β-1,3葡聚糖酶检测试剂盒使用说明
β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-GA活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4216
β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法：UPLC-MS-4216：50T/24S试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2支2-8℃保存试剂二液体42mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1.试剂一：临用前取1支加1.6mL蒸馏水溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周；2.标准品：10mg无水葡萄糖。
临用前加入1mL蒸馏水溶解，配制成10mg/mL葡萄糖溶液备用，2-8℃保存2周。
β-1,3-GA(EC3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。
在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。
Fucoidanβ-1,3-GA Reducing SugarReducing Sugar+3,5-Dinitrosalicylic Acid3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒 (化学发光免疫分析法)产品技术要求金山川
1.1包装规格：12人份/盒1.2主要组成成分：校准曲线：二维码。
质控范围批特异，详见标签。
2.1外观试剂盒完整无破损，试剂盒内各组分齐全、无破损、渗透；盒上印刷的标识以及瓶签、盒签上的字迹清晰完整，易识别。
2.2装量试剂盒的液体试剂净含量应不低于标示量。
2.3溯源性根据GB/T21415规定了校准曲线的溯源过程，溯源至企业工作校准品。
2.4准确度回收率应在80%～120%的范围内。
2.5检出限检出限应不高于40pg/mL。
2.6线性试剂盒在浓度为[50,50000]pg/mL的线性范围内，相关系数（r）应不低于0.9900。
2.7重复性测定高、低两个浓度水平的样本，测定结果的变异系数CV（％）值应不大于10%。
2.8特异性与浓度分别为50ng/mL的曲霉菌半乳甘露聚糖、念珠菌甘露聚糖、革兰阴性菌脂多糖均无交叉反应，检测结果均应不超过检出限。
2.9批间差用3个不同批号的试剂盒分别检测两个浓度水平的样本，3个批次试剂盒之间的批间变异系数CV（％）应不大于15％。
2.10质控品赋值有效性重复测定试剂盒内质控品各3次，每次测定结果均应在质控品测定值允许的范围内。
2.11质控品批内瓶间差取同一批号10支质控冻干品进行检测，所有瓶内重复性检测结果的变异系数CV（%）值应不大于10%。
2.12稳定性2.12.1效期稳定性试剂盒按要求在2℃～8℃放置，有效期12个月，取效期末的试剂盒进行检测，各项指标仍符合2.4～2.8的要求。
2.12.2质控品复溶稳定性质控品溶解后置2℃～8℃保存14天后，取质控品进行检测，结果应符合2.10、2.11的要求。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测操作SOP文件
声明本产品属精密光学仪器，在日常使用中，应严格按照我公司出具的操作流程进行试验操作，并确保工作环境正常。
本试验的操作者必须为经我公司培训合格的微生物实验室检验人员，如需更换操作者，请做好交接工作，确保新的操作者了解仪器特性、熟悉操作流程。
为避免试验结果不准确，请操作者认真阅读操作注意事项及操作流程，并严格遵守。
如有任何疑问，请联系我公司售后服务部。
售后服务部电话：400-811-9958北京金山川科技发展有限公司真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。
（1-3） -D-Glucan活化因子G 因子G凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）4．产品性能指标4.1 灵敏度最小检出值5pg/ml5．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200ul 加样器、100~1000ul加样器、旋涡混合器、定时器。
5.2实验耗材：200ul无热原吸头、1000ul无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。
5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7．标本采集、处理及保存7.1检测样本：血液、肺泡盥洗液、胸腔积液、腹水、脑脊液、尿液（无菌取中段尿或穿刺尿）7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。
常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。
1,3-β-D-葡聚糖检验简介
1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值
早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无 特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死 亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早 期诊断。
指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有 针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗 效高，价格适宜的药物提供准确的依据。
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小结
1,3-β-D-葡聚糖是侵袭性真菌感染早期 诊断、疗效观察、预后评估有价值的实 验诊断。
1,3-β-D-葡聚糖检验其敏感性优于GM 侵袭性真菌感染的诊断与治疗是一个复
杂过程，实验室与临床应密切联系，为 临床医生提供诸如显微镜检查、真菌培 养、血清学标志物等多方面信息。
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内毒素定量检测
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侵袭性真菌感染的诊断标准 EORTC/MSG2008修订版
宿主因素 临床特征 病原学
真菌镜检 真菌培养 组织病理学检查 血清学检查方法（间接证据）
CSF隐球菌抗原阳性——确诊 GM-test, G-test——临床诊断
Clinical Infectious Diseases 2008; 46
外
骨折
感染
内
肝脏疾病
休克
大手术术后
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内毒素定量检测的临床意义
发热原因的快速辅助诊断（< 1小时）； 早期判断革兰阴性菌的感染情况； （Gˉ菌所致）脓毒症、MODS等重症疾患的早期诊断 帮助临床医生快速合理筛选适当的药物(抗生素)； 判断抗感染治疗效果及预后； 肠源性内毒素血症的预判及评估；
评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚 糖浓度变化，评价选用药物的有效性。
监护病程：监护深部真菌感染易感人群的病发状态。 动态观察：易感人群，监测临床疗效。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖
附1真菌（1-3)—β—D葡聚糖检测标准操作规程1.目的规范真菌(1—3）-β-D葡聚糖检测的操作规程,保证结果准确性。
2.原理实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1—3)—β—D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。
利用(1—3)—β—D葡聚糖标准品建立β-D—葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的（1—3）- β-D葡聚糖含量.3.试剂真菌（1-3）—β-D葡聚糖检测试剂盒,湛江安度斯生物有限公司。
试剂盒包装规格:20人份/盒。
复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。
若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20℃以下冷冻保存，一周内使用.不能反复冻融试剂溶液.4.检测设备: LKM动态试管检测仪。
5.实验用具：250 μl无热原吸头、20—200 μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、无热原真空采血管(肝素抗凝剂）.6.标本采集及送检要求6.1标本采集要求6.1.1采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管；6.1.2常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。
6.2标本的送检和保存要求标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。
若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无β葡聚糖的容器内-20℃以下冷冻保存，一周内使用。
7.实验操作7.1在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热,一段时间后发出哔的一声,试管仪温度达到37℃，待用;7.2取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1~2 ml，以400 g离心10分钟；7.3取富含血小板的血浆100 μl，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75℃试管恒温仪中加热10分钟；7.4加热10分钟后，将样品稀释瓶从75℃试管恒温仪中取出,使其降至室温即可，即为1：10稀释的样品供试溶液；7.5取β—G试剂1支,开启；7.6取β-G试剂复溶液1支,开启后用移液器取0。
1,3-β-D-葡聚糖检验简介
注：＊原发性者可无宿主因素，△肺组织、胸液、血液真菌培养阳性（除外肺孢子菌）
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（1,3） - β- D-葡聚糖检测
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真菌细胞膜、壁结构
mannoproteins
β1,3 b1,6 葡聚糖 磷脂 双分 子层
b1,3葡聚糖 合成酶
几丁质 麦角固 醇
羊毛固醇C－14去甲基化酶 14位还原和7－8位异构酶 17 角鲨烯环氧化酶
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小结
1,3-β-D-葡聚糖是侵袭性真菌感染早期 诊断、疗效观察、预后评估有价值的实 验诊断。 1,3-β-D-葡聚糖检验其敏感性优于GM 侵袭性真菌感染的诊断与治疗是一个复 杂过程，实验室与临床应密切联系，为 临床医生提供诸如显微镜检查、真菌培 养、血清学标志物等多方面信息。
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内毒素定量检测
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1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值
早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无 特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死 亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早 期诊断。 指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有 针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗 效高，价格适宜的药物提供准确的依据。 评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚 糖浓度变化，评价选用药物的有效性。 监护病程：监护深部真菌感染易感人群的病发状态。 动态观察：易感人群，监测临床疗效。
危重病人的存活期延长
延长了真菌感染 的 高 危 期
使此类患者业已增加 的人数进一步扩大
严重真菌感染迅速上升势头
是日益严重的威胁！
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真菌感染的危险因素：
微生物检验实验室G试验标准操作规程
微生物检验实验室G试验标准操作规程1．目的规范G试验标准操作规程。
1.操作授权人经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。
2.用途：4．原理真菌（1，3）-β-D葡聚糖能特异性激活反应主剂中的G因子、凝固酶原等，发生凝固蛋白原转变的级联反应从而引起吸光度的变化，根据检测气吸光度的变化从而对真菌（1，3）-β-D葡聚糖浓度进行定量，试剂中添加的两性电解质甘氨酸、氨基糖苷类抗生素机表面活性剂可抑制脂多糖对B、C因子的激活，对革兰阴性脂多糖有特异性屏蔽作用。
5．样本要求5.1血清的制备：用一次性无热源真空采血管采静脉血4ml，进行3000rpm/min离心10-15min分得血清2小时内检测。
5.2血清保存：标本需冷藏于2-8℃下不超过24小时避免反复冻融。
产品如果需要运输，则应该冷藏运输。
5.3标本前处理：取上述血清0.1ml，加入0.9ml样品处理液中，混匀后70℃孵育10min，取出后立刻放入冷却槽中冷去5min，即为待测血清样品。
6．操作步骤：取待测血清0.2ml直接加入酶反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至9*65mm标准无热源平底试管中，然后再加入0.1ml反应主剂溶液，混匀后，插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行反应，反应结束后检测系统自动计算出待测血清中真菌（1，3）-β-D葡聚糖含量。
注：每批试剂盒由厂家提供参考标准曲线。
定标使用真菌（1，3）-β-D 葡聚糖纯品，纯度>98%。
7.结果判断结果解释：参考值：正常血清真菌（1，3）-β-D葡聚糖值<60pg/ml。
60pg/ml以下，无深部真菌感染（隐球菌、接合菌除外）：60-100pg/ml之间，为观察期，应连续检测。
100pg/ml以上，怀疑为深部真菌将感染，建议临床结症状治疗。
8.注意事项8.1、只能检测（1，3）-β-D葡聚糖含量，不能区分真菌种属，不能检测接合菌和隐球菌。
8.2、实验操作应在无菌无热源的环境下，避免微生物细菌污染8.3、无菌无热源的采血管（建议采用BD血清管），保证试验数据的准确。
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)说明书
2、准备样品： 称取样品 10g(或 10ml)加入装有玻璃珠的三角瓶中，再加人一定体积的蒸馏水稀释，静置 20min，200r/min 振荡 30min，然后四层纱布过滤，滤液 3000r/min 离心 10min，上清液加 入 50ml 容量瓶中，补水定容，即为纤维素酶提取液，用于样品 CES 活力的检测。如样品酶 活力较高，应稀释至合适浓度再次检测。
产品组成：
名称 纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法) 试剂(A):Glu 标准(1mg/ml) 试剂(B):CESAssaybuffer 试剂(C):CMCSolution 试剂(D):DNS 试剂 使用说明书 有效期
规格 100T 10ml 50ml 100ml 100ml
保存条件 4℃ 4℃ RT RT
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)说明书
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介： 纤维素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，Cellulase 简称 CES)是降解纤维素生成葡萄糖的一 组酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β -葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。在分解纤 维素时起生物催化作用，是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)检测原理是用羧甲基纤维素钠盐(CMC)作底物，经纤维素 酶水解后生成还原糖(葡萄糖)，还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸 (DNS)被还原为棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程 度呈正比，在 540nm 处用分光光度计测定棕红色物质的吸光度，即可求得还原糖的含量， 进而求得纤维素酶活的大小。本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。
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β-1,3葡聚糖酶检测试剂盒使用说明
分光光度法货号：BC0360
规格：50管/24样
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂二：液体42mL×1瓶，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。
产品说明：
β-1,3-GA(EC3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。
在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μL）测定管对照管标准管（葡萄糖溶液）样本或标准液100100100蒸馏水100100
试剂一100
充分混匀，放入37℃水浴60min。
试剂二600600600
充分混匀，沸水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，540nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A对照。
每个测定管需设一个对照管。
β-1,3-GA活性计算：
根据标准管吸光度（x）和浓度（y，mg/ml）建立标准曲线，将ΔA带入公式中计算出样品中产生的还原糖的含量y值（mg/ml）
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/g鲜重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细胞或细菌每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/g鲜重)=(y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y
V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。