QS2631内切-β-1,4-葡聚糖酶(Cx)活性测定试剂盒说明书
纤维素酶使用说明要点
纤维素酶使用说明精选优良菌株，先进的液体深层发酵工艺，全套不锈钢设备，进口酶分离设备和严格的质量控制程序生产，质量稳定，服务周道。
适用于中草药提取、植物提取、食品加工、果蔬汁加工、纺织、酿造、饲料等多个行业。
1.作用机理纤维素酶由内切葡聚糖酶(C1酶)；外切葡聚糖酶(Cx酶)；β-葡萄糖苷酶（又称纤维二糖水解酶）组成。
C1-酶作用于不溶性纤维素表面，使纤维素链裂开、长链纤维素分子末端部分游离，使纤维素链易于水化。
Cx-酶主要包括内切β-1,4葡聚糖酶和外切β-1,4葡聚糖酶，作用于经C1-酶催化的纤维素，分解β-1，4糖苷键。
前者是从高分子聚合物内部任意位置切开β-1,4键，主要生成纤维二糖、纤维三糖等。
后者作用于低分子多糖，从非还原性末端游离出葡萄糖。
β-葡萄糖苷酶可进一步将纤维二糖、纤维三糖及其它低分子寡聚糖分解为葡萄糖。
通过纤维素酶的作用，可以在不改变原料风味和营养价值的前提下，有效地破坏细胞结构，使有效成份得到充分利用。
2.执行标准及酶活定义【标准】QB2583-2003CMC酶活单位定义（U）：在50℃、pH4.8条件下，1分钟水解底物CMC -Na产生1μg还原糖（以葡萄糖计）所需的酶量定义为1个酶活单位。
3、理化指标外观：黄褐色粉剂pH 值：pH3.5-6.5，最适pH为4.8温度：40-60℃，最适温度为55℃。
4.适用范围本品可应用于中草药提取、植物提取、果蔬汁加工、食品酿造、酿酒、饲料、纺织、食品加工、乙醇等工业。
具体使用方法请与我们联系，用户需根据自己的产品、原料特点及工艺条件确定最佳使用方案。
5.包装规格 20kg/桶，可按顾客要求进行包装。
6.运输与贮存本品为生物制剂，运输、贮存过程应避光。
贮存于阴凉、通风、干燥场所。
保质期为12个月。
多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2660规格:50T/24S产品简介：多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase,PG）属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。
其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展。
PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入8mL蒸馏水，60℃水浴助溶。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1支，10mg半乳糖醛酸，4℃保存。
临用前加入0.943mL蒸馏水，配成50μmol/mL 的标准液。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照质量（g）:蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，16000g，离心10min，取上清置于冰上待测。
细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万个细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后4℃，16000g，离心10min取上清置于冰上待测。
液体：直接检测或用提取液稀释后检测。
Caspase1活性检测试剂盒比色法
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过 100µL 的分光光度检测杯检测时，除标准曲线外可以 检测 20 个样品。
试剂准备 1. 裂解液融化后混匀并置于冰浴上备用。 2. 检测缓冲液融化后混匀并置于冰浴上备用。
气泡。随后再加入 10µL Ac-YVAD-pNA(2mM)。
3. 加入 Ac-YVAD-pNA (2mM)后混匀，注意避免在混匀时产生气泡。37°C 孵育 60-120min。发
ห้องสมุดไป่ตู้
现颜色变化比较明显时即可测定 A405。如果颜色变化不明显，可以适当延长孵育时间，甚至可
以孵育过夜。
4. 样品的 A405 减去空白对照的 A405，即为样品中 caspase 1 催化产生的 pNA 产生的吸光度
二. 样品的收集： 1. 对于悬浮细胞：将没有诱导凋亡的对照品和诱导凋亡的样品，在 4°C 下，600g 离心 5min 后， 收集细胞，小心吸除上清，同时确保尽量没有细胞被吸除，PBS 洗涤一次。同前吸尽上清后，2×106 细胞加入 100µL 裂解液（建议加入 1%蛋白酶抑制剂（CC088）），重悬沉淀，冰浴裂解 15~20min。 下接步骤 4。 2. 对于贴壁细胞：将没有诱导凋亡的对照品和诱导凋亡的样品，吸取细胞培养液，备用。用胰 酶消化贴壁细胞，并收集至备用的细胞培养液中。在 4°C 下，600g 离心 5min 后，收集细胞，
1
小心吸除上清，同时确保尽量没有细胞被吸除，PBS 洗涤一次。同前吸尽上清后，2×106 细胞加
入 100µL 裂解液（建议加入 1%蛋白酶抑制剂（CC088）），重悬沉淀，冰浴裂解 15~20min。
真菌葡聚糖酶活力测定
前 言本标准与Novozymes A/S标准方法：EB-SM-0572.02/02 FBG. Fungal Beta-Glucanase activity by Konelab analyzer(英文版)的一致性程度为等同。
附录A为规范性附录。
本标准由诺维信（中国）生物技术有限公司提出。
本标准由诺维信（中国）生物技术有限公司负责起草。
本标准主要起草人：蔺继尚、关越、翟文景。
本标准于2004年04月首次发布。
诺维信分析方法第112部分：用Konelab分析真菌β-葡聚糖酶活力，FBG1 范围本方法规定了使用Konelab分析真菌β-葡聚糖酶活力的步骤。
本方法适用于所有Novozymes内部分析真菌β-葡聚糖酶样品的实验室。
2 原理β-葡聚糖酶能水解β-葡聚糖，生成还原糖。
该反应通过加入含有PAHBAH和铋盐（Bi3+）的碱性溶液中止。
含有的PAHBAH和铋盐能与还原糖形成有颜色的混合物，在405nm下检测。
生成的颜色与β-葡聚糖酶活力成比例。
该过程由Konelan分析仪自动完成。
2.1 反应条件(反应体系中)酶反应β-葡聚糖浓度： 0.50%β-葡聚糖酶浓度： （1-5）FBG/L缓冲液： 28 mM磷酸缓冲液pH： 5.0温度: 50℃时间: 20 min酶空白反应β-葡聚糖浓度： 0.50%β-葡聚糖酶浓度： （1-5）FBG/L缓冲液： 28 mM磷酸缓冲液pH： 5.0温度: 50℃时间: 20 min显色反应PAHBAH浓度： 42 mM酒石酸盐浓度： 56 mM铋盐浓度： 4.5 mMNaOH浓度： 146 mMpH： 碱性温度: 50℃时间: 20 min测定波长： 405 nm2.2 样品条件(样品溶液中)工作范围： （6-30）FBG/LQ/12KF 3568.112-2004定量范围： （13-30）FBG/L3 单位定义1 FBG等于在给定条件下每分钟生成相当于1µmol葡萄糖的还原糖所需的酶的量。
β-1,3葡聚糖酶测定试剂盒使用说明
β-1,3葡聚糖酶测定试剂盒使用说明分光光度法货号：BC0360规格：50管/24样产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：液体42mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。
产品说明：β-1,3-GA(EC3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。
在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：粗酶液提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：试剂名称（μL）测定管对照管标准管（葡萄糖溶液）样本或标准液100100100蒸馏水100100试剂一100充分混匀，放入37℃水浴60min。
试剂二600600600充分混匀，沸水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，540nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A对照。
β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-GA)试剂盒说明书
货号：QS2611 规格：50管/24样β-1,3 葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA）试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：β-1,3-GA(EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。
在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
测定原理：β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存；粗酶液提取：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
A，第1页，共2页如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A 对照。
每个测定管需设一个对照管。
β-1,3-GA活性计算：1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0958x -0.0192；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
可溶性果胶含量试剂盒说明书(分光光度法)
货号: QS2635 规格：50管/24样可溶性果胶(WSP)含量试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。
果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是许多高等植物细胞壁中含量最丰富的多糖成分，其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。
果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。
测定原理：利用酸溶液提取得到（WSP）可溶性果胶，采用咔唑比色法测定果胶含量。
果胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应，生成物质在530 nm处有最大吸收峰。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：试剂一：液体50mL× 1瓶，4℃保存。
试剂二：液体50mL× 1瓶，4℃保存。
试剂三：标准液1mL× 1支，4℃保存。
试剂四：液体5 mL× 1瓶，4℃保存；样品的前处理：1、细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。
沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL 试剂一（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。
2、WSP的提取：称取烘干的CWM 3mg，加入1mL试剂二，充分匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清液待测。
江南大学科技成果——耐热、高活性β-葡聚糖酶的构建及生产
江南大学科技成果——耐热、高活性β-葡聚糖酶的构建及生产项目简介β-葡聚糖酶是啤酒工业和饲料工业主要的酶制剂。
目前该酶制剂主要存在的问题是耐热性差和产酶水平不高的问题。
本项目通过基因工程和蛋白质工程手段，从酶分子结构着手，构建耐热、酸性条件下活性高的β-葡聚糖酶。
在不提高酶生产成本的前提下，酶的活性不低于50000U/g，在酸性55-80℃条件下孵育20min，酶活性大于80%。
达到国外同类产品的水平，但价格仅是国外同类产品的三分之一，具有广阔的市场前景。
项目获2009年获国家自然科学基金面上项目资助（30万元），项目编号：30972120；2009年获无锡市科技创业计划项目资助（15万元），项目编号：09132。
创新要点（1）采用基因融合、蛋白质分子改造技术从本质上提高酶分子的耐热性和表达水平；（2）β-葡聚糖酶的耐热性在80℃条件下处理30分钟，酶的残余活性大于90%，酶的活性不低于5000U/g。
效益分析（资金需求总额300万元）本项目可生产高效稳定的β-葡聚糖酶，主要技术性能指标优于国内外同类产品。
按照年产1000吨的β-葡聚糖酶计，每吨酶成本为1万元，销售价按国内同类产品每吨3万元计，年销售额达3000万，毛利润达2000万元，为国家上交税33万。
所以本产品是国内同类产品的升级换代产品，有较大的市场竞争优势和利润空间。
按照β-葡聚糖酶在饲料中0.1%的添加量计算，1000吨β-葡聚糖可添加到100万吨饲料中，按100%大麦、小麦替代玉米，可节约60万吨玉米；按大麦、小麦与玉米的平均差价每吨200元计，每吨饲料成本可降低120元，1000万吨饲料可节约成本12亿元。
所以本产品有明显的市场优势，为缓解我省玉米供需矛盾，开发大麦饲料资源、降低饲料成本，提升肉产品等级、扩大猪肉出口，促进饲料和养殖业健康发展具有重要意义。
推广情况本项目已规模试产，产品受到用户好评。
授权专利β-葡聚糖酶活性测定试剂盒，200910052355.4；饲料用β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因工程菌及其构建，200910031553.2。
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货号：QS2631 规格：50管/24样
内切-β-1，4-葡聚糖酶（Cx）活性测定试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
Cx存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，Cx主要作用于非晶态纤维素和水溶性纤维素衍生物，随机水解糖苷键，将其分解成葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖和其他寡聚体。
测定原理：
采用3,5－二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
样品测定的准备：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104
个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
混匀， 90℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，测 540nm 下吸光值 A，计
算ΔA=A 测定管-A 对照管。
每个测定管需设一个对照管。
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Cx 活性计算
1、标准条件下测定回归方程为y=6.4078x-0.0673；x 为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、血清（浆）Cx 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx 活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷V 样÷T
=14.305×(ΔA+0.0673)
3、细胞、细菌和组织中 Cx 活力的计算
（1）按照蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg/min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T
=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx 活力(μg/min/g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(W×V样÷V样总)
÷T=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx 活力(μg/min/104cell)=[1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷(500×V样÷V样总)
÷T=0.0286×(ΔA+0.0673)
1000：1mg/mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.55mL； V 样：加入样本体积，0.05 mL；
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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