蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 50X)
高脂肪样本蛋白提取方法
使用方法：
细胞蛋白提取： 1. 提取液制备：每 500ul 冷的蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物混匀后 置冰上备用。 2. 取 5-10×106 个细胞①，在 4℃，1000rpm 条件下离心 5-10 分钟，小心吸取培养 基，尽可能吸干，收集细胞。 3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每 5×106 个细胞中加入 500ul 冷的蛋白提取液，混匀后，在 4℃条件下振荡 15-20 分钟。 5. 在 4℃，14000rpm 条件下离心 15 分钟。 6. 将含有脂肪的上清吸入蛋白离心管中，套上液体收集管，在 4℃，12000rpm 条 件下离心 5 分钟。 7. 将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。 8. 将蛋白离心管中的脂肪杂质用吸头或合适工具刮出，即可用于处理上步未处理
完的样品或其他待处理样品。 9. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
组织蛋白提取： 1. 提取液制备：每 500ul 冷的总蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混 匀后置冰上备用。 2. 取 100mg 组织样本剪碎，加入蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼 可见固体①。 3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在 4℃，10000rpm 条件下离心 5 分钟。 4. 将含有脂肪的上清吸入蛋白离心管中，套上液体收集管，在 4℃，12000rpm 条 件下离心 5 分钟。 5. 将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。 6. 将蛋白离心管中的脂肪杂质用吸头或合适工具刮出，即可用于处理上步未处理 完的样品或其他待处理样品。 7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
碧云天β-Actin Mouse Monoclonal Antibody产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号β-Actin Mouse Monoclonal Antibody产品编号 产品名称包装 AF5001β-Actin Mouse Monoclonal Antibody50µl产品简介：来源 用途 交叉反应性 理论分子量 实际分子量 MouseWB, IF, IHCH, M, R41kDa42kDaWB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence; IHC, Immunohistochemistry; ICC, Immunocytochemistry; FC, Flow Cytometry; ChIP, Chromatin Immunoprecipitation Assay; ChIP-seq, ChIP-sequencing.H, Human; M, Mouse; R, Rat; C, Chicken; Cw, Cow; Dg, Dog; Gp, Guinea pig; Hm, Hamster; Hr, Horse; Mk, Monkey; Pg, Pig; Rb, Rabbit; S, Sheep; Z, Zebrafish; All, all species expected.配套提供了Western 一抗稀释液，可以用于Western 检测或其它适当用途时的一抗稀释。
建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：包装清单：产品编号 产品名称包装 AF5001 β-Actin Mouse Monoclonal Antibody50µl AZ050 Western 一抗稀释液50ml —说明书1份保存条件：β-Actin Mouse Monoclonal Antibody -20ºC 保存，Western 一抗稀释液-20ºC 或4ºC 保存，一年有效。
CelLyticTM系列蛋白裂解液
高效率 操作步骤简单,省时 高得率 得率远优于传统冻融或超声法 高活性 温和非变性条件下抽提活性蛋白 高兼容 与蛋白酶抑制剂、鳌合剂、离液剂等很好兼容 抽提的蛋白无需去除CelLyticTM 试剂即可进行下游实验： 亲和纯化 Western blot 凝胶迁移检测 报告基因检测……
566.28 2136.42 566.28 3758.04 2535.39 3938.22
501.93 3320.46
566.28 2084.94 3989.7
527.67 3629.34 5302.44
促销价¥
384.81 2375.80 685.97 2375.80 409.91 1505.79 2651.86 1054.05 1648.00 393.18 1187.90 217.50 711.07 4341.69 368.08 1271.56
哺乳动物细胞和组织裂解
C2978
CelLytic™ M Cell Lysis Reagent
C3228
CelLytic™ MT Cell Lysis Reagent
CE0500 NXTRACT
R0278
CelLytic™ MEM Protein Extraction Kit CelLytic™ NuCLEAR™ Extraction Kit For mammalian tissue or cultured cells RIPA Buffer
P8215
Protease Inhibitor Cocktail for use with fungal and yeast extracts
P8465
Protease Inhibitor Cocktail for use with bacterial cell extracts
常见蛋白酶抑制剂
当前位置：生物帮 > 实验技巧 > 生物化学技术 > 正文蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全日期：2012-06-13 来源：互联网标签：相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以坚持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种经常使用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对分歧蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统广州赛诚生物基因表达调控专题蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以坚持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种经常使用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对分歧蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。
由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。
经常使用抑制剂PMSF1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于异丙醇中;3)在室温下可保管一年;4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步调中加入新鲜的PMSF。
EDTA1)抑制金属蛋白水解酶;2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;3)溶液在4℃稳定六个月以上;4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。
胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中;3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月;4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L)5)在水中不溶解。
细菌蛋白提取方法(双向电泳用)
产品组成：
产品组成 规格
细菌蛋白提取液 A（2D） 细菌蛋白提取液 B
蛋白酶抑制剂混合物
BB-3182-1 50 assays
25ml 250ul 100ul
பைடு நூலகம்
BB-3182-2 100 assays
50ml 500ul 200ul
储存条件： 蛋白提取液 A 室温保存； 蛋白提取液 B 和蛋白酶抑制剂-20℃保存。
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124
细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702
植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物 SDS-PAGE 上样 Buffer
有效期： 一年。
产品简介： 贝博细菌总蛋白提取试剂盒（双向电泳用）可以从各种原核细菌样本中提取总蛋白，
提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提 取高质量的蛋白提供了保证。
提取的蛋白用于双向电泳。如需要用于报告基因检测、SDS-PAGE 电泳检测、Western blotting、
BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验的试剂盒，请联系本公司选购其他货号的试剂盒。
使用方法： 裂解液的准备：根据所需要提取的样本量，每 500ul 蛋白提取液中 A 加入 5ul 试剂 B 和 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。 在 4℃ 12000RPM 条件下将菌液离心 5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体， 用 PBS 洗菌体 2 次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。 按每 20mg 湿重菌体样本加入 500ul 裂解液，吹打混匀，冰上放置 30 分钟，间隔一 段时间振荡。（选做步骤：300w，10s 超声/10s 间隔条件下冰浴超声至菌液变清。 若不做，请延长裂解液作用时间至 2 小时。） 在 4℃ 12000RPM 条件下将提取液离心 5 分钟。 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细菌总蛋白。 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
膜-胞浆蛋白提取方法
膜-胞浆蛋白提取方法膜-胞浆蛋白提取方法膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格试剂 A 试剂 B 试剂 C蛋白酶抑制剂混合物蛋白稳定剂BB-3111-150T 10ml 20ml 10ml 250μl 100ulBB-3111-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 200ul储存条件：蛋白酶抑制剂、蛋白稳定剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。
产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承当各种生物功能，在疾病的发生、开展过程中扮演重要角色。
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析^p 及质谱分析^p 等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和外表活性剂增溶。
去污剂处理睬使膜蛋白丧失其天然构造，因此阻碍了膜蛋白的功能研究。
贝博膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。
本试剂盒提供配套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白和胞浆蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少穿插污染。
提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析^p 、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
应用实例：1 4 4图片说明：用膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提取细胞样本的'SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。
图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。
图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。
使用方法：A．细胞蛋白提取①1. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心汲取培养基，尽可能吸干，搜集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞样品中参加200μl冷的试剂 A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，2ul蛋白稳定剂，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟。
蛋白酶抑制剂选择指南
蛋白酶抑制剂选择指南1 蛋白酶抑制剂选择指南抑制剂 工作浓度 分子量 抑制蛋白酶种类 稳定性AEBSF终浓度1mM MW:239.5不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制胰蛋白酶,糜蛋白酶,纤溶酶,凝血酶及激肽释放酶. 可溶于水,其pH7的水溶液在4o C可保持稳定1-2个月,在pH>8的情况下会发生缓慢水解Aprotinins 抑肽酶终浓度2ug/ ml MW:6512 可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制纤溶酶,激肽释放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶,但不抑制凝血酶和Factor Xa。
非常稳定,当pH>12.8时失去活性,可溶于水(10mg/ml),-20o C下可长期保存Bestatin终浓度10uM MW:308.4 可逆的丙氨酰-氨基肽酶抑制剂, 工作液可保存一天,1mM的甲醇贮存液在-20o C可保存至少一个月E-64 Protease Inhibitor终浓度10uM MW:357.4 不可逆的半胱氨酸酸蛋白酶抑制剂,抑制半胱氨酸酸蛋白酶而不会影响其他酶的半胱氨酸残基,与小分子量的巯基醇如beta-巯基乙醇不会产生反应,具有高度特异性。
工作液在正常pH值下可保持稳定数天,1mM的水溶液在-20o C可保存几个月EDTA, 4Na终浓度10mM MW:380.2 金属蛋白酶的可逆性螯合物,可能同时影响其他金属依赖性生物过程。
其水溶液很稳定,其贮存液(pH8.5的0.5M 水溶液)在4o C可保存数月Leupeptin, 半硫酸盐 亮抑酶肽（亮肽素） 终浓度100uM MW:493.6 可逆的丝氨酸及半胱氨酸蛋白酶制剂,可抑制胰蛋白酶样蛋白酶及一些半胱氨酸蛋白酶如:Lys-C内切蛋白酶,激肽释放酶,木瓜蛋白酶,凝血酶,Cathepsin B及胰蛋白酶。
工作液的稳定期为数小时,贮存液(10mM水溶液)在4o C时稳定期为一周,-20o C时稳定期为一个月Pepstatin A 终浓度1uM MW:685.9 可逆的天冬氨酸蛋白酶,可抑制胃蛋白酶,Cathepain B&L,血管紧张肽原酶(renin)及以1mg/ml溶于甲醇,搅拌过夜可以1mg/ml溶于乙醇,333mg/ml溶于6N的蛋白酶抑制剂选择指南2抑肽素A 很多细菌来源的天冬氨酸蛋白酶,与蛋白酶有微弱的结合。
蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明
蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明转自:http://www.bioas/html/980.html在与蛋白相关的检测中，最关键的一步便是蛋白质的提取。
在提取的过程中，我们要经常加入以防止。
另外在磷酸化蛋白的研究过程中，也是必不可少的。
本文详细总结了常用的P MSF、 Leupep tin亮肽素、Aproti nin抑肽酶、Pepsta tin胃、EDTA-Na2等以及NaF氟化钠、Na3VO4原矾酸钠、Beta-glycer ophos phate甘油磷酸钠、Na2P2O4焦磷酸钠等的溶液配制、贮存液与工作液浓度及保存条件。
一、蛋白酶抑制剂PMSF：特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶。
溶解性：溶于异丙醇、乙醇、甲醇和丙二醇里>10mg/ml。
在水溶液中不稳定。
在100%异丙醇，25℃时稳定至少9个月。
分子量：174.2使用：贮存浓度200mM，工作浓度1m MLeupep tin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶B。
溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。
4℃一周稳定，分成小份，冷冻在 -20℃至少6个月。
分子量：C20H38N6O4×1/2 H2SO4:475.6 C20H38N6O4x 1/2 H2SO4× H2O:493.6使用：贮存浓度1m g/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)。
Aproti nin抑肽酶特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的高活性。
不抑制凝血酶或因子X。
溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如0.1M tris，pH8.0）。
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北京索莱宝科技有限公司
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用,50X)
货号：P1263
规格：100T
保存：-20ºC保存，有效期12个月。
产品组成：
产品名称规格保存
蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用,50X)2×1mL-20ºC避光磷酸酶抑制剂混合物(50X)2×1mL-20ºC
产品说明：
真菌或酵母提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。
因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。
本产品用于真菌或酵母蛋白提取的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂/金属蛋白酶抑制剂，以及丝氨酸/苏氨酸、酪氨酸、酸性及碱性磷酸酶抑制剂。
以1:50的比例分别把蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用,50X)加入裂解液中，即可用于真菌或酵母蛋白的提取，并有效抑制蛋白降解。
适用范围：
抑制真菌或酵母提取物中的各种蛋白酶(如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶等)和磷酸酶(如丝氨酸/苏氨酸、酪氨酸、酸性及碱性磷酸酶等)。
适用于Western Blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。
使用方法：
蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物（真菌或酵母抽提用，50X），使用时分别按照1:50的比例加入到裂解液中，混匀后即可使用。
含有蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。
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