木聚糖酶酶学性质测定
木霉木聚糖酶的酶学性质研究

1 2 主 要 仪 器与 设 备 .
试 剂 , 在 空 白样 中 补 加 酶 样 0 5 。 并 .ml 13 5 标 准 曲 线 的 绘 制 。 分 别 吸 取 0 1 / 木 糖 .. . mgml
溶液 0 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 、. , 依 中, 以蒸馏水补加 到 15ml . 。加 D 试剂 3 于 沸水 NS ml 中沸腾 1mi, 出后 冷却 , 0 n取 加入 1 m 蒸 馏水稀 释 混 0l 匀 , 5 0 m处 进行 比色测定 , 于 5n 用空 白管调零点 , 录 记
目前 木 聚 糖 酶 的 应 用 非 常 广 泛 , 括 在 林 副 产 品 包 加工 、 饲料工业 、 品工业 、 食 造纸工业等领 域中 , 自然 在
界 中有多种微 生物 可 以降解 、 用 木聚糖 , 利 例如 真菌 、 细菌等 。本试验通 过对 一种来 自木霉 ( r h dr T i o e— c ma发酵所得 的木 聚糖 酶 的酶 学性 质 的研究 , ) 为此 类
Ab ta t sr c :T h lna ei n e z m et a a r a p lc b l y n t er s a c s dt ewa fDNS e Xy a s sa n y h th sg e ta p ia i t .I h e e r h weu e h yo i t t dy t n y o o ia h r c e fXya a e t a e e a e r m he f r e t to fThem o s u O su he e z m lg c lc a a t r o ln s h tg n r td f o t e m n ain o r ac s a r nt c . u a i us Ther s l h w st tt e o tm a e p r t r n a e u ts o ha h p i lt m e a u e a d pH e e 5 w r O℃ a d 5 . Th c iiy o n .5 e a t t f v t y a a e wa e ta n d g e ty b 、Fe 、 。 a d M n . hex ln s sr s r i e r a l y Cu 。 Fe n 。 Thee z m e efc nm u b r y Sla n y fe to l e r ’ e f i e y sr n h l t S ef c n ta a ls n b o b n o t e g ti e k sv r to g w iei’ fe to e myo ea d a s r e tc ton pld e Sw a . Ke r ywo d:DNS M e h d; ln s ; En y l gc lCha a tr ; z m e A ci iy t o Xya a e z mo o ia r c e En y tv t
木聚糖酶检测方法

木聚糖酶检测方法
木聚糖酶是一种能够水解木聚糖为单糖的酶类。
木聚糖是构成植物细胞壁的重要成分,因此木聚糖酶在生物质转化、纸浆制造、饲料工业等领域具有重要的应用价值。
木聚糖酶检测方法主要有两种:基于底物的检测方法和基于抗体的检测方法。
基于底物的检测方法包括荧光素酮底物法、4-nitrophenyl-β
-D-木聚糖苷酸盐法、3,5-dinitrosalicylic acid法等。
这些方法利用底物与酶的反应产生可测定的信号,从而检测酶的活性。
基于抗体的检测方法是将制备好的抗体与木聚糖酶结合,形成免疫复合物,利用特定的检测方法检测抗体与酶的结合情况。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和不需要底物等优点。
总的来说,木聚糖酶检测方法的选择应根据具体情况进行考虑,以达到最佳检测效果。
- 1 -。
酶学特性研究方案

酶学特性研究实验方案(以木聚糖酶为例)根据所查文献资料,设计出了里氏木霉木聚糖酶特性的研究方案,如下:1、木聚糖酶的最适反应温度将1%的山毛榉木聚糖溶于pH5.0,100mM的乙酸—乙酸钠缓冲液中作为反应底物,在不同的温度(30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、70℃)下测定同一种木聚糖酶样品的酶活,反应时间为10min,以最大酶活为100%,分别计算各温度下得相对酶活。
2、木聚糖酶的最适反应pH分别用50mM的不同pH (3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5)的缓冲溶液(采用磷酸氢二钠—磷酸二氢钠缓冲液,由0.2M磷酸二氢钠和0.2M磷酸氢二钠溶液配制而成)溶解底物,分别于最适的温度下,按照标准方法测定酶活,以最大值为100%,分别计算各pH下的相对酶活。
3、木聚糖酶温度稳定性将酶液与磷酸氢二钠—磷酸二氢钠缓冲液(缓冲液的pH选取上一步中所得到的最适pH)混合,混合后缓冲液的浓度为50mM,并将此体系置于不同温度(20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃)的水浴锅中保温30min,立即冰水冷却30min,按标准方法测定酶活,以未经处理的酶液为对照,分别计算各温度处理后的残余酶活。
4、木聚糖酶PH稳定性将酶液与不同pH(3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0)的缓冲液(pH≤8.0用磷酸氢二钠—磷酸二氢钠缓冲液,pH≥9.0用甘氨酸—氢氧化钠缓冲液)混合,混合后缓冲液的浓度为50mM。
于最适反应温度下保温30min,立即冰水浴冷却30min,按照标准方法测定酶活,以未经处理的酶液为对照,分别计算各pH处理后的残余酶活。
5、金属离子及其它化合物对木聚糖酶反应的影响于反应体系中加入不同金属离子或化合物(5mM),在最适反应温度和最适反应pH下,按标准方法测定酶活。
以不加任何物质时的酶活为100%,计算相对酶活。
所测试的金属离子包括Cu2+、Zn2+、Mn2+、Na+、K+,其它化合物包括金属螯合剂EDTA,硫酸盐(NH4)2SO4。
饲用木聚糖酶的酶学性质研究

酸 一氢氧 化钠 缓 冲液 )配 制木 聚糖 底 物 ( 周先碗 ,
2 . 5 3 . 0 3 . 5 4 . 0 4 . 5、 5 . 0 5. 5 6 0、 6 5 7. 0 7. 5、 8 . 0
9 . 0 ) 的缓 冲 液 , 混匀后 , 在 3 7 水浴保温 4 h , 冰水 浴冷 却后 按 国标测 定酶 活 。 以酶活最 高者 为 1 0 0 %。
2 . 3木 聚糖酶 的 最适反 应温 度
期 对 该木 聚糖 酶有 更 为深人 的认 识 , 对 该 木 聚糖 酶 的应 用有 一定 的指 导作 用 。
1材 料与 方 法 1 . 1 木 聚糖 酶 由本 实验 室 固体发 酵 获得 。
1 . 2试 剂
用 最适 p H 的缓 冲液 配置 溶 液 ,在 3 0 、 4 O 、 4 5 、
5 0 、 5 5 、 6 0 、 6 5和 7 0 %不 同的温 度 下反 应 , 按 国标 法 测定 酶 活 。以酶 活最高 的温 度为 最适 反应 温度 。
2 . 4木聚 糖酶 的热 稳 定性
燕 麦 木 聚糖 ( X 0 6 2 7 ) 、 胃蛋 白酶 ( P 7 0 0 0 ) 、 胰 酶 ( T 1 0 0 5 ) 均购 自 S i g m a公 司 。 D N S试 剂 参 见 G B / T
析纯 。
1 . 3酶 活 测 定 方 法
按 国标法 测定 酶活 。 以未处理 酶 的酶活 为 1 0 0 %。
康氏木霉木聚糖酶酶学性质的研究

10 / i摇床培养 4 。 2 rrn n 8h 1 .2 液体发酵培养 .1 2.
1 麦麸加 1 L蒸馏水 ,装入 2 0 L三角 0g 0m 5 m 瓶 内 ,2 高压灭菌 3 m n 冷却后 , 1 1C c O i, 接种 ,0c, 3 C
10rmi 摇 床 培养 4 。 2 n / 8h
a d p 60I i temotbea d terlt eat i fx l a e man 0 i } a g f2 —5 C. n H .. s } r sa l n } eai ci t o ya ssr is8 % nter eo 0 I t l l v vy n e l n )c
T erlt ea t i fx l ae tbe a drman 5 % i ep rn eo .— 00 h ai ci t o ya s si s l e v vy n S a n e is8 nt H a g f 0 1 .. T e in a+ h 3 h sB 2 o . F 2 A1 。1 e 。 mmo/ u ̄a d F 3 y t n n ii r。w i a Z in d 4 mmo/ u ae 2 l L C 2 n e ae s o gih bt s hl C 2 n o sa r o e 。 n ]L C y s mu aoso ee z mea t i . t ltr f h ny ci t i t vy
L e g jn X AO K ijn G O S— u n U D n -u 。 I a-a , U iy a
(0 oL hI ut d oTcnl yG  ̄ l 学 g n ra F d  ̄m l y otC i i rto e og,I o S h nU vs f h o y l
木聚糖酶生产及酶学性质的研究

木聚糖酶生产及酶学性质的研究一、本文概述木聚糖酶是一类能够水解木聚糖及其相关多糖的酶类,广泛存在于自然界中,尤其是在植物、微生物和动物体内。
由于其在生物质转化、食品加工、饲料工业以及医药等领域的重要应用价值,木聚糖酶的研究与生产日益受到关注。
本文旨在全面综述木聚糖酶的生产方法、纯化技术以及酶学性质的研究进展,以期为木聚糖酶的进一步研究和应用提供理论支持和实践指导。
本文将对木聚糖酶的生产方法进行详细阐述。
这包括从天然来源中提取木聚糖酶,以及通过微生物发酵、基因工程等生物技术手段生产木聚糖酶。
在此基础上,还将探讨不同生产方法的优缺点,以及影响木聚糖酶产量的关键因素。
本文将关注木聚糖酶的纯化技术。
纯化是获得高质量、高活性木聚糖酶的关键步骤,本文将介绍常见的纯化方法,如硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等,并分析各方法的优缺点及适用范围。
本文将重点研究木聚糖酶的酶学性质。
这包括木聚糖酶的分子量、最适pH值、最适温度、动力学参数等基本性质,以及酶的稳定性、抑制剂和激活剂等影响因素。
通过对这些酶学性质的研究,可以更深入地了解木聚糖酶的作用机制和催化性能,为其在各个领域的应用提供理论依据。
本文旨在通过系统研究木聚糖酶的生产及酶学性质,为木聚糖酶的进一步研究和应用提供全面、深入的理论支持和实践指导。
二、木聚糖酶的生产方法木聚糖酶作为一种重要的工业酶,其生产方法主要包括微生物发酵法、化学合成法和基因工程法。
其中,微生物发酵法因其产量高、成本低、条件温和且易于工业化生产等优点,成为目前木聚糖酶生产的主要方法。
微生物发酵法生产木聚糖酶主要利用能够产生木聚糖酶的微生物,如真菌、细菌和放线菌等,通过优化培养基成分、发酵条件和菌种选育等手段,提高木聚糖酶的产量和活性。
目前,黑曲霉、米曲霉和里氏木霉等真菌是木聚糖酶的主要生产菌种。
在发酵过程中,碳源、氮源、无机盐和生长因子等营养成分对木聚糖酶的产量和活性具有重要影响。
常用的碳源包括木聚糖、葡萄糖、果糖等,氮源则包括蛋白胨、酵母粉、豆饼粉等。
木聚糖酶的酶活测定【范本模板】

木聚糖酶的酶活测定方法一、原理木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖,具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应。
反应颜色强度与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖量又与反应液中的木聚糖酶的活力成正比.酶活定义方法木聚糖酶活力单位是指55℃、pH5。
0的条件下,以每分钟催化木聚糖水解生成1μmol木糖所需的酶量定义为一个酶活力单位U。
二、实验试剂榉木木聚糖(sigma),木聚糖酶(苏柯汉),木糖50mmol NaAC-HAC、DNS试剂、50mmol柠檬酸-Na2HPO4、50mmol甘氨酸—NaOHDNS(1L)配置方法:取3,5—二硝基水杨酸6.3g溶于500ml水中,45℃水浴溶解后,加2mol/L的NaOH 262ml,不停搅拌,然后加入185g酒石酸钾钠,溶解后加入5g结晶酚(或6.25ml 80%的苯酚),溶解后加入亚硫酸钠5g,搅拌至溶解后冷却定容至1L。
4℃保存,7天后可用,若有絮状物请过滤后使用,有效期为6个月.50mmol NaAC-HAC:称取3.402gNaAC·3H2O 溶于蒸馏水中,定容至500ml;用移液器移取1.428ml HAC溶于蒸馏水中,定容至500ml。
两者按V(NaAC):V(HAC)≈2:1 体积配比,用pH计调节到pH5。
0。
50mmol柠檬酸—Na2HPO4:称取柠檬酸5.2535gNa2HPO44。
477g,溶于蒸馏水中定容至250ml;称取柠檬酸5.2535g溶于蒸馏水中定容至500ml;用pH计调节pH至所需pH值的缓冲液。
50mmol甘氨酸-NaOH:称取甘氨酸0.3735g溶于蒸馏水中,定容100ml;称取NaOH 0.200g 溶于蒸馏水中,定容100ml;用pH计调节pH至所需pH值的缓冲液。
三、仪器水浴锅、分光光度计、电热套、烧杯、具塞刻度试管、移液器、电子天平四、标准曲线的绘制1、木糖标准液的配制:准确称取100mg分析纯的无水木糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后,定容转移到100ml容量瓶中,再定容至刻度,摇匀,浓度为1mg/ml。
饲料用酶制剂中木聚糖酶酶学性质的研究

饲料用酶制剂中木聚糖酶酶学性质的研究目前国内外关于木聚糖酶的生产条件及其生产菌株的特性报道较多。
为了掌握常用饲用酶制剂中木聚糖酶的酶学性质,我们对某商品复合酶制剂中所含的木聚糖酶进行了热稳定性、最适pH值、最适反应温度、底物针对性、不同金属离子对其酶活的影响、反应进程曲线及其酶反应的未氏常数Km值等的测定,以期对常用的木聚糖酶的酶活测定、保存及应用有一定的指导意义。
1 材料与方法1.l 实验仪器精密pH计:±0.01pH;电子天平:d=1mg;紫外分光光度计UV-1601;恒温水浴锅;蠕动泵;紫外检测器;分布收集器;ф2.6 cm×100 m色谱柱。
1.2 实验材料某商品酶制剂1.3 酶活测定酶活力测定:采用DNS法酶活单位定义:在50℃、PH值为5.0条件下,每分钟产生 1μmol还原糖所需酶量定义为1个酶活单位。
测定底物:1.0%桦木木聚糖(SigmaX-0502);酶液制备:准确称取1.000g该酶制剂,用0.2mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH值为5.0)定容至500mL,摇匀,静署提取,过滤后取滤液并稀释至适当倍数备用。
标准曲线:分别吸取1.0mg/mL的木糖标准液0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8和1.0mL,依次加入试管中,以蒸馏水补加到2.0 mL。
加DNS 试剂3mL,于沸水中沸腾7min(样品放人重新沸腾时算起),取出后冷却,加入蒸馏水10mL混匀,于550nm处进行比色测定,用空白管调零点,记录光密度值,以木糖mg数为纵坐标,光密值为横坐标绘制出标准曲线。
酶活测定:取25mL具塞试管,加入1.0mL木聚糖底物,于50℃保温5min,然后精确加入1.0mL酶液,准确反应30min后测定酶活,空白管先加1mL酶液和3mL DNS试剂,沸水浴3 min,再加lmL木聚糖底物摇匀后沸水浴显色7 min,其余同前。
1.4 实验试剂0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液(pH值为5.0)、DNS试剂、10mg/mL木聚糖溶液。
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1.杨浩萌.姚斌.范云六.木聚糖酶分子结构与重要酶学性质关系的研究进展[期刊论文]-生物工程学报2005,21(1)
2.孙建义,许榨荣,李卫芬. 木聚糖酶的研究与应用进展. 生命科学探索与进展(上册).杭州大学出版社, 1998.
3.杨会涛.酵母木聚糖酶的酶学性质研究. 四川农业大学, 2006.
4.李秀婷.Li Xiuting微生物木聚糖酶及在食品工业中的应用[期刊论文]-农业机械学报2008,39(2)
5.万红贵.王涛.蔡恒.贾伟.郑伟刚.Wan Honggui.Wang Tao.Cai Heng.Jia Wei.Zheng Weigang木聚糖酶的特性及应用研究[期刊论文]-食品与发酵工业2008,34(3)
四川农业大学本科毕业论文(设计)开题报告
毕业论文(设计)题目
木聚糖酶酶学性质测定
选题类型
应用型
课题来源自选项目学 Nhomakorabea院生命科学与理学院
专 业
应用生物
指导教师
韩学易
职 称
实验师
姓 名
谢超
年 级
2010
学 号
20105032
开题报告(立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献)
国内外对木聚糖酶的研究主要有两个方面,一方面是改造木聚糖酶基因,改善其酶学性质,使之更适合工业应用要求。另一方面是研究如何提高木聚糖酶的表达水平,以方便工业生产中推广应用。
2研究的主要内容及预期目标
了解木聚糖酶的基本制备过程以及木聚糖酶的相关功能和应用前景,针对木聚糖酶酶学性质设计出相应的测定方法,根据酶的性质,对木聚糖酶的一些基本性质(包括最适反应pH和pH稳定性、最适反应温度和温度稳定性以及金属离子对酶活性的影响等)进行研究。
6.范美霞.孙迅.陶宗娅.木聚糖酶的研究进展[期刊论文]-菏泽学院学报 2009(2)
7.王中兴.木聚糖酶最适反应条件的研究[期刊论文]-安徽农学通报2008(9)
8.文清,李德发.影响饲料酶活力测定的因素分析[J].饲料研究,2002,5:15—18
指导教师意见
指导教师签名:
年月日
开题小组意见
负责人及成员签名:
1立题依据
木聚糖是一种多聚五碳糖,是植物细胞中主要的半纤维素成分。木聚糖酶(Xylanase)是可将木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解的酶,它在饲料、造纸、食品、能源工业和环境科学上有着广阔的应用前景。随着分子生学、结构生物学的发展及蛋白质工程的应用,对木聚糖酶结构和功能的研究不断深入。酶活是衡量酶生物活性的重要指标,该数据通常由酶供应者提供,但酶活受到酶储存时间、方式等多种因素的影响会有所损失,因此掌握木聚糖酶酶活的测定方法十分必要。
在不同pH的缓冲液中测定该酶的活性,测出该酶的最适pH,在不同温度下保温30、60min后,酶在pH5一lO之间具有较好的稳定性,不同保温时间对酶活影响差异不显著。在不同温度下测定该木聚糖酶的酶活,发现其最适反应温度为51℃,当将酶液在50、60、70、80、90、100℃分别保温30min后,发现其稳定性随温度升高而降低,60℃以下时稳定性较好
4进度安排
第一阶段(2013年3月——4月):题目拟定及资料搜集,写出开题报告,准备好开题答辩。
第二阶段(2013年5月——8月):查询与木聚糖酶和木聚糖酶酶学性质相关的文献,设计并完成相关实验。
第三阶段(2013年9月——10月):毕业论文设计阶段和毕业论文书写阶段
第四阶段(2013年11月——12月):毕业设计及论文论文完善及修改阶段
答辩时间:年月日
注:1.选题类型:基础型、应用基础型、应用型、调研型;
2.课题来源:国家级项目、省部级项目、横向合作项目、校级项目、自选项目;
在面包食品中,应用木聚糖酶水解谷物面粉中的木聚糖,产生木寡糖,使水在戊聚糖相和谷蛋白相重新分布,从而改善面包的质地、结构、松软度和保质期。在硬木和软木纸浆中,沉淀的木聚糖是木质素抽提的主要障碍,木聚糖酶通过水解作用使纸浆表面的木聚糖重新定位,重新沉淀,从而更易于化学物质渗透,提高木质素的抽提率。如果用少量的木聚糖酶处理草浆可显著改进草浆的滤水性、脆性等性能,提高纸浆白度和强度,使草浆有可能替代部分木浆生产高质量的纸制品。同时,木聚糖酶的前处理可以降低漂白中的氯和含氯化合物的用量,从而减轻对环境的污染。
3研究方案及方法理论
3.1研究方案:
3.1.1酶活单位定义
在50℃、PH6.8条件下,1min从1.0%燕麦木聚糖中释放1μmol木糖所需的酶量即为1个活性单位(U)。
3.1.2木聚糖酶的最适反应pH
分别用100mmol/L的不同pH(3.0、4.0、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、8.0、9.0)的缓冲液(pH≤8.0的用磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液,pH>8.0的用甘氨酸一氢氧化钠缓冲液)配制1.0%的木聚糖底物,按常规方法测定酶活,以酶活最高者为100%,在其他条件下的酶活占最高酶活的百分数即为该酶在此pH条件的相对酶活。
目前,我们对木聚糖酶的研究只集中在细菌和真菌上,它们产生的木聚糖酶只含一个亚基。对于不同生物来源的木聚糖酶,分子量范围为8—145Kd,pI范围为pH3—10.5,稳定pH范围为3—10。大多数酶的反应最适pH范围为4—7,最适温度为40—60℃。由于木聚糖酶具有重要的应用价值,目前人们加大了对木聚糖酶的开发研究,包括高产菌的选育,耐高温耐碱性无纤维素酶污染的木聚糖酶的筛选和克隆,工程菌的构建,培养条件的优化等。
3.1.3木聚糖酶的pH稳定性
用不同pH的上述缓冲液分别在50℃下处理木聚糖酶溶30、60min,然后调到晟适pH,按常规方法测定酶活,考察木聚糖酶的pH稳定性。以酶活最高者为100%。
3.1.4木聚糖酶的最适反应温度
用最适pH的缓冲液配制溶液,在30、40、45、50、55、60、65℃和70℃下按常规方法测定酶活,以酶活最高的温度为最适反应温度。
3.2研究方法理论:
在实验室采用还原糖法(即DNS法:其原理是木聚糖酶降解木聚糖生成木二糖、木糖等还原糖,还原糖再与3,5一二硝基水杨酸(DNS)发生反应,生成橙黄一棕红色的氨基化合物。在一定范围内,还原糖的生成量与反应液的颜色强度呈线性关系,读取540nm处的光密度值,并利用标准曲线将之转换成产生的木糖的量,进而根据公式得到酶的活力。)对木聚糖酶的一些基本性质(包括最适pH和pH稳定性、最适温度和温度稳定性及金属离子对酶活性的影响)进行研究。
3.1.5木聚糖酶的温度稳定性
用最适pH的缓冲液配制溶液,分别在40、50、60、70、80、90℃下保温30min,然后放人冰水中冷却,在最适温度和最适pH下按常规方法测定酶活,以50℃未保温的酶活力为100%。
3.1.6金属离子对木聚糖酶酶学性质的影响
分别配制Mg2+,Zn2+,Ca2+,Cu2+,Na+,Fe2+,Fe3+,K+,Co2+及EDTA 终浓度为0.001mol/L 无机盐的木聚糖酶溶液,测定酶活力.以不加任何无机盐的木聚糖溶液作为底物的溶液作为对照,观察金属离子对木聚糖酶酶学性质的影响。