(表2)㊂结果表明:2种添加水平的回收率在70.3%~93.6%之间,相对标准偏差在3.5%~9.2%之间,本方法有较好的准确度和精密度,满足染色剂残留定量分析的要求㊂方法的检出限0.5~1.2μg /kg 之间,定量限在1.1~2.8μg /kg 之间㊂7341第10期张耀海等:QuEChERS-温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留表1 5种染色剂的线性范围㊁线性方程㊁检出限㊁定量限和富集倍数Table 1 Linearity range,linear equation,limit of detcetion (LOD),limit of quantification (LOQ)and enrichment factor of 5dyes染色剂Dyes 线性范围Linearity range (μg /L)线性方程Linear equation 相关系数Correlation coefficient (r 2)检出限LOD (μg /L)定量限LOQ (μg /L)富集倍数Enrichment factor 精密度Precision (%)日内偏差Intra-day(n =3)保留时间Retention time 峰面积Peak area 日间偏差Inter-day(n =3)保留时间Retention time 峰面积Peak area 柑橘红2号Citrus red 210~5000y =24.269x +0.15890.999910209.4 1.6 1.7 1.8 4.3苏丹红1号Sudan 15~5000y =31.117x +0.22740.99985108.9 1.8 1.2 2.1 5.9苏丹红2号Sudan 25~5000y =32.177x +0.06990.99995108.60.8 2.8 2.7 3.8苏丹红3号Sudan 35~5000y =50.397x +0.14410.99985107.90.9 2.1 1.6 6.6苏丹红4号Sudan 410~5000y =53.782x +0.25340.999810207.10.93.22.34.4表2 5种染色剂的平均回收率㊁相对标准偏差㊁检出限和定量限Table 2 Mean recovery,relative standard deviation (RSD),limit of detection (LOD)and limit of quantification (LOQ)of 5dyes染色剂Dyes添加水平Added (mg /kg)平均回收率Mean recovery (%)相对标准偏差RSD (%,n =6)检出限LOD (μg /kg)定量限LOQ (μg /kg)柑橘红2号Citrus red 2苏丹红1号Sudan 1苏丹红2号Sudan 2苏丹红3号Sudan 3苏丹红4号Sudan 40.0189.27.50.0593.6 4.30.0187.59.20.0589.27.00.0181.3 6.20.0585.5 3.90.0176.4 4.60.0579.1 3.50.0170.3 6.30.0571.04.71.02.10.5 1.10.6 1.20.6 1.31.22.83.4 实际样品测定市场抽取脐橙样品各20份,采用上述方法,检出1例疑似样品,并用UPLC-MS /MS 进行确证㊂图7为 图7 实际样品的色谱图Fig.7 Chromatogram of real sample检出柑橘红2号的脐橙样品色谱图(含量为0.14mg /kg),图8为该样品多反应监测模式下的色谱图㊂空白脐橙分别用250和500mg /kg 的染色剂药液浸泡后,室温下放置7天,最终残留测定结果见表3㊂在250mg /kg 下,果皮中染色剂含量范围为421.2~867.4μg /kg,果肉中为2.0~22.1μg /kg,全果中为101.6~198.8μg /kg;在500mg /kg 下,果皮中染色剂含量范围为604.4~1384μg /kg,果肉中为5.2~24.4μg /kg,全果中为156.4~370.7μg /kg㊂结果表明,浸泡后,染色剂可以通过果皮缓慢进入果肉内部,但含量较低;苏丹红3号和4号的渗透能力较强,超过10μg /kg;柑橘红2号㊁苏丹红1号和2号的渗透能力较低,低于10μg /kg;全果中柑橘红2号的最大含量低于FDA 规定的最大限量㊂8341 分析化学第42卷图8 多反应监测模式下实际样品的色谱图Fig.8 UPLC-MS /MS chromatogram of real sample using MRM modea.m /z 309.3>278.3;b.m /z 309.3>153.3.表3 脐橙染色后果皮㊁果肉和全果中染色剂残留的含量Table 3 Contents of dyes in peel,pulp and whole fruit of navel orange after dyeing treatment染色剂Dyes含量Contents (μg /kg)浸泡浓度Soaking concentration (250mg /kg)果皮Peel 果肉Pulp 全果Whole fruit浸泡浓度Soaking concentration (500mg /kg)果皮Peel 果肉Pulp 全果Whole fruit柑橘红2号Citrus red 2867.4 2.1198.81272 5.4347.7苏丹红1号Sudan 1818.0 2.2186.11384 5.2361.3苏丹红2号Sudan 2870.3 2.0195.81381 6.0370.7苏丹红3号Sudan 3421.214.0101.660417.1156.4苏丹红4号Sudan 4544.822.1134.171124.4194.6未检出(Not detected)㊂4 结 论运用改进的QuEChERS 和TA-IL-DLLME 联用前处理技术,结合高效液相色谱法,建立了脐橙中多种染色剂残留的检测方法㊂该方法操作简单㊁快速准确㊁灵敏度高㊁重现性良好,检测成本低廉;避免了有机溶剂的大量使用,减少对环境的污染,可作为一般实验室多种染色剂残留的常规检测方法㊂References1 FAO Nutrition Meetings Report Series No.46A WHO /FOODADD /70.36/World Health Organization and International Programme on Chemical Safety.[2012-03-01]. /documents /jecfa /jecmono /v46aje10.htm2 Hope C,Connors R.J.AOAC International ,1989,72(5):705-7073 CHEN Yu-Fang,LIN Hai-Dan,LI Wei-Peng,XIE Yu-Shan,ZOU Zhi-Fei.PTCA Part B :Chem.Anal.,2011,47(5):536-538陈毓芳,林海丹,李为鹏,谢玉珊,邹志飞.理化检测:化学分册,2011,47(5):536-5384 HU Li,ZHONG Ling-Li,GUO Ling-An,YANG Xiao-Feng,MAO Jian-Fei,LI Xi,FU Cheng-Ping,ZHAO Hong-Yang.J.Food Safety and Quality ,2013,4(5):1473-1477胡莉,仲伶俐,郭灵安,杨晓凤,毛建霏,李曦,付成平,赵泓洋.食品安全质量检测学报,2013,4(5):1473-14775 Sun S,Wang Y,Yu W Z,Zhao T Q,Gao S Q,Kang M Q,Zhang Y P,Zhang H Q,Yu Y.J.Sep.Sci.,2011,34(14):1730-17376 Daood H G,Biacs M A.J.Chromatogr.Sci.,2005,43(9):461-4657 Ertas E,Oezer H,Alasalvar C.Food Chem.,2007,105(2):756-7608 ZHANG Yun,LI Jin-Zhong,ZHENG Jing-Feng,LI Yao-Ping,LÜYuan-Yuan,ZHANG Xin-Ren,LI Xiao-Jie.Chinese J.b.,2012,31(12):78-81张云,李今中,郑敬峰,李耀平,吕园园,张信仁,李晓捷.分析试验室,2012,31(12):78-819341第10期张耀海等:QuEChERS-温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留0441分析化学第42卷9 HU Li,LEI Shao-Rong,GUO Ling-An.Chinese Journal of Chromatography,2012,30(8):832-835胡莉,雷绍荣,郭灵安.色谱,2012,30(8):832-83510 Han C,Liu B,Zhu Z O,Huang F Z,Chen X Z,Shen Yan.J.Food Sci.,2012,77(12):C1269-C127211 Anastassiades M,Lehotay S J,Stajnbaher D,Schenck F J.J.AOAC International,2003,86(2):412-43112 GUO Meng-Meng,WU Hai-Yan,LI Zhao-Xin,TAN Zhi-Jun,ZHAI Yu-Xiu.Chinese J.Anal.Chem.,2013,41(9): 1322-1327郭萌萌,吴海燕,李兆新,谭志军,翟毓秀.分析化学,2013,41(9):1322-132713 Lehotay S J,Kok A D,Hiemstra M,Bodegraven P V.J.AOAC International,2005,88(2):595-61414 Rezaee M,Assadi Y,Hosseini M R M,Aghaee E,Ahmadi F,Berijani S.J.Chromatogr.A,2006,1116(1-2):1-915 Zhou Q,Bai H,Xie G,Xiao J.J.Chromatogr.A,2008,1188(2):148-15316 Baghdadi M,Shemirani F.Anal.Chim.Acta,2008,613(1):56-6317 Zhao E,Zhao W,Han L,Jiang S,Zhou Z.J.Chromatogr.A,2007,1175(1):137-14018 Cunha S C,Fernandes J O.J.Chromatogr.A,2011,1218(43):7748-775719 GB/T8855-2008,Fresh Fruits and Vegetables-Sampling.National Standards of the People′s Republic of China新鲜水果和蔬菜-取样方法.中华人民共和国国家标准.GB/T8855-2008Analysis of5Dyes Residues in Navel Orange with Temperature-assisted Ionic Liquid Dispersive Liquid-liquid Microextractionand High Performance Liquid Chromatography DetectionZHANG Yao-Hai1,3,ZHANG Xue-Lian2,ZHAO Qi-Yang1,3,CHEN Wei-Jun1,3,WANG Cheng-Qiu1,3,CHEN Ai-Hua1,3,JIAO Bi-Ning*1,31(Citrus Research Institute,Southwest University/Laboratory of Citrus Quality and Safety Risk Assessment,Ministry of Agriculture,Chongqing400712,China)2(Extending Stations of Forestry Science and Technology,Xiangyang441021,China)3(Quality Supervision and Testing Centre for Citrus and Seedling,Ministry of Agriculture,Chongqing4007123,China) Abstract A fast method composed of the quick,easy,cheap,effective,rugged and safe(QuEChERS)and temperature-assisted ionic liquid dispersive liquid-liquid microextraction(TA-IL-DLLME)sample preparation coupled with high performance liquid chromatography(HPLC)for the analysis of5dyes residues in navel orange was developed.The QuEChERS sample preparation involved the quick extraction with acetonitrile in the presence of anhydrous MgSO4and NaCl and the purification with primary secondary amine(PSA) sorbent.The TA-IL-DLLME sample preparation was processed using1mL of the extract obtained by QuEChERS as dispersive solvent and60μL of1-octyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate as extractive solvent under55℃of water-bath temperature and12min of water-bath time.The ultimate solution was detected by HPLC-UV and the contaminated sample was further confirmed by UPLC-MS/MS under multiple reactions monitoring(MRM)mode.The recoveries of five dyes were in the range from70.3%to93.6%at two spike levels of0.01and0.05mg/kg,the relative standard deviations(RSDs)were between3.5%and 9.2%and the limits of quantification(LOQs)were between1.1and2.8μg/kg.Keywords Quick-easy-cheap-effective-rugged and safe method;Dispersive liquid-liquid microextraction; Ionic liquid;High performance liquid chromatography;Dyes(Received18May2014;accepted19June2014) This work was supported by the China Agriculture Research System(No.CARS-27),the Natural Science Foundation of Chongqing (Nos.cstc2013jjB80009,cstc2013jcyjA0435),and the Fundamental Research Fund for the Central Universities(No.XDJK2012C059).。
高效液相色谱法测定叶酸片中叶酸含量
（ ｈ ｒ ｃ ｕ ｉａ ｏ ｌ ｇ ， ｉ ｉ ｇ Ｍ ｅ ｉａ Ｕｎ ｖ ｒ ｉ Ｒｉｈ ｏ ２ ６ ２ Ｃｈ ｎ ） Ｐ ａ ｍａ ｅ ｔ ｌＣ ｌ ｅ Ｊ ｎ ｎ ｄ ｃ ｌ ｃ ｅ ｉｅ ｓｔ ｙ， ｚ ａ ７ ８ ６。 ｉ ａ
Ａｂｔａ ｔＯｂ ｅ ｔ ｅ Ｔｏｅ ｔｂｉｈａ Ｌ ｔｏ ｏ ｈ ｅｅ ｍｉａｉｎｏ ｌｉ Ａ ｉ ｎ Ｆ ｌ ｃｄ Ｔ ｂｅｓ ｓｒ ｃ ： ｊ ｅｉ ｖ ｓａ ｌ ｎ ＨＰ Ｃ ｍｅ ｈ ｄｆｒｔｅ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｆＦ １ ｃｄｉ ｏｉ Ａ ｉ ａ ｌｔ ． ｓ ｏ ０ｃ ｃ
（ Ｏ： ０ ６ ４ ）ｗｉ ｈ ｌｗ ａｅａ ． ／ ｎ． ｓ ｌ Ｔｈ ｉｅ ａ ｇ ｆ ｏｉ ｉ ｓ２ ． ８１ ／ －８ ． ２￣ ／ ｔ ｔｅｆ ｈ ｏ ｒｔ ｔ１ ０ｍｌｍｉ Ｒｅｕ ｔ ｓ ｅｌ ｒｒ ｎ ｅｏ ｌ Ａｃｄｗａ Ｏ Ｏ ｇ ｍｌ １ ０ ７ ｇ ｍｌ ｎ Ｆ ｃ ａ
叶酸 是治 疗 贫 血 的 特 效药 物 。近 年来 叶酸 成 为 了营养 医学 界 的新 宠 ， 目前 市 场上销 售 的营养 保
限公 司） ＫＱ ５ ， ０型 超 声 波 清 洗 器 （ 山 市 超 声 波 昆
仪 器有 限公 司 ） Ｓ 一５ ， ＹＺ ５ ０型石 英 亚 沸 高 纯 水 蒸 馏 器 （ 苏金坛 市金 城 国胜 实验 仪 器 厂） Ｂ ２ ４Ｓ型 江 ， Ｓ ２
Ｍ ｅｈｏ ＦｏｌｃＡｃｄ ｗａ ｅ ｅ ｍ ｉ ｄ ｏ ｔ ｄｓ ｉ ｉ ｓ ｄ ｔ ｒ ｎｅ ｎ ＨＰＬＣ ｎｓｒ ｉ ｔｕｍｅｎ ｉ ｄ ａ Ｄ ｉｍ ｏ ｉ ｔ ｆｘｅ ａ ｎｓｌ ｃ１８ ｏｌ ｃ ｕｍｎ （２ ０ ５ ｍ ｍ × ４ ｍ ｍ ． ．６ ５
（ ＝ ０ ９９ ｒ ．９ ９）， ｎｄ ｔ ｅ ａ ｒ ｇｅ ｒ ｏ ｅｒ ｓ １ ０． ａ ｈ ｖｅ ａ ｅｃ ｖ ｙ ｗａ ０ ５％ ｗｉｈ ＲＳ １ ２％ ． ｔ Ｄ ． Ｃｏｎ ｌ ｓ ｏ Ｔｈ ｅ ｈｏ Ｓｓｍ ｐｌ ｓ ｎｓ． ｃｕ ｉｎ ｅ ｍ ｔ ｄ ｉ ｉ ｅ， ｅ ｉ
高效液相色谱法测定水果中脂溶性维生素含量的研究
高效液相色谱法测定水果中脂溶性维生素含量的研究裘立群;高艾英;张昊;井华【摘要】建立了反相色谱法同时测定水果中脂溶性维生素的方法,色谱条件为甲醇:水=97:3,检测波长:300nm,流速:1.0mL/min,样品在20min内达到基线分离.该方法适用于测定水果蔬菜等低含量脂溶性维生素的测定,准确性高,灵敏度好,是一种快速简单的分离脂溶性维生素的有效方法,适用于水果的质量控制,填补了国内检测低脂溶性维生素含量检测方法的空白.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2010(038)010【总页数】3页(P151-153)【关键词】液相色谱法;脂溶性维生素;水果【作者】裘立群;高艾英;张昊;井华【作者单位】山东农业大学化学与材料科学学院,山东,泰安,271018;泰安市产品质量监督检验所,山东,泰安,271000;泰安市产品质量监督检验所,山东,泰安,271000;山东农业大学化学与材料科学学院,山东,泰安,271018【正文语种】中文【中图分类】S6Abstract:The method of analysisof fat-soluble vitamins in fruitswas deter mined simultaneously by high perfor mance liquidchromatography(HPLC).The conditions of HPLC were that itwas usedmethanol and water asmobile phase with the flow rate 1mL/min underUV detectorwith 300nm.The 4 fat-soluble vitaminswere separated in20min.The method was rapid,sensitive,accurate,precise and suitable for deter mination of fat-soluble vitamins in fruits.Itwas effective in quality control and filling in the blanks of the analysis of lower fat-soluble vitamins contents ofmaterial in domestic country.Key words:HPLC;the fat-soluble vitamin;fruit维生素A、维生素D包括(维生素D2和维生素D3)、维生素E是机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素。
高效液相色谱法测定液态奶中的叶酸
高效液相色谱法测定液态奶中的叶酸赵雯玮1，2，陈祥贵1，杨潇1，郝吉生2，饶夙1，刘振平1（1.西华大学生物工程学院 ，四 川 成 都 610039;2.河南省安阳市质量技术监督检验测试中心 ，河 南 安 阳 455000）摘 要 ：建 立 了H PLC 二级管阵列检测器检测液态奶中叶酸的方法 。
该法相关系数为0.9996，平 均 回 收 率 在81.8％～88.77％之 间 ，最 低 检 测 限 为1.5 μg /L 。
本 方 法 简 单 、快 捷 、灵 敏 ，可用于液态奶中叶酸的日常分析 。
关键 词 ：叶 酸 ；液 态 奶 ；高 效 液 相 色 谱 中 图 分 类 号 ：TS252.7 文 献 标 识 码 ：A 文 章 编 号 ：1001-2230（2009）12-0051-03Determination of folic acid in liquid milk by high -performanc e liquid chro - matographyZHAO Wen -wei 1,2, CHEN Xian g -g u i 1, YAN Xiao 1, HAO Ji-s h eng 2, RAO Su 1, LIU Zh en -pin g 2(1.Department of Biological Engineering, Xihua University, Chengdu 610039, China; 2.Testing Center, Anyang Su per - vising of Quality and Technology in Henan, Anyang 455000, China)Ab st r ac t ：A s en s iti v e HPLC method with DAD detector for the determ i n a ti on of folic a c i d in liquid milk. Th e li n ea r coeff i c i en t i s 0.9996. Th e averag e recover i es a r e 81.8％～88.77％. Th e detec ti on limit of the folic a c i d i s 1.5 μg /L. Th e method i s s i mple, r a pid a nd s en s iti v e for da il y a n a l y s i s ． Key word s ：Fo li c a c i d ；li qu i d m il k ：H PLC 引 言材料与方法试 剂 与 仪 器试 剂 ： 甲 醇 （ 色 谱 纯 ）， 冰 乙 酸 、 乙 酸 铵 、 磷 酸 二 氢 0 1 1．1 叶 酸(Folic acid)又 称 维 生 素 M 、维 生 素 B9，参 与 核 酸 、蛋白质的生物合成 ，对孕妇尤其重要 。
高效液相色谱法测定保健食品中叶酸条件优化
高效液相色谱法测定保健食品中叶酸条件优化作者：董娇曹宁阳乔玲王烁岑琴来源：《农业科技与装备》2017年第07期摘要：采用二极管阵列检测器，以保留时间和紫外特征吸收光谱图作为定性依据，建立高效液相色谱法测定保健品中叶酸的方法。
试验结果表明：叶酸检出限2.5μg/mg；在0.1～50 μg/mL浓度范围内线性关系良好；样品加标回收率在90.9%～105.0%之间，RSD小于3.55%，可作为保健食品中叶酸的定量分析方法。
关键词：高效液相色谱法；叶酸；限出限；加收率中图分类号：R115.5 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2017）07-0052-02叶酸（Folic acid）即维生素B9，是一种水溶性维生素。
目前市场上销售的营养保健品基本都添加叶酸。
叶酸含量测定有分光光度法、微生物法、高效液相色谱法和高效液相色谱质谱联用法。
食品中的叶酸检验国标方法为微生物法，试验周期较长；分光光度法灵敏度较低，选择性较差；高效液相色谱质谱联用法仪器造价较高，不利于推广应用；2005年版《中国药典》中的叶酸测定采用高效液相紫外检测器法，前处理简单，但只适用于叶酸含量高的样品，且流动相组成复杂，对色谱柱伤害较大。
为此，采用高效液相色谱二极管阵列检测器检测保健食品中的叶酸，旨在建立一种简单、快速、准确的测定方法。
1 材料与方法1.1 材料与试剂叶酸（批号139092）由Dr.Ehrenstorfer提供。
乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
1.2 仪器与设备岛津LC20A高效液相色谱仪，配有M20A二极管阵列检测器；HZF-A500电子天平：福州华志科学仪器有限公司；KQ-250DB超声波发生器：昆山市超声仪器有限公司；H2050R离心机：长沙湘仪离心机仪器有限公司。
1.3 检测方法1.3.1 HPLC色谱条件及色谱柱 Thermo Syncronis C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流速：1 mL/min；进样量：20 μL。
高效液相色谱法测定六种柑橘类2,4-D的残留
高效液相色谱法测定六种柑橘类2,4-D的残留郑志福;曾炜;潘仲巍;吴樟金【摘要】建立了柑橘中农药2,4--氯苯氧乙酸(2,4-D)残留量的高效液相色谱(HPLC)测定方法.样品用乙酸乙酯超声波提取,硅藻土固相萃取预处理并富集浓缩10倍后HPLC分离测定.结果表明,测定2,4-D的线性范围是1.00～20.00 mg·kg-1,市售六种柑橘类水果中2,4-D含量在0.28～0.90 mg· kg-1,结果的相对标准偏差为0.6％～2.6％,2,4-D回收率为86％～92％.【期刊名称】《泉州师范学院学报》【年(卷),期】2013(031)006【总页数】4页(P24-26,33)【关键词】高效液相色谱;固相萃取;2,4-二氯苯氧乙酸;柑橘【作者】郑志福;曾炜;潘仲巍;吴樟金【作者单位】泉州师范学院化学与生命科学学院,福建泉州 362000;泉州师范学院化学与生命科学学院,福建泉州 362000;泉州师范学院化学与生命科学学院,福建泉州 362000;泉州师范学院化学与生命科学学院,福建泉州 362000【正文语种】中文【中图分类】O252.632，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）是高效、内吸、高选择性的除草剂和植物生长调节剂.在高浓度时，广泛用于水稻、玉米、小麦等禾本科作物田中防除一年及多年生阔叶杂草.低浓度时，则能促进作物生长，是应用广泛的水果保鲜剂，主要用于增强果实抗病力、延缓果实衰老、延长水果贮藏期［1］.2，4－D 作为除草剂和保鲜剂使用，会在作物和果实中产生残留.2，4－D 可以通过皮肤和呼吸系统进入体内，具有潜在的致癌性及致突变性，能刺激人体分泌大量的雌性激素，干扰内分泌系统，对生殖和免疫系统产生不良的影响.除此之外，2，4－D 能使血红细胞聚集，阻碍红细胞的携氧能力，损伤肌肉、肝脏、肾脏和脑组织，还会损害动物的眼睛、皮肤和黏膜［2］.卫生部规定2，4－D 作为水果表面保鲜剂使用残留量≤2mg·kg－1［3］.2012年4月，卫生部发文征求意见，拟撤销2，4－D 作为食品添加剂的使用，研究柑橘中2，4－D残留的测定方法具有重要意义.2，4－D 残留的检测常用气相色谱法［4－6］，也有高效液相色谱法（HPLC）测定土壤［7］和环境水［8］中2，4－D的报道.本文采用硅藻土固相萃取对六种柑橘进行前处理后，HPLC测定其中的2，4－D残留量.1 实验部分1.1 仪器与设备1100高效液相色谱仪（美国，Agilent公司），配有紫外检测器（G1314A）和化学工作站；TGL－16G高速离心机（上海安亭）；KQ－300VDB超声波清器（江苏昆山）；二十位固相萃取装置（美国，Agilent公司）.1.2 材料和试剂2，4－D 标准品（美国，SIGMA 公司），纯度≥98%；甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷为色谱纯；磷酸等为分析纯；水为超纯水；Bond Elut©Florisil固相萃取小柱（美国，Agilent公司），500mg，3mL；芦柑、冰糖橘、冰糖橙、福橘、贡橘、小金橘六种水果2012年12月于超市采购.2，4－D 标准溶液：配置100.00mg·L－1 2，4－D 甲醇溶液，用甲醇分别定容到1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00、9.00、10.00、20.00mg·L－1作为标准曲线用工作液.1.3 色谱条件检测器：紫外检测器；色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（5μm，4.6mm×150mm）；柱温：25℃；检测波长：282nm；流动相：体积比为6∶4甲醇－磷酸水溶液（pH 3.0）；流速：0.8mL·min－1；梯度洗脱程序：0～9.5min体积比为6∶4甲醇－水，9.5～15min甲醇；进样量：10.0μL.1.4 样品前处理柑橘皮切成约0.3cm×2cm 小条，称取20.0g于250mL圆底烧瓶中，加100mL乙酸乙酯，超声波30min.取上清液，20mL乙酸乙酯洗柑橘皮两次，合并有机相.乙酸乙酯相分5次加到50mL圆底烧瓶中45℃减压蒸干，加2mL乙酸乙酯超声波5min溶解，离心，取上清液待净化.Florisil小柱正己烷活化，2.0mL提取液上样，4.0mL体积比为4∶1乙酸乙酯－甲醇洗涤杂质，4.0mL甲醇洗脱2，4－D，收集第0.5～2.5mL甲醇，HPLC检测.1.5 回收率测定称取柑橘样品，添加2，4－D 浓度分别为0.50、1.00和2.00mg·kg－1，按样品1.4方法处理后按1.3色谱条件进行分析.2 结果与讨论2.1 HPLC色谱条件2，4－D 在282nm 有最大吸收，磷酸溶液pH 为3.0［8－10］.橘皮中干扰物较多，流动相为6∶4甲醇－水，流速0.8mL·min－1时2，4－D 与干扰物达到基线分离，2，4－D 保留时间8.6min（图1和2）.图1 10.0mg·L－1 2，4－D标样色谱图Fig.1 Chromatograms obtained for 2，4－D standard solution（10.0mg·L－1）图2 柑橘皮SPEFlorisil净化2，4－D残留色谱图Fig.2 Chromatograms obtained for 2，4－D in citrus samples cleaned－up by SPEFlorisil2.2 2，4－D 提取2，4－D 在甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯中溶解度大于1 000mg·kg－1，正己烷中只有30mg·kg－1.甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯提取效果差别不大，但甲醇、二氯甲烷萃取时杂质很多，本文采用乙酸乙酯提取.2.3 固相萃取条件2.3.1 固相萃取柱选择橘皮含多种有机物，乙酸乙酯提取液直接用HPLC 测定时，2，4－D 峰完全被杂质峰掩盖，无法定性定量.用硅藻土固相萃取柱净化，RT9.5干扰物基本除去，与RT7.8的干扰物能达到基线分离（图2）.2.3.2 固相萃取洗脱条件 2，4－D 为羧酸类化合物，硅藻土对羧酸类化合物吸附能力很强.在硅藻土柱上，用8.0mL正己烷、乙酸乙酯、4∶1乙酸乙酯－甲醇洗脱，洗脱液均无2，4－D 检出.1∶1乙酸乙酯－甲醇洗脱，第4～8mL检测出2，4－D.甲醇洗脱，第0.5～2.5mL检测出2，4－D.采用4mL 4∶1乙酸乙酯－甲醇洗涤杂质，收集甲醇洗脱液第0.5～2.5mL进行HPLC测定.2.4 标准曲线2，4－D 工作液由浓度低到高，按1.3色谱条件测定（图1），每个浓度测定3次，以峰面积（A）的平均值对浓度（C）作图（图3）.线性方程：A＝29.18C－0.04，R2＝0.999 8.2，4－D 甲醇标样浓度低于0.5mg·L－1时，峰面积小于15，且需手动积分，误差较大.2，4－D 残留国标≤2mg·kg－1，将样品富集浓缩10倍后测量，准确度较高.表1 芦柑中2，4－D添加回收率（n＝3）Tab.1 Recoveries of 2，4－D in citrus（n＝3）图3 2，4－D标准曲线Fig.3 Calibration curve of 2，4－D2.5 加标回收率取果园采摘不含2，4－D 芦柑样品，分别添加一定浓度2，4－D 标准溶液，按1.4方法处理后按1.3色谱条件进行HPLC测定，结果见表1.结果表明，硅藻土固相萃取柱对2，4－D 会有少量吸附，在2，4－D 浓度低时，回收率较低.2.6 六种柑橘类水果2，4－D 残留取市售六种柑橘类水果，按1.4方法处理后按1.3色谱条件进行HPLC测定，结果见表2.结果表明：六种水果果皮都检测出2，4－D 残留，这六种水果都使用2，4－D 保鲜处理，但含量低于国家食品添加剂使用标准2.0mg·L－1，可安全食用. 表2 六种柑橘类水果2，4－D残留Tab.2 Contents of 2，4－D in six citrus3 结论本文建立的柑橘中2，4－D 残留的高效液相色谱分析法，可用于柑橘表皮残留的2，4－D 进行有效的监测.经检测，市售六种柑橘类水果均含2，4－D，2，4－D 仍是柑橘类水果最普遍使用的防腐剂.2，4－D 作为防腐剂，最主要在果皮表面残留，在没有更安全有效的替代农药情况下，应该保留2，4－D 作为食品添加剂使用，但对于小金橘、陈皮等食用果皮的食品应限制2，4－D的使用.参考文献：［1］ANASTASSIADESA M，SCHWACKB W.Analysis of carbendazim，benomyl，thiophana temethyl and 2，4－dichlorophenoxyacetic acid in fruits and vegetables after supercritical fluid extraction［J］.Journal of Chromatography A，1998，825：45－54.［2］龚芳，席俊，职爱尼，等.2，4－D的毒性与残留检测方法研究进展［J］.河南农业科学，2011，40（8）：40－43.［3］中华人民共和国卫生部.GB 2763－2011 食品添加剂使用标准［S］.北京：中国标准出版社，2011.［4］BAIM M A，HILL H H.Determination of 2，4－dichlorophenoxyacetic acid in soils by capillary gas chromatography with ion－mobility detection ［J］.Journal of Chromatography A，1983，279：631－642.［5］陈友清，冯先桔.衍生化气相色谱法测定柑橘果实中的2，4－二氯苯氧乙酸［J］.浙江柑橘，2003，20（1）：43－45.［6］周艳明，李冬烨，胡睿.气相色谱法测定2，4－滴丁酯在水果中的残留［J］.农药，2010，49（1）：39－40.［7］DE AMRANTE O P，BRITO N M，DOS SANTOS T C R.Determinationof 2，4－dichlorophenoxyacetic acid and its major transformation product in soil samples by liquid chromatographic analysis［J］.Talanta，2003，60：115－121.［8］赵伟，马玉坤.高效液相色谱测定环境水中2，4－二氯苯氧乙酸的方法研究［J］.化学工程师，2009，162（3）：27－28.［9］方袁媛.HPLC法测定蔬菜中2，4－二氯苯氧乙酸［J］.海峡药学，2011，23（2）：44－46.［10］夏慧，陆自强，杨益众.高效液相色谱法测定豆芽中2，4－二氯苯氧乙酸残留［J］.扬州大学学报，2011，32（4）：86－89.。
高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成
柑橘汁组成复杂，其中除了糖外，还含有其它干 扰组分，如色素、多酚、有机酸等。色素、多酚相 对于糖疏水性强，易附着在柱材料上不被流动相洗脱而 降低柱效，所以在采用高效液相色谱分析进样之前要预 分离这些成分。本实验采用固相萃取小柱固相萃取预分 离，由于糖的亲水性极强，样品通过小柱时在柱上没 有保留，而色素、多酚等相对于测定组分疏水性较强， 在小柱上有保留，从而可预分离除去色素、多酚、脂 类等物质。固相萃取小柱先用 ２ｍｌ 甲醇活化，再用 ２ｍｌ 水洗去甲醇，弃去最初的 ２ｍｌ 滤液，收集后续的 ３ｍｌ 滤 液，用 ０．４５μｍ 滤膜过滤，取 １０μｌ 进样分析，这样可
190 2006, Vol. 27, No. 04
食品科学
※分析检验
高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成
李云康，潘思轶 ＊ （华中农业大学食品科技学院，湖北 武汉 ４３００７０）
摘 要：研究了柑橘汁中糖组成的高效液相色谱测定方法。采用固相萃取小柱预分离干扰成分，以Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ（４．６ × ２５０ｍｍ，５μｍ）糖分析柱为固定相，８０％ 乙腈为流动相，柱温 ２５ ± ２℃。本方法的相对标准偏 差 ０．８３％～１．７１％，标准回收率 ９６％～１０３％。该方法简便快速，结果准确可靠，为果汁中糖组成分析提供了一种 高效快速的测定方法。 关键词：高效液相色谱法；糖；柑橘汁；固相萃取
sample(b)
样品每样取 ２ 份，其中 １ 份加入蔗糖、葡萄糖和
192 2006, Vபைடு நூலகம்l. 27, No. 04