益气活血方对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响
中药对干细胞的作用研究进展
中药对干细胞的作用研究进展吕梦婷;黄晓桃;吴云霞【期刊名称】《中西医结合研究》【年(卷),期】2018(010)005【总页数】4页(P261-264)【作者】吕梦婷;黄晓桃;吴云霞【作者单位】华中科技大学同济医学院药学院 ,中药/药理系,武汉 430030;华中科技大学同济医学院附属湖北省妇幼保健院 ,武汉 430070;华中科技大学同济医学院药学院 ,中药/药理系,武汉 430030【正文语种】中文干细胞是一类具有多向分化潜能和自我复制功能的早期未分化细胞，按其来源不同可分为胚胎干细胞和成体干细胞。
在特定条件下，干细胞可以分化成功能不同的细胞，形成多种组织和器官。
近年来，随着研究的逐渐深入，在越来越多的组织和器官中均发现了干细胞的存在[1]。
干细胞的多向分化潜能和自我复制功能，使其在组织结构和功能的维护更新及损伤修复中发挥重要作用，因此干细胞的应用将为临床某些疾病的治疗提供新方法和新思路[2]。
中医药具有几千年悠久历史，不仅是中华民族的宝贵财富，也是世界传统医学的重要组成部分。
中药材来源广泛、作用靶点多且毒副作用小，在各类疾病的治疗中发挥着重要作用。
随着对中医药的不断深入研究，许多学者发现，中药能够促进干细胞的增殖和分化，并能直接在干细胞治疗中产生协同效应，为疾病的治疗开辟新前景。
近年来有关中药干预干细胞的研究成为热门领域，现本文从基础和临床两个方面对中药复方、单味药及其有效成分对干细胞作用的研究作如下综述。
1 中药对干细胞的作用1.1 中药复方对干细胞的作用目前，中药大多以复方的形式治疗疾病。
复方体现了中药之间的协同效应，达到增效减毒的目的，因此对复方的研究与实际临床应用更贴近。
近年来，中药复方对胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、造血干细胞乃至毛囊干细胞的作用均有较多文献报道，其为中药联合干细胞移植治疗相关疾病奠定基础。
安红梅等[3]以食用左归丸的大鼠含药血清培养小鼠胚胎干细胞CRL-1825细胞株，以探讨补肾阳中药对小鼠胚胎干细胞的影响，结果发现补肾阳中药可以有效抑制CRL-1825细胞凋亡。
活血化淤法联合化疗在非小细胞肺癌中的应用分析
活血化淤法联合化疗在非小细胞肺癌中的应用分析【摘要】目的：分析非小细胞肺癌中采用活血化瘀法联合化疗的疗效。
方法：将80例非小细胞肺癌患者分成试验1组和试验2组，试验1组进行化疗，试验2组联合活血化瘀法，比较疗效。
结果：从病情控制方面来看，试验2组患者中医症状评分低于试验1组，且疾病控制率高于试验1组；从预后方面来看，试验2组患者免疫功能指标改善效果较高，且不良反应发生率较低，生活质量评分得到提高；所有数据组间比较均P<0.05。
结论：非小细胞肺癌患者在进行化疗的同时，配合活血化瘀法进行干预，可控制病情，提高预后。
【关键词】活血化瘀法；化疗；非小细胞癌；治疗效果肺癌是当前恶性肿瘤疾病中比较常见的一种，在肺癌众多类型中，非小细胞肺癌是高发类型，近几年伴随老龄化问题不断加重下，老年人数量持续增多，而老年人作为肺癌高发群体，导致肺癌发生率持续增高。
当前临床中针对非小细胞肺癌患者的治疗，手术是最佳治疗手段，但是如果患者确诊时间较晚，已经错过手术最佳治疗时机，这时则需要采取化疗方式治疗，以控制患者病情发展，延长生存期限。
但是化疗治疗因为药物的特殊性，在治疗期间，可能会产生较为显著的不良反应，同时还可能会影响疗效，预后效果较差。
这些年在临床研究持续探讨下发现，非小细胞肺癌从中医学方面入手进行治疗干预可以发挥出一定的优势，中医学认为非小细胞肺癌属于“肺积”“咳嗽”范畴，所以在治疗上采取活血化瘀法进行治疗，通过中药汤方内治，可以巩固临床疗效，减少不良反应程度。
对此，下文选取非小细胞肺癌患者，分析化疗联合活血化瘀法的疗效。
1 资料与方法1.1基础资料选取2021年1月至2023年1月医院收治80例非小细胞肺癌患者为对象，搜集资料分组见表1。
表1患者资料组别n（例）男女比例年龄（岁）病程（月）TNM分期III期IV期试验1组4022:1846.84±1.3315.84±1.5231（77.50）9（22.50）试验2组4023:1746.91±1.4215.96±1.4129（72.50）11（27.50）X2 /t0.05080.22760.36610.26670.2667P0.82160.82060.71530.60550.60551.2方法试验1组进行化疗治疗，主要选择紫杉醇和顺铂方案，通过静脉滴注的方式，紫杉醇剂量135mg/m2，接着给予顺铂60mg/m2静脉滴注，以21天作为一个治疗疗程，持续治疗两个疗程。
桃红四物汤的药理学研究进展
桃红四物汤的药理学研究进展李翊;彭代银【摘要】This article is a review of the latest progresses achieved in studying the pharmacological aspects of Taohong Siwu Decoction in rnthe context of the effects on cardiovascular system, hones, traumatic injury with blood stasis syndrome, hepatic, anti-tumor, gynecological rndisease,hoping to provide more scientific evidences for Taohong Siwu Decoction studies.%该文从对心血管系统的作用、对骨骼的作用、对损伤血瘀证的作用、对肝脏的作用、抗肿瘤作用、对妇科疾病作用等几个方面综述了桃红四物汤的药理学研究进展,为桃红四物汤研究提供科学依据.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)005【总页数】3页(P529-531)【关键词】桃红四物汤;药理学;研究进展【作者】李翊;彭代银【作者单位】安徽中医学院,安徽省高等学校省级现代中药重点实验室,安徽,合肥,230038;安徽中医学院,安徽省高等学校省级现代中药重点实验室,安徽,合肥,230038【正文语种】中文桃红四物汤源自于清·吴谦的《医宗金鉴》，为活血化瘀方中的经典方剂。
由桃仁、红花、当归、白芍、熟地黄、川芎等6味中药组成，具有养血活血，祛瘀生新之功，被古代医家推崇为调经要方，主治妇女月经不调及痛经，现代常用于血瘀引起的多种病症。
药理学研究证明，其不仅具有改善心功能、抗心肌缺血、抑制血小板聚集、改善血液流变学及微循环作用，而且具有抗缺氧、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血脂、增强免疫功能等多种功效。
安肺益肾方对COPD大鼠血清IL-2、IFN-γ、IgA、IgG及脾淋巴细胞增殖的影响
１。
表达增加 ， Ｉ Ｌ一２表 达 降 低 ， 这 与 有关 文 献 报道 的相
表１ 各组大 鼠血清 Ｉ Ｌ 一 ２ 、 Ｉ Ｆ Ｎ一 ． ｙ 含量的 比较 （ ： ± ５ ， ｎ ＝ ８ ）
似 。予安肺益 肾方 灌 胃后 ， Ｉ Ｆ Ｎ一 不 同程 度下 降 ， Ｉ Ｌ一 ２
疫功 能。
主题词
慢性 阻塞性肺疾病／中医药疗法
安肺 益 肾方／ 治疗应 用 大鼠
慢性 阻塞 性 肺 疾 病 （ ｃ ｈ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｏ ｂ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｐ ｔ ｄ ｍ ｏ ｒ ｉ ａ ｒ ｙ ｄ ｉ ｓ －
２ ｏ ０ ５ Ｏ １ １ １ ； 安肺益 肾方 ： 由冬虫夏草菌丝 粉、 生 黄芪 、 红景天 、 银杏 、 瓜萎 、 海蛤壳 、 麻 黄等 ８味中药组 成 ， 为颗粒 剂 ， 由北 京 师范大学 教育部资源药物工程研究 中心所 提供 ， 规格为 每剂 生药 ８ ９ ． ５ ｇ ， 制成 ２ ２ ． １ ５ ｇ 颗粒 ， 每克颗粒相 当于生药 ３ ． ５ ６ ｇ 。
碱组 ） 和正 常对照组 （ 简称正 常组 ） 。安肺 益 肾方大 、 中、 小
பைடு நூலகம்
探讨该 方对 Ｃ Ｏ Ｐ Ｄ模 型大鼠免疫功能的调节作用。
１ 材 料
剂量组的给药剂量分 别为 ２ ． ４ 、 １ ． ２ 、 ０ ． ６ ｇ ／ ｋ ｇ ， 分 别为 临床用
益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠胰腺miR-375表达水平和胰岛功能的影响
益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠胰腺miR-375表达水平和胰岛功能的影响袁洁;张军;戴金颖;王顺意;徐雪梅;赵静;刘颖【摘要】目的探讨益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠胰腺组织中miR-375表达水平的影响,并分析其与胰岛β细胞功能的相关性.方法采用小剂量链脲佐菌素(STZ)加高脂饮食诱导2型糖尿病大鼠模型.设空白组、模型组、益气养阴活血方(自拟)高、中、低剂量治疗组,于治疗8周后处死大鼠.分别测定大鼠体质量、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2hBG)、胰岛素敏感指数(ISI)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),胰岛素分泌指数(HOMA-β)光镜下观察胰岛形态学变化,通过实时荧光定量PCR技术检测胰腺组织中miR-375的表达水平.结果经益气养阴活血方治疗后,大鼠的体质量、FBG、2hBG均不同程度降低(P＜ 0.05);HOMA-IR均有所降低,ISI HOMA-β均有所升高(P＜0.05);胰岛细胞形态有不同程度改善;胰腺组织中的miR-375表达量显著降低,模型组(2.29±0.91),益气养阴活血方低剂量组(0.33±0.21),中剂量组(0.43±0.32),高剂量组(0.48 ±0.19),治疗前后比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论益气养阴活血方可改善胰岛β细胞功能.其改善的原因可能与胰腺中miR-375表达下调有关.%Objective To study the effect of Yi Qi Yang Yin Huo Xue decoction on miR-375 in pancreatic tissue and on the function of β cells in diabetic rat models.Methods Diabetic rat models were established using high-energy diet and intravenous injection of streptozocin(STZ).The rats were divided into blank group,model group,and high-,medium-and low-dose Yi Qi Yang Yin Huo Xue decoction groups.After 8 weeks of administration,body weight (BW) was measured and blood was collectedfor detection of fasting blood glucose (FBG),fasting bloodinsulin(FINS),insulin sensitive index(ISI) and for calculation of the indexes of insulin resistance(HOMA-IR).Before the rats were sacrificed,2-hour plasma glucose(2hPG) was determined.The histopathological features in the islet tissue were examined with HE staining.The level of miR-375 in the islet tissue was detected with qPCR.Single factor analysis of variance was used to sort out the data.Results After the treatment with Yi Qi Yang Yin Huo Xue decoction,the levels of WB,FBG,2hPG,FINS and HOMA-IR decreased significantly (P ＜ 0.05) compared with the model group while the ISI was increased significantly (P ＜ 0.05).The islet apoptosis was reduced by the administration of this pared with model group (2.29 ± 0.91),the levels of miR-375 in the high dose Yi Qi Yang Yin Huo Xue de coction group(0.48 ±0.19),medium dose group(0.43 ±0.32) and low dose group (0.33 ± 0.21) were decreased significantly (P ＜0.05).Conclusions Yi Qi Yang Yin Huo Xue decoction can improve islet beta cell function,and the mechanism may be associated with the down-regulation of the level of miR-375 in islet tissues.【期刊名称】《武警医学》【年(卷),期】2017(028)004【总页数】5页(P347-351)【关键词】益气养阴活血方;2型糖尿病大鼠;miR-375;胰岛β细胞功能【作者】袁洁;张军;戴金颖;王顺意;徐雪梅;赵静;刘颖【作者单位】063000唐山,华北理工大学;063000,唐山市中医医院内分泌一科;063000唐山,华北理工大学;063000唐山,华北理工大学;063000唐山,华北理工大学;063000唐山,华北理工大学;063000,唐山市中医医院内分泌一科【正文语种】中文【中图分类】R285.5糖尿病多属于中医“消渴病”的范畴，由于其起病隐匿且病程漫长，在糖耐量受损阶段及糖尿病早期，因无明显的“三多一少”的临床症状，往往被人们忽略，来医院就诊时往往发病已久。
水飞蓟宾对肝星状细胞增殖的抑制和促凋亡作用
水飞蓟宾对肝星状细胞增殖的抑制和促凋亡作用黄家明【期刊名称】《临床合理用药杂志》【年(卷),期】2017(10)33【摘要】目的探讨水飞蓟宾对肝星状细胞(HSC)增殖的抑制和促凋亡作用。
方法取对数生长期的HSC-T6细胞,用完全培养基将细胞悬液的浓度调至1×104个/ml,接种于96孔板,以MTT法分别检测OD值,以流式细胞术检测各组细胞凋亡率。
结果随着药物剂量的增加,细胞的增殖受抑,呈明显剂量依赖性。
对照组、25umol/L,50 umol/L,100 umol/L,200 umol/L,400 umol/L的凋亡比分别为(5.30±0.97)%、(14.60±1.70)%、(35.40±8.93)%、(47.60±11.34)%、(55.80±15.94)%、(69.60±22.93)%,可见水飞蓟宾剂量依赖性可诱导HSC-T6凋亡。
结论水飞蓟宾对HSC增殖和迁移具有明显的抑制作用,其机制可能与其诱导肿瘤细胞的早期凋亡有关,细胞凋亡与细胞周期活动密不可分。
【总页数】2页(P83-84)【作者】黄家明【作者单位】江西省赣州市人民医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.水飞蓟宾抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡的作用及机制2.水飞蓟宾抑制人乳头状甲状腺癌TPC-1细胞增殖及诱导凋亡作用的实验研究3.水飞蓟宾对人膀胱癌细胞系T24和5637的增殖抑制及凋亡诱导作用4.水飞蓟宾对大鼠肝HSC—T6储脂细胞增殖和胶原合成的抑制作用5.水飞蓟宾通过Fas/FasL信号通路促进肝星状细胞凋亡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中医药抗肝纤维经治法研究进展
学 两组胶原沉积 总量及 Ｉ Ｉ型胶原量 均 明显低于病 理对照 、
组， 以桃虹 四物汤组最好 ・ 明显优于其 他两组 （ ０ Ｏ 】陆 Ｐ＜ ． １ 。
雄等 观察旋 覆菇汤 治疗 大 鼠肝纤维化 和肝窦 毛细血管 化 ０
维普资讯
第２ 卷 第 ２ ６ 期
２ ０ ３ ０２ 月
山东中 医药 大学学报
Ｊ ＲＮＡ ＡＮ ＯＵ Ｌ ＯＦ ＳＨ ＤＯＮ ＵＮＩＥ Ｉ Ｃ Ｇ Ｖ ＲＳＴＹ ＯＦ Ｔ Ｍ
Ｖｏ ． ６， ． ｔ ２ Ｎｏ ２
Ｍ ａ ．２ ０２ ｒ ０
黄燕等 ） 大鼠肝纤 维 化作 用 ， 用肝组织连 续切 片电子计 抗 采 算机辅助病理组织三维重建技 术 ， 对肝纤维 化及治疗后肝组 织 的纤维 间 隔 、 肝血 窦等结构进 行三维 礁寨及体 积爿量 ・ 结 果 显示 复方８ １ ６ 可使纤维 化肝脏 的奸维 吸收 消靛 ， 紊乱 的肝
的作 用 ， 结果 显 示治疗组 大 鼠肝组 筝 中胶 原 形成 量明显 下 ｝ 降， 电镜观察对 照组大 鼠肝窦 内皮细胞 间窗孔数 明显减少 ． 内皮 下有连续性 基底 膜出现 ， 其肝 窦毛细血管 化程度重于治
对细胞增殖抑 翩最强 ． 扶正组对 胶原生成及基 因表达抑｛ 最 睁 Ｉ 强， 面垒方组介于两者之间。 ３ 益气话 血法 黄 彬等 认 为慢性肝 炎肝纤 维化 的瘸 机关键 是 气虚 血 瘀、 本虚标 实 ， 立法 益气 活血 软 坚 ， 用软坚 冲剂 （ 应 黄芪 丹
根 据患者 的临床 表现 ・ 见于胁痛 ， 可 症瘕 、 积聚 、 鼓胀 等多种 病证， 多数 医家认 为其病 因病机 为湿 、 、 瘀 、 、 、 热 毒 痰 郁 虚作
养阴益气活血方药对VEC血管调节物质的影响
养阴益气活血方药对VEC血管调节物质的影响
张旭;戴晓明
【期刊名称】《青海医药杂志》
【年(卷),期】2006(36)12
【摘要】目的:观察养阴益气活血方药物血清对血管内皮细胞(VEC)病理模型血管调节物质的影响及其对血瘀证的治疗机理。
方法:经LPS及养阴益气活血方药物血清作用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)12h后,取上清培养液测定NO与ET水平。
结果:养阴益气活血方药物血清可降低LPS所致NO与ET的升高。
结论:养阴益气活血方可以维持VEC血管调节物质的动态平衡,维持其正常生理功能,从而能有效预防和治疗血瘀证。
【总页数】3页(P1-3)
【关键词】养阴益气活血方;药物血清;人脐静脉血管内皮细胞;NO;ET
【作者】张旭;戴晓明
【作者单位】南京中医药大学基础医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R289.5;R331.36
【相关文献】
1.养阴益气活血方药对血管内皮细胞的影响 [J], 仲浩;吴德芹;周晶;张旭
2.养阴益气活血方药对大鼠血液流变学和血小板聚集的影响 [J], 杨洁红;郭莹;别晓东;刘华;万海同
3.养阴益气活血方药不同配伍对VSMC的影响 [J], 戴晓明;张旭;蒋明;杨进
4.养阴与益气活血方药对培养人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶等功能影响的对比研究[J], 万海同;白海波;杨洁红;余道军;杜月光;别晓东;严伟民;杨进;郑筱祥
5.益气活血养阴方药对实验性心衰大鼠血流动力学的影响 [J], 韩曼;赵小明;张灯成;于远望
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益气活血方对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响马力天;李洁;张毅;任秦有;丁井永;赵参军;杜江河;李佩;毛立挺【摘要】目的探讨中药“复方益气活血方”(Yiqihuoxue prescription)对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响.方法体外培养肝星状细胞LX-2,浓度分别为1.125,2.228,3.31,4.37,5.41 mg/ml益气活血方作用于LX-2细胞24h,48h,然后用MTT比色法检测细胞的增殖情况,选取合适的益气活血药物浓度(1.125,2.228,6.432 mg/ml)用流式细胞术检测益气活血药作用24 h后对LX-2细胞凋亡的影响.结果①MTT检测结果显示,不同浓度的益气活血方用于LX-2细胞24h和48h后,能够抑制LX-2细胞增殖(P＜0.05),24h抑制率随药物浓度的增加而提高.48 h时,当药物浓度达到3.31 mg/ml后,其抑制作用不随药物浓度的增加而增强(P＞0.05).②流式细胞术检测显示,益气活血方(浓度分别为1.125,2.228,6.432 mg/ml),可明显促进LX-2细胞凋亡.结论益气活血方能抑制LX-2细胞的增殖,促进LX-2细胞凋亡,其抑制作用呈时间-剂量依赖性.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2015(046)006【总页数】4页(P528-531)【关键词】益气活血方;LX-2细胞;增殖;凋亡【作者】马力天;李洁;张毅;任秦有;丁井永;赵参军;杜江河;李佩;毛立挺【作者单位】解放军68222部队营卫生所,陇西748000;第四军医大学唐都医院中医科暨中西医结合肿瘤科;解放军451医院内分泌科;第四军医大学唐都医院中医科暨中西医结合肿瘤科;第四军医大学唐都医院中医科暨中西医结合肿瘤科;第四军医大学唐都医院中医科暨中西医结合肿瘤科;第四军医大学唐都医院中医科暨中西医结合肿瘤科;解放军68313部队卫生队;解放军68222部队卫生队;解放军68222部队卫生队【正文语种】中文【中图分类】R575肝纤维化(liver fibrosis，LF)是肝内结缔组织的异常增生，导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程，是许多慢性肝病发生发展过程中的重要特征，如肝细胞癌［1］和肝硬化［2］。
多种原因可以导致LF的发生，如病毒感染、乙醇摄入、肝内脂肪沉积、糖尿病、毒物等［3，4］。
肝纤维化的特征是细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的过度沉积。
肝纤维化的发病机制非常复杂，目前主要认为肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSCs)的激活，转化为成肌纤维细胞和成纤维细胞［5-8］，合成分泌大量ECM在LF的发病过程中起了主要作用。
肝纤维化是一种可逆的损伤修复反应［9］。
HSC的激活是本病发展的中心环节，因此，主要在以下几个方面进行肝纤维化的治疗:①去除原发病因;②围绕HSC进行治疗，如通过抑制PDGF和TGF-β来抑制HSC的活化、直接抑制HSCs的活性和抑制ECM的合成和分泌等。
但是由于肝纤维化发病原因极其复杂，西药在治疗方面效果并不理想且费用昂贵。
而祖国医学在这方面有其独特的优势，不仅有价格优势，而且不良反应较少。
根据其临床表现，属于中医“积聚”等病症范畴，大量的研究表明［10-12］，中药在治疗本病方面有疗效好，且毒副作用小的优势。
因此，我们选择中药复方益气活血方(Yiqihuoxue prescription)，以人肝星状细胞LX-2为靶细胞，用MTT法观察不同剂量药物对其增殖的影响，用流式细胞术观察药物对细胞凋亡的影响，体外研究其对LX-2细胞的抑制作用，为进一步研究其导致LX-2细胞凋亡的机制提供参考。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂MTT试剂(晶彩生物有限公司)、Bio-rad酶联免疫检测仪、DMEM高糖培养基(Gibco公司，美国)、四季青胎牛血清。
LX-2细胞由第四军医大学细胞工程学研究中心边惠洁教授赠予，美国 Bection Dickinson公司流式细胞仪，750 g多功能粉碎机、渗滤柱、旋转蒸发仪、循环水式多用真空泵。
1.2 LX-2细胞的培养及传代将LX-2细胞培养在含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的高糖DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的细胞孵箱中，每天换液1次。
在倒置显微镜下观察细胞密度为80%-90%时，以胰酶37℃消化2-3 min传代。
1.3 实验药物的制备精选黄芪15 g、人参10 g等益气药物，莪术15 g、当归10 g等活血药物共17味中药组成复方益气活血方(购自西安市诚信药材行)。
制备过程:(1)提挥发油:①用750 g多功能粉碎机将益气血活血方中当归、莪术，过1号筛，直至全部粉碎完毕。
②先将益气活血方中当归、莪术按1∶1的比例加入渗滤柱中，第1次加入1 500 ml的石油醚，以60滴/min的速度开始滴，直至滴完，然后再加入2次石油醚，每次500 ml，以同样的滴速滴完;③将渗滤出的石油醚+药油装入1 000 ml的烧瓶中，每次500 ml，用旋转蒸发仪进行蒸发，直至石油醚全部回收完成，将留下的挥发油装入玻璃瓶中，密闭备用;④将渗滤柱中的药粉倒出，使石油醚挥发完毕，干药粉保存备用。
(2)熬药:每剂250 g加水500 ml，按传统煎药法文火煎煮30 min取药液，以恒温水浴锅浓缩成含生药1.25 g/ml的汤剂，真空包装，4℃冰箱保存。
以上工作由第四军医大学唐都医院药剂科中药制作车间完成。
1.4 药物浓度的选择及稀释一个60 kg的病人，其体液量占总重量的20%，即12 L，熬成的药物浓度为:1.25 g/ml，按照成年人每天服用50 ml计算，假定全部吸收，则其体内药物浓度为:(50 × 1.25)/12 000=5.21 mg/ml，但是药物不可能被全部吸收，所以在我们进行MTT实验时，选择药物浓度略低于5.21 mg/ml，因此选择的药物浓度为1.125，2.228，3.31，4.37，5.41 mg/ml。
在用流式细胞术检测细胞凋亡时，选择药物浓度为1.125，2.228，6.432 mg/ml。
由于1.25 g/ml的药物很黏稠，所以在加药时要进行稀释，其稀释方法为:将100 μl的益气活血药物溶于1 000 μl的培养基中(含10%FBS和双抗)，稀释后药物浓度为113.63 mg/ml。
药物稀释后，用0.22 μm孔径的滤器对其进行过滤除菌。
1.5 MTT法检测LX-2细胞的增殖情况对数生长期的LX-2细胞，胰酶消化后，1 000 r/min离心5 min，用高糖DMEM(含10%胎牛血清)将细胞浓度调为5×104 cell/ml细胞悬液后，接种于96孔培养板，每孔加细胞悬液100 μl(即每孔5 000个细胞)，放在37℃、5%CO2的细胞培养箱中，待细胞贴壁长至底面积的50%后，更换培养基，并且每孔分别加入过滤后的益气活血药物，使终浓度达到1.125，2.228，3.31，4.37，5.41 mg/ml;每一浓度设 4个复孔，另设空白对照组，此外，设立单加药物和培养基，不加细胞的对照组(观察药物是否会与MTT反应)。
单独作用24，48 h后，去除培养基，每孔加20 μl，5 mg/ml MTT 溶液，孵育 4 h，每孔加入二甲基亚砜150 μl，在微型混合器上振荡10 min后于全自动酶标仪上测定490 nm OD值。
实验重复3次，取均值计算增殖抑制率。
增殖抑制率=(1-药物组OD值/对照组OD值)×100%。
1.6 流式细胞术检测细胞的凋亡情况取对数生长期的LX-2细胞，胰酶消化后，常规离心，用高糖DMEM(含10%胎牛血清)将细胞浓度调为5×104 cell/ml细胞悬液后，接种于6孔培养板，每孔加细胞悬液2 000 μl，放在37℃、5%CO2的细胞培养箱中，待其长到80%后，更换培养基，并且每孔分别加入益气活血药，使终浓度达到1.125，2.228，6.432mg/ml。
药物作用24 h 后，收集细胞(贴壁细胞用胰酶消化，悬浮细胞离心收集)，收集细胞后用PBS洗2次，根据AnnexinⅤ-FITC/PI双标记试剂盒说明，取195 μl细胞悬液，加入5 μl AnnexinⅤ-FITC混匀，室温反应10 min，PBS洗细胞一次，在以190 μl稀释的结合缓冲液重悬，加10 μl的PI，用流式细胞仪分析。
1.7 统计学分析计量资料用±s表示，数据分析采用SPSS20.0统计软件进行单因素方差分析。
流式细胞仪分析采集软件BD FACSDiva Software，以P＜0.05为差异有统计学意义。
图1 益气活血方对LX-2细胞增殖的影响Figure 1 Effect of Yiqihuoxue prescription on the proliferation of LX-2 cells2 结果2.1 益气活血方对LX-2细胞增殖的影响各时间点各浓度药物对LX-2细胞的增殖均有抑制作用(P＜0.05，见图1)，24 h时随药物浓度增加，其抑制作用也逐渐增强(P＜0.05)，48 h时当药物浓度达到3.31 mg/ml时，其抑制作用不随药物浓度的增加而增强(P ＞0.05)。
除4.37，5.41 mg/ml外，其余组随药物作用时间的延长，其抑制率也增高(P ＜0.05)。
2.2 益气活血方对LX-2细胞凋亡的影响细胞在接受到相应的信号刺激时会启动细胞凋亡，磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)在细胞凋亡早期会从细胞膜内侧翻转到细胞膜的表面，AnnexinⅤ与PS高亲和力特异性结合，检测标记荧光的AnnexinⅤ可以识别细胞的早期凋亡。
在细胞凋亡的中晚期和死细胞，碘化丙啶(propidine iodide，PI)能透过细胞膜而使细胞核红染。
因此，联合使用AnnexinⅤ与PI，可以将早晚期凋亡细胞和死细胞区分开。
凋亡结果显示:细胞凋亡率(B2+B4)随药物浓度增加逐渐增加(见图2)，其中B4为早期凋亡，B2为晚期凋亡，即，益气活血方可促进细胞凋亡。
图2 益气活血方作用24 h对LX-2细胞凋亡的影响Figure 2 Apoptosis of LX-2 cells after treated with Yiqihuoxue prescription for 24 h3 讨论肝星状细胞(HSC)的激活、增殖在肝纤维化的发生发展中发挥着至关重要的作用［13，14］。
西方医学针对本病无特效药，祖国医学却日益发挥出独有的优势。
虽然在祖国医学中并无本病的具体病名，但可依据其临床表现将其病机归纳为“气滞血瘀”和“正气虚弱”，在治疗上当强调“活血化瘀”与“扶正补虚”并用［15，16］。