革兰染色——【医学微生物学精品讲义】
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《革兰氏染色》课件
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该方法基于细菌细胞壁的构造和成分 差异，通过染色剂对细菌细胞壁的吸 附和渗透作用，显示出不同的颜色， 从而进行鉴别。
革兰氏染色中使用的试剂及其作用
结晶紫
用于初步染色，能与细 胞壁结合，形成不溶性
复合物。
碘液
用于加强结晶紫与细胞 壁的结合，使染色更明
显。
酒精
脱色剂，去除染料与细 胞壁结合的复合物，使
染色
结晶紫染色
将结晶紫染液滴加在载玻片上，覆盖 菌体，染色1-2分钟。
冲洗
用吸水纸吸去多余染液，用清水轻轻 冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
水洗和脱色
水洗
用流水冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
脱色
将载玻片放入脱色液中染液滴加在载玻片上，覆盖菌体，复染1-2分钟。
色或粉红色。
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片
将待染色的菌体轻轻涂布在载玻 片上，确保菌体均匀分布。
干燥
将涂有菌体的载玻片放在室温下 自然干燥，避免强烈气流或直接 阳光照射。
固定
火焰固定
通过短时间轻触载玻片边缘，用火焰迅速固定菌体，使其与载玻片粘附。
冷却
将固定后的载玻片放在干净的桌面上自然冷却。
染色时间
染色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
脱色时间
脱色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
染色方法
不同的染色方法可能会影响染 色效果和观察结果。
05
革兰氏染色的应用和意 义
在医学诊断中的应用
01
鉴别细菌种类
革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要方法之一，通过染色结果的不同可以
将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，有助于医生对感染进
该方法基于细菌细胞壁的构造和成分 差异，通过染色剂对细菌细胞壁的吸 附和渗透作用，显示出不同的颜色， 从而进行鉴别。
革兰氏染色中使用的试剂及其作用
结晶紫
用于初步染色，能与细 胞壁结合，形成不溶性
复合物。
碘液
用于加强结晶紫与细胞 壁的结合，使染色更明
显。
酒精
脱色剂，去除染料与细 胞壁结合的复合物，使
染色
结晶紫染色
将结晶紫染液滴加在载玻片上，覆盖 菌体，染色1-2分钟。
冲洗
用吸水纸吸去多余染液，用清水轻轻 冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
水洗和脱色
水洗
用流水冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
脱色
将载玻片放入脱色液中染液滴加在载玻片上，覆盖菌体，复染1-2分钟。
色或粉红色。
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片
将待染色的菌体轻轻涂布在载玻 片上，确保菌体均匀分布。
干燥
将涂有菌体的载玻片放在室温下 自然干燥，避免强烈气流或直接 阳光照射。
固定
火焰固定
通过短时间轻触载玻片边缘，用火焰迅速固定菌体，使其与载玻片粘附。
冷却
将固定后的载玻片放在干净的桌面上自然冷却。
染色时间
染色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
脱色时间
脱色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
染色方法
不同的染色方法可能会影响染 色效果和观察结果。
05
革兰氏染色的应用和意 义
在医学诊断中的应用
01
鉴别细菌种类
革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要方法之一，通过染色结果的不同可以
将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，有助于医生对感染进
讲义-细菌的革兰氏染色
细菌的革兰氏染色一、目的与要求：1 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性.2 学习掌握革兰氏染色技术，巩固学习光学显微镜油镜的使用方法。
二、原理：革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gram氏创立的，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。
革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。
经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。
实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。
碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。
革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
三实验器材1 菌种：大肠杆菌。
2 染色液和试剂：生理盐水、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红复染液, 香柏油，显微镜擦拭液（二甲苯）.３器材：酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。
四实验方法1 涂片:•取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水（或蒸馏水）；•用接种环无菌操作从琼脂培养基上挑取适量菌苔（1－2环）；•将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。
细菌革兰氏染色PPT课件
实验二 细菌革兰氏染色
1
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
2
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
3
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
17
1、根霉——菌丝特化形成假根等特化菌丝
18
1、根霉——孢囊孢子（无性繁殖）
19
2、曲霉、青霉——分生孢子（无性繁殖）
20
3、犁头霉——接合孢子（有性繁殖）
21圆柱形，
但有时某些酵母菌可形成假菌丝。酵母菌无性繁殖以出芽 方式生殖。
22
微生物的菌落形态
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
5
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
6
四、实验方法
（一）革兰氏染色 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—
菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉 眼可见的群体。
区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细 胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态 的集中反映，因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征， 可通过这些特征差异区分和识别。
特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质 地等。
1
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
2
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
3
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
17
1、根霉——菌丝特化形成假根等特化菌丝
18
1、根霉——孢囊孢子（无性繁殖）
19
2、曲霉、青霉——分生孢子（无性繁殖）
20
3、犁头霉——接合孢子（有性繁殖）
21圆柱形，
但有时某些酵母菌可形成假菌丝。酵母菌无性繁殖以出芽 方式生殖。
22
微生物的菌落形态
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
5
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
6
四、实验方法
（一）革兰氏染色 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—
菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉 眼可见的群体。
区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细 胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态 的集中反映，因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征， 可通过这些特征差异区分和识别。
特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质 地等。
《革兰氏染色法》课件
将脱色后的涂片用番红染液复染，时间约为1-2分钟。番红是 一种酸性染料，可以和蛋白质结合，使菌体或细胞呈现红色 。
番红复染的作用是使菌体或细胞呈现红色，使其更加明显， 有助于观察和鉴别。同时，番红还可以与结晶紫形成鲜明的 对比，使观察更加准确。
冲洗与干燥
• 将染色完成的涂片用清水冲洗干净，然后晾干或用吸水纸吸干 水分。冲洗的目的是去除染色过程中残留的染料和媒染剂等物 质，以免对观察造成干扰。干燥的目的是使涂片固定，以便于 保存和观察。
背景
革兰氏染色法的发明对于细菌学的发展起到了重要的推动作 用，为后续的细菌分类、疾病诊断和治疗提供了有力支持。
染色原理
原理
革兰氏染色法的染色原理主要是通过 一系列的脱色处理和复染，使细菌着 色，从而根据颜色差异将细菌分为革 兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
操作流程
革兰氏染色法通常包括涂片、脱色、 媒染、染色和复染等步骤，通过这些 步骤的组合和调整，可以实现对不同 类型细菌的准确鉴别。
革兰氏染色法的结
03
果与意义
革兰氏阳性菌与阴性菌的染色特性
革兰氏阳性菌
被染成紫色或蓝紫色，不易被酒 精脱色，有厚重的革兰氏染色反 应。
革兰氏阴性菌
被染成红色或淡红色，易被酒精 脱色，有较弱的革兰氏染色反应 。
染色结果的分析与解读
根据染色结果判断细菌的种类和特性，有助于临床诊断和 治疗。
通过观察染色后细菌的形态和排列，可以初步判断细菌的 致病性。
重要性
革兰氏染色法对于临床医学、生物技术和食品工业等领域具有重要意义，能够 帮助科学家和医生快速准确地鉴别不同类型的细菌，从而采取相应的治疗和预 防措施。
发展历程与背景
发展历程
革兰氏染色法由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884 年发明，至今已有百余年历史。随着科学技术的不断进步， 该方法在操作流程和染料选择等方面不断得到优化和改进。
实验课6 ——【医学微生物学精品讲义】
5. 摇动卡片片刻，立即用肉眼观察结果。 阴性：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物 阳性：出现粉红色凝集块
TRUST (toluide red unheated serum regain test)
材料：TRUST试剂盒、病人血清
反应卡
1
2
3
Positive Negative Experimental control control group
（4）复染：稀释复红30sec，水洗，甩干水份。
（四）浅部真菌病标本的检查
1. 实验材料 （1）发癣或足癣患者的毛发或皮屑。 （2）10～20%NaOH溶液。 （3）载玻片、盖玻片等。
奋森螺旋体(革兰染色)
梅毒螺旋体(镀银染色)
钩端螺旋体(镀银染色)
暗视野显微镜下苍白密螺旋体 （暗视野，放大1000倍）
（二）梅毒血清学诊断试验
非螺旋体抗原试验：查反应素，特点是敏感性高, 但 易出现假阳性。 反应素是指非特异性抗类脂质抗体。当苍白螺旋体侵 入人体后,便会诱发人体产生两种相对应的抗体,即具 有种和属特异性的IgM和IgG抗体,另一种是非特异性抗 类脂质抗体称为反应素，它不是由螺旋体所产生而是 在螺旋体破坏人体组织过程中所释放的物质间接产生 的这种具有抗体特性的物质称为反应素。这种抗体主 要是IgE。
操作程序：
1. 将待检血清及TRUST抗原于试验前置（23-29℃）中平衡 片刻。
2. 分别吸取阴性和阳性对照各1滴（50μl）加到反应卡的二 个圆圈内并铺匀。
3. 吸取待检血清或血浆（不需灭活）1滴，分别滴加于卡片 上的另一个圆圈内并铺匀。
4. 轻轻摇匀抗原，用专用滴管针头垂直滴加抗原各1滴于 圈内。
真菌
（一）真菌的形态
真菌（fungi）大多为多细胞，仅少数为单细胞。单细 胞型真菌呈圆形或椭圆形，如酵母菌或类酵母型真菌。
TRUST (toluide red unheated serum regain test)
材料：TRUST试剂盒、病人血清
反应卡
1
2
3
Positive Negative Experimental control control group
（4）复染：稀释复红30sec，水洗，甩干水份。
（四）浅部真菌病标本的检查
1. 实验材料 （1）发癣或足癣患者的毛发或皮屑。 （2）10～20%NaOH溶液。 （3）载玻片、盖玻片等。
奋森螺旋体(革兰染色)
梅毒螺旋体(镀银染色)
钩端螺旋体(镀银染色)
暗视野显微镜下苍白密螺旋体 （暗视野，放大1000倍）
（二）梅毒血清学诊断试验
非螺旋体抗原试验：查反应素，特点是敏感性高, 但 易出现假阳性。 反应素是指非特异性抗类脂质抗体。当苍白螺旋体侵 入人体后,便会诱发人体产生两种相对应的抗体,即具 有种和属特异性的IgM和IgG抗体,另一种是非特异性抗 类脂质抗体称为反应素，它不是由螺旋体所产生而是 在螺旋体破坏人体组织过程中所释放的物质间接产生 的这种具有抗体特性的物质称为反应素。这种抗体主 要是IgE。
操作程序：
1. 将待检血清及TRUST抗原于试验前置（23-29℃）中平衡 片刻。
2. 分别吸取阴性和阳性对照各1滴（50μl）加到反应卡的二 个圆圈内并铺匀。
3. 吸取待检血清或血浆（不需灭活）1滴，分别滴加于卡片 上的另一个圆圈内并铺匀。
4. 轻轻摇匀抗原，用专用滴管针头垂直滴加抗原各1滴于 圈内。
真菌
（一）真菌的形态
真菌（fungi）大多为多细胞，仅少数为单细胞。单细 胞型真菌呈圆形或椭圆形，如酵母菌或类酵母型真菌。
实验一 革兰染色法PPT课件
葡萄球菌属主要是釐黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌等链球菌属肺炎链球菌草绿色链球菌肠球菌等白喉杆菌炭疽杆菌破伤风杆菌蜡样芽孢杆菌等其中釐黄色葡萄球菌肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阳性菌通常对青霉素类第一或第二代头孢菌素等高度敏感青霉素可为化脓性细菌感染可首选药物
微生物实验课注意事项
• 禁止不穿白大衣进入实验室； • 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随
2020/3/26
P3
9
9
注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
2020/3/26
11
11
染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
2020/3/26
大肠杆菌(10×100)
12
12
染色结果
螺形菌Spiral bacterium
2020/3/26
13
13
革兰染色意义
★鉴别细菌 ★选择抗菌药物 ★研究细菌的致病性
2020/3/26
2020/3/26
15
15
选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾 杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆 菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细 菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐 药
• 革兰氏阴性菌对第三代头孢、氨基糖苷类、抗假单胞菌 属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第 二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆 菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。
微生物实验课注意事项
• 禁止不穿白大衣进入实验室； • 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随
2020/3/26
P3
9
9
注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
2020/3/26
11
11
染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
2020/3/26
大肠杆菌(10×100)
12
12
染色结果
螺形菌Spiral bacterium
2020/3/26
13
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革兰染色意义
★鉴别细菌 ★选择抗菌药物 ★研究细菌的致病性
2020/3/26
2020/3/26
15
15
选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾 杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆 菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细 菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐 药
• 革兰氏阴性菌对第三代头孢、氨基糖苷类、抗假单胞菌 属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第 二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆 菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。
微生物实验 革兰染色(病原生物学与免疫学课件)
4、染色： 革兰染色过程： ▪ 初染： 结晶紫 1滴
1分钟
▪ 媒染： 碘液1滴
1分钟
▪ 脱色： 95%酒精2滴 半分钟
▪ 复染： 稀释复红1滴 半分钟
▪每步染色完后均需水洗。
5、镜检 结果： 呈紫色为G+菌； 呈红色为G-菌；
紫碘酒红 一一半半 球阳杆阴 阳紫阴红
思考题
1．在细菌染色涂片的制作过程中，固定 的目的和意义是什么？
1. 细菌蛋白质是两性电解质，等电点较低，在 pI2-5之间。故在近于中性的环境中，细菌多带负电 荷，易与带正电荷的碱性染料结合。
2. 细菌胞质中含有大量呈酸性的RNA，也与碱性 染料有亲和性。
单染和复染 ▪ 单染：一种染料 ▪ 复染：两种或两种以上染料进行染色
革兰染色 抗酸染色
革兰染色(Gram stain)
个细菌菌落，在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。（Tip:菌量不宜过多，以免标本过 厚，影响染色结果）
2、干燥： 最好在室温中自然干燥，或放入37度培
养箱，也可在远离火焰上方微微烘干，但 切勿靠近火焰以免烤焦标本。（Tip:如烘干， 以玻片不烫手为宜。）
3、固定：
火焰固定。固定的作用一是杀死细菌，同 时可改变对染料的通透性（因为活的细菌一 般不让各种染料进入细胞内）。再者使细菌 与玻片粘附牢固，三是使细菌蛋白凝固后保 持其固有的外形。
2．革兰染色的意义。 3．革兰染色时，为什么会出现阳性菌阴
染的现象？
细菌是无色半透明的微小生物，肉眼看不到，必须 借助于显微镜才能够观察。然而，未经染色的细菌 标本，在普通光学显微镜下只能粗略地看见其形态 和大小，只有经过染色后才能观察清楚。染色后镜 检，不但可以识别细菌的各种不同结构，还可以辅 助鉴别细菌。
《革兰氏染色原理》课件
革兰氏染色可以用于监测细菌对抗生素的耐药性，如果细菌对某种抗生 素产生耐药性，染色结果会发生变化，提示医生调整治疗方案。
03
临床实验室检测
在临床实验室中，革兰氏染色常用于血液、尿液、分泌物等标本的细菌
学检测，帮助实验室人员快速识别和分离出致病菌。
在生物学领域的应用
03
微生物分类
生态学研究
生物安全
革兰氏染色是微生物分类学中常用的一种 方法，通过染色可以将不同种类的细菌进 行区分，有助于科学家对微生物进行分类 和研究。
菌体呈紫色或紫黑色，不易脱色。细 胞壁厚，肽聚糖网状结构发达，抗脱 色能力强。
革兰氏阴性菌（G-）
菌体呈红色或粉红色，易脱色。细胞 壁薄，肽聚糖网状结构稀疏，抗脱色 能力弱。
染色结果解读步骤
涂片制备
将待测细菌均匀涂布在载玻片 上，干燥固定。
脱色与复染
通过脱色剂去除涂片上的颜色 ，再用复染剂进行复染，以便 更好地观察染色结果。
开发新型染料
寻找更稳定、更灵敏的染 料，以提高染色效果和准 确性。
自动化染色设备
研发自动化染色设备，减 少人为误差，提高染色的 一致性和可重复性。
染色技术的研究进展
探索染色与其他技术的结合
01
将染色与其他技术如免疫荧光、原位杂交等结合，以提高检测
的灵敏度和特异性。
深入研究染色机制
02
深入探讨染色机制，了解染色过程中染料与微生物的相互作用
理，以便观察其最终颜色。
03
碘液复染
脱色后的细菌用碘液进行复染 ，使细胞壁上的脂质和蛋白质 成分与碘结合，形成黄色或褐
色的复合物。
染色结果的分析
01
革兰氏阳性菌
02
革兰氏阴性菌
03
临床实验室检测
在临床实验室中，革兰氏染色常用于血液、尿液、分泌物等标本的细菌
学检测，帮助实验室人员快速识别和分离出致病菌。
在生物学领域的应用
03
微生物分类
生态学研究
生物安全
革兰氏染色是微生物分类学中常用的一种 方法，通过染色可以将不同种类的细菌进 行区分，有助于科学家对微生物进行分类 和研究。
菌体呈紫色或紫黑色，不易脱色。细 胞壁厚，肽聚糖网状结构发达，抗脱 色能力强。
革兰氏阴性菌（G-）
菌体呈红色或粉红色，易脱色。细胞 壁薄，肽聚糖网状结构稀疏，抗脱色 能力弱。
染色结果解读步骤
涂片制备
将待测细菌均匀涂布在载玻片 上，干燥固定。
脱色与复染
通过脱色剂去除涂片上的颜色 ，再用复染剂进行复染，以便 更好地观察染色结果。
开发新型染料
寻找更稳定、更灵敏的染 料，以提高染色效果和准 确性。
自动化染色设备
研发自动化染色设备，减 少人为误差，提高染色的 一致性和可重复性。
染色技术的研究进展
探索染色与其他技术的结合
01
将染色与其他技术如免疫荧光、原位杂交等结合，以提高检测
的灵敏度和特异性。
深入研究染色机制
02
深入探讨染色机制，了解染色过程中染料与微生物的相互作用
理，以便观察其最终颜色。
03
碘液复染
脱色后的细菌用碘液进行复染 ，使细胞壁上的脂质和蛋白质 成分与碘结合，形成黄色或褐
色的复合物。
染色结果的分析
01
革兰氏阳性菌
02
革兰氏阴性菌
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医学微生物学实验
EXPERIMENTS OF MEDICAL MICROBIOLOGY
• 实验室规则 The Rules of Microbiological Lab
• 分组 Grouping
实验一 细菌形态与结构的检查
examination of bacterial morphology and structure
荚膜 capsule
鞭毛 flagullum
芽胞 spore
芽胞 spore
细菌形态检查法
• 细菌染色标本检查法 a.单染法 Simple staining：
如：美兰染色Methylthioninium Chloride staining b.鉴别染色法 Differential staining
• 媒染：滴加碘液（Gram's iodine solution）媒染1min， 水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。
• 脱色：加95％酒精（ethanol）数滴，轻轻晃动玻片 30sec，直到流下的酒精无色或稍呈淡紫色为止。 水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。
• 复染：加稀释石炭酸复红染液（basic fuchsin solution） 复染30sec，水洗。
标本片的制作
Preparation of bacterial specimen
涂片Smear → 干燥 Dry →而均匀 • 干燥时标本面朝上 • 固定需在酒精灯火焰上来回2～3次，杀死细菌、
粘附牢固、蛋白质变性易于着色。如遇多种标本， 可用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面， 标明标本的编号。
如：革兰染色Gram stain、 抗酸染色Acid-fast stain c.特殊染色法 Special staining
如：鞭毛染色Flagella stain、芽胞染色 Spore stain
d.墨汁负染色法 Negative stain • 细菌不染色标本检查法
a.悬滴法 Hanging drop method
形（霍乱弧菌Vibrio cholera） ➢ 螺菌 spirilum 菌体有多个弯曲（幽门螺杆菌
Helicobacter pylori）
Basic shapes
• Spherical: coccus • Rod: bacillus • Curved or spiral: spiral bacterium
葡萄球菌 staphylococcus
肠道杆菌 Enterobacteria
霍乱弧菌
Vibrio cholera
幽门螺杆菌 Helicobacter pylori
细菌特殊结构观察
Observe bacterial special structures
• 荚膜 capsule：与细菌致病力有关（产气荚膜梭菌 C. perfringens） • 鞭毛 flagellum：细菌的运动器官（破伤风梭菌 C. tetani） • 芽胞 spore：判断微生物的灭菌指标（破伤风梭菌 C. tetani） • 菌毛 pilus：与细菌致病力和遗传物质的传递有关---电镜观察
革兰染色法（Gram stain）
革兰染色的原理
• 等电点 • 胞壁结构成分
Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall
• 初染：在已固定的标本片上滴加结晶紫染液 （Crystal violet），染1min，水洗，并将玻片上积水 轻轻甩净。
细菌基本形态观察
Observe bacterial morphology
1. 球菌 coccus：外观呈球形或近似球形（葡萄 球菌staphylococcus）
2. 杆菌 bacillus：呈杆状，长短、粗细和大小不 一（肠道杆菌enterobacteria）
3. 螺形菌spiral bacteria： ➢ 弧菌 vibrio 菌体略带弯曲，呈逗点状或括弧
镜检
• 待标本片自干，或用吸水纸吸干（勿撕），加一滴 香柏油，油镜检查，注意观察菌体的形态及染色性 • 紫色者为革兰阳性菌（G+菌） • 红色为革兰阴性菌（G-菌）
实验完毕后，请把玻片放在污物盆中!
• 掌 握 细 菌 的 三 种 基 本 形 态 和 特 殊 结 构 Master bacterial morphology and special structures • 掌握细菌学标本片的制作和革兰染色法 Master the preparation of bacterial sample slides and Gram staining • 掌握油镜的使用与保护 Master the use of oil lens • 了解墨汁涂片法和悬滴法 Know the principle of negative staining and hanging-drop
b.压滴法 Pressure drop method
Gram staining
Acid-fast staining
真菌fungus
Negative staining
悬滴法
1．取凹玻片一张，在凹窝四周涂凡士林（或水）少许。 2．取一接种环细菌液体培养物放在盖玻片中央。 3．将凹玻片反转，使凹窝对准盖玻片中心，液滴即悬垂于凹 窝中央。 4．先用低倍镜找到悬滴的边缘，再换用高倍镜检查。镜检时 光线宜稍弱，也可用暗视野显微镜观察。 5．结果观察细菌的运动性（有鞭毛细菌有位置移动，无鞭毛 细菌只有原位颤动。
EXPERIMENTS OF MEDICAL MICROBIOLOGY
• 实验室规则 The Rules of Microbiological Lab
• 分组 Grouping
实验一 细菌形态与结构的检查
examination of bacterial morphology and structure
荚膜 capsule
鞭毛 flagullum
芽胞 spore
芽胞 spore
细菌形态检查法
• 细菌染色标本检查法 a.单染法 Simple staining：
如：美兰染色Methylthioninium Chloride staining b.鉴别染色法 Differential staining
• 媒染：滴加碘液（Gram's iodine solution）媒染1min， 水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。
• 脱色：加95％酒精（ethanol）数滴，轻轻晃动玻片 30sec，直到流下的酒精无色或稍呈淡紫色为止。 水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。
• 复染：加稀释石炭酸复红染液（basic fuchsin solution） 复染30sec，水洗。
标本片的制作
Preparation of bacterial specimen
涂片Smear → 干燥 Dry →而均匀 • 干燥时标本面朝上 • 固定需在酒精灯火焰上来回2～3次，杀死细菌、
粘附牢固、蛋白质变性易于着色。如遇多种标本， 可用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面， 标明标本的编号。
如：革兰染色Gram stain、 抗酸染色Acid-fast stain c.特殊染色法 Special staining
如：鞭毛染色Flagella stain、芽胞染色 Spore stain
d.墨汁负染色法 Negative stain • 细菌不染色标本检查法
a.悬滴法 Hanging drop method
形（霍乱弧菌Vibrio cholera） ➢ 螺菌 spirilum 菌体有多个弯曲（幽门螺杆菌
Helicobacter pylori）
Basic shapes
• Spherical: coccus • Rod: bacillus • Curved or spiral: spiral bacterium
葡萄球菌 staphylococcus
肠道杆菌 Enterobacteria
霍乱弧菌
Vibrio cholera
幽门螺杆菌 Helicobacter pylori
细菌特殊结构观察
Observe bacterial special structures
• 荚膜 capsule：与细菌致病力有关（产气荚膜梭菌 C. perfringens） • 鞭毛 flagellum：细菌的运动器官（破伤风梭菌 C. tetani） • 芽胞 spore：判断微生物的灭菌指标（破伤风梭菌 C. tetani） • 菌毛 pilus：与细菌致病力和遗传物质的传递有关---电镜观察
革兰染色法（Gram stain）
革兰染色的原理
• 等电点 • 胞壁结构成分
Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall
• 初染：在已固定的标本片上滴加结晶紫染液 （Crystal violet），染1min，水洗，并将玻片上积水 轻轻甩净。
细菌基本形态观察
Observe bacterial morphology
1. 球菌 coccus：外观呈球形或近似球形（葡萄 球菌staphylococcus）
2. 杆菌 bacillus：呈杆状，长短、粗细和大小不 一（肠道杆菌enterobacteria）
3. 螺形菌spiral bacteria： ➢ 弧菌 vibrio 菌体略带弯曲，呈逗点状或括弧
镜检
• 待标本片自干，或用吸水纸吸干（勿撕），加一滴 香柏油，油镜检查，注意观察菌体的形态及染色性 • 紫色者为革兰阳性菌（G+菌） • 红色为革兰阴性菌（G-菌）
实验完毕后，请把玻片放在污物盆中!
• 掌 握 细 菌 的 三 种 基 本 形 态 和 特 殊 结 构 Master bacterial morphology and special structures • 掌握细菌学标本片的制作和革兰染色法 Master the preparation of bacterial sample slides and Gram staining • 掌握油镜的使用与保护 Master the use of oil lens • 了解墨汁涂片法和悬滴法 Know the principle of negative staining and hanging-drop
b.压滴法 Pressure drop method
Gram staining
Acid-fast staining
真菌fungus
Negative staining
悬滴法
1．取凹玻片一张，在凹窝四周涂凡士林（或水）少许。 2．取一接种环细菌液体培养物放在盖玻片中央。 3．将凹玻片反转，使凹窝对准盖玻片中心，液滴即悬垂于凹 窝中央。 4．先用低倍镜找到悬滴的边缘，再换用高倍镜检查。镜检时 光线宜稍弱，也可用暗视野显微镜观察。 5．结果观察细菌的运动性（有鞭毛细菌有位置移动，无鞭毛 细菌只有原位颤动。