表面微生物监测
表面微生物监测除了用空气微生物取样来监测生产环境的微生物污染水平外，表面监测也可监测生产区域表面以及设备与产品接触表面的微生物世。
监测的方法必须考虑取样的准确性和代表性。
基本的监测方法包括接触碟法、擦拭法以及表面冲洗法。
每种提供的数据都可以用于产品质量的评价。
测试方法可以定性和定量。
而且取样的准确性受收集和处理样品的过程影响，因此必须对取样进行培训和测试。
(1)接触碟法接触碟容易操作而且可以定量。
因此被广泛使用，适用于对平整的规则性表面进行取样监测。
通常的碟子是50mm直径的，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面积一般约为25cm2。
培养基可以根据使用添加中和剂。
取样时，确保全部琼脂表面与取样点表面充分接触。
取样后，需用蘸有70%乙醇的纱布擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。
将取样后并做好标记的接触碟置于培养箱中培养，读数，记录。
缺点：不适用于非常规表面；若培养基太湿润，菌落会连片生长导致不易计数。
(2)擦拭法该方法通常用于对不规则表面（尤其是设备表面）进行取样。
拭子通常为一根棒状物，其顶端由吸水性材料制成，拭子头在取样前应先行浸湿（通常为无菌生理氣化钠溶液或0. 1%的蛋白胨溶液约5ml),取样时，握住拭子柄，以30°角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积25cm2左右（可用特定的无菌模板确定擦拭面积），然后将取样头折断放入上述溶液内，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。
如果拭子头的材料为藻酸钙，则要用稀的盐溶液作为稀释剂（如1%柠檬酸钠溶液），这样才能让拭子头完全溶解。
因擦拭取样的面积一般约为25cm2，故擦拭法也属于定量检测方法。
缺点：取样和转移技术可能会影响结果；样品处理后才能培养。
(3)表面冲洗法该法适用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。
用定量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法来计算微生物数量。
缺点：适用性不广，需要额外的操作，取样和处理过程可能会影响结果。
D.人员卫生监测人员是无菌生产中主要污染源。
对于无菌药品的人员要求参见“4人员”。
人员卫生监测的方法与表面微生物监测方法中的接触碟法相同。
E.培养基及培养条件环境监测用培养基的类型和培养条件取决于所选用的检测方法，但必须具有广谱性。
通常，营养琼脂（NA)或大豆胰蛋白胨琼脂（TSA)培养基属于全能型培养基。
此类培养基适用于多数环境微生物（包括真菌）的分离生长。
但是，对专用于酵母菌分离生长的特定培养基，仍应另行选择，如玫瑰红钠琼脂、萨布罗（Sabourauds)培养基等都是常用的真菌培养基。
如果被监测环境中使用过消毒剂或存在抗生素，则要向表面监测用培养基中加一些添加剂（聚山梨酯80、卵磷脂、偶氮凝集素或(3-内酰胺酶等），以中和或尽量减少消毒剂或抗生素的抑菌作用。
例如，在对非抗生素生产级区环境设施表面监测时，通常是在营养琼脂或大豆胰蛋白胨琼脂培养基内添加0.7%的聚山梨酯80和0. 1%的卵磷脂。
应对环境监测用微生物培养基进行验证，验证其在适当的时间和温度条件下检出真菌(包括酵母菌和霉菌）和细菌的能力。
用于环境监控的培养基，首先应检查其可靠地恢复微生物生长的能力。
所有配好的培养基批号，均应进行培养基灵敏度试验，表14-4列出了环境监测用培养基灵敏度检查菌种。
必要时，应使用中和剂，防止洁净室消毒剂或产品残留（如抗生素）抑制微生物生长。
培养基灵敏度检查试验中，可加人环境监测中分离的菌株进行试验，接种量应不超过100个菌。
培养基相关的其他内容，参见“15.6培养基”。
一旦选定培养基，需确定培养温度和培养时间。
通常，需氧菌应在30培养48 ~72小时。
酵母菌和霉菌数通常在20-ZSt,培养5~7天。
F.监测方法的确认方法确认的手段包括以下几种。
•进行回顾性验证/确认，即回顾环境监测的历史数据，并对这些监测数据的重现性予以评价。
參进行挑战性试验，证明监测方法的回收率。
该法应用广泛，也可作为回顾性验证/确认的支持性资料。
•进行监测后取样点的清洁消毒效力测试。
对接触碟法和擦拭法，有时同样需进行方法确认。
方法是，将从环境中分离到得代表性微生物，接种于无菌的试验表面，接种量不超过100CFU，然后按常规方法进行取样及处理，计算回收率。
用于接种的试验表面通常为方形或圆形薄片，材料多为塑料、玻璃和不锈钢类，以尽可能模拟实际监测时的环境设施表面。
通常可以采S引用相关文献或技术报告的方法来证明该取样方法的适用性。
在方法确认阶段，应对培养基、培养时间和培养温度等进行评估，以确定适于环境中代表性微生物的最佳培养条件。
同时，应确定适用于真菌、厌氧微生物或特定的控制性微生物（指可能严重影响环境的微生物）的选择性培养基。
一旦培养基供应商、接触碟、拭子或监测方法发生变更，则需重新确认。
如果决定变更取样方法，变更前必须进行相应的验证/确认性试验，以保证新方法等效或优于现行方法。
14.3.2取样计划【背景介绍】环境监测的取样计划在各生产企业各不相同，这取决于一些影响因素，包括但不局限于产品的类型、生产过程、设施/工艺的设计、生产密度、人为干扰、环境监测历史数据等。
没有一个单独的取样方案适用于所有的监测。
环境监测的频率及取样fi,最好能及时发现所有人为干预、偶发事件及任何系统的损坏。
由无菌工艺生产的无菌产品与最终灭菌处理的无菌产品相比，前者的环境监测尤为重要。
取样计划应随着取样频率的变化而变化，根据趋势分析对取样点数量做出相应的调整，既可增加，也可减少。
【技术要求】根据生产环境对产品污染风险的高低，确定取样计划。
例如，对无菌工艺产品的A级区取样频率可设为每批一次；I)级区的非关键辅助区取样频率可设为每季度一次。
【实例分析】14.3.4取样点及取样量的设置【背景介绍】取样位点的选择很大程度上取决于洁净室的设计和生产过程。
在选择取样点时，应对每个程序仔细认真地加以评估。
取样的主要的目的是提供有价值并可用于判断的数据，以便鉴别/识别特定程序、设备、材料和工艺相关的实际或潜在的污染。
取样应设在如果取样点受到污染，则产品很可能受到污染的那些位置，然而，必须谨慎地确定取样点的位置，靠近产品但不要接触产品。
【实施指导】常规监测取样位点应考虑如下因素：•在哪些部位的微生物污染，最可能对产品质量造成不良影响？•在生产过程中，什么地点最容易长菌？•取样点的选择需要统计学设计（例如，按照美国标准209E来计算）还是根据网格法来确定？在常规监测中，有一些点需要周转取样吗？•哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难奏效的部位？•什么活动会导致污染的扩散？參在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品吗？取样只应在生产结束或换班时进行吗？为了建立常规的取样位点，必须考虑产品与其接触或暴露的环境的程度。
对反映产品的微生物污染水平有代表性的取样点必须取样和进行环境监测。
与产品接触的来源可能包括压缩气体，房间空气，生产设备，工具，关键表面，储存容器，传送带，手套，人员以及水。
不与产品直接接触的来源可能包括：墙，地，天花板，门，长発，椅子，测试仪器和缓冲间。
但是，最关键点的位置作为取样点并不一定适用。
必须考虑环境监测是否实际上会加大产品污染风险的概率。
此外，如果在生产过程中污染的概率很低，就不必要对关键点取样（例如，不再需要手工操作的已灭菌部件）。
确立一个合适的取样点需要考虑很多因素，比如厂方设施，生产线的设定，验证数据，生产过程，历史数据，测试方法等。
洁净区（室）监测中的取样点和取样量可以比洁净级别确认时的取样点和取样量少，应该通过正式的风险分析研究和对监测结果的分析（至少要有6个月以上的运行数据作为分析基础），来确定监测频次和限度。
同时，监测频次和限度的确定也要考虑到生产工艺因素，监测限度及取样点应该定期进行回顾验证，以保证监测行为的有效性。
国标GB/T 16292—2010、GB/T 16293—2010 和GB/T 16294—2010 医药工业洁净室(区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法中规定了最少采样点的数目。
最少采样点数目可在以下两种方法中任选一种。
(1)利用公式计算N,=A°'S——最少采样点数(四舍五人为整数）；-4——洁净室或洁净区的面积，m2。
注：在单向流悄况下.面积/!可以认为fi垂直于气流方向上的横截面面积。
(2)最少采样点数可从表14-6查到。
环境取样在遵循最低取样点数的同时，还须执行以下规则。
A.空气悬浮粒子參任何洁净区内取样点应不少于两个；•除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置；•在一个区域内应最少取样五次，每个取样点的取样次数可多于一次，不同取样点的取样次数可以不同；为了确定A级区的级别，每个采样点的采样量不得少于丨m3。
參取样点一般布置在距离地面0. 8 ~ 1. 5m之间或操作平台的高度；參尽量避免在回风口附近取样，而且测试人员应站在取样口的下风侧。
B.空气浮游菌參除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。
•在日常监控时，那些与产品相邻近的区域，以及可能与产品直接接触的空气及设备附近均应考虑增加取样点和取样次数（与产品非接触区相比，这些区域应视为关键区h人员活动频繁或人员较集中的区域也应被视为关键区，需加强监控。
參取样点一般布置在距离地面0. 8 ~ 1. 5m之间或操作平台的高度。
•取样时，取样设备会对气流产生干扰，因此，动态测试空气浮游菌取样时应避免可能对气流组织的干扰。
參应根据被测区域的浮游菌控制限度和取样方式确定取样量，每个点一般采样一次。
•尽量避免在回风口附近取样（距离lm以上），且测试人员应站在取样口的下风侧，并尽量少走动。
C.沉降菌测试•取样点的分布及其取样位置与空气浮游菌监测相同；日常监控可以根据风险分析结果，沉降菌与浮游菌交替或混合取样。
參沉降时间至少为半小时，但不得超过4小时。
D.表面微生物测试表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：參洁净区（室）的大小；•设备、管路等的复杂程度；參生产活动的重要性；參易受污染的部位等。
应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介质的管路（不易被清洁/消毒部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。
根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微生物限度要求。
表面微生物的每点取样面积宜控制在25cm2左右。
为避免干扰，宜在生产活动结束后取样。
E.人员监测參对无菌生产工艺的无菌生产区，例如A/B级区的每位工作人员进行每班测试, 甚至要对每次更衣进行监测。
表面微生物检测方法[1]
![表面微生物检测方法[1]](https://360docs-1393072327.cos.ap-beijing.myqcloud.com/65f7445e3b3567ec102d8ac5.webp)
空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准1、目的：检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。
2、参照标准：中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。
3、采样与检测方法：3.1空气的采样与测试方法3.1.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。
d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。
e)正常生产状态的采样，每周一次。
（2）采样方法在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。
采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。
采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。
3.1.2菌落培养：（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。
（2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。
表面微生物的测定方法验证报告
方法验证报告公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统空调风管内表面微生物GB/T 18204.5-2013(11)1.目的验证培养法测定集中空调通风系统风管内表面微生物指标，来判断在本实验室此方法的适用性。
2.方法内容2.1 原理集中空调通风系统风管内表面采集的样品，计数在营养琼脂培养基上经35℃~37℃、48h培养所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数为细菌总数，计数在沙氏琼脂培养基上经28℃、5天培养所形成的菌落数为真菌总数。
2.2 仪器和设备2.2.1定量采样机器人或采样规格板：采样机器人采样面积为50 cm2或100 cm2，采样精度为与标准方法的相对误差小于20%；采样规格板面积为25 cm2。
2.2.2高压蒸汽灭菌器。
2.2.3恒温培养箱。
2.2.4平皿：φ90 mm。
2.3培养基和试剂2.3.1 营养琼脂培养基：蛋白胨10 g氯化钠5g肉膏5g琼脂20 g蒸馏水1000mL2.3.2制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏溶于蒸馏水中，校正pH值为7.2~7.6，加人琼脂，121 C ，20 min灭菌备用。
2.3.3沙氏琼脂培养基：蛋白胨10 g葡萄糖40g琼脂20 g蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨、葡萄糖溶于蒸馏水中，校正pH为5.5~6.0，加入琼脂，115 ℃，15 min灭菌备用。
2.3.4Tween-80(=0.01%)。
2.4采样采样：使用定量采样机器人或人工法(11.3.1)在确定的位置、规定的面积内采样，表面积尘较多时用刮拭法采样，积尘较少不适宜刮拭法时用擦拭法采样。
整个采样过程应无菌操作。
为避免人工采样对采样环境的影响，宜采用机器人采样。
2.5测量步骤2.5.1刮拭法采集的样品：将采集的积尘样品无菌操作称取1 g，加入到Tween-80水溶液(11.4.3)中，做10倍梯级稀释,取适宜稀释度1mL倾注法接种平皿。
2.5.2擦拭法采集的样品：将擦拭物无菌操作加入到Tween-80水溶液(11.4.3)中，做10倍梯级稀释，取适宜稀释度1mL倾注法接种平皿。
表面微生物检测方法[1]
![表面微生物检测方法[1]](https://360docs-1393072327.cos.ap-beijing.myqcloud.com/8ac7af073b3567ec102d8aed.webp)
空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准1、目的：检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。
2、参照标准：中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。
3、采样与检测方法：3.1空气的采样与测试方法3.1.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。
d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。
e)正常生产状态的采样，每周一次。
（2）采样方法在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。
采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。
采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。
3.1.2菌落培养：（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。
（2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。
表面微生物监测
表面微生物监测除了用空气微生物取样来监测生产环境的微生物污染水平外，表面监测也可监测生产区域表面以及设备与产品接触表面的微生物世。
监测的方法必须考虑取样的准确性和代表性。
基本的监测方法包括接触碟法、擦拭法以及表面冲洗法。
每种提供的数据都可以用于产品质量的评价。
测试方法可以定性和定量。
而且取样的准确性受收集和处理样品的过程影响，因此必须对取样进行培训和测试。
(1)接触碟法接触碟容易操作而且可以定量。
因此被广泛使用，适用于对平整的规则性表面进行取样监测。
通常的碟子是50mm直径的，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面积一般约为25cm2。
培养基可以根据使用添加中和剂。
取样时，确保全部琼脂表面与取样点表面充分接触。
取样后，需用蘸有70%乙醇的纱布擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。
将取样后并做好标记的接触碟置于培养箱中培养，读数，记录。
缺点：不适用于非常规表面；若培养基太湿润，菌落会连片生长导致不易计数。
(2)擦拭法该方法通常用于对不规则表面（尤其是设备表面）进行取样。
拭子通常为一根棒状物，其顶端由吸水性材料制成，拭子头在取样前应先行浸湿（通常为无菌生理氣化钠溶液或0. 1%的蛋白胨溶液约5ml),取样时，握住拭子柄，以30°角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积25cm2左右（可用特定的无菌模板确定擦拭面积），然后将取样头折断放入上述溶液内，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。
如果拭子头的材料为藻酸钙，则要用稀的盐溶液作为稀释剂（如1%柠檬酸钠溶液），这样才能让拭子头完全溶解。
因擦拭取样的面积一般约为25cm2，故擦拭法也属于定量检测方法。
缺点：取样和转移技术可能会影响结果；样品处理后才能培养。
(3)表面冲洗法该法适用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。
用定量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法来计算微生物数量。
缺点：适用性不广，需要额外的操作，取样和处理过程可能会影响结果。
版药典表面微生物检测操作规程
1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
3.责任：表面微生物检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2表面微生物：4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。
接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2采样点选择：洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的大小；2.设备、管路等的复杂程度；3.生产活动的重要性；4.易受污染的部位等。
实验室环境与人体表面微生物的检测
实验操作应严格遵守规范，避免产生气溶胶和飞溅物，同时对实验废弃物进行妥善处理， 防止污染环境。
06 结论与展望
研究结论
实验室环境中微生物的种类和数 量对实验结果具有重要影响，必
须采取有效措施进行控制。
人体表面微生物的分布和数量与 健康状况有关，检测人体表面微 生物有助于了解个体健康状况。
湿度
湿度对微生物的生长和传 播具有重要影响。
营养物质
实验室环境中存在的营养 物质为微生物提供了生长 条件。
03 人体表面微生物的检测方 法
微生物检测的基本方法
显微镜直接观察法
通过显微镜直接观察样本中的 微生物形态，如细菌、真菌等
。
生理生化反应法
利用微生物的生理生化特性进 行检测，如氧化酶试验、糖发 酵试验等。
实验室环境与人体表面微生物的检 测
目 录
• 引言 • 实验室环境对微生物的影响 • 人体表面微生物的检测方法 • 实验室环境与人体表面微生物的关系 • 实验结果与分析 • 结论与展望 • 参考文献
01 引言
主题简介
实验室环境与人体表面微生物的检测是研究微生物在实验室环境中分布、传播和影 响的重要手段。
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04 实验室环境与人体表面微 生物的关系
实验室环境中微生物的来源
实验室内部操作
实验室内的各种操作，如实验动 物饲养微生物培养等，都可能 产生微生物气溶胶或污染实验台
面、地面等。
实验室外部环境
实验室外部的空气、尘埃、飞沫 等也可能携带微生物进入实验室。
人员带入
实验人员进出实验室时，可能会 将微生物带入实验室。
实验室环境中的微生物可能来自实验人员、实验材料、空气等，也可能在实验过程 中产生。
车间表面微生物检测风险评估
质量风险评估
果糖车间表面微生物评估报告
产品名称：果糖
产品代号：0540
产品阶段：生产阶段
评估日期：
报告起草人：
审核人：
批准人：
1、风险等级与风险矩阵
第 2 页共7 页
1.2 严重性和可能性矩阵（风险等级判断）
如果可能性和严重性的乘积为1－4为低风险（绿色区域），乘积为5-9中等风险（黄色区域），乘积为10-25为高风险（红色区域）。
1.3 可检测性和风险等级矩阵（关键性判断）
风险等级分为三等，如果高风险打分为3分，中等风险打分为2分，低风险打分为1分。
风险等级和可检测性的乘积为1-5为非关键参数（绿色区域），乘积为6-15为关键参数（红色区域）。
2.评估报告所需的相关资料
3.评估所需的参考资料
4．医药级果糖车间表面微生物评估
第 5 页共7 页
第 6 页共7 页
5.结论
经过评估，医药级果糖车间表面微生物检测点共为29个点，检测频次为1次/月。
第7 页共7 页。
药典表面微生物检测操作规程
题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
3.责任：表面微生物检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。
接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
表面微生物检测标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。
表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。
如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。
不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。
4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。
5、测试状态及时间：动态测试。
6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。
将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。
翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。
但与前次擦拭移动方向垂直。
擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。
7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
物体表面微生物污染检测标准操作规程
物体表面微生物污染检测标准操作规程一、采样方法
二、检测方法
充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0 ml接种平皿，将冷却至40~45 ℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20 ml，36±1 ℃恒温箱培养48小时，计数菌落数。
三、结果计算
物体表面菌落总数计算方法：
1、规则物体表面：
细菌菌落总数（CFU/ cm²）：平均每皿菌落数×稀释倍数/
采样面积（cm²）；
2、不规则物体表面的结果计算，用CFU/件表示。
四、判定标准
1、Ⅰ、Ⅱ类环境：洁净手术部、其他洁净场所、非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器
官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等，物体表
面细菌菌落总数≤5 CFU/cm²。
2、Ⅲ、Ⅳ类环境：儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人工流产室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心检
查包装灭菌区和无菌物品存放区、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室等，物体表面细菌菌落总数≤10 CFU/cm²。
五、采样中的注意事项
1、采样时机：日常常规检测时可在消毒后采样，怀疑医院感
染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被污染时，应随机采样。
2、常规对环境物体表面消毒效果检测时可不进行致病性微生物检测，疑似医院感染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被微生物污染时，应进行目标微生物的检测。
3、采样、接种中严格遵守无菌技术操作规程。