实验四 斐林试剂法法测定还原糖含量(1)
斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备1)斐林试剂甲液称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42滤2)斐林实际乙液分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤B斐林试剂标定精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。
此操作在1min内完成。
再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。
R=WG/V式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，mlG——葡萄糖的质量，gV——葡萄糖定容体积，250mlC测定步骤称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。
其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。
计算还原糖含量按下式计算还原糖(%)=100RV/WG式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;G——样品质量，g;V——葡萄糖定容体积，250ml。
综合实验之生物制品分析检测
综合实验之生物制品分析检测实验一:斐林试剂置换法测定还原糖的含量一、实验原理:糖类包括多糖、双糖和单糖，其中单糖和某些双糖具有游离的羰基，称为还原糖，多糖和蔗糖无还原性。
利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定.非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。
斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。
根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。
二、试剂与材料：1、试剂：菲林试剂甲液：称取69.3g硫酸铜晶体，用蒸馏水溶解，定容至1000ml菲林试剂乙液：称取346g酒石酸钾钠，100g氢氧化钠，用蒸馏水溶解定容至1000ml2、1%次甲基蓝溶液：1g次甲基蓝溶于100ml水3、0.2%标准葡萄糖溶液：2g葡萄糖105℃烘干到恒重加水到1000ml4、碱式滴定管5、样品溶液：待测葡萄糖溶液样品1：稀释20倍，样品2：稀释50倍6、电炉三、操作方法：1、斐林试剂标定A 取甲液5ml+乙液5ml，（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶）置于250ml三角瓶中，加入10ml水，并从滴定管中加入0.2%的标准葡萄糖溶液若干毫升（约23ml）。
（量控制在后滴定时消耗葡萄糖液在0.5－1.0ml)B 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液用0.2%标准葡萄糖液滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。
记录耗用的葡萄糖液量为V0,必须在1min内完成。
注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
2、定糖预备试验同1法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%葡萄糖液滴定至蓝色消失。
还原糖含量的测定
05
结果分析与解读
数据处理与图表绘制
数据处理
对实验数据进行整理、筛选和计算， 确保数据的准确性和可靠性。
图表绘制
根据处理后的数据，绘制图表以直观 地展示实验结果，如柱状图、折线图 等。
结果解读与误差分析
结果解读
根据实验结果，分析还原糖含量的变化趋势和规律，判断实 验是否符合预期。
误差分析
对实验结果进行误差分析，找出误差来源，如操作误差、仪 器误差等，以提高实验的准确性和可靠性。
部分多糖
多糖是由多个单糖通过脱 水缩合形成的，部分多糖 也具有还原性，如淀粉、 纤维素等。
还原糖与非还原糖的区别
还原性
还原糖具有还原性，能够还原斐林试 剂或班氏试剂；非还原糖则没有还原 性，不能还原斐林试剂或班氏试剂。
结构
性质
还原糖通常具有较高的反应活性，而 非还原糖则较低。
还原糖通常含有醛基或酮基，而非还 原糖则没有这些基团。
02
还原糖基础知识
定义与性质
定义
还原糖是指具有还原性的糖类，能够 还原斐林试剂或班氏试剂的糖。
性质
还原糖具有醛基或酮基，因此具有还 原性，可与斐林试剂或班氏试剂发生 氧化还原反应。
还原糖的种类
01
02
03
单糖
单糖是最简单的糖类，也 是最具还原性的糖，如葡 萄糖、果糖等。
双糖
双糖是由两个单糖通过脱 水缩合形成的，如麦芽糖、 乳糖等。
色谱法
总结词
色谱法是一种分离和测定复杂混合物中各组 分含量的方法。在测定还原糖含量时，通常 使用高效液相色谱法，将样品中的还原糖与 其他组分分离，通过检测器检测各组分的含 量，从而计算出还原糖的含量。
详细描述
总糖和还原糖的测定——斐林氏法
总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。
这里只介绍斐林氏法。
一、目的学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。
二、原理还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。
本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。
当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。
酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。
此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。
在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。
再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。
将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。
三、器材及试剂：1．器材：①山芋粉②广范试纸pH1～12。
③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）⑤烧杯150毫升（×1），100毫升（×1）⑥三角烧瓶250毫升（×6）⑦滴定管25毫升（×1）⑧双孔橡皮塞⑨电炉300W（×1）⑩天平。
食品中还原糖含量的测定-直接滴定法
• 3.试剂：
– 硫酸铜（CuSO4 · 5H2O） – 次甲基蓝 -碱性酒石酸铜甲液（费林试剂甲液） – 酒石酸钾钠 – 亚铁氰化钾 -碱性酒石酸铜乙液（费林试剂乙液） – 乙酸锌 – 冰乙酸 -乙酸锌溶液 – 葡萄糖 -葡萄糖标准溶液（1mg/ mL） – 氢氧化钠 -氢氧化钠溶液 – 盐酸
四、实验步骤
• 2. 碱性酒石酸铜溶液的标定 – 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置 于150mL锥形瓶中（甲液、乙液混合后生成氧 化亚铜沉淀，因此，应将甲液加入到乙液，使 生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水10mL、玻璃 珠2粒，从滴定管中滴加9mL葡萄糖标准溶液， 控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速 度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚 好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总 体积。同法平行操作三份，取其平均值，计算 每10mL（甲液、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶 液相当于葡萄糖的质量（mg）。
• 4. 样品溶液的测定
– 吸取5.0mL碱性酒石酸铜溶液甲液及5.0mL乙 液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL、玻璃 珠2粒，从滴定管中滴加比预测体积少1mL的 样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸以以每 两秒1滴的速度滴定至终点。记录样液消耗的 体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。
• 1. 样品处理
– 汽水等含CO2的饮料-雪碧
• 吸取10mL样品置于蒸发皿中，在水浴上除去CO2后， 移入250mL容量瓶，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入 容量瓶中，加水至刻度，混匀后备用。
– 酒精饮料-啤酒
• 吸取10mL样品，置于蒸发皿中，用1mol/L氢氧化钠 溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1/4后， 移入100 mL容量瓶中，加入50 mL水，摇匀后慢慢 加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL 10.6%亚铁氰化钾溶液， 加水至刻度，摇匀。静置30min，用干燥滤纸过滤， 滤液备用。
还原糖的测定实验报告
1. 了解还原糖的性质和鉴定方法。
2. 掌握使用斐林试剂检测还原糖的原理和操作步骤。
3. 学习通过比色法计算还原糖的含量。
二、实验原理还原糖是指含有游离醛基或酮基的糖类，它们能够还原斐林试剂中的Cu²⁺离子为Cu⁺离子，生成砖红色的Cu₂O沉淀。
斐林试剂由斐林A液（含CuSO₄的碱性溶液）和斐林B液（含NaOH的碱性溶液）组成，两种试剂混合后，Cu²⁺离子与还原糖反应生成Cu₂O沉淀。
三、实验材料与试剂1. 试剂：- 斐林A液：称取硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）0.1g，溶于100mL水中，加入5mL浓NaOH溶液。
- 斐林B液：称取NaOH 2g，溶于100mL水中。
- 标准葡萄糖溶液：准确称取葡萄糖1.0000g，溶于1000mL水中，配制成1mg/mL的标准溶液。
- 样品溶液：取一定量的待测样品，用蒸馏水溶解并定容至一定体积。
2. 仪器：- 烧杯- 试管- 滴定管- 移液管- 移液器- 恒温水浴锅- 移液管1. 准备标准溶液：准确移取1mL标准葡萄糖溶液，加入9mL蒸馏水，配制成0.1mg/mL的标准溶液。
2. 配制斐林试剂：将斐林A液和斐林B液等体积混合，立即使用。
3. 取一支试管，加入2mL样品溶液。
4. 加入2mL斐林试剂，混合均匀。
5. 将试管放入恒温水浴锅中，加热至沸腾，保持沸腾状态5分钟。
6. 取出试管，观察沉淀颜色。
7. 重复步骤3-6，制作标准曲线。
8. 根据标准曲线，计算样品溶液中还原糖的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：以标准葡萄糖溶液浓度为横坐标，沉淀颜色深浅为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品溶液中还原糖含量的计算：根据样品溶液的浓度和沉淀颜色深浅，在标准曲线上找到对应的还原糖含量。
六、实验讨论1. 实验过程中，斐林试剂需现配现用，以免Cu²⁺离子被还原成Cu⁺离子，影响实验结果。
2. 样品溶液的浓度应控制在一定范围内，以免沉淀颜色过深，影响准确度。
还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]
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还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]实验一糖类的性质实验〔一〕糖类的颜色反响一、实验目的1、了解糖类某些颜色反响的原理。
2、学习应用糖的颜色反响鉴别糖类的方法。
二、颜色反响〔一〕α-萘酚反响1、原理糖在浓无机酸〔硫酸、盐酸〕作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对此反响均呈阳性，故此反响不是糖类的特异反响。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100mL，贮于棕色瓶内。
用前配制。
1％葡萄糖溶液100mL1％果糖溶液100mL1％蔗糖溶液100mL1％淀粉溶液100mL0.1％糠醛溶液100mL浓硫酸500mL4、实验操作取5支试管，分别参加1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1mL。
再向5支试管中各参加2滴莫氏试剂，充分混合。
倾斜试管，小心地沿试管壁参加浓硫酸1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。
观察记录各管颜色。
〔二〕间苯二酚反响1、原理在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反响是酮醣的特异反响。
醛糖在同样条件下呈色反响缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反响。
实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反响。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂塞氏试剂：0.05％间苯二酚－盐酸溶液1000mL，称取间苯二酚0.05g 溶于30mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000mL。
1％葡萄糖溶液100mL1％果糖溶液100mL1％蔗糖溶液100mL4、实验操作取3试管，分别参加1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5mL。
再向3支试管中各参加塞氏试剂5mL，充分混合。
将试管同时放入沸水浴中，观察记录各管颜色。
(二)糖类的复原作用一、实验目的1、理解并掌握糖类的复原性质；2、学习常用的鉴定糖类复原性的方法。
还原糖测定
还原糖含量的测定（斐林试剂法）一、实验目的：学习用斐林试剂测还原糖的方法，二、实验原理：斐林试剂由甲、乙液组成，甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。
平时甲、乙溶液分开贮存，测定时才等体积混合，混合后，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2Na0H十CuS04——→Cu（OH）2↓十Na2SO4氢氧化铜因能与酒石酸钾钠反应形成络合物而使沉淀溶解。
酒石酸钾钠铜络合物中的二价铜是一个氧化剂，在氧化醛糖和酮糖（合称总还原糖）的同时，自身被还原成一价的红色氧化亚铜沉淀：反应终点用次甲基蓝来指示。
三、实验器材与试剂：电炉，滴定管等(1)斐林溶液甲液：称取30g结晶硫酸铜(CuS04·5H20)，0.1g次甲基蓝，定容于1000mL水中，如有不溶物须过滤。
乙液：称取100g酒石酸钾钠，108g NaOH，定容1000mL水中，若有沉淀过滤即可。
(2)0.1％标准葡萄糖液：精确称取于105℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 1.000g，用水溶解后，定容至1000mL。
四、实验步骤1. 空白滴定准确吸取斐林甲、乙液各5mL，放入250mL锥形瓶中，加水约15mL，并从滴定管加入约20mL 0.1％标准葡萄糖溶液，严格控制不要摇晃三角瓶，将锥形瓶置电炉上加热煮沸，并准确沸腾30s，在沸腾状态下，以每两秒1滴的速度滴入0.1％标准葡萄糖溶液，至溶液刚由蓝色退去，生成砖红色沉淀为止。
后滴定操作应在1分钟内完成，整个煮沸时间应控制在3分钟之内。
记下总耗糖量V0。
2. 预滴定稀释：将样品除气后，进行适当稀释，以期用15~50mL（最好20~30mL）稀释液使滴定完成。
一般将发酵液稀释100倍（吸取1mL发酵液定容到100mL容量瓶）。
准确吸取斐林甲、乙液各5mL，放入250mL锥形瓶中，加水约15mL，吸取稀释样液1mL，放入锥形瓶中，并从滴定管加入约18mL 0.1％标准葡萄糖溶液，其他与空白滴定基本相同，最后在1分钟内滴定完成。
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实验四斐林试剂法测定果品蔬菜中还原糖含量
一、实验目的：
掌握园艺产品中糖的测定方法。
二、实验原理
利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。
非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。
斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。
根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。
三、试剂与材料
1、斐林试剂
甲：69.3g CuSO4.5H2O加水溶解并定容至1000ml；
乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml；
2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存；
3、0.2%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml；
4、碱式滴定管；
5、电炉，各种玻璃器皿。
四、操作方法
1、斐林试剂标定
取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入0.2%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。
（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在0.5－1.0ml)。
电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用0.2%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。
记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
）
2、样品滴定预备试验
同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录耗用的葡萄糖量为V1。
3、样品滴定
同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml 0.2%葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。
五、结果计算
还原糖含量(以葡萄糖计)（g/ml)=（Vo-V)×0.002×1/10×n
式中：V o--------斐林试剂标定值，ml
V---------样品糖液测定值，ml
0.002-----标准葡萄糖溶液浓度，g/ml
10--------样品糖液体积，ml
n---------样品稀释倍数
六、思考题：
1、还原糖测定方法有哪些？
2、总结本实验方法测定还原糖应注意哪些事项？。