表面微生物监测
表面微生物监测
除了用空气微生物取样来监测生产环境的微生物污染水平外，表面监测也可监测生产区
域表面以及设备与产品接触表面的微生物世。监测的方法必须考虑取样的准确性和代表性。
基本的监测方法包括接触碟法、擦拭法以及表面冲洗法。每种提供的数据都可以用于产品质量的评价。测试方法可以定性和定量。而且取样的准确性受收集和处理样品的过程影响，因此必须对取样进行培训和测试。
(1)接触碟法
接触碟容易操作而且可以定量。因此被广泛使用，适用于对平整的规则性表面进行取样监测。通常的碟子是50mm直径的，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面积一般约为25cm2。培养基可以根据使用添加中和剂。取样时，确保全部琼脂表面与取样点表面充分接触。取样后，需用蘸有70%乙醇的纱布擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。将取样后并做好标记的接触碟置于培养箱中培养，读数，记录。
缺点：不适用于非常规表面；若培养基太湿润，菌落会连片生长导致不易计数。
(2)擦拭法
该方法通常用于对不规则表面（尤其是设备表面）进行取样。拭子通常为一根棒状物，其顶端由吸水性材料制成，拭子头在取样前应先行浸湿（通常为无菌生理氣化钠溶液或0. 1%的蛋白胨溶液约5ml),取样时，握住拭子柄，以30°角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积25cm2左右（可用特定的无菌模板确定擦拭面积），然后将取样头折断放入上述溶液内，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。如果拭子头的材料为藻酸钙，则要用稀的盐溶液作为稀释剂（如1%柠檬酸钠溶液），这样才能让拭子头完全溶解。因擦拭取样的面积一般约为25cm2，故擦拭法也属于定量检测方法。
缺点：取样和转移技术可能会影响结果；样品处理后才能培养。
(3)表面冲洗法
该法适用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。用定量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法来计算微生物数量。
缺点：适用性不广，需要额外的操作，取样和处理过程可能会影响结果。
D.人员卫生监测
人员是无菌生产中主要污染源。对于无菌药品的人员要求参见“4人员”。
人员卫生监测的方法与表面微生物监测方法中的接触碟法相同。
E.培养基及培养条件
环境监测用培养基的类型和培养条件取决于所选用的检测方法，但必须具有广谱性。通常，营养琼脂（NA)或大豆胰蛋白胨琼脂（TSA)培养基属于全能型培养基。此类培养基适用于多数环境微生物（包括真菌）的分离生长。但是，对专用于酵母菌分离生长的特定培养基，仍应另行选择，如玫瑰红钠琼脂、萨布罗（Sabourauds)
培养基等都是常用的真菌培养基。如果被监测环境中使用过消毒剂或存在抗生素，则要向表面监测用培养基中加一些添加剂（聚山梨酯80、卵磷脂、偶氮凝集素或(3-内酰胺酶等），以中和或尽量减少消毒剂或抗生素的抑菌作用。例如，在对非抗生素生产级区环境设施表面监测时，通常是在营养琼脂或大豆胰蛋白胨琼脂培养基内添加0.7%的聚山梨酯80和0. 1%的卵磷脂。
应对环境监测用微生物培养基进行验证，验证其在适当的时间和温度条件下检出真菌(包括酵母菌和霉菌）和细菌的能力。
用于环境监控的培养基，首先应检查其可靠地恢复微生物生长的能力。所有配好的培养基批号，均应进行培养基灵敏度试验，表14-4列出了环境监测用培养基灵敏度检查菌种。必要时，应使用中和剂，防止洁净室消毒剂或产品残留（如抗生素）抑制微生物生长。培养基灵敏度检查试验中，可加人环境监测中分离的菌株进行试验，接种量应不超过100个菌。培养基相关的其他内容，参见“15.6培养基”。
一旦选定培养基，需确定培养温度和培养时间。通常，需氧菌应在30培养48 ~72小时。酵母菌和霉菌数通常在20-ZSt,培养5~7天。
F.监测方法的确认
方法确认的手段包括以下几种。
?进行回顾性验证/确认，即回顾环境监测的历史数据，并对这些监测数据的重现性予以评价。
參进行挑战性试验，证明监测方法的回收率。该法应用广泛，也可作为回顾性验证/确认的支持性资料。
?进行监测后取样点的清洁消毒效力测试。
对接触碟法和擦拭法，有时同样需进行方法确认。方法是，将从环境中分离到得代表性微生物，接种于无菌的试验表面，接种量不超过100CFU，然后按常规方法
进行取样及处理，计算回收率。用于接种的试验表面通常为方形或圆形薄片，材料多为塑料、玻璃和不锈钢类，以尽可能模拟实际监测时的环境设施表面。通常可以
采S引用相关文献或技术报告的方法来证明该取样方法的适用性。
在方法确认阶段，应对培养基、培养时间和培养温度等进行评估，以确定适于环境中代表性微生物的最佳培养条件。同时，应确定适用于真菌、厌氧微生物或特定的控制性微生物（指可能严重影响环境的微生物）的选择性培养基。一旦培养基供应商、接触碟、拭子或监测方法发生变更，则需重新确认。如果决定变更取样方法，
变更前必须进行相应的验证/确认性试验，以保证新方法等效或优于现行方法。
14.3.2取样计划
【背景介绍】
环境监测的取样计划在各生产企业各不相同，这取决于一些影响因素，包括但不局限于产品的类型、生产过程、设施/工艺的设计、生产密度、人为干扰、环境监测历史数据等。没有一个单独的取样方案适用于所有的监测。环境监测的频率及取样fi,最好能及时发现所有人为干预、偶发事件及任何系统的损坏。由无菌工艺生产的无菌产品与最终灭菌处理的无菌产品相比，前者的环境监测尤为重要。取样计划应随着取样频率的变化而变化，根据趋势分析对取样点数量做出相应的调整，既可增加，也可减少。
【技术要求】
根据生产环境对产品污染风险的高低，确定取样计划。例如，对无菌工艺产品的A级区取样频率可设为每批一次；I)级区的非关键辅助区取样频率可设为每季度一次。
【实例分析】
14.3.4取样点及取样量的设置【背景介绍】
取样位点的选择很大程度上取决于洁净室的设计和生产过程。在选择取样点时，应对每个程序仔细认真地加以评估。取样的主要的目的是提供有价值并可用于判断的数据，以便鉴别/识别特定程序、设备、材料和工艺相关的实际或潜在的污染。取样应设在如果取样点受到污染，则产品很可能受到污染的那些位置，然而，必须谨慎地确定取样点的位置，靠近产品但不要接触产品。
【实施指导】
常规监测取样位点应考虑如下因素：
?在哪些部位的微生物污染，最可能对产品质量造成不良影响？
?在生产过程中，什么地点最容易长菌？
?取样点的选择需要统计学设计（例如，按照美国标准209E来计算）还是根据网格法来确定？在常规监测中，有一些点需要周转取样吗？
?哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难奏效的部位？
?什么活动会导致污染的扩散？
參在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品吗？取样只应在生产结束或换班时进行吗？
为了建立常规的取样位点，必须考虑产品与其接触或暴露的环境的程度。对反映产品的微生物污染水平有代表性的取样点必须取样和进行环境监测。与产品接触的来源可能包括压缩气体，房间空气，生产设备，工具，关键表面，储存容器，传送带，手套，人员以及水。不与产品直接接触的来源可能包括：墙，地，天花板，门，长発，椅子，测试仪器和缓冲间。
但是，最关键点的位置作为取样点并不一定适用。必须考虑环境监测是否实际上会加大产品污染风险的概率。此外，如果在生产过程中污染的概率很低，就不必要对关键点取样（例如，不再需要手工操作的已灭菌部件）。
确立一个合适的取样点需要考虑很多因素，比如厂方设施，生产线的设定，验证数据，生产过程，历史数据，测试方法等。
洁净区（室）监测中的取样点和取样量可以比洁净级别确认时的取样点和取样量少，应该通过正式的风险分析研究和对监测结果的分析（至少要有6个月以上的运行数据作为分析基础），来确定监测频次和限度。同时，监测频次和限度的确定也要考虑到生产工艺因素，监测限度及取样点应该定期进行回顾验证，以保证监测行为的有效性。
国标GB/T 16292—2010、GB/T 16293—2010 和GB/T 16294—2010 医药工业洁净室(区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法中规定了最少采样点的数目。最少采样点数目可在以下两种方法中任选一种。
(1)利用公式计算
N,=A°'S
——最少采样点数(四舍五人为整数）；
-4——洁净室或洁净区的面积，m2。
注：在单向流悄况下.面积/!可以认为fi垂直于气流方向上的横截面面积。
(2)最少采样点数可从表14-6查到。
环境取样在遵循最低取样点数的同时，还须执行以下规则。
A.空气悬浮粒子
參任何洁净区内取样点应不少于两个；
?除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置；
?在一个区域内应最少取样五次，每个取样点的取样次数可多于一次，不同取样点的取样次数可以不同；为了确定A级区的级别，每个采样点的采样量不得少于丨m3。
參取样点一般布置在距离地面0. 8 ~ 1. 5m之间或操作平台的高度；
參尽量避免在回风口附近取样，而且测试人员应站在取样口的下风侧。
B.空气浮游菌
參除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。
?在日常监控时，那些与产品相邻近的区域，以及可能与产品直接接触的空气及设备附近均应考虑增加取样点和取样次数（与产品非接触区相比，这些区域应视为关键区h人员活动频繁或人员较集中的区域也应被视为关键区，需加强监控。
參取样点一般布置在距离地面0. 8 ~ 1. 5m之间或操作平台的高度。
?取样时，取样设备会对气流产生干扰，因此，动态测试空气浮游菌取样时应避免可能对气流组织的干扰。
參应根据被测区域的浮游菌控制限度和取样方式确定取样量，每个点一般采样一次。
?尽量避免在回风口附近取样（距离lm以上），且测试人员应站在取样口的下风侧，并尽量少走动。
C.沉降菌测试
?取样点的分布及其取样位置与空气浮游菌监测相同；日常监控可以根据风险分析结果，沉降菌与浮游菌交替或混合取样。
參沉降时间至少为半小时，但不得超过4小时。
D.表面微生物测试
表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：
參洁净区（室）的大小；
?设备、管路等的复杂程度；
參生产活动的重要性；
參易受污染的部位等。
应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介质的管路（不易被清洁/消毒部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。
根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微生物限度要求。
表面微生物的每点取样面积宜控制在25cm2左右。
为避免干扰，宜在生产活动结束后取样。
E.人员监测
參对无菌生产工艺的无菌生产区，例如A/B级区的每位工作人员进行每班测试, 甚至要对每次更衣进行监测。
?取样部位应包括手套、操作服的易遭污染部位，有时（人员更衣确认时）还应包括头罩、口罩和脚套等。
?手套和操作服表面的微生物监测是人员卫生监测的关键。手套取样时应包括双手的手指和手掌，操作服表面取样主要是前臂的袖管部位、肩前下部等，鞋套的取样部位宜在套筒的上侧面（此部位在穿戴时易被污染）。
?人员卫生监测时每点取样面积宜控制在25cm2左右。
參为避免干扰，宜在生产活动结束时取样（人员离开无菌生产区时取样）。
病原微生物快速检测箱
病原微生物快速检测箱 内置 单元 配置物品数量主要技术规格配置依据 快速检测试剂单元炭疽抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录炭疽抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录鼠疫抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录鼠疫抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录土拉热抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录土拉热抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录布鲁氏菌抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录布鲁氏菌抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录鼻疽抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录鼻疽抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录类鼻疽抗体快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录类鼻疽抗原快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录A型肉毒毒素快速检测试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录B型金球肠毒素快检试剂1包注册证书，10人份卫生装备参考目录 现场采样设备单元一次性注射器10支5ml 卫生装备参考目录采血管10支5ml非抗凝卫生装备参考目录一次性采血针10支7# 卫生装备参考目录脑脊液管50个2ml 卫生装备参考目录碘药水棒1盒0.5%有效碘卫生装备参考目录医用棉签1包略卫生装备参考目录酒精棉球1盒医用，独立包装卫生装备参考目录止血带1根医用卫生装备参考目录医用乳胶手套2副医用，一次性，独立包装卫生装备参考目录医用防护口罩4个N95口罩卫生装备参考目录 现场采样辅助用品单元医用垃圾袋2个一次性，防护生物污染卫生装备参考目录剪刀1把12.5cm直尖卫生装备参考目录敷料镊1个12.5cm 卫生装备参考目录记号笔1支略卫生装备参考目录签字笔1支略卫生装备参考目录
(完整版)环境监测期末复习总结-奚旦立第四版.doc
第一章绪论 环境监测的过程（不同角度）（ P1） 现场调查→监测方案制订→优化布点→样品采集→运送保存→分析测试→数据处理→综合 评价 从信息技术的角度看，环境监测是环境信息的捕获、传递解析、综合的过程。 环境监测的对象（P1） 反应环境质量变化的各种自然因素、对人类活动与环境有影响的各种人为因素、 对环境造成污染危害的各种成分。 环境监测的特点（P5） 1综合性：表现在手段、对象、数据统计及分析 2连续性 3追溯性 环境优先污染物（概念）（ P8） 1、经过优先选择（对众多有毒污染物进行分级排序，从中筛选出潜在危害性大、在环境中 出现频率高的污染物作为监测和控制的对象）的污染物成为环境优先污染物，简称优先污染物（ priority pollutants ）。对优先污染物进行的监测称为优先监测。 2、优先污染物的特点：难以降解，在环境中有一定残留水平，出现频率较高，具有生物积累 性，具有致癌、致畸、致突变（“三致”）性质、毒性较大，以及目前已有检测方法的一类物 质。 第二章水和废水监测 水体污染分类（P34） 化学型污染：指随废水及其他废物排入水体的无机和有机污染物质造成的水体污染。 物理型污染：排入水体的有色物质、悬浮物、放射性物质及高于常温的物质造成的污染。 生物型污染：生活污水、医院污水等排入水体的病原物质造成的污染。 水质监测方案（地面水、水污染源）（ P41-47） 监测断面和采样点的设置（河流断面布设、监测垂线布设、采样点位确定） 应在水质、水量发生变化及水体不同用途的功能区处设置监测断面 （1）大量废水排入河流的居民区、工业区上下游； （2）湖泊、水库的主要出入口； （3）饮用水源区、水资源区域等功能区； （4）入海河流的河口处、较大支流汇合口上游和汇合后与干流混合处； （5）国际河流出入国际线的出入口处； （6）尽可能与水文测量断面重合 河流监测断面的布设 为评价完整江、河水系的水质，需要设置背景断面、对照断面、控制断面和削减断面；对于 某一河段，只需设置对照、控制和削减（或过境）三种断面。 （1）背景断面：设在基本上未受人类活动影响的河段，用于评价一个完整水系污染程度。 （2）对照断面：为了解流入监测河段前的水体水质状况而设置。这种断面应设在河流进入 城市或工业区以前的地方，避开各种废（污）水流入处和回流处。一个河段一般只设一个对 照断面。有主要支流时可酌情增加。 （3）控制断面：为评价监测河段两岸污染源对水体水质影响而设置。控制断面的数目应根据 城市的工业布局和排污口分布情况而定，设在排污区（口）下游，废（污）水与江、河水
大学校园空气微生物污染调查
大学校园空气微生物污染调查 了解校园四季空气中微生物含量变化趋势与污染情况。方法采用撞击式采样器，在人员负荷最重、活动最频繁时，对某大学校园空气中细菌粒子和霉菌粒子含量进行检测。结果校园空气微生物含量在季节间有很大不同，细菌含量在夏季最高，霉菌含量高峰在夏秋两季。细菌浓度比较高的功能区有道路、寝室、食堂、超市、体育馆、微机室和教室。可吸入霉菌粒子占霉菌粒子总数的比例高于细菌粒子。结论校园空气微生物含量在多种因素的综合影响下，季节间和不同功能区之间均表现出明显的差异，存在一过性污染情况。 空气中的微生物往往吸附在颗粒物上形成生物粒子，随风飘荡，其中小粒径的生物粒子在疾病传播方面具有更大意义。研究表明，空气中微生物数量的多少与环境、清洁卫生状况、人员密度和活动情况、空气流通程度等因素有关[1，2]。高校校园是师生集中生活和学习的地方，普遍存在空气微生物污染问题[3，4]。加强对高校校园空气微生物的监测，对于了解校园卫生状况，加强环境卫生管理有着非常重要的参考意义。采用空气中生物粒子数(菌落总数，cfu)这一指示微生物指标对校园主要功能区空气质量进行生物学评价。 1.材料与方法 1.1 校园概况沈阳市内某高校，2001年新迁校址，主要建筑物距离城市南北向主干道约150～1000m。 1.2采样为全面反映校园内师生主要活动区域空气微生物状况，按功能不同将校园分成12个不同的功能区，即操场、道路、绿地、食堂、宿舍、教室、图书馆、微机室、实验室、超市、体育馆和办公室。参照《公共场所卫生监测技术规范》(GB/T 17220-1998)，共设采样点126个。于2008-12，2009-03、2009-06、2009-09采样，分别代表冬、春、夏和秋四季，在各功能区人员负荷最重、活动最频繁时采样。参照《公共场所空气微生物检验方法》(GB/T18204.1-2000)，采用撞击式采样。JWL-2型采样器有上、下两级，上级收集粒径 及以上的微生物粒子，下面级收集以下粒径的可吸入微生物粒子。采样高度为1.2～1.5m，采样时间1min，采样流量28.3L/min。细菌在37℃培养48h，霉菌在26℃培养72h 后，分别计数两级采样皿中的细菌菌落数和霉菌菌落数(cfu)，也即捕获在采样皿中的空气细菌粒子数和霉菌粒子数。全年共采样2016份。 1.3培养基营养琼脂培养基和高盐查氏培养基购自北京奥博星生物技术有限责任公司。按使用说明配置、灭菌。使用Φ9cm平皿，每平皿倾注20ml培养基，冷却备用。 1.4主要仪器JWL-2 两级筛孔型撞击式空气微生物采样器，北京检测仪器有限公司；DXC-280B型不锈钢手提式灭菌器，上海申安医疗器械厂；YLN-30A菌落计数器，北京市亚力恩机电技术研究所；SHP-250型生化培养箱和MJP-250型霉菌培养箱，上海精宏实验设备有限公司；DB-4A控温电热板，金坛市天竟实验仪器厂，环境温度在零度以下采样时使用。 1.5 统计分析菌落计数后，按照公式n=N×1000/(Q×t)计算受检空气中微生物含量。式中：N—平皿菌落计数，个；Q—空气流量，L/min；t—采样时间，min。 1.6质量评价我国《室内空气质量标准》(GB/T18883-2002)规定，室内细菌菌落总数≤2500cfu/m3为合格。 2.结果 2.1空气中细菌粒子浓度及其变化趋势结果见表1，图1。 由表2可见，同样在冬季，室外空气中霉菌粒子含量明显低于其它三个季节，而在室内
环境监测期末考试题目与答案
环境监测期末考试题目 与答案 文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
《环境监测》试卷（答案）（时间 100分钟） 班级姓名学号成绩
9、监测大气中的氮氧化物时，可用三氧化二铬将一氧化氮氧化成二氧化氮后测定。 表示有50%的时间超过的噪声值，它表示测定10、噪声监测数据统计结果中的L 50 结果的噪声平均值。 六、简答题：（共40分） 1、如何分别测定烟气中的正压、负压和全压，请画图说明。（7分） （根据绘图的完整性给分，全压、静压和动压、正压、负压画错一个扣分） 2、请简述BOD、COD、TOD、TOC之间的关系，如何根据其关系确定有机物的类型。（8分） BOD
P>M 时，P>T/2，水样中NaOH 和CO 32-;（2分） P=M 时，水样中只含有CO 32- ；（2分） P 环境监测微生物知识培训试题 一、填空题（共20空，每空3分） 1.环境监测微生物测试主要包括的项目有沉降菌、浮游菌、表面微生物、人员微生物。其中 沉降菌测试的时间一般为4h。 2.对于洁净区表面微生物取样,对于规则表面通常使用RODAC双碟进行测试,对于不规则表面 一般使用擦拭取样法。 3.静态状态下进行的环境监测，除监测操作人员（不得超过2人），无其他操作人员活动。 4.酵母菌和霉菌的监测为1年4次，一般在1、4、7、10月采用沙堡氏培养基加测。 5.所用的每一批号的培养基，应选取3只进行阴性对照，以检验此批号培养基无菌是否良好。 6.应在A级关键操作的同时，对A级背景区域进行微生物项目的监测。 7.807车间的N1070/06房间及809车间的T128、T149、T207、T239房间，如某一品种在该 区域生产时需要进行A级操作，则该房间按相连B级频率测试；如该房间没有A级操作过程，则按不相连B级频率测试。 8.无菌双碟在洁净区使用时，应在双碟表面标明测试区域、测试位点、测试日期、产品批号 （限有产品的A级区域），避免混淆。用于写标识的笔应为不易擦除的无尘记号笔。 9.沉降菌测试时，在准备好的双碟底部写好编号后放置在各取样点，将培养皿大盖全部打开， 并扣在不产尘的灭菌纸或PE膜上。 10.沉降菌测试过程中，如双碟被不慎触碰，A级双碟继续监测；其他级别的双碟结束测试 并重新放置双碟继续监测，结束后结果按累加计数。 11.浮游菌测试测试位置一般距地面0.8-1.5m左右，A级区域仪器放在工作台面上。 二、问答题（共2题，每题20分） 1.简述培养基双碟递入递出流程。 1.培养基由车间物流通道进入。 2.在D级递物柜间黄线外去掉纸箱或转运筐。 3.打开物流递物柜房间递物柜紫外灯，空照30分钟后，递入培养基双碟。 4.用紫外灯照射60分钟后方可递入C级区。5操作人员在C级区对双碟进行表面清洁，去掉最外层塑料袋包装，递入B级区递物柜内，用紫外灯照射60分钟后递入B级区存放。 6.A级隔离器内使用的双碟，在隔离器前灭菌去掉第二层包装，带单层塑料袋包装递入灭菌。 7.监测完毕，将培养基用双层聚乙烯包装袋热封好，递出无菌室。 2.简述使用R ODAC双碟进行表面微生物测试的步骤。 取R ODAC双碟倒置，打开培养皿盖，用适当压力(保证双碟表面与被测表面完全接触)使R ODAC双碟培养基表面接触被测部位，接触面积为25cm2，盖上培养皿盖，倒置。取样完毕，用蘸有75%乙醇的丝光毛巾擦取样部位三遍，以杜绝培养基或其他擦拭液的残留。 微生物取样方法、微生物检测标准 举例一： 一、空气采样及检验方法 1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制 2采样（空气沉降法） 2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。 2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。 2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。 3培养：于37℃培养24小时。 4检测频率：每周 空气质量标准： 生车间、熟车间、成品车间：低于100个 半成品库、成品库：低于10个 二、设备的采样与检验方法 根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。 1采样方法 1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面） 取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面） 将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 2检验方法 2.1细菌总数的检验 将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。 结果计算 表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 2.2致病菌的检验 沙门氏菌，参照GB4789.4进行 金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行 4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2， 5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2 一般区域：细菌总数≤100个∕cm2 三、人员手表面细菌污染情况的检验 病原微生物检测新方法 检测高致病性病原微生物样本时存在前处理困难，步骤多、时间长、重复性与可扩展性差、需要高温灭活等问题，所以在临床实验室难以实现标准化。自动聚焦声学技术是在传统超声波处理基础上的技术革新，聚焦声波能够以极低的能量输入获得良好的样本处理结果，避免传统超声能量过剩可能引起的样本处理过度及热损伤。 AFA技术在DNA剪切中的准确稳定的表现使其在NGS领域备受推崇。其实该技术在微量珍贵以及难处理的医学样本制备中也有不俗的表现，可有效提高生物大分子得率，获得足够且高质量的核酸样本用于下游分析。这是现有条件下提高检测灵敏度的有效手段，可减低可疑或者假阴性结果。 有数据表明：对于珍贵/微量及难处理的样本，基于AFA聚焦超声技术的生物大分子制备方案，其优势不仅仅表现在得率，纯度，完整性等表面价值，更重要的是提升了下游数据价值：1.qPCR 扩增效率提高；2医学样本如痰液中病毒核酸有效释放；3宏基因组样本有效破碎以便下游检出更多革兰氏阳性菌；4 文库复杂度提升，基因密集区以及GC富含区测序深度提升；5融合基因检出提升等。 呼吸道合胞病毒（Human Respiratory Syncytial Virus, RSV）是一种RNA病毒，可导致发热、鼻炎、咽炎及上呼吸道感染等症状。在老年人患者中，病毒载量较低，为了保证检测的准确性，需要灵敏度更高的检测方法如RT-PCR法。 在呼吸道合胞病毒的鉴定案例中，比较了聚焦超声技术(AFA)处理痰液结合MNAzyme探针法与Glass beads研磨方法处理痰液结合探针法对RSV病毒提取及扩增效率的影响。 结果显示，与Glass beads方法相比，经Covaris AFA超声法处理后提取的核酸样本，检测到的Ct值明显减小(变化范围1.0 - 4.0 log)，即经Covaris AFA 超声法处理的样本提取的病毒RNA得率更高。尤其是在7号样品中，使用Glass beads方法处理的样本，检测RSV-B呈阴性，而Covaris方法处理的样本检测结果为阳性。 在这个案例中，Covaris AFA超声法处理痰液的时间仅为30秒。这是因为聚焦超声技术的声波频率（500kHz）远远高于普通水浴超声，集中的能量可以 一 名词解释 1 精密度: 精密度是指用一特定的分析程序在受控条件下重复分析均一样品所得测定值的一致程度，它反映分析方法或测量系统所存在随机误差的大小。 2 空白试验:又叫空白测量，是指用蒸馏水代替样品的测量。其所加试剂和操作步骤与实验测量完全相同。 3 静态配气法：是把一定量的气态或蒸汽态的原料气加入已知容积的容器中，再充入稀释气，混匀制得。 4 生物监测：①利用生物个体、种群或群落对环境污染或变化所产生的反应进行定期、定点分析与测定以阐明环境污染状况的环境监测方法。 ②受到污染的生物，在生态生理和生化指标、污染物在体内的行为等方面会发生变化，出现不同的症状和反应，利用这些变化来反映和度量环境污染程度的方法称为生物监测法P296 5 空气污染指数(Air pollution Index ，简称API)是指空气中污染物的质量浓度依据适当的分级质量浓度限值进行等标化，计算得到简单的量纲为一的指数，可以直观、简明、定量地描述和比较环境污染的程度。 6 分贝：是指两个相同的物理量（如A 和A 0）之比取以10为底的对数并乘以10（或20）：N=10lg 0 A A 。分贝符号为“d B ”，它的量纲为一，在噪声测量中是很重要的参量。 7 生化需氧量BOD ：指在有溶解氧的条件下，好氧微生物在分解水中有机物的生物化学氧化过程中所消耗的溶解氧量。 8 化学需氧量COD ：指在一定条件下，氧化1L 水样中还原性物质所消耗的氧化剂的量。以氧的质量浓度（以mg/L 为单位）表示。 9 优先污染物：对众多有毒污染进行分级排队，从中筛选出潜在危害性大，在环境中出现频率高的污染物作为监测和控制对象。这一过程是数学上的优先过程，经过优先选择的污染物称优先污染物（Priority Pollutants ）。 10 简易监测：是环境监测中非常重要的部分，其特点是：用比较简单的仪器或方法，便于在现场或野地进行检测，具有快速、简便的特点，往往不需要专业技术人员即可完成，价格低廉。 11 土壤背景值：又称土壤本底值，是指在未受人类社会行为干扰（污染）和破坏时，土壤成分的组成和各组分（元素）的含量。 12遥感监测：是应用探测仪器对远处目标物或现象进行观测，把目标物或现象的电磁波特性记录下来，通过识别、分析，揭示某些特性及其变化，是一种不直接接触目标物或现象的高度自动化检测手段。 13 突发事件：是指一定区域内突然发生的、规模较大且对社会产生广泛负面影响，对生命和财产构成严重威胁的事件和灾害。或是指在组织或者个人原计划或者认识范围以外突然发生的、对其利益具有损伤性或潜在危害的一切事件。 14 环炉检测技术：是将样品滴于圆形滤纸的中央，以适当的溶剂冲洗滤纸中央的微量样品，借助于滤纸的毛细管效应，利用冲洗过程中可能发生的沉淀、萃取或离子交换等作用，将样品中的待测组分选择性地洗出，并通过环炉加热而浓集在外圈，然后用适当的显色剂进行显色，从而达到分离和测定的目的。 15 质量控制图：实验室内质量控制图是监测常规分析过程中可能出现的误差，控制分析数据在一定的精密度范围内，保证常规分析数据质量的有效方法。 空气中微生物检测 空气中微生物的检测 1。实验目的 本实验中使用的灭菌培养皿在空气中取样并培养一段时间以测定空气中的微生物。其实验意义在于: (1)了解空气中微生物的分布 (2)比较了普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和类型 (3)验证微生物实验中无菌操作的重要性二。实验原理 空气是人类维持正常活动的物质条件，与人类健康有着非常密切的关系。随着社会进入信息时代，空气微生物的采样和检测也得到了迅速发展。已经开发了各种快速、灵敏、特异和高度自动化的仪器。为了保持高质量的空气环境，应该使用正确和先进的空气监测方法。在我们周围环境中有大量的微生物空气也不例外。尽管空气不是微生物的良好栖息地然而，由于气流、灰尘和水滴的流动、人类和动物活动等原因，仍然存在相当数量的微生物。 中空气微生物的采集方法很多，主要采用空气微生物采样器采样监测，自然沉降采样法采样。本文介绍了各种采样方法的性能，以便正确选择各种采样方法。空气微生物采样主要涉及四个方面:采样器、采样介质、采样方法和检测程度。空气微生物采样器主要包括:冲击采样器、过滤空气采样器、离心空气采样器、旋风采样器、静电沉降采样器等 当空气中的单个微生物落在适合其生长和繁殖的固体培养基表面 时，在适当温度下培养一段时间后，每个分散的菌体或孢子将形成一个肉眼可见的细胞群体或菌落。通过观察不同大小和形状的菌落，可以大致识别空气中存在的微生物类型。本实验通过检测普通实验室和无菌间空气中存在的微生物，来判断无菌间的消毒效果，了解空气中常见的微生物群。三。实验装置和仪器 1。实验仪器 (1)无菌板，组数(2)酒精灯，恒温箱数×1 (3)，数量×2 (4)高压釜(5)干热灭菌器(6)冰箱 (7)板(直径9厘米)(8)量筒(9)烧瓶(10)酸度计2。实验所需试剂 (1)蛋白胨，量10g (2)牛肉膏，量3g (3)氯化钠5g (4)琼脂15-20g (5)蒸馏水1000毫升 4，实验步骤 1。琼脂培养基制备方法:将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂和蒸馏水混合，加热溶解 ，调至7.4，过滤分装，高压灭菌121℃和20min，用自然沉降法测定时，将约15mL倒入灭菌板中，制成营养琼脂板2.倒置板:培养基按常规方法制备，分成三角瓶，高压灭菌备用使用 前，将培养基融化，冷却至50℃左右，倒入几个盘子备用。 3。检测:首先打开无菌室内的紫外线灯，照射15分钟后关闭。打开上面浓缩了 的无菌平板的皿盖，将皿盖暴露在无菌室空间和普通实验室空间中，分别不移动5min和30min后盖上皿盖每个培养基的平板要求在每个 环境监测考试题库 一、判断题（共50题） 1、环境监测人员合格证考核由基本理论、基本操作技能和实际样品分析三部分组成。（√） 2、空白试验是指除用纯水代替样品外，其它所加试剂和操作步骤，均与样品测定完全相同的操作过程，空白试验应与样品测定分开进行。（×） 3、配制溶液时为了安全，水要缓慢地加入浓酸或浓碱中，并不断搅拌，待溶液温度冷却到室温后，才能稀释到规定的体积。（×） 4、工业废水样品应在企业的车间排放口采样。（×） 5、测定PH值的样品可放置数天后进行测定，对其测定值无任何影响。（×） 6、甲醛法测定大气中SO2时，当显色温度在20℃±2℃，比色皿为lcm时，要求试剂空白 液不应超过0.03吸光度。( ×) 7、二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法测砷时，所用锌粒的规格不需严格控制。（×） 8、对含悬浮物的水样应分别单独定容采样，并全部用于测定。（√） 9、风罩用于减少风致噪声的影响和保护传声器，故户外测量时传声器应加戴风罩。（√） 10、在K2Cr2O7法测定COD的回流过程中，若溶液颜色变绿，说明水样的COD适中，可继续进行实验。（×）11、水样采集后，立即经0.45μm滤膜过滤,其滤液消解供可溶性正磷酸盐的测定。（√） 12、在冬天气温较低，一般采集的较清洁地面水的溶解氧，往往是过饱和的，这时无须处理就可立即进行BOD5测定。 （×） 13、如果水样中不存在干扰物时，测定挥发性酚的预蒸馏操作可以省略。(×) 14、测定挥发酚的NH3-NH4Cl缓冲液的pH值不在10.0±0.2范围内，可用HCl或NaOH调节。(×) 15、测定溶解氧的水样，应带回实验室再固定。（×） 16、一类污染物应在企业的车间排放口采样。(√) 17、pH标准溶液在冷暗处可长期保存。(×) 18、总不可过滤固体物质通常在100℃度下烘干。两次称重相差不超过0.005g。(×) 19、测定水中悬浮物，通常采用滤膜的孔径为0.45μm。(√) 20、水样为淡粉色时，可使用铂钴比色法测定色度。(×) 21、测定水样浊度超过100度时，可酌情少取，用水稀释到50.0ml，用分光光度法测定。(√) 22、硫酸肼有毒、致癌!使用时应注意。(√) 23、测定水中砷时，在加酸消解破坏有机物的过程中，溶液如变黑产生正干扰。(×) 24、二乙氨基二硫代甲酸银分光光度法测定水中砷时，锌粒的规格对测定无影响。(×) 25、六价铬与二苯碳酰二肼反应时，硫酸浓度一般控制在0.05～0.3mol/L(1/2H2S04)，酸度高时，显色快，但不稳定。(√) 26、测汞水样既可在酸性介质中进行，也可在碱性介质中进行。( ×) 27、EDTA具有广泛的络合性能，几乎能与所有的金属离子形成络合物，其组成比几乎均为l:1的螯合物。(√) 28、在pHl0的溶液中，铬黑T长期置入其内，可被徐徐氧化，所以在加入铬黑T后要立即进行滴定。(√) 一、空气中微生物的检测 一、实验目的 1了解空气中微生物的分布状况，学习空气采样方法 2掌握空气中微生物的检测方法 二实验原理 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病原微生物。 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中，形成“气溶胶”，借风力传播。 空气中的微生物中，真菌的孢子数量最多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中。 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。 病原菌在空气中一般很易死亡，但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一段时间。 尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中，微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中，微生物较少。 在本次实验中测量空气中微生物含量，主要是利用空气的自然沉降法，也有其它方法，如撞击法，过滤法等。 三实验器材 电炉，培养基，培养箱，无菌台 四实验步骤 倍默产品 MAT-100空气微生物监测系统 MAT-100空气微生物监测系统集多项优点于一身，“多点”、“远程”、“在线”监测空气浮游菌的首选！ 产品特点： ★仪器适用于多种环境中的空气微生物采样，一机可同时满足单点或多点监测，远程监测，无需再增加任何装置和辅助设备，经济节约； ★仪器具有变频调节流量功能，具有高、中及低三种监测流量模式，可任意选择切换； ★采样器上491个精密筛孔均匀分布，最大限度的捕获微生物，并减少菌落重叠的风险；而检测过程中，无需将检测空气引出至外部环境，不会造成二次污染；★仪器具有流量校准功能； ★仪器具有故障自我诊断与报警提示功能； ★每一采样器具有唯一编码，监测信息可追溯，可进行位置编号、过程记录、查询及打印功能； ★采样器部分采用316L不锈钢制造，体积小巧，可任意放置于采样位置，不占用空间； ★灭菌：带有原位灭菌功能，采样头部分可进行在线灭菌；采样筛孔盖也可采用湿热灭菌； ★引入隔离装置内采用密封连接器； ★单手快速连接及开启筛孔盖及放置培养皿，方便操作； ★时间实时显示，并实时记录采样参数，包括开始时间、结束时间，采样流量，并具有预约时间取样功能； ★采样数据存储、查询和打印功能； ★采用90mm直径标准培养皿，易购、低使用成本； ★提供完整的IQ、OQ验证文件，符合GMP要求。 技术参数： 1.电源：220V，50Hz 2.基本尺寸 主机：330mm（L）×220mm（W）×150mm（H） 采样器：105mm（Φ）×150 mm（H） 3.重量：采样单元约2kg 主机约1.5kg 4.适应介质温度：0℃～40℃ 5.检测流量低流量：28.3L/min 中流量：50L/min 高流量：100L/min 6.采样时间设定范围：1~120min 7.预约时间设定范围：0~120 min 8.流量精度：±5% 9.控制线长度（L）：3m，特殊长度可订制 10.采样点：每台主机可连接1~4个采样器，可分别或同时监测1~4个位置； 11.显示：7英寸触摸式彩色显示屏 12.报警方式：蜂鸣器鸣叫提示 13.培养皿规格：Ф90mm标准培养皿 14.存储数据：100组/每个采样点 15.打印：热敏式打印 16.连接方式：主机与采样器连接采用REMO连接器 REMO连接器可用于隔离器（Isolator），手套箱和密闭式屏障系统（C-RABS）密闭空间的连接。 病原微生物的检测方法研究进展 摘要：本文章主要对病原微生物的检测方法研究进展进行综述，具体介绍食品、环境方面的病原微生物的检测方法研究进展。以及本人对病原微生物检测方法发展的一些看法及体会。 关键词：病原微生物检测方法PCR技术食品检测 Abstract: This article mainly summarized research progress on detection methods of pathogenic microorganism，Specific introduction food, environment research progress of methods used for the detection of pathogenic microorganisms. And I have some views on the development of pathogenic microorganism detection method and experience Key words: Pathogenic microorganisms Detection method PCR technology Food testing 病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。 病原体中，以细菌和病毒的危害性最大。病原微生物指朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒。本文主要介绍的是在食品、环境、医药方面病原微生物检测方法的应用及研究，目的在于了解病原微生物的检测方法及其研究进展，增加生物学科普知识。 1病原微生物概述 1.1 病原微生物概念 病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。 病原体中，以细菌和病毒的危害性最大。病原微生物指朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒。 《环境监测》课程 A 卷 专业班级：命题教师：审题教师： 学生姓名：学号：考试成绩： 一、名词解释（每小题 2.5 分，共20分）得分：分 １．环境监测 ２．环境优先污染物 ３．酸度 ４．高锰酸盐指数（CODM）n ５．二次污染物 ６．环境标准 ７．生物监测 8 . 土壤背景值 二、填空题（每空0.5 分，共10分）得分：分 1、环境监测的特点： _____ 、______ 、_____ 。1、综合性、连续性、追溯性 2、为评价完整江、河水系的水质，需要设置 ____ 背景断面、对照断面、控制断面和削减断面 __ 、______ 、_____ 、______ 。 3、3、选择水质监测的分析方法的原则：__①灵敏度和准确度能满足测定要求； ②方法成熟；③抗干扰能力好；④操作简便。 ___ 、_____ 、______ 、_____ 。 第1页共10 页 4、化学需氧量测定中，加入硫酸-硫酸银的作用是：_控制溶液反应处于酸性条件下，催化氧化还原反应快速进行________ 、______ 。 5、LD50表示___ ，TLm表示______ 。LD50表示半数致死量，TLm表示半数存活浓度 6、氨氮测定时，加入酒石酸钾钠的作用是__消除钙镁等金属离子的干扰 7、生物监测的步骤包括1、样品的采集和制备 2 、生物样品的预处理：消解和灰化，提取、分离和浓缩 3 、污染物的测定 8、大气采样时要求相对高度是__ 1.5m 。 三、判断题（每小题 1 分，共10 分）得分：分 1、BOD和COD都可表示水中的有机物的多少，但COD 实验三环境微生物的检测 一、实验目的 1.了解周围环境中微生物的分布情况。 2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性。 3.了解四大类微生物的菌落特征。 二、实验原理 在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物。土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物。由于它们体积微小，人们用肉眼无法观察到它们个体的存在。但是只要稍加留意，我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体。这些现象表明，自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件，微生物就可以在其上生长繁殖。据此，我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物。 培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料。其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分。此外，根据不同的微生物的要求，在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH。配制好的培养基必须进行灭菌。所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素，使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施。经过灭菌后的物体是无菌的。消毒是与灭菌完全不同的概念，它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施。 灭菌的方法较多，广泛使用的是高温灭菌，其中最常用的是高压蒸汽灭菌法。此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。在1.05kg/cm2的蒸汽压力下，温度可达121℃。一般只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。 微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术。为了确保纯种不被杂菌污染，在整个接种过程中，必须进行严格的无菌操作。在实验过程中必须牢固树立无菌概念，经常保持实验台及周围环境的清洁，严格无菌操作，避免杂菌的污染，这是保证实验成功的必要条件。 空气、物表、器械、医务人员手微生物检测参考标准 一、空气微生物污染检验方法 采用平板暴露法操作 结果计算：按平均每皿的菌落数报告：CFU/(皿·暴露时间)。 结果判断： Ⅱ环境： 手术室、供应室、计生手术室、产房、眼科治疗室 、婴儿室、 ≤4.0cfu/皿（15min ） Ⅲ环境 各科治疗室、处置室、ICU 、胃肠镜室、儿科病房、妇科检查室、急救室、 化验室血库、口腔科。 ≤4.0cfu/皿（5min ） 二、物体表面微生物污染检查方法 检测方法： 把采样管充分震荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml ，接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20ml,36℃±1℃恒温培养箱48h ，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。（采样面积都为100cm 2） 结果计算： 物体表面菌落总数（CFU/cm 2）= 结果判断： Ⅱ环境： 手术室、供应室、计生手术室、产房、眼科治疗室 、婴儿室。 ≤5.0cfu/cm 2 平均每皿菌落数×采样液稀释倍数 采样面积（cm 2) Ⅲ环境各科治疗室、处置室、ICU、胃肠镜室、儿科病房、妇科检查室、急救室、化验室血库、口腔科。≤10.0cfu/cm2 三、消毒医疗器材的检验方法 检验方法： 把采样管充分震荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml，接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20ml,36℃±1℃恒温培养箱48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。 检验标准 1、高度危险性医疗器材应无菌 2、中度危险性医疗器材的菌落数应≤20 CFU/件（CFU/g或CFU/100cm2）,不得检 出致病性微生物。 3、低度危险性医疗器材的菌落数应≤200 CFU/件（CFU/g或CFU/100cm2）,不得 检出致病性微生物。 （1）、高度危险性物品： 手术器械、穿刺针、腹腔镜、活检钳、心脏导管、植入物等。 （2）、中度危险性物品： 胃肠道内镜、气管镜、喉镜、肛表、口表、呼吸机管、麻醉机管道、压舌板、肛门压力测量导管、直肠压力测量导管等。 （3）、低度危险性物品： 听诊器、血压计、袖带、病床围栏、床面以及床头柜、被褥、墙面、地面、痰盂（杯）和便器等。 四：医务人员手卫生 环境微生物监测标准操作规程 一、监测指征 1．感染暴发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。 2．监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。 3．当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或系统启用时监测。 4．目标性监测的需要。 5．循证医学证据支持。 二、空气监测(沉降法) (一)采样时间：消毒处理后与进行医疗活动之前。 (二)采样高度：距地面垂直高度80～150 cm。 (三)采样点设置 1．非洁净房间：室内面积≤30 ㎡，在对角线上设里、中、外3点。里、外两点位置各距墙1 m；室内面积>30 ㎡，设东、西、南、北、中5点。其中东、西、南、北4点均距墙1 m。9 cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5 min后送检培养。 2．洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同清洁级别进行布点，操作按照GB 50333—2002。9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30 min后送检培养。 (四)采样注意事项 1．采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。进入清洁房间采样须穿洁服。 2．皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；皿盖应扣放，以防污染。 3．采样结束后，由外向内合上皿盖。 4．采样完毕的培养皿应在6 h内培养。 (五)实验室检验 1．培养皿在37℃培养48 h后，进行菌落计数和致病菌检验。普通营养琼脂培养基的配制按照GB／T 4789．28—2003；菌落计数方法按照GB\T 7918．2—1987；致病菌检验：溶血性链球菌检验按照GB／T 4789．11—2003，沙门菌检验按照CB\T 4789．4—2003，铜绿假单胞菌检验按照GB／T7918．4—1987，金黄色葡萄球菌检验按照CB\T 7918．5—1987,， 2．计算结果：非洁净房间以100 c㎡的平皿在空气中暴露5 min即相当于10 L 空气中的细菌数，计算公式为： 细菌数(cfu／m3)=1 000÷(A／100×t×10／5)×N=50 000N／At 式中：t——平皿暴露于空气中的时间(min)；N—一培养后平皿上的菌落数(cfu／平皿)；A——所用平皿的面积(c㎡)。 洁净房间直接以“个／(30 min·Φ90)”平皿为单位计算结果。 (六)结果判断： 参照GB 15982—1995《医院消毒卫生标准》。 三、物体表面监测 (一)采样时间： 消毒处理后4 h内。 (二)采样方法 被采样本面积<100 c㎡取全部表面；如采样面积≥100 c㎡，连续采样4个位置(不可有重叠)，每个位置采5 cm×5 cm的大小，用浸有无菌生理盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10 ml无菌生理盐水试管内。不规则的物体表面，用棉拭子直接涂擦，采样面积≥30 c㎡ (三)采样注意事项 食品病原微生物快速检测技术及研究进展 王 辉，张 伟，王 燕，顾 希 （山东东营出入境检验检疫局， 山东东营 257091） 摘 要：食品病原微生物传统检验方法费时、敏感度低、特异性差；随社会和食品工业快速发展， 研究和建立食品病原微生物快速检测方法越来越受到世界各国重视。该文介绍免疫学技术、分子生物学技术、代谢技术、仪器分析技术、生物传感器技术等检测微生物基本原理，及这些技术在食品病原微生物检测中研究进展。关键词：病原微生物；食品检测；食品安全 Research progress on rapid detection technology of pathogenic microorganism in foods WANG Hui ，ZHANG Wei ，WANG Yan ，GU Xi （Dongying Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau ， Dongying 257091，Shandong ，China ）Abstract ：Co nventi o nal m et ho d are ti m e –co n sum ing ，l o w s en s itivity and h yp os en s itivity in f oo d pat ho geni c m i c r oo rgani sm dete c ti o n ，wit h t h e rapid devel o p m ent o f soc iety and f oo d pr o d uc ti o n in t h e w o rld ，s t u dy and t h e e s tabli shm ent o f f oo d pat ho geni c m i c r oo rgani sm rapid dete c ti o n te ch n o l o gy i s in c rea s ingly paid attenti o n t o by vari ous cou ntrie s. In t h i s arti c le ，t h e ba s i c prin c iple o f i mmu n o l o gy te ch n o l o gy ，mo le cu lar m i o l o gy te ch n o l o gy ，m etab o l o gy te ch n o l o gy ，in s tr um ental analy s i s te ch n o l o gy ，bi os en so rte te ch n o l o gy were intr o d uc ed ，and t h e pr o gre ss o f t h e s e dete c ti o n te ch n o l o gie s o n f oo d pat ho geni c m i c r oo rgani sm were reviewed .Key words ：pat ho geni c m i c r oo rgani sm ；f oo d dete c ti o n ；f oo d s afety 中图分类号：TS207.4 文献标识码：A 文章编号：1008―9578（2012）04―0001―05收稿日期：2012–03–06作者简介：王辉（1982~ ），男，工程师，硕士，研究方向：食品微生物快速检测。 随着世界经济全球化、贸易自由化和食品工业化迅速发展，食品安全已成为全球关注热点问题，而食品中病原微生物是影响食品安全最主要因素。食品病原微生物传统检验方法步骤非常繁琐，需耗费大量人力、物力，且检测周期长、灵敏度较低，难以满足目前国内外对食品安全检测要求。因此，研究和建立灵敏度更高、特异性更强、简便快捷食品病原微生物快速检测技术迫在眉睫。本文对目前国内外改进和开发一些病原微生物快速检测技术及其在食品方面应用进行综述。1 免疫学技术 免疫学检测技术是应用免疫学理论而设计一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌细胞因子的实验方法，其基本原理是利用抗原、抗体间能发生特异性免疫反应以检测病原。1.1 免疫荧光技术（IF T ） 免疫荧光技术是将不影响抗原、抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应抗原（或抗体）结合后，形成免疫复合物在一定波长光激发下可产生荧光，借助荧光显微镜可检测或定位被检抗原。目前免疫荧光技术可用于沙门氏菌、葡萄球菌毒素、E.Coli O157和单核细胞增生李斯特氏菌等快速检测。张晓 华等〔1〕利用副溶血弧菌免疫家兔制备多克隆血清，建立中国对虾病原菌―副溶血弧菌间接荧光抗体检测技术，不仅可用于诊断发病感染对虾，也可用于检测带菌状态或未发病感染对虾。1.2 酶免疫技术 酶免疫技术是利用抗原、抗体反应高度特异性和酶促反应高度敏感性，通过肉眼或显微镜观察及分光光度计测定，达到在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体部位，及对其进行定量目的。根据抗原、抗体反应是否需要分离结合和游离酶标记物而分为均相和非均相两种类型。非均相法较常用，包括液相与固相两种免疫测定法。非均相酶固相免疫测定法即ELISA 在目前应用最为广泛。Cryan 等〔2〕在研究大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli.）内毒素时，将ELISA 法与DNA 探针技术等进行比较，发现ELISA 技术更灵敏、快速。此外，ELISA 法还可用于食品介导病毒检测。葛翠翠等〔3〕使用双抗夹心ELISA 检测食品中大肠杆菌O157∶H7，结果表明，该法稳定性、重复性良好，对纯培养菌液检出限为105 cfu/mL，具有良好敏感性及特异性。杨静〔4〕等用沙门氏菌特异性单克隆抗体CB8和de7建立直接检测沙门氏菌方法，即用被检样品直接包被ELISA 板固定加酶标抗体作用一段环境监测微生物知识培训试题(有答案)
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