兽医微生物综合实习实验报告作大全业

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兽医微生物实习报告

兽医微生物实习报告

实习报告实习单位:XXX兽医微生物实验室实习时间:202X年X月X日至202X年X月X日实习内容:在兽医微生物实验室的实习期间,我主要参与了以下几个方面的工作:1. 微生物分离与纯化:通过平板划线法和液体稀释法对采集的动物样本进行微生物分离,然后将分离出的微生物进行纯化培养。

2. 微生物鉴定:使用显微镜观察微生物的形态特征,并通过生化反应管进行生化鉴定,确定微生物的种类。

3. 药敏试验:利用纸片扩散法对分离出的病原微生物进行药敏试验,以确定敏感抗生素。

4. 动物实验:将分离出的病原微生物接种到实验动物体内,观察动物的发病情况和病理变化,从而确定病原微生物的致病性。

实习过程:在实习的第一周,我在导师的指导下学习了微生物分离与纯化的基本操作,了解了各种微生物分离方法的原理和注意事项。

在实际操作过程中,我学会了如何正确使用无菌操作技术,避免污染样本和实验材料。

在实习的第二周,我学习了微生物鉴定的方法,通过显微镜观察微生物的形态特征,如菌落形状、颜色、大小等。

同时,我还学会了如何进行生化反应管的填写和结果判定,从而准确地确定微生物的种类。

在实习的第三周,我参与了药敏试验的操作。

我了解到药敏试验是确定敏感抗生素的重要手段,对于治疗感染性疾病具有重要意义。

在实验过程中,我学会了如何正确填写药敏试验表格,并使用纸片扩散法进行操作。

在实习的第四周,我参与了动物实验。

我将分离出的病原微生物接种到实验动物体内,并观察了动物的发病情况和病理变化。

通过这个实验,我深刻地了解了微生物的致病性,以及如何进行实验性治疗和预防。

实习收获:通过这次兽医微生物实习,我不仅学到了许多关于微生物分离、纯化、鉴定和药敏试验的专业知识,还提高了自己的动手能力和实验技能。

在实习过程中,我学会了如何正确使用实验仪器和设备,掌握了无菌操作技术,避免了实验过程中的污染。

此外,我还学会了如何阅读和分析实验结果,如何撰写实验报告。

这些技能对我今后从事兽医微生物工作具有很大的帮助。

兽医微生物实验报告心得

兽医微生物实验报告心得

兽医微生物实验报告心得引言本次兽医微生物实验是为了进一步了解和学习兽医微生物学的基本知识和实验技能。

通过这次实验,我对于兽医微生物的重要性有了更深刻的认识,并且学会了如何进行微生物实验并分析实验结果。

在实验过程中,我克服了很多困难,也取得了一定的实验成果。

实验目的本次实验旨在通过在实验室环境中培养和观察兽医常见的微生物,如大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等,以了解它们的生长特性、形态特征以及对不同环境和抗生素的反应。

同时,通过对实验结果的分析,加深对兽医微生物学的理解。

实验方法在实验开始前,我们首先从临床样本中收集到了兽医微生物,经过处理后,进行了培养和鉴定实验。

1. 选取适当的培养基:根据不同微生物的喜好和需求,选取合适的培养基。

比如对于大肠杆菌,我们使用了MacConkey琼脂培养基。

2. 非无菌操作和试管消毒:为了保证实验环境的清洁和纯净,我们严格遵守实验操作规程,进行非无菌操作和试管消毒。

3. 菌液接种:将培养基孵育后,取少量菌液点在培养基的表面,利用三菌种接种。

4. 培养和观察:将接种后的培养基放置在恒温培养箱中进行培养。

经过一定时间后,我们观察和记录了菌落的形态特征、生长情况以及对抗生素的敏感性。

5. 结果分析:根据实验结果,我们进行了数据分析和统计,并与兽医微生物学的知识进行比对和对照。

实验结果与讨论在本次实验中,我们成功培养了大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,并观察到了以下结果:1. 大肠杆菌:在MacConkey琼脂培养基上,大肠杆菌形成呈粉红色的菌落,这是由于MacConkey琼脂中含有发酵产酸的培养基成分,而大肠杆菌能够产生乳酸和醋酸。

此外,我们还发现大肠杆菌对青霉素和链霉素等抗生素具有一定的抵抗力。

2. 金黄色葡萄球菌:在营养琼脂培养基上,金黄色葡萄球菌形成呈金黄色的球状菌落。

通过进一步的实验观察,我们发现金黄色葡萄球菌对厌氧生长条件下的青霉素能够产生敏感性。

通过对实验结果的分析,我们进一步认识到微生物对不同环境因素和抗生素的反应差异性,并且加深了对兽医微生物学的理解。

兽医微生物及免疫学实践报告

兽医微生物及免疫学实践报告

兽医微生物及免疫学实践报告引言。

兽医微生物及免疫学是兽医学中的重要学科,它涉及动物疾病的病原微生物和动物免疫系统的研究。

在本次实践中,我们将重点关注微生物和免疫学在兽医临床实践中的应用。

微生物学实践。

在微生物学实践中,我们对动物身体内的微生物进行了采样和分离。

通过使用培养基和生物化学试剂,我们成功地分离出了多种细菌和真菌。

我们还对这些微生物进行了鉴定和药敏试验,以确定其对常用抗生素的敏感性。

这有助于制定针对不同病原微生物的治疗方案,提高治疗效果。

免疫学实践。

在免疫学实践中,我们重点研究了动物的免疫系统。

通过血清学实验和细胞免疫学实验,我们评估了动物的免疫功能。

我们还学习了免疫学在预防和治疗动物疾病中的应用,包括疫苗接种和免疫
调节治疗。

兽医临床实践。

在兽医临床实践中,我们将微生物学和免疫学的知识应用于实际临床案例。

通过对患有不同疾病的动物进行检查和诊断,我们能够更好地理解疾病的病因和发病机制。

同时,我们也能够更准确地选择治疗方案,并监测治疗效果。

结论。

兽医微生物及免疫学是兽医学中不可或缺的学科,它对于预防和治疗动物疾病起着关键作用。

通过本次实践,我们深入了解了微生物和免疫学在兽医临床实践中的重要性,这将为我们未来的兽医工作提供坚实的基础。

同时,我们也认识到了微生物耐药性和免疫功能调节在动物健康中的重要性,这将促使我们更加重视兽医微生物及免疫学的研究和实践。

动物微生物实习报告

动物微生物实习报告

一、实习背景随着科学技术的不断发展,动物微生物学在生物学领域的重要性日益凸显。

为了更好地了解动物微生物学的相关知识,提高自身的实践操作能力,我们选择了动物微生物实习作为本次实习的主要内容。

本次实习于2023年x月x日至x月x日在XX 大学动物微生物实验室进行。

二、实习目的1. 了解动物微生物学的基本概念、分类和特性。

2. 掌握动物微生物实验室的基本操作技能。

3. 通过实验,提高自己的动手能力和团队协作能力。

4. 培养严谨的科学态度和良好的实验习惯。

三、实习内容1. 实验一:动物微生物的分离与纯化(1)实验目的:学习动物微生物的分离与纯化方法,掌握平板划线法和稀释涂布平板法。

(2)实验原理:通过平板划线法和稀释涂布平板法,将动物微生物从样品中分离出来,得到纯种。

(3)实验步骤:①准备实验材料:无菌平板、无菌镊子、无菌接种环、无菌培养皿、无菌水、待分离样品等。

②平板划线法:将无菌接种环在酒精灯上灼烧后,待冷却至适宜温度,蘸取待分离样品,在平板上划线,重复几次,使样品均匀分布在平板上。

③稀释涂布平板法:将待分离样品进行梯度稀释,取适量稀释液涂布于平板上。

④培养:将平板倒置放入培养箱中,适宜温度下培养。

⑤观察:观察平板上的菌落生长情况,记录菌落数。

2. 实验二:动物微生物的形态观察(1)实验目的:学习显微镜的使用方法,观察动物微生物的形态。

(2)实验原理:利用显微镜观察动物微生物的形态,了解其基本特征。

(3)实验步骤:①准备实验材料:显微镜、盖玻片、载玻片、无菌水、待观察样品等。

②制片:将待观察样品滴在载玻片上,用盖玻片覆盖。

③观察:在显微镜下观察动物微生物的形态,记录观察结果。

3. 实验三:动物微生物的生理生化特性测定(1)实验目的:学习动物微生物的生理生化特性测定方法,了解其代谢特点。

(2)实验原理:通过测定动物微生物的生理生化指标,了解其代谢特点。

(3)实验步骤:①准备实验材料:无菌培养皿、无菌水、待测样品、生理生化试剂等。

兽医微生物实习报告

兽医微生物实习报告

一.实习目的为了使学生能够理论联系实际,通过亲自实地解剖感染小鼠,对小鼠的心、肝、脾进行麦康凯琼脂平板划线培养,以柯赫法则为这次实习的主线,达到鉴定出小鼠感染的菌种的目的,熟练运用微生物实验课的所涉及的实验操作和方法,提高实验动手能力,分析实验过程中可能出现的问题,并解决问题。

特开设微生物教学实习,掌握基本技能,加深理论部分的理解,能够独立诊断出传染病病菌,获得严谨的科学实验素养。

二.实习材料实验动物:一只被感染小鼠,一只健康小鼠实验器械,主要包括:小鼠解剖工具手术剪、镊子、蜡盘、钉子,接种棒、酒精灯、打火机、记号笔、手套、载玻片、枪头、注射器、离心管。

实验材料:麦康凯琼脂平板、各种染色液(结晶紫溶液、碘溶液、酒精、沙黄水)、蒸馏水、培养基(普通肉汤培养基、蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、固体培养基)、PBS重悬液、生化试验材料(微量发酵管(葡、乳、枸、尿素、麦、甘醇、蔗、硫)、对二甲基氨基苯甲醛、乙醚、甲基红、vp甲乙液)。

实验主要仪器:离心机,分光光度器,温箱,摇床,超净工作台三.实习内容以柯赫法则为主线,通过对感染小鼠的剖解采样、分离培养、镜检、扩增培养,然后把得到的纯培养物对健康小鼠进行再次接种以获得被感染小鼠,再次重复以上操作,把获得的纯培养物通过镜检观察和做生化实验来鉴定出感染小鼠的致病菌。

四.实习操作进程第一天:实验设计、讨论症状、分离剖解1 实验设计:以小组为单位进行实验设计,明确此次实验主要法则是:柯赫法则。

在老师的指导下确定此次实习的主要步骤,讨论实验中可能遇到的问题以及注意事项。

2 讨论症状:比较观察健康小鼠与病鼠,可见到病鼠一般呈萎靡状,不活跃。

每组领取一只感染小鼠观察症状,体表基本正常。

3 分离剖解:先将麦康凯琼脂平板分三区,依次写上肝、脾、心。

右手抓起小鼠尾巴,将小鼠摇晕,采用颈椎脱臼法将小鼠处死。

将小鼠尸体仰卧固定于蜡盘上,充分露出胸腹部。

先用小鼠腹部柔软部用剪刀剪一小口,然后从该小口处往上、往下剪将皮毛剥离,剥离腹膜暴露出肝脏和脾,可观察到有轻微的肝肿胀,颜色变淡。

兽医专业实验报告总结(3篇)

兽医专业实验报告总结(3篇)

第1篇一、实验背景随着我国畜牧业的快速发展,兽医行业在保障畜牧业健康、促进农民增收等方面发挥着越来越重要的作用。

为了提高兽医专业学生的实践能力和专业技能,我校兽医专业开设了一系列实验课程。

本次实验报告总结将对我校兽医专业学生的《兽医微生物学》综合实习进行总结。

二、实验目的1. 掌握营养肉汤、血琼脂平板、麦康凯平板、普通琼脂、三糖铁层琼脂的配置方法。

2. 熟练掌握细菌的分离培养技术,包括解剖、病料采集、从组织中分离细菌、培养细菌、移植细菌、纯化细菌、细菌接种等。

3. 掌握细菌的鉴定技术,如光学显微镜油镜的技术、组织涂片、在组织材料中认识细菌、辨别细菌、生化实验、血清学实验技术及细菌片的涂片、染色、镜检等技术。

4. 熟悉病毒的鸡胚分离培养技术,包括鸡胚死活的鉴定、鸡胚的接种、胚液的收集,以及病毒的血凝试验和血凝抑制试验。

5. 认识真菌(酵母菌、青霉菌、曲霉菌、毛霉菌、根霉菌)的形态。

三、实验过程1. 配制培养基:按照实验要求,配制了营养肉汤、血琼脂平板、麦康凯平板、普通琼脂、三糖铁层琼脂等培养基。

2. 细菌分离培养:采集病料,进行细菌分离培养,观察细菌生长情况,进行纯化细菌。

3. 细菌鉴定:利用光学显微镜油镜技术观察细菌形态,进行组织涂片,辨别细菌种类,进行生化实验和血清学实验,鉴定细菌种类。

4. 病毒分离培养:进行鸡胚分离培养,观察鸡胚死活,接种病毒,收集胚液,进行血凝试验和血凝抑制试验。

5. 真菌观察:观察酵母菌、青霉菌、曲霉菌、毛霉菌、根霉菌的形态,了解其生长特点。

四、实验结果与分析1. 培养基配制成功,细菌生长良好,纯化细菌效果明显。

2. 通过细菌分离培养和鉴定,成功分离出多种细菌,如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。

3. 在细菌鉴定过程中,掌握了生化实验和血清学实验技术,为临床诊断提供了有力支持。

4. 病毒分离培养成功,血凝试验和血凝抑制试验结果符合预期。

5. 观察到酵母菌、青霉菌、曲霉菌、毛霉菌、根霉菌的形态,了解了其生长特点。

兽医实验室实习报告总结

兽医实验室实习报告总结

实习报告总结在兽医实验室的实习期间,我有幸参与了多种实验项目,从而对兽医微生物学、细菌检验、病毒分离培养等方面有了更深入的了解。

实习过程中,我不仅提高了自己的操作技能,还学会了如何更好地与他人沟通和陈述观点。

以下是我在实习期间的学习成果和心得体会。

首先,在实习过程中,我掌握了兽医微生物学的基本技术和细菌检验的基本程序。

通过实际操作,我熟悉了营养肉汤、血琼脂平板、麦康凯平板、普通琼脂和三糖铁层琼脂的配置方法。

此外,我还学会了细菌的分离培养技术,包括解剖、病料的采集、从组织中分离细菌、培养细菌、移植细菌、纯化细菌和细菌接种等步骤。

在细菌鉴定技术方面,我掌握了光学显微镜油镜技术、组织涂片、生化实验、血清学实验及细菌片的涂片、染色、镜检等操作。

其次,在病毒分离培养方面,我学会了鸡胚死活的鉴定、鸡胚的接种和胚液的收集等技术。

此外,我还掌握了病毒的血凝试验和血凝抑制试验。

通过这些实验,我对病毒的特性和传播途径有了更深入的认识。

在实习过程中,我还学习了如何与他人沟通和合作。

在实验室里,我与同学们共同完成实验任务,互相学习、交流,共同解决问题。

此外,我还学会了如何陈述自己的观点,并在讨论中说服别人认同。

这些沟通技巧对我今后的学习和工作中具有重要意义。

然而,在实习过程中,我也遇到了一些困难和挑战。

例如,在细菌分离培养和病毒分离培养实验中,我曾遇到过接种操作不成功、实验数据不准确等问题。

但通过请教老师和同学,我不断改进操作方法,提高实验技能,最终克服了这些困难。

总之,实习期间我在兽医实验室的学习和实践取得了丰硕的成果。

我不仅提高了自己的专业技能,还学会了与他人沟通和合作。

这段实习经历对我今后的学习和职业生涯具有重要意义。

在今后的学习和工作中,我将继续努力,充分发挥所学知识,为兽医事业做出贡献。

兽医临床综合实验报告(3篇)

兽医临床综合实验报告(3篇)

第1篇一、实验背景随着兽医科学的不断发展,兽医临床实验在动物疾病诊断和治疗中扮演着越来越重要的角色。

本实验旨在通过综合运用兽医临床技能,对动物疾病进行诊断、治疗和预后评估,从而提高兽医学生的临床实践能力。

二、实验目的1. 熟悉兽医临床实验的基本流程和操作方法。

2. 学会运用临床技能对动物疾病进行诊断。

3. 掌握常见动物疾病的诊疗方案。

4. 提高兽医学生的临床思维和解决问题的能力。

三、实验内容1. 实验动物的选择与准备实验动物选用健康成年家兔,体重2-3kg。

实验前对家兔进行适应性饲养,观察其行为和生理状态,确保实验过程中家兔的安全。

2. 病例采集与初步诊断(1)病史采集:询问家兔主人的饲养管理情况、病状出现时间、病情发展过程等。

(2)临床检查:观察家兔的精神状态、体态、呼吸、心率、体温等,必要时进行详细体格检查。

(3)实验室检查:根据初步诊断结果,进行相应的实验室检查,如血液学、生化、病原学等。

3. 疾病诊断与治疗方案根据病史采集、临床检查和实验室检查结果,对家兔疾病进行诊断。

本实验以“家兔巴氏杆菌病”为例,进行如下诊断与治疗:诊断:1. 临床症状:家兔出现食欲下降、精神沉郁、呼吸困难、腹泻等症状。

2. 实验室检查:血液学检查显示白细胞计数升高,中性粒细胞比例增加;生化检查显示肝功能异常。

治疗方案:1. 抗菌治疗:选用敏感抗生素进行治疗,如氟苯尼考、恩诺沙星等。

2. 支持治疗:补充电解质,维持水、电解质平衡。

3. 对症治疗:根据病情进行对症治疗,如抗病毒、抗炎等。

4. 治疗效果评估治疗过程中,定期观察家兔的临床症状和实验室检查结果,评估治疗效果。

本实验中,家兔病情在治疗3天后明显好转,食欲恢复,呼吸平稳,腹泻症状消失。

治疗7天后,家兔恢复正常,实验室检查指标恢复正常。

四、实验总结本实验通过综合运用兽医临床技能,对家兔巴氏杆菌病进行了诊断和治疗。

实验过程中,学生掌握了病史采集、临床检查、实验室检查、疾病诊断、治疗方案制定等基本技能,提高了临床实践能力。

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华南农业大学实验报告实验项目名称:《兽医微生物》综合实习所属课程名称:《兽医微生物学》学生姓名123 学号:20098765489专业年级:09班成绩:一、实验目的(1).巴氏杆菌的培养鉴别与病毒的培养1.掌握营养肉汤、血琼脂平板、麦康凯平板、普通琼脂、三糖铁层琼脂的配置方法。

2.细菌的分离培养技术(解剖、病料的采集,从组织中分离细菌、培养细菌、移植细菌、纯化细菌,细菌接种)。

3.细菌的鉴定技术(光学显微镜油镜的技术,组织涂片,在组织材料中认识细菌、辨别细菌、生化实验、血清学实验技术及细菌片的涂片、染色、镜检等技术)。

4.病毒的鸡胚分离培养技术(鸡胚死活的鉴定、鸡胚的接种、胚液的收集)病毒的血凝试验和血凝抑制试验。

5.掌握实验用具的包扎、消毒等。

(2).酶联免疫吸附实验检测小猪FMDV抗体水平1.掌握给猪只注射药物和疫苗的方法,掌握从前腔静脉抽取猪血(用于分离血清)。

2.掌握血清的分离技术。

3.掌握病毒的培养,手集,纯化,浓缩等。

4.掌握ELISA反映条件的优化,熟悉掌握酶联免疫吸附实验的原理,具体操作和应用。

二、实验原理以及实验要求(1)1.利用细菌的一般生理生化特性进行鉴别。

2.酶联免疫吸附试验为一种固相酶免疫测定技术,先将已知抗原或抗体包被于固相载体的表面,与待检样品中的相应抗体或抗原发生反应,再加入酶标记抗体或抗原与免疫复合物结合,最后加入酶的作用底物,根据产物颜色的深浅或测定其A值,可进行定性或定量分析。

(2)1.通过本次综合实习全面系统地掌握兽医微生物学的基本技术和细菌检验的基本程序,掌握各种生理生化试验的原理及试验方法,将理论与实践有机统一。

2.加强对临床常见病原菌鉴定本领的操作训练。

3.熟练掌握微生物实验常用仪器的使用及培养基制备的原则和方法。

4.对每一步实验要认真对待,对实验结果应详细记录,仔细分析,以便得出正确的鉴定结论,实习结束后,全面总结并写出实习报告。

三、实验内容1.细菌与病毒的分离及诊断2.ELISA实验检测小猪FMDV的抗体水平四、实验材料与设备实验材料1.细菌的分离诊断:(1) 无菌注射器、抗凝剂、健康鸡、健康兔、血琼脂基础、锥形瓶、蒸馏水、麦康凯琼脂粉、三糖铁琼脂粉、营养琼脂粉、营养肉汤基础、雏鸡、小白鼠、木板、图钉、剪刀、接种环、接种针、镊子、各种染色液、移液枪、葡萄糖培养管、蔗糖培养管、乳糖培养管、甘醇培养管、靛基质培养管、硫化氢培养管、H2O2、氧化酶试纸、巴氏杆菌标准毒、巴氏杆菌阳性血清、靛基质指示剂、载玻片、显微镜等(2) 装有不明病毒的80编号小管一支、9-10日龄鸡胚、打孔器、一次性注射器、剪刀、记号笔、镊子、灭菌乳钵、离心管、空平皿、玻璃沙、空试管几支、西林瓶、青霉素、移液管、锥型瓶、U型96孔微量反应板、蛋架(3)载玻片、接种环、镊子、盖玻片、显微镜(4)实验设备:高压消毒炉、恒温培养箱、离心机、电子天平、冰箱、轻微振荡器2.ELISA实验检测小猪FMDV的抗体水平(1)一次性注射器、不锈钢注射器,口蹄疫疫苗,酒精和棉球。

(2)离心管,离心机,微量注射器。

(3)FMDV,BHK-21细胞(貂鼠肾细胞),温箱,水浴锅,透析袋,PEG20000.生理盐水。

(4)酶联检测仪,酶标版,病毒,洗涤液,封闭液,待检测血清,阴性血清,阳性血清,酶标二抗,底物液,终止液。

五、实验方法和步骤(一)细菌的的分离及诊断1.实验前准备(此步分量为一组6个人)(1)小鼠的攻毒:挑选健康的小鼠,术者在做好接种准备之后,先用右手抓住鼠尾,令其前爪抓住饲料罐的铁丝网,然后用左手的拇指和食指捏紧头颈部皮肤,并反转左后使小鼠腹部朝上,将其尾巴夹在左手掌与小指之间,右手消毒小鼠大腿根部,把持注射器,以针头插入大腿,注入约0.2.攻毒后,每天观察一次,将病死的小鼠放入冰箱冷藏以备实验。

(2)心脏采血:兔心脏采血:触摸健康兔左前肢以下、胸骨以上、靠左的位置,通过心跳感觉心脏位置,用碘酒、酒精棉球消毒,用无菌注射器抽取1ml抗凝剂,并润湿注射器,待酒精干后,将针插入,边插边回抽,当有血冲上针筒时,即抽取血9ml,用作血平板。

鸡心脏采血:将无菌注射器抽取1mL抗凝剂,并湿润注射器。

触摸健康鸡左翼以下、胸骨以上、嗉囊靠左的位置,通过心跳感觉心脏位置,用碘酒、酒精棉球消毒,待酒精干后,将针插入,边插边回抽,当有血冲上针筒时,即抽取血7ml,用作血平板。

(3)血琼脂平板:称取琼脂基础3.3g,加100ml蒸馏水,加热溶解,倒入锥形瓶,高压灭菌15min,待冷却至50℃,加入5%无菌脱纤维鸡兔血10ml,摇匀,倾注至灭菌平皿。

(注意琼脂温度过高,鲜血加入后则成巧克力颜色,温度低,则鲜血易凝不易混合。

(4)麦康凯平板:每人取一支,每个约8mL。

称取麦康凯琼脂粉14.3g,加600ml蒸馏水,加热溶解,倒入锥形瓶,高压灭菌15min,倾注至灭菌平皿。

(5)三糖铁琼脂:称取三糖铁琼脂粉15g,加240ml蒸馏水,加热溶解,分装到试管,每支约10ml,高压灭菌15min,趁热摆斜面,待其凝固。

(实验室准备)(6)营养肉汤:称取营养肉汤基础4.4g,加200ml蒸馏水,加热溶解,分装到试管,每支约10ml,高压灭菌15min。

(实验室准备)(7)血细胞悬浮液:往无菌离心管注入2mL鸡血,再加入4ml生理盐水,摇匀,放入离心机2000r/s离心10min,然后取出离心管,并用无菌注射器吸去起上清液,重复3次。

用移液枪吸取1ml血细胞到100ml无菌玻璃瓶中,再加入99ml生理盐水,冷藏。

2.分离培养取一因细菌感染而致死的小鼠,腹部向上固定于木板上,用酒精棉球消毒体表,打开腹腔,暴露肝脏,用剪刀夹一燃烧酒精棉球,在肝脏表面烫之杀死表面杂菌,用灭菌接种环插入烧灼部,将接种环旋转1圈,然后取材划线接种于血琼脂平板上,置37℃温箱培养24h。

3.形态与染色小鼠作分离培养后,用灭菌镊子和剪刀取一小块肝脏,作组织涂片,进行瑞氏染色,镜检。

观察细菌形态特征。

4.肉汤增菌培养观察血琼脂平板上的细菌菌落形态特征,然后用灭菌接种环挑取可疑菌落,涂抹到载玻片上,进行革兰氏染色,镜检。

用灭菌接种针环挑取可疑菌落,接种到加有血清的营养肉汤,摇匀,置37℃温箱培养24h。

5.生化实验观察肉汤变化情况,用灭菌接种环取肉汤中已纯化细菌,涂抹到载玻片上,进行革兰氏染色,镜检。

进行生化试验。

(1)用灭菌接种环取肉汤中已纯化细菌,分别在麦康凯平板、营养琼脂上划线(2)用灭菌接种针取肉汤中已纯化细菌,分别在葡萄糖培养管、蔗糖培养管、乳糖培养管、甘醇培养管、靛基质培养管、硫化氢培养管进行穿刺(3)用灭菌接种针取肉汤中已纯化细菌,在三糖铁琼脂上进行划线并穿刺。

将所有生化培养管及培养皿,置37℃温箱培养246.观察生化实验结果。

往靛基质培养管滴加指示剂,观察变化,其它生化管直接进行观察。

(二)病毒的实验诊断1.实验前准备(1)心脏采血:触摸健康鸡左翼以下、胸骨以上、嗉囊靠左的位置,通过心跳感觉心脏位置,用碘酒、酒精棉球消毒,用无菌注射器插入,边插边回抽,当有血冲上针筒时,即抽取鸡血2~3ml,装入密封管中,用于血清得制备;用无菌注射器抽取1ml抗凝剂,并润湿注射器,用同样方法取鸡血9ml,并装入离心管中,用于鸡红细胞的制取。

(2)血细胞悬浮液:往无菌离心管注入2~3ml鸡血,再加入4ml生理盐水,摇匀,放入离心机以2000r/s离心10min,然后取出离心管并用无菌注射器吸去其上清液,重复4次。

用移液枪吸取1ml血细胞到100ml无菌玻璃瓶中,再加入99ml生理盐水,冷藏。

2.病毒病料的采集通过无菌手术,取病鸡的脾脏、肝脏、肺、脑的组织块,将其剪碎后,加入少量玻璃砂研磨,然后加入4ml生理盐水和双抗各0.01ml,用注射器将其注入离心管,以10000r/s进行离心10min。

3. 接种接种鸡胚,采用绒毛尿囊腔接种,通过照胚检测鸡胚死活,在气室边缘避开胚体和血管处作一记号,作为接种的部位,碘酒、酒精消毒,并用打孔器在此处打孔;用1ml注射器吸取病毒液0。

1ml,注射器沿小孔插入鸡胚约1。

5CM,注入病毒液以胶布封孔,置于37。

C 温箱中直立培养。

4.观察已接种鸡胚24小时后观察鸡胚未死亡。

5.处理已接种鸡胚接种48小时后观察鸡胚已死,将鸡胚置4。

C冷冻过夜。

6.收胚收获病毒液。

采用无菌手术去气室顶壳,开口直径为整个气室大小,用无菌镊子撕去部分蛋膜,撕破绒毛尿囊膜而不撕破羊膜,用镊子轻轻按住胚胎,用消毒注射器吸取尿囊液,置于西林瓶中,备用。

解剖胚胎。

7.血凝及血凝抑制试验采用1%红细胞,以及新城疫的血清和禽流感血清,按下表操作。

①血细胞凝集试验(HA)(单位:ūl)用轻微震荡器震荡1~2min,放入37℃箱中15~30min.判断1个单位血凝价,并配成4个单位病毒溶液.○2血细胞凝集抑制试验(HI)(单位:ūl)(三)ELISA1.实验前准备(1)给猪注射口蹄疫疫苗:使用不锈钢注射器,抽取适量的疫苗液与注射器中,根据需要的注射量,进行调整注射器上的戒指,以保证每次注射的量刚好而不过量。

注射过程可以不更换针头,因为注射之前要确保猪只没有患传染病或没发病。

有需要的可以每次都用酒精棉球消毒。

注射选择耳后的颈部或者臀部肌肉丰满处。

注射时等猪只安静并迅速走近并且同时推射,把药物注入体内。

(2)抽猪血:抽取血液时注射器不加入抗凝剂(因为抗凝剂是避免细胞受损,而分离血清需要破坏细胞),从猪的锁骨两侧锁骨窝45度角插入注射器,回抽有血时即可抽取。

2.分离血清3抗原的制备(1)病毒的增殖与收获,将适量FMDV接种于已长满单层BHK-21细胞的细胞培养瓶中,置于37度培养箱中至细胞完全发生病变后,反复冻融3次,收集病毒。

(2)病毒的纯化与浓缩:﹤1﹥将收集的病毒液与75度水浴中作用15min,期间摇动3-4次,以灭活病毒;﹤2﹥灭活的病毒液装入离心管,于1200rpm离心30min。

收集上清液;﹤3﹥将透析液置于生理盐水中煮沸5min,然后将纯化的病毒液装入透析袋,放入盛有聚乙二醇2000(PEG20000)的容器中,以吸附病毒液中液体,浓缩至透析袋中的液体体积为原液的1/2即可。

4 ELISA反应条件的优化(1)抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数的选择:将抗原以1:10,1:20,1:30……,1:1024横向包被酶标版,每个浓度包被8孔,封闭后,将阴性血清和阳性血清以1:10,1:20,1:40……,1:1024纵向加入酶标版,每孔加12孔,最后测定每孔的OD值,以p/N值最大时的抗原浓度为抗原的最佳包被浓度,以此时的血清的稀释倍数为血清的最佳稀释倍数。

(2)封闭液浓度的选择:用洗涤液配置分别为含0.1%,0.5%,1%BSA浓度封闭液,按照常规程序进行ELISA实验,以空白对照无色,且P/N值最大时的BSA浓度为最佳的封闭液浓度,结果为0.5%。

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