β-葡聚糖酶活性测定
酶活力测定方法
蛋白酶活力测定: 参照中华人民共和国专业标准SB/ T10317-1999蛋白酶活力测定方法( Asha 等, 2007)。
纤维素酶DNS酶活力测定方法DNS, 活力, 纤维素酶, 测定1 定义1g固体酶粉在40℃和pH值4.2条件下，每分钟水解纤维素生成1微克葡萄糖的量为1个酶活力单位，以u/g表示。
2 原理纤维素酶分解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将3，5二硝基水杨酸中的硝基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量，表示酶的活力。
3.试剂和溶液3.1 1％葡萄糖标准溶液（同β－葡聚糖酶酶活测定）3.2 羧甲基纤维素钠(CMC)溶液取1g羧甲基纤维素钠（粘度300～600厘泊）,加入pH4.2的磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液(甲液414ml和乙液586ml并用pH计校正至pH为4.2)混合均匀,水浴加热至溶,冷却后用2M 盐酸或氢氧化钠调节pH到4.2,定溶至100ml,再用二层纱布过滤，此溶液在4℃冰箱贮存，有效期3天。
取滤液100ml，20ml，蒸馏水40ml，混匀，贮冰箱备用。
3.3 DNS 试剂（同β－葡聚糖酶酶活测定）4仪器和设备4.1恒温水浴锅(40℃±0.2℃)4.2分光光度计含10mm比色皿，可在550nm处测量吸光度。
5测定步骤5.1 标准曲线绘制分别吸取1%葡萄糖标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水制成每ml分别含有葡萄糖0、200、400、600、800、1000、1200mg的稀标准液。
各取不同浓度的稀标准液0.5ml于试管中，加入CMC溶液1.5ml、DNS试剂3.0ml，于沸水浴中沸腾7min，取出后立即加入蒸馏水10ml混匀。
冷却后，用10mm比色皿，在波长550nm处用分光光度计分别测定其吸光度。
以吸光度为纵坐标，相对应的葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。
β-葡聚糖酶最佳降解条件
β-葡聚糖酶最佳降解条件
β-葡聚糖酶（也称为β-gluconase）在降解葡聚糖（即β-葡聚糖）时，具有最佳的降解条件。
这些条件可以包括温度、pH 值和底物浓度等。
1. 温度：β-葡聚糖酶的最适工作温度通常在40-50℃之间。
在这个温度范围内，酶的活性最高，降解效率最佳。
2. pH值：β-葡聚糖酶的最适工作pH值通常在5-7之间。
不同的酶可能对pH值有不同的要求，但一般在中性至微酸性条件下表现最好。
3. 底物浓度：虽然β-葡聚糖酶可以降解各种浓度的葡聚糖，但最佳降解效果通常在适度的底物浓度下实现。
过高或过低的底物浓度都可能对酶的降解效率产生负面影响。
此外，酶的优化和工程也可以通过进一步改变反应条件来提高降解效率。
例如，选择适合的辅助酶、共培育或化学修饰等方法可以进一步优化β-葡聚糖酶的降解性能。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测操作SOP文件
声明本产品属精密光学仪器，在日常使用中，应严格按照我公司出具的操作流程进行试验操作，并确保工作环境正常。
本试验的操作者必须为经我公司培训合格的微生物实验室检验人员，如需更换操作者，请做好交接工作，确保新的操作者了解仪器特性、熟悉操作流程。
为避免试验结果不准确，请操作者认真阅读操作注意事项及操作流程，并严格遵守。
如有任何疑问，请联系我公司售后服务部。
售后服务部电话：400-811-9958北京金山川科技发展有限公司真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。
（1-3） -D-Glucan活化因子G 因子G凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）4．产品性能指标4.1 灵敏度最小检出值5pg/ml5．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200ul 加样器、100~1000ul加样器、旋涡混合器、定时器。
5.2实验耗材：200ul无热原吸头、1000ul无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。
5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7．标本采集、处理及保存7.1检测样本：血液、肺泡盥洗液、胸腔积液、腹水、脑脊液、尿液（无菌取中段尿或穿刺尿）7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。
常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。
1,3-β-D-葡聚糖检验简介
b1,3葡聚糖 合成酶
几丁质
麦角固 醇
羊毛固醇C－14去甲基化酶
14位还原和7－8位异构酶
角鲨烯环氧化酶
17
1,3-β-D-葡聚糖结构
葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁
糖蛋白类
中
1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成
葡聚糖
分50%以上，是真菌细胞壁上
几丁质
的特有成分 以1,3-β-糖苷键连接的葡萄
9
镜检和培养方法
敏感性低
血培养：在肿瘤和血液病病人中，50%尸检证 实深部念珠菌感染的病例血培养阴性。
培养结果阳性仅表示存在某种真菌，区 分定植和感染困难
培养时间长 有些标本采集困难
10
非培养方法优点
快速报告结果 敏感性提高 取材简便 多以真菌在致病状态产生的物质为检
真菌（1-3）-β-D-葡聚糖 与革兰氏阴性菌脂多糖检测
器械部 广东金羽医药发展有限公司
1
鲎
20世纪六十年代，人们 发现一种古老的海洋生物， 被称为“海洋活化石”的 鲎，它的血液与内毒素接 触后会发生特异性的凝集 反应，人们经过大量研究 和实验从它的血液中提取 出了用来检测内毒素的 “鲎试剂”。
2
真菌特异的代谢产物
D-阿拉伯糖醇
真菌 DNA 的检测
12
临床诊断、拟诊的微生物学
1 合格痰标本直接镜检发现菌丝，且连续培养 ≥2次分离到同种真菌
2 BALF经直接镜检发现菌丝真菌培养阳性 3 痰液或BALF直接镜检发现新生隐球菌 4 乳胶凝集法检测隐球菌荚膜多糖抗原阳性 5 G实验连续两次阳性 6 GM实验连续两次阳性
在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来， 故其在体液中的量不增高。
谷物β-葡聚糖测定方法研究进展
doi ： 10.7606/j.issn.l 009-104 1.2021.09.08麦类作物学报 2021,4 1 (9):1 1 16— 1 123Journal of Triticcac Crops网络出版时间=2021-09-09网络出版地址:https ：//kns. cnki. nct/kcms/dctail/6 1. 1359. s. 20210909. 0933. 004. html谷物卩-葡聚糖测定方法研究进展李丹青1,张凯龙2,闫金婷3,胡新中2,董锐2,闫喜梅2(1.商洛学院，陕西商洛726000； 2.陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西西安710119；3.西安市农产品质量安全检验监测中心，陕西西安710077)摘 要：谷物供葡聚糖具有多种生理活性，在食品等领域广泛应用.如何快速、准确、经济地检测供葡聚 糖含量已成为燕麦、大麦等谷物产业亟需解决的问题.目前，谷物供葡聚糖的检测方法主要有酶法、色谱法、 刚果红法、荧光法、粘度法、近红外法等，各方法采用不同的原理，在准确度、检测效率、检测成本等方面均有所差异.其中，酶法测定结果准确度高，已被开发成试剂盒并成为谷物伕葡聚糖的标准检测方.法，但是高纯度酶价格昂贵；近红外法检测简单快捷，可大批量检测样品，甚至可以选用全谷物籽粒进行无损检测，然而该方法在建立时需要大量已知含量的样本确定定量模型.本论文综述了当前谷物供葡聚糖的检测原理、检测方法的优缺点和相关标准.关键词：谷物；-葡聚糖；检测方法中图分类号:S512. 1 :S330文献标识码：A 文章编号：1009-104 1 (2021 )09-1 1 1608Review of Cereal p-Glucan Determination MethodsLI Danqingi ,ZHANG Kailon g 2 ,YAN Jintin g 3,HU Xinzhong ,DONG Rui 2 ,YAN Ximei 2(1. Shangluo University,Shangluo ,Shaanxi 726000,China ； 2. College of Food Engineering and NutritionalScience .Shaanxi Normal University,Xi'an,Shaanxi 710119 ,China ； 3. Testing & Determination Centre of Agricultural Products Quality Safety of Xi'an City, Xi'an,Shaanxi 710077, China)Abstract : Cereal 0-glucan has various physiological activities and is widely applied in food and otherfields. How to quickly ,accurately and economically determine p-glucan content, has become an urgent,issue in cereal industry such as oat. and barley. At present.? the determination methods of cereal p-glu-can mainly contain enzymatic method , chromatographic method , Congo red method , fluorescencemethod , viscosity method,NIR method, etc. There are differences in their principles ? with diversified accuracy, determination efficiency , and cost. Among them , enzymatic method has the highest, accura cy. It. has been developed into commercial assay kit and has become the standard method for the deter mination of cereal p-glucan. However , the enzymes with high purity are expensive. NIR method is easy and quick,and is able to detect, samples in large quantities ?which can even achieve non-destructive tes ting by using whole grains. However this method requires a large nllmbe- of samples with known p-glucan content, to establish the quantitative model. This article summarizes the current, determination principles ,pros and cons ,as well as relevant, standards for each determination method of cereal p-glu-can.Key words ： Cereal ； p-glucan ；Determination method收稿日期：2021-01-19 修回日期:2021-02-13基金项目：陕西省重点研发计划项目(2019ZDLN04-04)；农业部现代产业技术体系项目(CAR&07-E1)；陕西省谷物科学国际联合研究中心项目(2019GHJD-15)第一作者 E-mail ： 5 9 7328195 @ qq. com通讯作者：胡新中(E-mail ： hxinzhong@snnu. )第9期李丹青等：谷物|3-葡聚糖测定方法研究进展-1117-卜葡聚糖是由-葡萄糖苷键连接D-葡萄糖而成的非淀粉多糖，在自然界中广泛存在.其按结构可分为（3-1,3-葡聚糖、-1,3-1,6-葡聚糖和-1, 3-1,4-葡聚糖，主要来源有谷物、细菌和真菌［］.在众多来源中，谷物-葡聚糖由于其丰富、安全、可靠的来源以及优良的理化特性成为研究焦点.谷物-葡聚糖具有多种生理功能和作用.它可以调节血糖水平，预防二型糖尿病3］降低血清胆固醇水平，预防心血管疾病［56］；平衡肠道菌群，预防结肠癌调节血压［0］和增强免疫细胞活性［1］.此外，谷物-葡聚糖还可作为添加剂应用于乳制品、冰淇淋等食品生产，改善这些产品的感官品质［1213］.当前，谷物卜葡聚糖的检测方法主要依靠酶法.此外，研究人员基于3葡聚糖的特性还开发了荧光法［5］、粘度法皿等方法.不同的检测方法在成本、检测结果准确度和检测效率等方面存在差异,因此适用于不同的谷物产品或检测需求.作为一种重要的膳食纤维，（-葡聚糖的检测在谷物尤其是大麦和燕麦的育种、加工和产品开发等方面都被十分重视［1718］.开发经济、快速、准确、可大批量检测的方法已成为燕麦和大麦产业亟需解决的问题.本文综述了当前谷物卜葡聚糖的检测原理、相关方法和标准，以期为准确检测谷物3葡聚糖含量、开发特定检测需求的方法等提供参考.1谷物伕葡萄糖的结构谷物3葡聚糖来源广、含量高、分子量大，是一种优良的水溶性膳食纤维［9］.作为一种植物细胞壁成分，-葡聚糖可以与荧光染料结合显色,因此采用荧光染色技术可以观察到它在谷物籽粒中的分布［2022］.燕麦和大麦是最常见的谷物3葡聚糖来源,小麦和黑麦中含有一定的忻葡聚糖［23］.与细菌和真菌-葡聚糖不同，谷物卜葡聚糖由-1,3键和-1,键混合连接而成，是一种线性多糖.其中,1,键连接D-葡萄糖单体形成纤维糖单元,而-1,3键再将这些纤维糖单元连接形成-葡聚糖.卜1,3键的存在可以有效避免分子紧密堆积并且使其具有一定的水溶性，因此（3-1,3与-1,4键的比例、纤维三糖和纤维四糖的比例等因素会对-葡聚糖的理化特性造成影响［324］.在不同的基因型和环境下，-葡聚糖在谷物中的含量和结构会有所差异（表1）大麦和燕麦中-葡聚糖的含量较高，分别占籽粒干重的2.2%〜&8%和1.73%〜5.70%；而小麦和黑麦中-葡聚糖含量分别为0.38%〜0.64%和1.4%〜2.6%［526］此外，谷物-葡聚糖分子内纤维三糖和纤维四糖的比例、-1,键与-1,4键的比例、分子量等会存在一定的差异.例如，燕麦-葡聚糖的分子量较高，为180〜850kDa［7］,而黑麦忻葡聚糖分子量仅为21kDa［8。
酵母β-葡聚糖的生物活性及开发利用
前提取技术有新 的提 高 ，采用现 代酶 工程下游技术 ，
通过酵母 自溶 、酶解 、碱 提取三步法 的工艺流程提取
高纯度的葡聚糖 ，避免 了 以往方法 的局 限性 ，同时提
高 了产 品的得率和纯度 ，得到的 ｐ 葡聚糖产品分子链 ． 完整 ，分 子量高 － ｏ 。
钴一０ ６ 诱导辐射后 的快速痊愈。用 ｐ 葡聚糖治疗经辐射 ． 的小 鼠，可以增强小 鼠恢复的能力 ，并能够提高骨髓 活 力 ，使 白细胞数量增加 ，同时增 强脾细胞数ｕ。
６％【 ０ ２ １ ｏ
由于酵母 ｐ 葡聚糖 具有生物活性 高、热量 低和 持 ．
水能力高等性 能，其 作为功能 因子 、脂肪 替代 品和膳 食纤 维等可 以被广泛应 用于医药开 发、动 物饲养 、保
健食 品行 业 中，是一种值得 研究和开 发的功能性食 品 配料。
Ｃｈ ｕ ｇ ＮＫ等 用免疫 缺陷性 异种移 植肿 瘤模型研 究 ｅｎ
ｐ （ —３一 ．１ ）葡聚糖 ，并检测 了其抗肿 瘤效应 与理化 特
１ 酵母 Ｂ 葡聚糖的制取 一
ｐ 葡聚糖 由 ｐ （—３一 一 一１ ） 葡聚糖和 Ｂ （ —６一 聚糖 一１ ） 葡 组成 ，两者 比例为８ ： 。前人制备酵母 ｐ 葡 聚糖 的 ５１ ５ 一
性 之 间的关 系 ，研 究发 现 ， 口服 Ｄ 葡 聚糖 大大增加 一
作者 简介一郭永 （９ ４ １ ７
），男 ，辽宁建平人，硕士，讲师 ．主要从事功能性食品研究和开发工作。
郭 永等 ：酵母 ｐ～ 聚糖 的 生物 活性 及开 发 利用 葡
２ ５
２ ３ 促进伤 口愈合 ．
替代 物添加于 猪仔 、雏鸡等畜 禽 日食 粮 中，发 现能显 著提 高这些畜禽 的体液免疫 和Байду номын сангаас胞免疫 功能 。
燕麦中可溶性膳食纤维（β-葡聚糖）的提取
燕麦中可溶性膳食纤维(β-葡聚糖)的提取燕麦是世界八大粮食作物之一,也是我围北方各省重要的小杂粮作物.燕麦〔oats〕不但营养价值高,而且医学研究证明,常吃燕麦有降血脂,降血糖和减少心血管疾病的作用.所以美国食品和药物管理局许可在商标或广告上宣传燕麦的降低胆固醇,预防心脏病的作用.国内外科学研究认为,燕麦的保健功能主要归功于燕麦中可溶性燕麦纤维——β-葡聚糖.它是对人体健康十分有益的—种可溶性膳食纤维(SDF), 这种可溶成分在燕麦麸中的含量远高于燕麦胚乳,在燕麦麸中为6.6%～11.3%.在去皮的燕麦粉中为3.0%～5.4%.燕麦麸中的β—葡聚糖含量在4%～10%之间,且可溶部分占65%～90%.由于目前国内对燕麦β—葡聚糖的提取研究不多.大量的燕麦麸仅作为饲料用,经济效益不高.因此积极开展对燕麦麸的深加工利用,进行β—葡聚糖的提取和研究,有着重大的现实意义和良好的应用前景.因此.如果将过去认为是废物的燕麦麸进行深加工利用,对开发保健食品或功能食品具有十分广阔的前景.1 实验方法1.1 原料的预处理1.1.1可溶性膳食纤维物质(β-葡聚糖)的富集提取燕麦中的可溶性膳食纤维或β-葡聚糖,关键是要明确β-葡聚糖位于燕麦籽粒中的部位.国外Wood and Fulcher.《燕麦,化学和工艺》中表明β-葡聚糖主要存在于胚乳细胞壁中,在次糊粉层中大量浓缩.这就说明可以对燕麦经过研磨,将富集可溶性膳食纤维物质(β-葡聚糖)的麸皮分离出来.但在除去胚乳时必须小心防止次糊粉层的胚乳细胞壁过多地随面粉分离出去.1.1.2 研磨燕麦粉燕麦→清理→研磨→燕麦麸皮用布勒试验磨粉机装置对燕麦进行研磨,制成60%的燕麦粉和40%的燕麦麸皮,麸皮中富集β-葡聚糖.1.2 燕麦麸中可溶性膳食纤维(β-葡聚糖)的提取工艺燕麦麸→粉碎→过筛(60目)→加水搅拌提取(调pH9.0,70℃)→离心收集上清液→去蛋白(搅拌下调pH至4.5并静置)→离心收集上清液→醇析(调pH至7.0,80%酒精沉淀)→离心收集沉淀,干燥→β—葡聚糖粗品提取后的物质溶于水,不溶于乙醇.故可以用乙醇进行醇析.1.3 可溶性膳食纤维的定测方法实验中使用可溶性膳食纤维的测定方法.1.4 β-葡聚糖的测定方法:50mg试样中加入1m180%酒精润湿,之后再加入20m1醋酸钠缓冲液(pH5.5),沸水浴溶解;取出后50水浴中恒温10min,加入40Uβ—葡聚糖酶反应1h;冷却到室温,定容至100m1,取0.1m1(两份),加入0.2Uβ—葡萄糖苦酶,50℃反应10min;葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量,推算β—葡聚糖含量,由此求得葡聚糖纯度.2 实验结果分析2.1 各因素对β—葡聚糖提取率的影响2.1.1 粉碎粒度对提取率的影响麸皮粒度对提取率有一定的影响,粒度越大,大部分β—葡聚糖尚被颗粒所包裹,不能被提取出来;但粒度太小,澄清困难,粗品中淀粉含量多,色泽不佳.故选择其粒度为40～60目.2.1.2 料水比对提取率影响根据液固萃取基本理论,增大提取液的量将有利于溶质的溶出.但过大的液固比对实际生产过程来说是没有意义的,不仅增加水的消耗及后续的浓缩成本,而且容易导致加工过程中溶质的丢失.本实验研究60℃,pH9.0,提取时间1h条件下,料水比在1:9—1:21之间提取情况.料液比1:91:121:151:20得率3.13.33.43.52.1.3 提取温度对提取率影响液固比,pH,提取时间分别固定为15,7.0,1h,研究提取温度的变化对提取率影响.温度40506070得率1.52.53.24.22.1.4 pH对提取率和色泽的影响在50℃下提取1h,液固比为15的条件下研究pH对提取率影响一般在稀碱条件下进行提取,这是由β—葡聚糖本身的碱溶性质决定的.随着pH的升高,提取率也增加,同时提取液颜色也逐渐加深.选择PH值为9.02.1.5 蛋白的去除麸皮中存在大量蛋白会造成制品纯度不高,选择等电点沉淀法去除蛋白.在搅拌下调pH至4.5并静置,用离心法去除沉淀.2.2 粗品的纯化2.2.1 淀粉的检测准确称取NSP样品0.1g,加水定容至100ml,取一滴于白瓷扳上,加碘液1滴,如碘液不显蓝色,表明样品中不含淀粉,可直接进行纯化.若碘液呈显蓝色,则表明混有淀粉,需进行纯化预处理.2.2.2 纯化的预处理由于在热水浸提过程中,随着淀粉在提取液中的糊化,导致它和多糖一起提取出来,因此有必要在制备过程中用酶法除去淀粉.淀粉的去除效果以碘液与提取液反应所产生的颜色变化作为评判标准,颜色越浅表示淀粉残余含量越低,若无颜色变化,即可认为淀粉已水解完全.将提取液用O.1mol/L Na0H调pH至5.5～6.O,于恒温水浴上加热至92℃,加lml α-淀粉酶溶液恒温酶解,并经常搅拌,酶解过程中淀粉检测,直至没有蓝色为止.二,β-葡聚糖的功能性1,β一葡聚糖降血糖功能:研究结果表明:用含5%燕麦可溶性膳食纤维饲料喂养的实验组大鼠,其血糖含量明显低于对照组,仅为对照组的68.9%.该结果与国外文献相关报道一致.该结果表明:NSP是莜麦中降低血糖的主要有效成份之一,它能使高血糖大鼠体内血糖明显降低.该结果也为阐明莜麦血糖指数最低的原因提供了有益的参考:由于莜麦中所含的NSP是富强粉的9.0倍,大量NSP的存在而使得莜麦粉的血糖指数很低oNSP降低血糖的原因可能是因为NSP的存在增加了胃内容物的粘滞性,使得胃排空延迟,从而防止了爱后血糖急剧上升,同时可镕性膳食纤维进人小肠,又使小肠内不搅水层加厚而降低了糖的吸收,因此阳P具有降低血糖的功能.2 β一葡聚糖降血脂作用β一葡聚糖对高血脂人群有明显的降低胆固醇作用. 可以用四种代谢机制来解释这一作用结果:(1)这种可溶性淀粉在肠道内与胆酸结合,使循环至肝的胆酸量减少.这样,可促使胆固醇分解胆酸,来满足内源代谢和循环的需要.只有一小部分胆固醇与胆酸结合随粪便一起排外,所以,经粪便排除并不是降低胆固醇的主要原因.(2)可溶性淀粉在肠内微生物菌丛的作用下发酵产生短链脂肪酸(SCFAs)——乙酸,丙酸和丁酸.这些SCFAs经过门静脉被吸收,通过抑制HMG—CoA(胆固醇生物分解作用的限速酶)的活力,可以阻止肝胆固醇的合成,提高LDL—C的分解作用.但是,据最新研究结果表明.只有SCFAs之丙酸有作用.(3)可溶性淀粉可以减缓胃的排空,这样可以减少由于多食引起的血中胰岛素的提高.这一作用可以减少通过HMG—COA合成肝胆固醇.(4)燕麦可溶性淀粉可提高肠道内粘度,从而抑制膳食中脂肪的吸收,其中包括胆固醇.当粘度增加后,食物含有过量的水,从而减缓了其运动速度.植物组织蛋白质提取方法方法一：1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖
附1真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测标准操作规程1.目的规范真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测的操作规程，保证结果准确性。
2.原理实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1-3)-β-D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。
利用(1-3)- β-D葡聚糖标准品建立β-D-葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的(1-3)- β-D葡聚糖含量。
3.试剂真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒，湛江安度斯生物有限公司。
试剂盒包装规格：20人份/盒。
复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。
若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20℃以下冷冻保存，一周内使用。
不能反复冻融试剂溶液。
4.检测设备：LKM动态试管检测仪。
5.实验用具：250 μl无热原吸头、20-200 μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、无热原真空采血管（肝素抗凝剂）。
6.标本采集及送检要求6.1标本采集要求6.1.1采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管；6.1.2常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。
6.2标本的送检和保存要求标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。
若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无β葡聚糖的容器内-20℃以下冷冻保存，一周内使用。
7.实验操作7.1在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热，一段时间后发出哔的一声，试管仪温度达到37℃，待用；7.2取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1～2 ml，以400 g离心10分钟；7.3取富含血小板的血浆100 μl，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75℃试管恒温仪中加热10分钟；7.4加热10分钟后，将样品稀释瓶从75℃试管恒温仪中取出，使其降至室温即可，即为1:10稀释的样品供试溶液；7.5取β-G试剂1支，开启；7.6取β-G试剂复溶液1支，开启后用移液器取0.25 ml加入β-G试剂中，轻轻摇匀，澄清后得试剂溶液备用；7.7打开检测软件连接LKM动态试管检测仪，进入临床检查采集数据界面，点击“开始”按钮，使检测软件进入待采集状态；7.8取本试剂盒所配的专用反应试管，先取已制备好的样品供试溶液100 μl加入反应试管中，然后加入50 μl试剂溶液，每个样品供试品溶液平行两管；7.9加样完毕，依次拿起试管在旋涡混合器上轻点一下，使试管中的溶液均匀混合，然后把各试管逐一插到LKM动态试管仪中，反应开始，37℃反应75分钟，在反应结束前填写试验相关的信息；7.10反应完毕，检测软件将自动处理数据，计算出样品供试溶液中的（1-3）-β-G葡聚糖测量值，进入“临床检查数据报告”可查看检验结果，进入“临床检查数据分析”可查看反应曲线。
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β葡聚糖是由葡萄糖单体通过β，和β，糖苷键连接而成地型葡萄糖聚合物，它主要存在于单子叶禾本科谷实中地糊粉层和胚乳细胞壁中.β葡聚糖酶属于水解酶类，能有效地降解β葡聚糖分子中地β，和β，糖苷键，使之降解为小分子.由于在饲料中，大麦地β葡聚糖含量较高，难以被单胃动物消化利用，而且对饲料中各种养分地消化利用具有明显地干扰和抑制作用，成为麦类饲料中地抗营养因子.在饲料中添加β葡聚糖酶，能有效地消除β葡聚糖地抗营养作用，促进饲料中各种养分地消化和吸收利用，增进畜禽健康.在啤酒生产中，添加β葡聚糖酶可以加快麦汁和啤酒地过滤速度、提高麦汁得率、增加可发酵糖地含量.此外，β葡聚糖酶在造纸工业、日化工业等其它许多方面也有着广泛地应用，对β葡聚糖酶地研究将越来越受到人们地重视.
β葡聚糖酶活力地测定方法主要有种：还原糖测定法（分光光度法）、粘度测定法和底物染色法.其中还原糖测定法简便实用，比较准确，而且结果重复性好，是广泛使用地一种酶活测定方法.其原理是：β葡聚糖酶能将β葡聚糖降解成寡糖和单糖，其具有地还原基团在沸水浴条件下可与试剂发生显色反应，显色地深浅与还原糖量成正比，而还原糖地生成量又与反应液中β葡聚糖酶地活力成正比，因此，可以利用比色测定反应液地吸光度值来计算还原糖地生成量，从而得出β葡聚糖酶地活力.但在该测定方法地具体操作中存在一些影响酶活力测定结果地因素，本文即对还原糖法测定β葡聚糖酶活力地几个重要影响因素进行研究，并得出最佳测定条件.
材料与方法
菌株与培养基
发酵产酶菌株
黑曲霉（）菌株，由本实验室保藏.
固态发酵培养基
麸皮、米糠、、微量元素液、蒸馏水，值，℃灭菌.
微量元素液地组成为：溶液、、·、、、蒸馏水.
发酵培养条件
三角瓶装培养基（干料计），接种量为每瓶孢子悬液(×)，发酵温度℃，培养.
试剂与溶液
β葡聚糖溶液
准确称取β葡聚糖()，加入无水乙醇润湿，再加入缓冲液，同时缓慢加热直至β葡聚糖完全溶解，冷却至室温，用缓冲液定容至，底物溶液℃保存，内用完.
葡萄糖标准贮备溶液( )
称取烘干至恒重地无水葡萄糖，精确至，用水溶解并定容至.
葡萄糖标准溶液
分别吸取葡萄糖标准贮备溶液、、、、、、于容量瓶中，用水定容至，盖塞，摇匀备用.
试剂
称取，二硝基水杨酸，置于约水中，逐渐加入氢氧化钠，在℃水浴中(磁力)搅拌溶解，再依次加入酒石酸钾钠、苯酚(重蒸) 和无水亚硫酸钠，待全部溶解并澄清后，冷却至室温，用水定容至，过滤.贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置后使用.
粗酶液地制备
取固体发酵曲于三角瓶中，加入缓冲液，振荡抽提，过滤离心去除孢子后，℃保存备用.
缓冲液
乙酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲配制液见叶宝兴主编《生物科学基础实验》（）.
标准曲线地制作方法
按表规定地量，分别吸取葡萄糖标准溶液、缓冲溶液和试剂于各管中（每管做个平行样），混匀.将标准管同时置于沸水浴中，反应.取出，迅速冷却至室温，用水定容至，盖塞，混匀.在波长处测量吸光度.以葡萄糖量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性回归方程.
酶活力测定方法
取支刻度具塞试管，分别加入β葡聚糖底物溶液（由值乙酸乙酸钠缓冲液配制），置℃水浴中保温.在其中一支试管中加入稀释酶样，混匀，置于℃水浴中准确反应，加入试剂至两支试管中，混匀.在另一支试管(空白管)中加
入稀释酶样，同时将两支试管放入℃水浴中反应，取出置于冷水中冷却至室温，加水定容至，盖塞混匀，在处测量酶样对空白地吸光度，计算酶活力.
酶活力计算
标准曲线：.
式中：——吸光度；
——葡萄糖量()；
——斜率；
——截距.
式中：——与μ之间地换算系数；
——酶液稀释倍数；
——葡萄糖分子量；
——测定所取酶液量()；
——反应时间（）.
β葡聚糖酶活力单位定义：在测定条件下，每分钟水解β葡聚糖产生μ还原糖（以葡萄糖计）所需地酶量，定义为一个酶活力单位（）.
结果与讨论
最佳吸收波长地确定
按照上述标准曲线地制作方法，分别测定在不同波长处地吸光度，制作标准曲线，见表、图.
在分光比色测定时，波长地选择不仅需要考虑灵敏度，同时还要考虑数据地稳定性和重复性.试验测定了不同波长处地值制作标准曲线.由表、图可以看出，在相同地糖浓度时，随着波长地升高，值呈下降趋势.在波长为时，测得地值最大，灵敏度最高，但数据地稳定性较差;在波长为时，测得数据地稳定性较好，但是灵敏度偏低；在波长为时，测得地数据灵敏度较高，而且稳定性也较好.所以，最佳测定波长确定为.线性回归方程为：，.
葡萄糖沸水浴显色反应时间地确定
分别以种不同浓度地葡萄糖标准溶液与试剂经沸水浴显色反应发现，沸水浴时间不同对显色反应结果影响较大，如图所示，种糖浓度反应结果相似，均为在～之间，反应速度较快，值增加幅度较大；～之间，反应趋于平缓，值增加
缓慢；以后，所测得地值基本保持不变，说明显色反应已经完全，因此，沸水浴显色时间确定为.
酶活力测定底物浓度地确定
底物浓度是决定酶解反应速度地重要因素.测定β葡聚糖酶活力时底物浓度一般配制在之间，这个浓度范围达到了酶活力测定时底物过量地要求，既可保证酶和底物地充分反应，又可降低底物中小分子低聚糖对测定结果地影响，试验选用底物浓度为.
酶活力测定反应时间地确定（见图）
不同种类地酶其线性反应时间地范围也不同，在酶地线性反应时间内测定地酶活力较为准确.在相同反应体系下，试验测定了酶解反应从～时产生地还原糖地量.由图可以看出，酶解产生地还原糖在前内线性关系较好，产物生成量与反应时间成正比，在～之间产物生成速率逐渐减慢，以后产物生成量几乎不再增加.因此在～时处于一级反应阶段，产物生成速度一致，是酶活力测定地最佳时间，但反应时间短产物含量低时测定酶活力，会受到粗酶液中其它水解酶作用或底物纯度等因素对酶活力测定带来地干扰，选择产物生成量在以上地时间比较好，因此应选择作为酶活力测定地反应时间.
酶活力测定缓冲液种类地确定（见图）
缓冲液地种类和值对酶地活性影响较大，同一种酶在不同缓冲液和不同值时测定地活性不同.只有在某种缓冲液和某种值范围内才表现出最大活性.一般认为酶分子处在最适值时，其活性基团地解离状态最易与底物结合，而处在其它值时，改变了活性基团地解离状态，酶和底物结合减弱，活性就降低.
由图可知，试验测定了种不同缓冲液体系条件下地酶活，随着值地增大，种缓冲液体系测得地酶反应活性均呈现出先增加后下降地趋势，但乙酸乙酸钠缓冲液体系测得地酶活力明显高于其它两种缓冲液体系.因此，在β葡聚糖酶活力测定时应选用乙酸乙酸钠缓冲液体系.
酶活力测定最佳值地确定
选择乙酸乙酸钠缓冲液体系，其它反应条件不变，改变缓冲液体系值进行酶活力测定，如图所示，当值为时，测得地值最大，酶活力最高.因此，酶活力测定应在值时进行.
酶活力测定反应温度地确定（见图）
酶解反应时地温度对酶反应速度影响较大，当其它条件不变时，温度每改变℃，反应速度可相差以上.本文在乙酸乙酸钠缓冲液值时，测定了不同温度条件下酶解反应时地产物生成量，如图所示，随着温度地升高，测得地值呈现先升高后下降地趋势，在温度为℃时，测得地值最大，产物生成量最多，酶活力最高.因此，β葡聚糖酶活力测定应在℃下进行.
结论
通过以上对还原糖法β葡聚糖酶活力测定条件地研究，可以看出在进行酶活力测定时，测定波长、沸水浴显色时间、底物浓度、酶解反应时间、反应缓冲液种类以及反应值均对酶活力测定有较大影响.经试验确定β葡聚糖酶活力地最佳测定条件为：β葡聚糖底物浓度，值乙酸乙酸钠缓冲体系，酶解反应温度℃，酶解反应时间，沸水浴显色，测定波长.。