固相萃取富集2高效液相色谱法测定环境水中多菌灵和噻菌灵

固相萃取富集2高效液相色谱法测定环境水中多菌灵和噻菌灵郭英娜　姜茁松33　张　敏　冯丽娟　赵进英　李金昶3(东北师范大学分析测试中心,长春130024)摘　要　建立了以固相萃取技术富集,高效液相色谱法进行分离和检测多菌灵和噻菌灵2种杀菌剂的方法。

环境水中的多菌灵和噻菌灵用3M E mpore 6mL C 18Cartridge 进行固相萃取。

以Hypersil ODS 柱为分析柱,优化得到高效液相色谱分离条件:流动相为甲醇2水(50∶50,V /V );流速为0.7mL /m in;柱温为55℃;在286n m 波长下检测,检出限为0.05mg/L 。

本法操作简便,灵敏,回收率高。

关键词　高效液相色谱,固相萃取,多菌灵,噻菌灵,杀菌剂 2004202218收稿;2004205218接受33吉林省药品检验所1　引 言多菌灵(MBC )、噻菌灵(T BZ )均属苯并咪唑类杀菌剂,是高效、低毒和广谱的内吸性杀菌剂,并具有预防和治疗作用,尤其对麦类赤霉病有特效[1]。

这类杀菌剂广泛应用于庄稼收获前和收获后的生产、储存及保鲜过程中,但其在土壤[2]、水[3]以及作物[5～7]中仍有一些残留,对人、畜有一定的毒副作用,因此,建立测定苯并咪唑类杀菌剂的方法具有重要的意义。

测定苯并咪唑类杀菌剂传统的方法是薄层色谱法和非水电位滴定法,前者测定精度不高,而后者操作手续繁杂、费时。

本实验采用高效液相色谱法测定多菌灵和噻菌灵,并用于环境水样的分析,具有很好的灵敏度和重现性。

环境水中残留的多菌灵和噻菌灵含量一般很低,需要富集方能检出。

传统的液2液萃取操作繁琐,且有机溶剂用量大,毒性大。

所以实验选用3M E mpore 6mL 小柱进行固相萃取,有机溶剂用量很少,操作简便,回收率高。

2　实验部分2.1仪器与试剂LC 26A 高效液相色谱系统(日本岛津公司),包括:LC 26A 高压溶剂输送泵,SP D 26AV 紫外2可见检测器,C 2R4A 色谱数据处理机,CT O 26A 柱温箱,SCL 26B 系统控制器,7125六通进样阀(RHEODY NE,L.P .,U.S .A.)和20μL 定量管;预柱(4.0mm ×3.0mm ,10μm )。

SHZ 2D ∆循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);自制5个样位的固相萃取装置(图1);3M E mpore 6mL C 18固相萃取小柱(3M Co .,St .Paul,MN )。

多菌灵(99%,Che m Service );噻菌灵(99%,Che m Service );甲醇(色谱试剂,山东省禹王实业总公司化学试剂厂);实验用水为二次蒸馏水。

2.2　固相萃取和色谱条件用2mL 甲醇清洗填料为C 18的富集小柱的柱床,抽去流出液,再依次使2mL 甲醇2水(50∶50V /V )和2mL 二次蒸馏水缓慢通过萃取小柱,用以活化柱中填料,并除去干扰杂质;在柱子被抽空前加80mL 水样,使样品连续的通过萃取柱,通过调整萃取装置的真空度来控制流速为10mL /m in 左右;用5mL 二次蒸馏水清洗样品瓶;待水样全部抽完后,用平稳的气流继续抽15m in,使待测组分充分富集在SPE 柱上;最后用2mL 甲醇依靠重力作用洗脱被分析组分。

Hy persil ODS (200mm ×4.6mm i .d .,5μm )色谱柱;进样量20μL;流动相:甲醇2水(50∶50,V /V );流速:0.7mL /m in;紫外检测波长:286nm;柱温:55℃。

用甲醇溶解并配制一系列标准溶液,使用外标法定量。

第33卷2005年3月 分析化学(FE NX I HUAXUE )　研究简报Chinese Journal of Analytical Che m istry 第3期395～397　图1　自制5个样位的固相萃取装置Fig .1　The device of s olid phase extracti on (SPE )of five sa mp les 3　结果与讨论3.1　测定波长的选择在紫外分光光度计上对多菌灵和噻菌灵标准溶液进行光谱扫描。

根据所得紫外吸收光谱可见,多菌灵分别在206、280和286nm 处有最大吸收,噻菌灵在203和299nm 处有最大吸收。

考虑到当吸收波长小于220nm 时,吸收干扰较大,因此,选定波长为286nm 。

在该波长下进行测定,既保证了较高的分析灵敏度,又无干扰。

3.2　流动相的组成本实验以甲醇2水体系做流动相且进行等度洗脱。

固定流动相的流速为0.7mL /m in 。

通过改变流动相中甲醇与水的比例,测定其标准溶液的保留值和峰面积,确定流动相的最佳配比。

以保留值和峰面积对不同甲醇2水的比例做图。

由实验结果可以看出,随着流动相中甲醇含量的减少,两种杀菌剂的保留时间不断增大;但甲醇含量的改变对峰面积的影响不大。

综合考虑保留值和灵敏度两项指标,选择甲醇的浓度为50%。

3.3　酸度的影响固定流动相中甲醇的浓度为50%,用磷酸调节流动相的pH 值,在不同的酸度下测定多菌灵和噻菌灵标准溶液的保留值。

结果发现,流动相的酸度在pH 值为3～7的范围内对多菌灵和噻菌灵的保留时　图2　55℃时标准溶液(a )和某污染水样品(b )的色谱图Fig .2　Chr omat ogra m of standard sa mp les at 55℃(a )and a se wage (b )1.多菌灵(carbendazi m ); 2.噻菌灵(thia 2bendaz ole )。

间、峰面积没有太大的影响。

因此,实验中用甲醇2水体系作为流动相时,不必再调节pH 值。

3.4　柱温的选择使用C 18烷键合相做固定相,化合物在固定相上的吸附是由于苯并咪唑分子中的氮原子(弱碱)和硅石表面硅烷醇的残基之间的作用。

T BZ 的峰较宽是由于化合物的碱性较强,因此在流动相中加入碱性物质可以改善峰形。

但在碱性条件下不利于硅石的化学稳定性,并且使流动相条件复杂;而实验们发现升高温度也可有效的改善峰形:在选定的上述条件下,从25℃开始,每隔5℃测定一次两种杀菌剂溶液的保留值和峰面积,一直测到60℃。

结果发现,随温度增加减少了化合物的保留时间,保持了高的分离度,并且改善了弱峰的峰形,故选择温度为55℃最合适。

3.5　色谱分离在优化的色谱条件下,得到多菌灵和噻菌灵标准溶液的色谱图以及某种污染水样的色谱图(见图2)。

3.6　标准曲线和检出限分别配制多菌灵和噻菌灵标准溶液,浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、1510、20.0、40.0和50.0mg/L,进样量20μL,以所得峰面积A (104μAU )对浓度C (mg/L )进行回归分析。

结果表明,线性表1　标准曲线及检出限Table 1　Standard curve and detecti on li m it 杀菌剂Fungicide 回归方程Regressi on equati on 相关系数(r )Correlati on coefficient 检出限Detecti onli m it (mg/L )多菌灵Carbendazi m A =0.091+0.5329C 0.99980.05噻菌灵Thiabendazole A =0.1235+0.59C0.99890.05　关系良好。

回归方程、相关系数和检出限(S /N =3)列于表1。

3.7　方法的精密度及回收率对已知浓度的样品进行加料回收实验,计算5次结果的平均回收率,结果见表2。

693 分析化学第33卷表2　回收率测定结果(n =5)Table 2　Result of recoveries (n =5)杀菌剂Fungicide 原量O riginal (mg/L )RS D (%)加入量Added (mg/L )测得量Found (mg/L )平均回收率Recovery (%)多菌灵Carbendazi m 0.23.10.1080.2995　0.2909　0.29320.2955　0.295995.8噻菌灵Thiabendaz ole0.2 5.20.1160.2973　0.3012　0.30030.2970　0.298394.6　3.8　实际样品测定应用所建立的分析方法,检测了3种污染水样中多菌灵和噻菌灵的含量。

样品中多菌灵和噻菌灵的含量分别为:1号水样21.6和21.9μg/L;2号水样51.5和76.7μg/L;3号水样19.8和10.0μg/L 。

References1　Fei Youchun (费有春).Concise Pesticide D ictionary (简明农药词典).Beijing (北京):Che m ical I ndustry Press (化学工业出版社),19852　Sanchez 2raser o F,Romer o T E,D i os C G .J.Chro m atogr .,1991,538:480～4833　Dhoot J S,del Rosari o A R.J.Chro m atogr .,1993,645:178～1814　Marvin C H,B rindle ID,Hall C D,Chiba M.J.Chro m atogr .,1994,555:147～1545　Colinge A,Noirfalise A.J.Chro m atogr .,1983,257:416～4186　Bush way R J,Hurst H L,Kugabalas ooriar J,Le wis B.J.Chro m atogr .,1991,587:321～3247　AnastassiadesM ,Sch wack W.J.Chro m atogr .A ,1998,825:45～54D eterm i n a ti on of Carbendaz i m and Th i a bendazole i nEnv i ronm en ta l W a ter by Soli d Pha se Extracti onand H i gh Performance L i qu i d Chro ma tographyGuo Yingna,J iang Zhuos ong,Zhang M in,Feng L ijuan,Zhao J inying,L i J inchang3(Faculty of Che m istry,N ortheast N or m al U niversity,Changchun 130024)Abstract A reversed phase high perf or mance liquid chr omat ographic (HP LC )method f or the separati on and deter m inati on of trace concentrati ons of carbendazi m (MBC )and thiabendaz ole (T BZ )in water was intr o 2duced .W ater was subjected t o s olid 2phase extracti on (SPE )using C 18cartridge .The analytical colu mn of HP LC was Hypersil ODS with a mobile phase of methanol 2water (50∶50,V /V )at a fl o w rate of 0.7mL /m in,te mperature of column at 55℃and wavelength at 286n m.The method is si m p le,rap id,accurate,and p recise .It has satisfact ory repeatability and recovery .L i m it of detecti on is about 0.05mg/L.Keywords H igh perfor mance liquid chr omat ography,s olid phase extracti on,carbendazi m ,thiabendaz ole,fungicide(Received 18February 2004;accep ted 18May 2004)793第3期郭英娜等:固相萃取富集2高效液相色谱法测定环境水中多菌灵和噻菌灵 。