乳酸堆积对肝星状细胞增殖、分化、凋亡的影响
五味子药用成分在鼠类生理生化及病理中的应用研究进展
万祥旭，黄笑然，周宝丽，等.五味子药用成分在鼠类生理生化及病理中的应用研究进展［J ］.中南农业科技，2023，44（3）：240-243．五味子（Schisandra chinensis ）属毛茛目木兰科植物。
果实亦称为五味子，古称荎蕏、玄及、会及，呈不规则的球形或扁球形，直径5~8mm ；表面红色、紫红色或暗红色，皱缩，显油润。
五味子味甘酸，是最早列于《神农本草经》的上品中药，药用价值高，性温滋力，入心、肺、肾经，具收敛固涩、益气生津等功效［1］。
学者对药用植物提取成分对动物生理生化功能的影响进行了研究。
本研究将中药五味子在啮齿动物生理生化及病理中的应用进行综述，可为其药品开发及鼠类饲养、疾病防治提供基础性依据。
1五味子对鼠类的抗肿瘤作用1.1五味子乙素对肿瘤患鼠的抑瘤作用五味子乙素（Schisandrin B ，Sch B ）是五味子的重要活性成分，经研究证实，Sch B 可以抑制SHG-44胶质肿瘤细胞的增殖［2］。
Li 等［3］研究发现，U251和U87胶质瘤细胞增殖也会被Sch B 所抑制，在不同给药量的情况下，对肿瘤细胞的抑制程度也不同，这反映出该抑制作用具浓度依赖性。
Sch B 同时也是诸多抗肿瘤药物的联合剂，范晓艳等［4］将Sch B 与类烷化剂的金属铂类化合物顺铂（Cisplatin ，CN ）进行联合，并将联合药物作用于H 22小鼠实体瘤，结果表明，药用组小鼠肿瘤细胞减少且大面积坏死。
除此之外，Sch B 还分别可与紫杉醇［5］和氟尿嘧啶［6］等药物相联合，以抑制肿瘤细胞的增殖。
1.2五味子多糖对肿瘤患鼠的抑瘤作用多糖为糖苷键所结合的糖链，是由不少于10个单糖构成的聚合糖高分子碳水化合物［7］。
五味子多糖（Fructus schisandrae polysaccharides ，FSP ）属中药多糖，具抑瘤功效。
王艳杰等［8］将FSP 作用于H 22肝癌移植瘤小鼠，结果表明，给药组小鼠肿瘤组织细胞中相应细胞器溶解性坏死，可见FSP 可以抑制小鼠H 22肝癌移植瘤的生长。
促红细胞生成素EPO
浅析促红细胞生成素——兴奋剂摘要：促红细胞生成素是由肾脏分泌产生的一种特异性糖蛋白，能够促进骨髓红细胞的增殖与成熟。
其最早用来治疗遗传、癌症、慢性肾衰以及其他一些炎症引起的的贫血症，但是随着经济的发展和技术的更新，促红细胞生成素被作为一种兴奋剂逐渐应用于竞技比赛中，造成运动员身体的损伤以及比赛的不公平。
笔者通过查阅相关文献，从促红细胞生成素的起源，解剖，功能及检测几个方面系统的整合促红细胞生成素的相关知识，为后续读者提供一个较为全面而清晰地学习框架。
关键词：EPO；兴奋剂；运动医学EPO是促红细胞生成素（Erythropoietin）的英文简称，自从发现以来被广泛应用于耐力运动项目中。
人体中的促红细胞生成素能够促进红细胞生成，明显提高人体的红细胞数量及血红蛋白的含量, 从而提高人体运输氧气的能力,提高人体的最大摄氧量, 所以EPO 与运动尤其是耐力运动关系十分密切。
应用基因重组技术成功制造人重组促红细胞生成素( rhEPO) 后, 有些运动员试图通过服用rhEPO提高运动成绩, 但却忽略了服用rhEPO 的副作用,服用红细胞生成素可以使患肾病贫血的病人增加血流比溶度（即增加血液中红细胞百分比）。
人体缺氧时，此种激素生成增加，并导致红细胞增生。
EPO兴奋剂正是根据促红细胞生成素的原理人工合成，它能促进肌肉中氧气生成，从而使肌肉更有劲、工作时间更长。
一、EPO历史来源（一）EPO简介促红细胞生成素(EPO，Erythropoietin)也称为红细胞集落形成刺激物(ECSA)和红细胞生成刺激因子(ESF)，为哺乳动物调节红细胞生成的主要调控因子，1948 年Bonsdor 与Jalsvisto 首次发现，并于1977年由Migake从尿中分离纯化出来的。
人体内的EPO 为一种糖蛋白激素，大部分是肾脏中的酶样物质红细胞生成酶(Erythrogenin)作用于肝脏所生成的促红细胞生成素原(Erythropoietinogen)在血浆中转变而成的。
肝衰竭的酸碱平衡失调与纠正方法
肝衰竭的酸碱平衡失调与纠正方法肝脏是人体最重要的代谢器官之一，其功能不仅包括合成、分解和转化物质，还包括酸碱平衡的调节。
然而，当肝脏发生衰竭时，其酸碱平衡功能也会受到严重影响，导致酸碱平衡的失调。
本文将探讨肝衰竭引起的酸碱平衡失调的原因以及纠正方法。
一、肝衰竭引起的酸碱平衡失调的原因肝衰竭可导致以下酸碱平衡的异常表现：1. 乳酸酸中毒：乳酸在正常情况下由肝脏转化为葡萄糖。
当肝脏功能受损，乳酸的产生量增加，肝脏对乳酸的转化能力下降，导致乳酸在血液中积累，造成乳酸酸中毒。
2. 呼吸性酸中毒：肝脏功能受损时，无法正常合成尿素，进而导致氨基酸代谢异常，产生大量的酸性物质，如尿素酸。
这些酸性物质在体内蓄积，引起呼吸性酸中毒。
3. 代谢性碱中毒：肝脏衰竭时，无法正常代谢血中的草酸根离子，导致草酸根离子在体内蓄积，引起代谢性碱中毒。
二、肝衰竭酸碱平衡失调的纠正方法针对肝衰竭引起的酸碱平衡失调，可以采取以下纠正方法：1. 抗感染治疗：肝脏功能衰竭时，免疫力下降，易发生感染。
感染可加重酸碱平衡失调。
因此，在纠正酸碱平衡失调的过程中，要及时使用抗感染药物，控制感染的发展，减少酸碱平衡失调的恶化。
2. 药物治疗：选择适当的药物可以帮助纠正酸碱平衡失调。
例如，对于乳酸酸中毒，可使用碱剂来中和血液中的乳酸；对于呼吸性酸中毒，可使用辅助通气或呼吸兴奋剂加强呼吸功能；对于代谢性碱中毒，可使用草酸酸化剂清除体内的草酸根离子。
3. 肝脏支持治疗：肝衰竭患者需要进行肝脏支持治疗，以帮助恢复肝脏功能。
常用的肝脏支持治疗方法包括：人工肝支持系统、肝移植等。
这些治疗方法可修复肝脏功能，从根本上纠正酸碱平衡失调。
4. 饮食调控：在纠正酸碱平衡失调的过程中，合理的饮食是非常重要的。
患者应遵循低蛋白、高碳水化合物、高维生素的饮食原则，避免进食高蛋白、高脂肪的食物，以减轻肝脏负担，提高身体抵抗力。
综上所述，肝衰竭引起的酸碱平衡失调是一种严重的并发症，需要及时纠正。
病理生理学复习考试重点
一、名词解释基本病理过程：主要是指多种疾病中可能出现的、共同的、成套的功能、代谢和结构的变化。
健康：健康指的是不仅是没有疾病或病痛，而且是一种躯体上、精神上和社会上的完全良好状态。
疾病：疾病是在一定条件下受病因损害作用，因机体自稳调节紊乱而发生的异常生命活动过程。
病因：能够引起疾病并赋予该疾病特征性的因素称为病因。
诱因：能够促进疾病发生发展的因素称为诱因。
脑死亡（brain death）：机体作为一个整体功能永久性停止的标志是全脑功能的永久性消失。
目前一般均以枕骨大孔以上全脑死亡的标准。
低渗性脱水：又称低容量性低钠血症，其特点是失Na+多于失水，血清Na+浓度<130mmol/L,血浆渗透压<280mmol/L,伴有细胞外液量的减少。
高渗性脱水：又称低容量性高钠血症，其特点是失水多于失Na+,血清Na+浓度>150mmol/L,血浆渗透压>310mmol/L,细胞外液量和细胞外液量均减少。
水中毒：高溶性低钠血症，特点是是血钠下降，血清Na+浓度<130mmol/L，血浆渗透压<280mmol/L，但体钠总量正常或增多，患者有水潴留使体液量明显增多。
脱水热：由于从皮肤蒸发的水分减少，使散热受到影响，从而导致体温升高，称之为脱水热。
水肿：过多的液体在组织间隙或体腔内积聚称为水肿。
高钾血症:血清中钾浓度高于 5.5mmol/L 低钾血症：血清中钾浓度低于 3.5mmol/L。
酸碱平衡紊乱：病理情况下引起的酸碱超负荷、严重不足或调节机制障碍，导致内环境酸碱稳态破坏而产生PH异常的情况。
代谢性酸中毒：细胞外液H+增加或HCO3-原发性减少和PH降低为特征的酸碱平衡紊乱类型。
呼吸性酸中毒：CO2排除障碍或吸进过多引起以血浆［H2CO3］原发性增高和PH降低为特征的酸碱平衡紊乱类型。
代谢性酸中毒:细胞外液碱增多或H+丢失，以血浆［HCO3-］原发性增加和PH升高为特征的酸碱平衡紊乱类型。
乳酸产生和代谢产物
乳酸产生和代谢产物乳酸产生和代谢产物的深度探讨引言：在人体代谢过程中，乳酸是一个重要的产物，它在能量代谢、肌肉运动和康复过程中起着关键作用。
乳酸产生和代谢产物的研究对于我们深入理解人体运动生理学以及增强运动表现具有重要意义。
本文将从乳酸产生、乳酸代谢和乳酸相关运动方面进行全面评估，为你展开一幅关于乳酸的完整画卷。
一、乳酸产生1. 乳酸的生成途径乳酸的产生主要通过糖酵解途径，即葡萄糖在缺氧条件下经过糖酵解反应，生成乳酸。
乳酸也可以通过氧化酵解途径生成，即葡萄糖在氧气充足的情况下，通过线粒体内的柠檬酸循环和氧化磷酸化反应生成乳酸。
2. 乳酸产生与肌肉疲劳在高强度运动中，肌肉细胞能量供应不足，酵解速率超过氧化速率，导致乳酸产生的速度超过其消除速度。
乳酸的积累会导致肌肉酸化、能量产生减少，进而导致肌肉疲劳。
二、乳酸代谢1. 乳酸的代谢途径乳酸主要通过乳酸-乳酸盐循环以及肝脏乳酸清除来代谢。
乳酸通过血液运输到肝脏，在乳酸脱氢酶的作用下转化为葡萄糖，供给其他组织继续进行糖酵解。
乳酸可以通过肌肉和心脏细胞内的线粒体进行氧化代谢，产生额外的能量。
2. 乳酸代谢与运动能力乳酸的代谢能力是体育运动能力的重要指标之一。
乳酸的快速清除和高效代谢能力可以延缓肌肉疲劳的发生，提高运动表现。
通过适当的训练和调整饮食，可以提高乳酸代谢能力，有效提升运动能力。
三、乳酸相关运动1. 乳酸阈值乳酸阈值是指肌肉中乳酸积累开始超过清除速度的运动强度。
乳酸阈值的评估可以帮助运动员制定科学的训练计划，提高运动表现。
通过乳酸阈值训练，可以延缓乳酸积累的时间，提高乳酸代谢能力。
2. 乳酸耐力运动乳酸耐力训练是一种特殊的训练方式，旨在提高乳酸代谢能力和乳酸阈值。
通过乳酸耐力训练，可以增加肌肉对乳酸的利用能力，改善肌肉酸化程度，提高运动耐力。
结论：乳酸产生和代谢产物是人体运动过程中不可或缺的重要组成部分。
了解乳酸的产生途径和代谢途径，有助于我们更好地理解肌肉疲劳的形成机制。
乳酸概念及生成代谢机制、高乳酸血症类型、人体危害和乳酸升高处理方案
乳酸概念及生成代谢机制、高乳酸血症类型、人体危害和乳酸升高处理方案乳酸概念及生成代谢机制乳酸是糖无氧酵解的代谢产物，糖酵解是细胞广泛存在代谢途径，机体所有组织均能糖酵解产生乳酸，特别是在耗能较多的组织细胞如神经细胞、脑、骨骼肌细胞和血红细胞内更加活跃，其能反映机体组织氧供及代谢状态。
人体正常情况下每天只大约产生 15-20mmol/Kg 乳酸，能被肝脏，肾脏清除。
肝脏通过合成糖原和乳酸经丙酮酸途径进入线粒体氧化供能，在乳酸清除中占有重要的地位，肾脏在乳酸增高时清除乳酸能力不断增加，机制是既通过丙酮酸途径进入线粒体氧化供能，及进行糖异生，又通过肾小管分泌随尿液排出。
机体正常进行有氧代谢，葡萄糖会转化为丙酮酸，丙酮酸进入三羧酸循环，产生ATP供能。
一旦组织血流灌注不足、乏氧等导致供氧不足，糖发生无氧酵解增加，丙酮酸大量转化为乳酸，导致乳酸异常升高。
高乳酸血症类型根据乳酸的光学同分异构体类型，高乳酸血症可分为 L-乳酸和D-乳酸高乳酸血症，临床绝大多数为 L-乳酸增高。
根据是否由组织缺氧引起，将L-乳酸高乳酸血症分为两类——A 型和B型。
A型指由组织缺氧引起的高乳酸血症，B 型指无组织缺氧的高乳酸血症。
临床以 A 型最常见，B 型相对较少。
A 型高乳酸血症的常见病因包括：1. 各种原因导致的休克，如脓毒性休克、心源性休克等；2. 局部灌注不足：如胃坏死和其他原因的内脏缺血、大动脉血栓栓塞等。
3. 其他原因导致组织缺氧：如严重低氧血症、严重贫血、一氧化碳中毒、糖酵解增加（剧烈运动、颤抖）、癫痫发作等。
B型高乳酸血症的常见病因包括：1.某些后天获得性疾病，如糖尿病酮症酸中毒、肿瘤（白血病、淋巴瘤、嗜铬细胞瘤等）、获得性免疫缺陷病（艾滋病）、严重肝病、肾衰、脓毒症、硫胺素缺乏等；2.药物和中毒，如对乙酰氨基酚、β-受体激动剂、氰化物、胰岛素、硝普钠、核苷酸逆转录酶抑制剂（如齐多夫定、恩替卡韦）、双胍类药物（如苯乙双胍、二甲双胍）、异丙酚、水杨酸盐、有毒醇类（如甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇）等；3.遗传性代谢疾病，如丙酮酸氧化障碍、氧化磷酸化障碍、糖原代谢及糖异生障碍等。
乳酸的代谢过程
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乳酸的代谢过程（大纲）一、乳酸概述1.1乳酸的定义与性质1.2乳酸在生物体内的作用二、乳酸的生成过程2.1乳酸发酵2.1.1乳酸菌发酵过程2.1.2乳酸发酵在食品工业中的应用2.2乳酸在人体内的生成2.2.1乳酸的合成途径2.2.2乳酸生成的调节机制三、乳酸的代谢途径3.1乳酸氧化途径3.1.1乳酸脱氢酶途径3.1.2乳酸酸脱氢酶途径3.2乳酸转化为葡萄糖途径3.2.1乳酸-葡萄糖循环3.2.2乳酸转化为葡萄糖的调控四、乳酸代谢与生理功能4.1乳酸与肌肉疲劳4.2乳酸与免疫调节4.3乳酸与抗氧化作用五、乳酸代谢异常与疾病5.1乳酸酸中毒5.1.1病因与机制5.1.2临床表现与治疗5.2乳酸代谢相关遗传性疾病5.2.1乳酸脱氢酶缺乏症5.2.2乳酸酸转运体缺陷病六、乳酸代谢研究进展与应用6.1乳酸代谢组学研究6.2乳酸在生物能源领域的应用6.3乳酸在生物制药领域的应用一、乳酸概述1.1乳酸的定义与性质乳酸（Lactic acid），化学式为C3H6O3，是一种有机酸。
它是一种白色晶体，有微弱的甜味，易溶于水，熔点为131.5℃。
乳酸在自然界中广泛存在，尤其是在乳制品和水果中含量较高。
在生物体内，乳酸是通过糖酵解途径产生的，是一种重要的代谢产物。
【病例讨论总结】关于外科手术后乳酸升高及肝损伤
关于外科手术后乳酸升高及肝损伤
一、乳酸升高的原因
乳酸是细胞无氧呼吸时葡萄糖的代谢产物，肌肉在缺氧时产生大量的乳酸，经血液运回肝脏，在肝中进行糖异生，再以葡萄糖回到血液，被肌肉再利用，构成乳酸循环，高乳酸血症反映细胞氧供给和氧供需不平衡，其增高程度反应了组织灌注不良和氧债，其升高的主要原因如下：
1、乳酸生成过多：
1）组织氧供不足：CO中度；
2）组织灌注不足：休克，心衰；
3）应激至高儿茶酚胺血症；
4）组织中毒性缺氧；
2、乳酸清除不足：
1）严重肝病；
2）糖尿病；
3）高乳酸血症；
4）ARDS，肺乳酸释放量大大增加。
二、乳酸升高的分型：乳酸升高可分为先天性高乳酸血症（糖酵解酶缺乏症）和获得性高乳酸血症（A型伴组织低氧及B型不伴组织低氧）。
三、手术后肝损伤：
1、手术因素：
1）肝、胆道系统的手术；
2）会造成肝脏淤血的手术；
3）植入物造成肝功能受损的因素；
2、患者因素
1）肝炎、肝硬化、胆道阻塞以及外伤所致的肝损伤；
2）免疫功能异常或遗传缺陷所致的肝脏疾病；
3）因其他疾病服用影响肝脏功能的药物
4）心功能不全；
5）严重营养不良；
6）饮酒等。
3、麻醉因素：
1）药物性肝损
2）体位因素
外科大手术术后病人均伴有不同程度的血乳酸及肝酶异常，出院后多自行好转，不必多虑。
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乳酸堆积对肝星状细胞增殖、分化、凋亡的影响孙辉; 马凌波; 董飞; 胡光荣; 何永捍; 邓颖【期刊名称】《《重庆医学》》【年(卷),期】2019(048)016【总页数】4页(P2743-2746)【关键词】乳酸; 肝星状细胞; 细胞增殖; 细胞分化; 细胞凋亡【作者】孙辉; 马凌波; 董飞; 胡光荣; 何永捍; 邓颖【作者单位】哈尔滨医科大学附属第二医院急诊科 150081; 中国科学院昆明动物研究所昆明650223【正文语种】中文【中图分类】R575.2+9肝纤维化是慢性肝损伤所致的病理改变，表现为肝内细胞外基质(extracellular matrix，ECM)成分过度沉积[1-2]，并影响肝脏的功能。
肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)是肝内ECM主要来源的HSCs，是肝纤维化形成的细胞学基础[3-4]的增殖、分化是肝纤维化的中心环节。
肝硬化是各种慢性肝病所致肝功能受损从而影响体内糖代谢的转化[5]，导致乳酸在体内的异常堆积，使细胞生存的微环境发生改变，刺激纤维结缔组织的大量增生所致。
但乳酸堆积对HSCs的影响尚未见文献报道。
本实验采用体外培养的HSCs制作乳酸堆积模型，探讨乳酸堆积对HSCs增殖、分化和凋亡的影响。
1 材料与方法1.1 实验材料人HSCs(上海坤肯生物化工有限公司)，反转录试剂盒(ABI AppliedBiosystems公司,美国)，L-乳酸、胎牛血清(Sigma公司,美国)，TRIzol，引物(Invitrogen公司,美国)，AnnexinV/PI双染色流式法细胞凋亡检测试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司)，四甲基偶氮唑蓝(MTT，上海碧云天生物技术有限公司)，CO2培养箱、光学显微镜、流式细胞仪、Real-time PCR仪(Thermo公司,美国)。
1.2 方法1.2.1 HSCs的培养 HSCs细胞接种于25 cm2无菌培养瓶中，加入含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液5 mL，置于37 ℃、含5% CO2饱和湿度的培养箱中培养，用0.25%胰蛋白酶消化传代，当细胞生长融合至80%～90%时进行实验。
1.2.2 细胞分组把传代好的HSCs分为4组，乳酸终浓度为0 mmol/L(对照)、0.5 mmol/L(HSCs+0.5 mmol/L乳酸组)、1.0 mmol/L(HSCs+1.0 mmol/L乳酸组)、2.0 mmol/L(HSCs+2.0 mmol/L乳酸组)，分别培养72 h，其中以含0 mmol/L乳酸的HSCs为对照组。
1.2.3 MTT法检测细胞增殖取生长状态良好的HSCs，用0.25%胰酶消化，加入等量培养液中和胰酶并离心，弃上清液后加入PBS，再离心后加入不同乳酸浓度的培养液制成含细胞数为5×107/L的细胞悬液，接种于96孔板上，每孔200 μL，每组设6个复孔，同时设只加培养基而无细胞的空白对照孔。
将各组细胞放置于37 ℃、5% CO2饱和湿度培养箱内培养72 h后，加人20 μL MTT(5 g/L)后再培养4 h，离心弃上清液后加入200 μL二甲基亚砜(DMSO)，振荡15 min，使用全自动酶标仪检测490 nm处的吸光度(A)值。
HSCs增殖抑制率(%)=(1-各实验组A 值/对照组A值)×100%。
1.2.4 流式细胞仪测定HSCs凋亡和细胞周期 HSCs凋亡检测:把生长良好的各组细胞经消化、离心后分别调整为含细胞数为5×106/mL的细胞悬液，各组分别取1 mL于离心管中，经反复离心洗涤混匀后，各组分别取250 μL，加入5 μL PI和10 μL A nnexinV-FITC，充分混合均匀后室温下避光孵育15 min，流式细胞仪检测细胞凋亡率，实验每组重复3次。
细胞周期检测：各组细胞培养72 h后用0.25%胰酶消化收集细胞，PBS洗2遍，弃上清液，加入1 mL 70%预冷乙醇，吹打均匀，4 ℃过夜固定(12 h以上)。
PBS洗涤去乙醇，1 000 r/min离心5 min，PBS 洗2遍。
0.5 mL PBS重悬细胞，加入PI和 RNase A至终浓度50 μg/mL，37 ℃ 温浴30 min。
用流式细胞仪测定细胞周期，实验每组重复3次。
1.2.5 real-time PCR法检测α-SMA和Fasl mRNA1.2.5.1 提取总RNA 各组细胞培养72 h后,弃培养液,向24孔板中每孔加入0.2mL TRIzol反复吹打后刮取裂解液分别移至灭菌的1.5 mL EP管中，室温下静置5 min。
每组EP管中加0.2 mL氯仿，经震荡(15 s)-静置(2 min)-离心(4 ℃，13 500×g、15 min)-上清液移管后，加入0.5 mL的异丙醇，再经震荡-静置(10 min)-离心(4 ℃，13 500×g、10 min)-弃上清液后，加入1 mL 75%乙醇，最后轻洗沉淀-离心(4 ℃，10 600×g、5 min)-弃上清-室温晾干后，加入DEPC水溶解并保存于冰上，待检。
1.2.5.2 逆转录合成cDNA 先测定总RNA浓度。
按试剂盒操作说明书操作，将0.5 μg的样本RNA、0.5 μL RTase、0.4 μL dNTP、1.0 μL 10×RT buffer、1.0 μL引物、7.5 μL双蒸水配成10 μL反转录体系，上机。
1.2.5.3 real-time PCR分析首先在real-time PCR仪中进行40个循环(95 ℃15 s，60 ℃ 1 min)，紧接着在95 ℃条件下用SYBR Green PCR Master Mix进行变性10 min；利用ABI Prism®快速7500型荧光定量PCR仪对cDNA进行扩增。
结果用实验组目的基因相对于对照组基因变化的2-ΔΔCt表示。
各基因real-time PCR引物序列见表1。
1.2.6 caspase-3活性检测各组细胞培养经胰蛋白酶消化、PBS洗涤后制备成细胞数为1×106/mL的单细胞悬液，取1 mL于离心管中经离心(1 000 r/min、5 min)后弃上清液，加入50 μL预冷的细胞裂解液，冰浴10 min，再以1 000 r/min离心5 min，弃上清液后加入5 μL caspase-3底物(DEVD-FC)和50 μL 2×反应缓冲液/二硫苏糖醇(DTT)混合液，37 ℃恒温水浴1 h，上机待检。
caspase-3相对活性=实验组荧光强度/对照组荧光强度。
表1 real-time PCR引物序列基因方向引物(5'-3')产物大小(bp)GAPDH正向CATGACCACAGTCCATGCCATC450反向CACCCTGTTGCTGTAGCCATATT Cα-SMA正向AAGAGGAAGACAGCACAGCTC101反向GATGGATGGGAAAACAGCCFasl正向CCAGCCCTTCAATTACCCATATCC68反向ATCTTCCCCTCCATCATCACCAG1.3 统计学处理实验数据采用SPSS19.0软件进行处理，计量资料用表示，组间两两比较采用LSD-t检验，多组间比较采用单因素方差分析法，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 乳酸对HSCs增殖的影响不同浓度乳酸培养HSCs 72 h后用MTT法检测HSCs的增殖能力发现，低浓度(≤2 mmol/L)乳酸对HSCs增殖具有明显促进作用(P<0.05) ，之后随着乳酸浓度的增加，乳酸对HSCs毒性增加，对HSCs生长有明显的抑制作用(P<0.05)，见表2。
2.2 乳酸对HSCs的凋亡和细胞周期的影响不同浓度乳酸培养HSCs 72 h后采用流式细胞仪检测HSCs凋亡和细胞周期发现，在乳酸浓度为0、0.5、1.0、2.0 mmol/L时HSCs的凋亡率与对照组比较，逐渐减少，差异有统计学意义(P<0.05)；低浓度乳酸作用72 h可调节细胞周期，G0/G1期细胞减少，S期细胞增加，与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),见表3。
2.3 乳酸对HSCs的凋亡基因FasL mRNA的表达和caspase-3活性的影响各低浓度乳酸组与对照组比较，凋亡基因FasL mRNA的表达明显减少(P<0.05)，caspase-3活性明显降低(P<0.05)，并且其变化趋势与乳酸浓度呈剂量效应，见图1A、B。
2.4 乳酸对HSCs ECM中α-SMA mRNA的影响 real-time PCR检测结果显示，与对照组比较，低浓度乳酸可明显刺激细胞外基质α-SMA mRNA的表达(P<0.05)，见图1C。
表2 乳酸对HSCs的抑制率乳酸浓度(mmol/L)A值增殖抑制率(%)0(对照组)0.90±0.21-0.50.93±0.14a-2.11.00.95±0.17a-4.42.00.96±0.31a-5.54.00.84±0.27a7.78.00.71±0.35a21.912.00.62±0.28a31.916.00.49±0.51a46.220.00.40±0.43a56.1-：此项无数据；a：P<0.05，与对照组比较表3 乳酸对HSCs凋亡和细胞周期的影响乳酸浓度(mmol/L)凋亡率G0/G1S0(对照组)11.2±0.5765.3±1.533.1±0.50.58.1±0.31a60.6±0.9a37.6±1.1a1.05.8±0.29 a53.3±1.2a44.3±0.8a2.04.3±0.31a45.3±0.8a50.9±1.5aa：P<0.05，与对照组比较A:FasL;B：caspase-3;C:α-SMA;a：P<0.05，与对照组比较图1 乳酸对HSCs FasL、caspase-3、α-SMA mRNA表达的影响3 讨论各种致病因子可导致肝内基质异常地沉积、结缔组织异常增生，肝损伤在修复愈合的过程中伴有肝纤维化发生，长期的纤维化过程则会发展成肝硬化。
目前对肝纤维化的研究主要集中在HSCs的激活、肝内基质合成和降解失衡、有关的细胞因子(如TNF-α、PDGF、TGF-β等)、天然免疫和获得性免疫系统[6-7]等方面。
而HSCs的激活则是肝纤维化形成的中心环节[8-9]，损伤的肝细胞释放细胞因子如PDGF、TGF-β等，导致HSCs被激活，活化的HSCs分泌合成ECM增多，并转化为成纤维细胞。