生化实验 二硝基水杨酸比色法测还原糖含量
3_5_二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究
第12卷第3期2004年9月纤维素科学与技术Journal of Cellulose Science and TechnologyVol.12 No.3Sept. 2004文章编号：1004-8405(2004)03-0017-043,5-二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究齐香君，苟金霞，韩戌珺，闫博（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西咸阳 712081）摘要：据相关资料报道，在碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸被还原糖还原生成的氨基化合物在540 nm波长下具有最大吸收，在此条件下该方法可测糖的适合浓度为3~4 mg/mL。
而对其吸收光谱的测定研究发现，生成的氨基化合物在483 nm处有最大吸收，在该波长下测糖范围是0.1~1.0 mg/mL，并且测量的相对误差为2.2%。
关键词：3,5-二硝基水杨酸；还原糖；最大吸收波长；测量范围中图分类号：Q53 文献标识码：A众所周知，还原糖测定在我们生产细菌纤维素的发酵过程中具有十分重要的意义。
由于3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）具有准确性高、重现性好、尤其适用于大批量样品的测定等特点，而广泛地被用来测定发酵液中的残余糖量，从而得出细菌在繁殖和合成纤维素的过程中的耗糖量。
据相关资料报道[1,2]，在碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸被还原糖还原生成的氨基化合物在540 nm波长下具有最大吸收，在沸水浴中显色时间2 min，在此条件下该方法可测糖的适合浓度为3~4 mg/mL。
而我们对其生成的氨基化合物的吸收光谱进行了研究，发现其λmax 不是540 nm，因此本文对3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的方法进行探讨与研究。
1 原理与方法1.1 原理在氢氧化钠和丙三醇的的存在下，还原糖能将3,5-二硝基水杨酸中的硝基还原成氨基，生成氨基化合物。
此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色，在一定波长下具有最大吸收，并且吸光度与还原糖含量有线性关系。
1.2 适用范围及特点此法适用于各类食品中的还原糖的测定，具有准确度高、重现性好、操作简便、快速等优点，尤其适用于大批量样品的测定。
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。
一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。
2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。
(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。
3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。
将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。
在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。
(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。
(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。
(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。
(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。
(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。
(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。
二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。
然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。
在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。
还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。
三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。
3_5_二硝基水杨酸_DNS_比色法测定马铃薯还原糖含量的研究
１ ｍｇ·ｍＬ－１ 葡萄糖标准液：准确称取 １ ｇ 的无 水葡萄糖，待溶解后定容至 １ ０００ ｍＬ。
ＤＮＳ 显色液：准确称取无水的 ３，５－ 二硝基水杨 酸 ６．５ ｇ 溶解待用。无水氢氧化钠 ４０ ｇ 溶解后移入 ５００ ｍＬ 容量瓶，冷却后定容。将水杨酸溶解液移 入 １ ０００ ｍＬ 容量瓶并加入 ３２５ ｍＬ 的氢氧化钠，再 加入 １５ ｍＬ 丙三醇溶解定容至 １ ０００ ｍＬ 贮存于棕 色试剂瓶中。以上试剂均为分析纯。水为蒸馏水。 １．２ 试验方法 １．２．１ 吸收光谱的测定
量瓶中加水约 ２５ ｍＬ，步骤同上。
１．２．４ 显色时间的确定
准确吸取 １、２、４ ｍＬ 葡萄糖标准液分别加入
到 ５０ ｍＬ 的容量瓶中，各加 ５ ｍＬ ＤＮＳ，并在沸水
浴中煮 ２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１４、１６、
１８、２０ ｍｉｎ，步骤同上。
１．２．５ 稳定时间的确定
任意选择一个马铃薯样品提取液，准确吸取葡
的比较 ［Ｊ］． 中国马铃薯，２００４， ６： ３３７－ ３３． ［ ５ ］ 罗志刚，曾满枝，凌晨，等． ３，５－ 二硝基水杨酸比色法测定烟
草中水溶性总糖． 中国烟草科学，２０００， ２：３４－ ３６． ［ ６ ］ 齐香君，苟金霞，韩戌环君，等． ３，５－ 二硝基水杨酸比色法测定
收稿日期：２００５－ ０８－ １２ 作者简介：朱海霞（１９７９－ ），女，东北农业大学硕士研究生， 从事马铃薯遗传育种研究。 基金项目：国家“８６３”计划项目（２００４ＡＡ２４１１３３）资助 !通讯作者：Ｅ－ ｍａｉｌ： ｐｏｔａｔｏ＠ｍａｉｌ．ｎｅａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
１ 材料与方法
１．１ 试验材料 １．１．１ 马铃薯样品
还原糖和总糖含量的测定(3,5 一二硝基水杨酸比色法)
还原糖和总糖含量的测定（3，5 一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3 ，5 一二硝基水杨酸比色法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：2132 更新时间：2021-5-13 11:29:24一、目的植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
二、原理各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与 3 ， 5 一二硝基水杨酸共热， 3 ， 5 一二硝基水杨酸被还原为 3-氨基 -5- 硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。
一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系， 540nm 波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
三、仪器、试剂和材料1 .仪器（ 1 ）刻度试管： 25 ml X 11（ 2 ）离心管或玻璃漏斗 X2（ 3 ）烧杯： 1OOml X 1（ 4 ）三角瓶： 100m1 X 1（ 5 ）容量瓶： 100ml X 3（ 6 ）刻度吸管： 1 ml X 1 ， 2m1 X 4, 10ml X 1（ 7 ）恒温水浴（ 8 ）沸水浴（ 9 ）离心机（过滤法不用此设备）（ 10 ）电子顶载天平（ 11 ）分光光度计2 .试剂（ 1 ） 1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取 100mg 分析纯葡萄糖（预先在8 0 ℃ 烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 100ml 的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
3,5二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究
3,5二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究一、本文概述本文主要研究了3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法在测定溶液中还原糖的应用。
还原糖是一类具有还原性的单糖和低聚糖，如葡萄糖、果糖和麦芽糖等，它们在许多生物化学反应中发挥着重要作用。
因此，准确测定溶液中的还原糖含量对于理解生物过程、食品工业、医药研究等领域具有重要意义。
DNS比色法是一种常用的还原糖测定方法，其原理是利用DNS试剂与还原糖在碱性条件下发生氧化还原反应，生成一种在煮沸条件下呈棕红色的化合物，其颜色深浅与还原糖含量成正比。
通过比色法测定这种化合物的吸光度，就可以间接计算出溶液中还原糖的含量。
本文将详细介绍DNS比色法的实验步骤，包括试剂的配制、实验条件的优化、以及实际样品的分析等。
还将探讨影响测定结果的各种因素，如温度、pH值、反应时间等，以提高测定的准确性和可靠性。
本文还将对DNS比色法与其他常用还原糖测定方法进行比较，以评估其在实际应用中的优缺点。
通过本文的研究，旨在为相关领域的研究人员和技术人员提供一种准确、简便的还原糖测定方法，为深入研究还原糖的生物化学性质和应用提供有力支持。
二、3,5二硝基水杨酸比色法基本原理3,5-二硝基水杨酸（3,5-dinitrosalicylic acid，DNS）比色法是一种常用的测定溶液中还原糖含量的方法。
该方法基于还原糖与DNS试剂在碱性条件下发生氧化还原反应的原理。
在反应过程中，还原糖将DNS试剂中的硝基还原为氨基，生成了一种深红色的化合物，这种化合物的颜色深浅与还原糖的含量成正比。
DNS比色法的反应过程可以分为两个阶段。
在碱性环境下，DNS 试剂与还原糖发生缩合反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
然后，该中间产物进一步与还原糖反应，生成一种深红色的氨基化合物。
这种颜色变化可以通过比色法进行定量测定，从而确定溶液中还原糖的浓度。
DNS比色法具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，因此在食品、农业、生物等领域得到了广泛应用。
总糖和还原糖的测定实验
总糖和还原糖的测定实验一、实验目的1.掌握还原糖和总糖的测定原理。
2.学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验内容与原理用3，5－二硝基水杨酸比色法测定总糖和还原糖的含量。
在碱性条件下，黄色的3，5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定的浓度范围内，还原糖的含量与棕红色物质颜色的深浅成正比，利用分光光度计，在540nm波长下测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，即可算出样品中还原糖的含量。
三、实验主要仪器设备及材料1. 3，5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再加入45g 丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000mL。
2. 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL，即含葡萄糖为1.0mg/mL。
3. 6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500m L。
4.碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸馏水中。
5. 6mol/L NaOH：称取120g NaOH溶于500mL蒸馏水中。
6. 0.1% 酚酞指示剂。
7.藕粉，淀粉。
8.试管1.5×15cm（×13)，3.0×20cm（×1）；移液管0.2mL（×2），0.5mL（×2），1mL（×5），10mL（×1）；水浴锅、电炉、分光光度计。
四、实验步骤1.葡萄糖标准曲线制作取6支1. 5 cmm×1.5cm试管，按下表加入1.0mg/mL葡萄糖标准液和蒸馏水。
加完试剂后，于沸水浴中加热5min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。
以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
实验二 还原糖及总糖的测定
实验二还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：1．掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。
2．熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。
原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光值。
查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和材料：1．试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。
乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。
（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。
（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2．器材比色管、离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、离心机、天平、分光光度计。
3,5 -二硝基水杨酸比色法测还原糖含量
一、概述还原糖是一类可溶于水的碳水化合物，通常具有甜味。
在食品加工和生产中，还原糖的含量是一个重要的指标。
测定食品中还原糖的含量对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。
而3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的方法来测定还原糖的含量。
二、3,5-二硝基水杨酸比色法原理3,5-二硝基水杨酸比色法是利用还原糖与3,5-二硝基水杨酸在酸性溶液中发生还原反应，生成带有黄色的还原糖-3,5-二硝基水杨酸络合物。
通过比色测定络合物的吸光度，可以间接测定还原糖的含量。
这种方法的优点是操作简便、灵敏度高、准确性较好，因此被广泛用于食品、医药等领域的还原糖含量测定。
三、实验步骤1. 样品制备：将待测食品样品制成均匀的糊状。
2. 提取还原糖：将制好的样品用水提取，得到含有还原糖的提取液。
3. 混合试剂：将3,5-二硝基水杨酸试剂与提取液进行混合，使其发生化学反应生成还原糖-3,5-二硝基水杨酸络合物。
4. 比色测定：用比色计测定络合物的吸光度，据此计算出还原糖的含量。
四、实验注意事项1. 实验操作中需注意安全，避免接触到有毒化学品。
2. 实验操作要严格按照步骤进行，避免操作失误。
3. 比色计要保持清洁，以确保测定结果的准确性。
五、实验结果分析通过3,5-二硝基水杨酸比色法测定出的还原糖含量可以作为食品加工和质量控制的重要数据。
实验结果的准确性和稳定性对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。
六、实验应用3,5-二硝基水杨酸比色法不仅在食品加工领域有重要应用，还在医药、化工等领域具有广泛的应用。
对该方法的研究和实际应用具有重要价值。
七、结论3,5-二硝基水杨酸比色法是一种简便、灵敏度高的测定还原糖含量的方法，具有较好的准确性和实用性。
在食品加工和生产中，该方法有着重要的应用价值，能够为保障产品质量和食品安全提供重要数据支持。
八、参考文献1. Zhang, Y.; Wu, X.; Chen, Z. A. M. Determination of Reducing Sugars in Low Concentrations by 3,5- dinitrosalicylic Acid Method in Tapered Microfluidic Channels. Anal. Chem. 2017, 89, 9750-9756.2. Miller, G. L. Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of Reducing Sugar. Anal. Chem. 1959, 31, 426-428.以上就是3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量的一些基本内容，该方法的简便性和高灵敏度使其成为食品加工和生产中常用的一种检测手段。
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3，5-二硝基水杨酸比色法测量还原糖含量
一．实验目的
1、掌握用制作标准曲线的方法来测量还原糖的含量.
2、学会使用721精密型分光光度计。
3、熟练容量瓶、移液管等简单仪器的使用方法。
二．原理
1、还原糖是指含有醛基或者酮基的糖类，单糖都是还原糖，多糖中有乳糖和麦芽糖等是还原糖，而淀粉和蔗糖是非还原糖。
DNS即3，5-二硝基水杨酸中含有的硝基使其有较强的氧化性，与醛基在加热的条件下发生氧化还原反应，生成红色物质3-氨基-5硝基水杨酸。
反应方程式如下：
2、不同浓度的还原糖液与DNS反应时，生成的3-氨基-5硝基水杨酸的浓度不同，导致反应后液体颜色深浅不同。
在分光光度计下测量标准梯度浓度的葡萄糖溶液与DNS反应后液体的OD540（波长为540nm条件下样液的光密度值），做出OD540——还原糖含量标准曲线，对于未知样品的测量，只需将OD540带入图像，找到相应的还原糖含量值即可。
3、本实验总糖的测量步骤中，因为样品（面粉）主要由淀粉构成不能与DNS直接反应，所以需要用酸水解法将淀粉降解为单糖进行测量。
淀粉由单糖缩合产生，在降解过程中会引
入水分子，所以计算总糖的质量时，应除去水的质量。
M葡萄糖=180，M水=18，由于淀粉的
=0.9倍。
碳链极长，忽略链末端本身含有的一个水分子，则淀粉的质量为还原糖质量的180−18
180
三．试剂（配制方法）
提前配制试剂
DNS（3,5-二硝基水杨酸试剂）：6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L NaOH加到热酒石酸钾钠的热溶液中（182g酒石酸钾钠溶液溶于500蒸馏水中），再加5g重结晶酚和
5g亚硫酸氢钠于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000ml，储存于棕色瓶中。
碘化钾—碘试剂：称取5g碘10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
酚酞试剂：0.1g酚酞溶于250ml 85%的乙醇中，棕色瓶储存。
6mol/L HCl 溶液
10% NaOH 溶液
面粉样品
0.5mg/mL葡萄糖溶液：精确称取105℃烘至恒重的葡萄糖0.5g，用水定容到1000ml。
四. 实验仪器
（一）每组配置
试管：10ml*10 试管架：1
试管夹：2 铁架台：1
移液管：1ml*2 5ml*2 10ml*1 移液管架：1
胶头滴管：2 培养皿：1
容量瓶：100ml*3 漏斗: 1
烧杯: 100ml*3 500ml*1
（二）公用仪器
分光光度计：3 比色皿：3*4
水浴锅：6 蒸馏水：瓶*3
滤纸：若干称量纸：若干
废液缸：1L烧杯*3
五．操作步骤
（一）标准梯度糖液配制
分别取0.5mg/ml的葡萄糖标准液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml于1~6号试管中，并用蒸馏水补足到1ml。
（二）还原糖液的提取
1、精确称取面粉1.0g于100ml小烧杯中，少量水调成糊状后，再加入50ml蒸馏
水搅匀。
2、水浴50℃保温20min后，用水定容到100ml。
3、过滤，取滤液1ml于7、8号试管中，待用。
（三）总糖的水解与提取
1、称取面粉1.0g，放入100ml小烧杯中。
2、加入10ml 6mol/L的HCl，和15ml蒸馏水，沸水浴加热25min.
3、用胶头滴管滴2~3滴碘化钾—碘溶液于培养皿中（可以稍微稀释），用细玻璃棒
蘸少量样品与之进行反应，若无深蓝色物质产生说明总糖已经水解完全，否则继续
沸水浴加热并每隔5min以相同的方法再次测定，直至完全水解。
4、取出完全水解的样品，冷却后滴加2~3滴酚酞，用10% NaOH滴定至中性。
5、用水定容到100ml，过滤，取5ml滤液，再次定容到100ml。
6、取5中第二次定容的液体1ml于9、10号试管中，待用。
（四）OD540的测量及标准曲线的制作
1、在10支试管中加入0.5ml DNS试剂，混匀，十只试管放入500ml装有少量水的
烧杯中，进行沸水浴加热5min，再流水冷却。
2、每支试管加入再4.0ml蒸馏水并摇匀。
3、取液体装入比色皿中，每个样品测三次，取其平均值为其OD540，以未加葡萄糖
的试管即1号试管内的液体作为参比液。
4、取1~6号试管中的数据，做出OD540~还原糖含量曲线，纵坐标为OD540，横坐
标为0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，单位mg。
5、在曲线上读出7~10号试管的含量值。
（五）计算含量
1、取7，8号试管含量的平均值作为还原糖含量值，取9，10号试管含量的平均值
作为总糖的含量值。
2、
还原糖含量%=还原糖毫克数×样品稀释倍数（100）
样品毫克数（1000）
×100%
总糖含量%=水解后还原糖毫克数×样品稀释倍数（2000）×0.9
样品毫克数（1000）
×100%
六．实验注意
1、标准曲线的制作建议用EXCEl制作，也可以只用坐标纸，用最小二乘法得出公式，
需附图在每个组员的实验报告上。
2、本实验中用水浴锅进行操作，沸水浴操作时，只需将温度控制在90~93℃即可，温
度过高（超过95℃）会使还原糖煮糊。
3、OD540在测量时，每一个比色皿都需要测量三次（包括标准糖液、还原糖液和总糖液），
取平均值。
测量时，打开盖子再重新盖上盖子读出OD540即为一次测量，同一个比色皿再测量时不要拉动伸缩杆。
4、标准曲线制作过程中如有明显偏离直线的一个点，应果断舍去，如果有两个或者两
个以上的时候，全部10支试管的糖液重新制作。
这是为了使所有的糖液在相同的条件下加热，避免无关因素引起的误差。
5、10% NaOH滴定时，滴定终点应为滴加半滴NaOH溶液刚刚变为粉红色，且静置30s
不褪色。
若多滴则重新加入盐酸进行滴定，若少滴，则用半滴法进行滴定。
附实验数据记录。